表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究

目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞～囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0～38.7个(P＜0.01),体外受精率为70.2%～92.8%(P＜0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%～95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%～91.1%,桑椹胚发育率为40.6%～87.5%,囊胚发育率为5.1%～75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.     

小鼠早期胚胎几种不同培养方法的比较

目的探讨小鼠胚胎体外发育中的最佳培养方案。方法将从超排的ICR雌鼠输卵管内收集的1-细胞放入无糖CZB中培养,分别于2-细胞、4-细胞、桑椹胚阶段更换入含3.0 mmol/L葡萄糖(最适浓度)的CZB中,以及胚胎培养全程均在含糖CZB中更换1次培养液、胚胎培养全程均在含糖CZB中不更换培养液,对照组胚胎培养全程均在无糖CZB中,观察记录胚胎的发育情况。结果2-细胞、4-细胞阶段换入含糖CZB中的序贯培养及培养全程在含糖CZB中单一培养,囊胚率均高于对照组(P0.05);桑椹胚阶段换入含糖CZB中的序贯培养,囊胚率与对照组差异无统计学意义(P0.05);2-细胞、4-细胞阶段换入含糖CZB中的序贯培养与全程在含糖CZB中的两步法单一培养及一步法单一培养,囊胚率分别为46.5%、38.4%、41.7%、56.6%,其差异无统计学意义(P0.05)。结论在小鼠早期胚胎体外发育中,2-细胞至桑椹胚前对葡萄糖存在依赖性;尽管序贯培养是有效的,但并不一定优于一步单一培养。     

TGF-β1改善体外培养小鼠胚胎种植率及其作用机制的研究

目的 探讨TGF-β1在体外对小鼠胚胎发育及胚胎种植的影响及其作用机制.方法 ①收集小鼠2-细胞期胚胎,在含不同剂量TGF-β1的M16培养液中进行体外培养,观察胚胎发育情况,并进行胚胎移植,观察着床率;②测定移植后小鼠外周血及胚胎种植部位母胎界面IL-10/INF-γ水平.结果 ①1 ng/mL和10 ng/mL TGF-β1能提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率.其中TGF-β1 10 ng/mL时作用最显著,TGF-β1浓度过高对体外胚胎发育不利;②M16+TGF-β1 10 ng/mL组体外培养囊胚移植后母胎界面INF-γ低于M16组,差异有统计学意义[(30.89±11.31) pg/mL vs. (43.23±18.09) pg/mL,P<0.05].两组间IL-10水平无明显差异.结论 ①小鼠胚胎体外培养基中加入适宜浓度TGF-β1可提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率;②TGF-β1可能通过促进体外胚胎发育速率和质量,改善胚胎和内膜发育同步性,促进母胎界面Th1/Th2平衡向Th2偏移而促进胚胎着床.     

昆明小鼠卵子的体外受精及其新培养系统的建立

本研究首次将CZB培养液应用于昆明小鼠早期胚胎的培养，建立了一个可行的胚胎体外培养的新方法，采用昆明种成熟雄鼠附睾尾部精子与常规超排法得到的卵子在TYH培养液中进行体外受精后，将卵子分别移入WM和CZB培养液中进行发育培养。WM中的胚胎发生阻滞而未能继续发育；CZB培养液中的胚胎有79%发育至4细胞期，81%的胚胎发育至桑椹胚阶段，突破了胚胎培养中存在的“2细胞阻滞”现象。而于胚胎培养的不同阶段向培养液中添加葡萄糖也未表现出明显的作用。表明在昆明小鼠胚胎培养的早期阶段，葡萄糖并非一种重要的营养物质。     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

2,3,7,8-四氯苯二噁英对NIH小鼠胚胎发育的影响

目的探讨2,3,7,8四氯苯二英(TCDD)对NIH小鼠胚胎发育过程的影响。方法在NIH小鼠妊娠早期的1～8d,胚泡着床前期的1～3d和着床后期的4～8d,经口腔灌服0、2、50和100ng(kg·d)剂量的TCDD,在小鼠妊娠第9天和第18天时观察子宫内的胚胎发育形态。结果50、100ng(kg·d)剂量在妊娠早期1～8d染毒,使多数妊娠小鼠在第9天观察时子宫内胚胎全部丢失;在妊娠1～3d和4～8d染毒,使部分妊娠小鼠胚胎丢失,另外有部分胚胎吸收或发育阻滞。同时发现早期成活胚胎在发育过程中继续死亡,妊娠第18天时,胎鼠出生前成活率下降。结论小鼠妊娠早期染毒,引起小鼠妊娠早期胚胎丢失,着床后胚胎发育异常,出现阻滞和死亡。     

槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育能力的影响

目的 为完善小鼠早期胚胎体外培养体系,了解槲皮素对小鼠1-细胞胚胎体外发育的影响.方法 以CZB为基础培养液,添加不同浓度(500、50、5、1、0.5、0.2、0.1 μm)的槲皮素作为试验组,添加等量二甲基亚砜(DMSO)作为对照组,观察不同浓度槲皮素对胚胎发育到囊胚各阶段的影响.结果 当槲皮素浓度超过50μm时,对胚胎发育有毒性效应;0.1～1 μm浓度槲皮素对胚胎发育有促进作用,特别是0.5 μm槲皮素能明显提高胚胎的囊胚形成率.结论 0.5 μm槲皮素能促进小鼠早期胚胎的体外发育.     

胰岛素对ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段．方法用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择最适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化．结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0．005μg／mL和0．05μg／mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组．2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素囊胚率显著高于对照组和其他实验组．结论在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至μg／mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0．005μG／mL和0．05μG／mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要．     

不同来源小鼠2-细胞胚胎体外发育情况的比较

目的比较小鼠配子体外授精法与2-细胞胚胎收集法所得鼠胚体外发育情况,探讨适合人类体外受精实验室的质量控制系统。方法采用雌雄小鼠配子体外授精和体内受精收集2-细胞胚胎,同时对2-细胞胚胎在相同条件下进行体外培养,观察胚胎发育情况。结果小鼠配子体外授精法的受精率为82.2%;对两种方法所获2-细胞胚胎进行培养,48 h卵裂率及72 h囊胚形成率均无显著差异。结论体内受精2-细胞胚胎收集法较小鼠配子体外授精法操作简便,是较理想的人类胚胎实验室质控方法。     

Relevance of Hepatocyte Growth Factor and Fibroblast Growth Factor on Mouse Preimplantation Embryo Development

Objective To explore the effect of hepatocyte growth factor （HGF） and fibroblast growth factor （FGF） on preimplantation embryo development of mouse.
Methods Mated mice were killed by cervical dislocation to collect two pronucleous （2 PN） zygotes from oviduct of pregnant 1 d NMRI mice and were cultured to the hatching blastocyst stage and the number of embryo in different stages was recorded under an invert microscope. The cleavage rates of formed 2 PN zygotes were compared with blastocyst and hatching blastocyst stage in drops of T6 medium with or without HGF or FGF （0 ng/ml, 10 ng/ml, 20 ng/ml, 50 ng/ml, 1 000 ng/ml）.
Results HGF and FGF enriched embryo culture media promotea the aevetopment from 2 PN stage embryos to blastocyst. Adding 20 ng/ml of FGF or HGF to the culture medium significantly increased the percentage of 2PN embryos that developed into blastocysts （P〈0.05）, but culture of embryos in drops of T6 medium with HGF （20 ng/ml） had no improvement in in-vitro hatching.
Conclusion Exogenous HGF and FGF at low concentrations promote in-vitro mouse blastocyst formation.     

Effect of Insulin on Development of ICR Mouse Embryos in Vitro

Objective To study the effects and the appropriate concentration of insulin on the development of mouse embryos in vitro, and the effects of insulin on the development of different stages of embryos.Methods Mouse embryos were cultured in vitro in the mKSOM media supplemented with insulin at different concentrations and with insulin during different stages of embryos. The blastocyst rates and the cell numbers were counted.Results Additions of insulin significantly increased the rates of blastocyst and the total cell numbers. The concentrations of 0.005 μg/ml and 0.05 μg/ml insulin caused a significant increase in the total cell numbers compared with the control and experimental groups. Addition of insulin from 2-cell to 4-cell stage or from the 4-cell to morula stage, significantly increased the blastocyst rates compared with control and experi-mental groups.Conclusion Insulin can promote the development of mouse embryos in vitro. The appropriate concentration of insulin added in mKSOM was 0.005 μg/ml and 0.05 μg/ml.Exposure of embryos to insulin, beginning at the 2-cell and extending to the 4-cell stage or beginning at the 4-cell and extending to the morula stage, is important for the development of ICR mouse embryos in vitro.     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度。方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle's氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程。用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析。结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高。结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的囊胚发育率低和发育迟缓是继““2-细胞阻滞““解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题.本实验通过对 KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成.方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较 KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果.结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用.结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育.     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的 囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法 采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果 在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论 通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。