心肌细胞钙通道中药研究现状

195 8年Fatt和Katz等最早发现钙离子通道 (L型钙通道 ) ,1970年Fleckenstein首先提出钙拮抗剂 (CalciumAntagonist,Ca -A)一词。随着膜片钳技术的发明、改进与完善 ,钙通道药理学研究进入了一个崭新的阶段。目前发现心肌细胞上有B型、L型和T型三种钙通道。B型钙通道即背景钙通道 (backgroundCa2 + channels) ,或称漏流钙通道(leakcalciumchannels) ,是静息钙通道。L型 (long -lasting)钙通道是细胞兴奋过程中钙离子内流的主要途径 ,T型 (transient)钙通道功能与维持细胞自律性和低膜电位 (接近静息膜电位 )时钙的跨膜运动有关。后二者…     

尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞离子通道的影响

目的:基于膜片钳技术探讨尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞I Ca-L离子通道的影响。方法:通过对各组I Ca-L电流密度的峰值的变化、不同去极化水平电流密度的改变,I-V曲线、激活曲线以及失活曲线的变化等证明心肌缺血再灌注损伤发生后心肌细胞离子通道发生变化,尖叶假龙胆含药血清干预后能够改变离子通道的变化。制备尖叶假龙胆含药血清。选取大鼠H9c2心肌细胞株,建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,实验分为空白组、模型组、尖叶假龙胆含药血清高、中、低剂量组,应用膜片钳技术观察尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞I Ca-L离子通道的影响。结果:与模型组比较,尖叶假龙胆含药血清各剂量组能够升高损伤后不同去极化水平电流密度(P<0.05),下移I-V曲线,降低激活与失活半电压值,使激活曲线发生左移,失活曲线发生右移。结论:尖叶假龙胆可能通过影响L型钙离子通道稳定心肌细胞的电生理活动,对心肌缺血再灌注损伤心肌产生保护作用。     

激光共聚焦显微镜比较观察甾体皂苷Trilliuo、Lc253、Lc239对培养心肌细胞内[Ca2+]i的作用

目的：薯蓣皂苷元的皂苷为许多抗心血管中药中的主要活性成分，具有重要研究价值。本研究以经人工合成获得的薯蓣皂苷元皂苷同系物甾体皂苷Trilliuo(署蓣皂苷元葡萄糖苷、Lc253[薯蓣皂苷鼠李糖(1→2)葡萄糖苷]、Lc239(薯蓣皂苷元[鼠李糖(1→2)，葡萄糖(1→3)]葡萄糖苷)为研究对象，通过考察它们对培养心肌细胞钙离子释放的影响，分析其构效关系。方法：利用激光共聚焦显微镜测定加入fluo3—AM培养的心肌细胞中的钙离子变化情况。结果：Lc253能明显增强心肌细胞节律性和呈浓度依赖性增加心肌细胞静息钙离子水平，加入CaCl2 10mmol/L or KCl 60 mmol/L后钙离子荧光峰强度仍维持在较高水平；而Trilliuo and Lc239在10^—5mmol/L浓度时，对心肌细胞静息钙离子水平作用不明显，在高浓度胞外Ca^2 或K^ 情况下，抑制心肌细胞内钙离子升高；其作用特点与verapamil相似，具有钙离子通道阻断作用。结论：研究结果显示三种甾体皂苷对细胞内钙离子浓度有所差异，结构中连接糖的数目与调孔钙内流的活性有重要的相关性。这些皂苷类化合物对钙离子通道的活性有潜在的开发价值。     

滇黄芩总黄酮对豚鼠心肌细胞电压依赖性钠通道电流的影响

目的:研究滇黄芩总黄酮(totla flavonoid)对豚鼠心肌组织电压门控性钠通道的影响。方法:成年豚鼠,肝素抗凝后,腹腔麻醉,断头处死,迅速取其心脏,进行Langendorff灌流,先用无钙台式液灌流10 min,再以Ⅰ型胶原酶溶液灌流心脏,待心脏基本变软后剪取心室部分,制备单个心室肌细胞。分离出的豚鼠心肌单细胞,用全细胞电压钳技术记录电压依赖性钠电流进行研究。结果:滇黄芩总黄酮能可逆性抑制钠电流,其半数抑制浓度(IC50)为106 mg.L-1(95%的可信限是92～112 mg.L-1)。滇黄芩总黄酮并不影响钠通道激活开放的刺激电位阈值、最大激活电位值和反转电位值,但能使可激活开放的钠通道明显减少,钠离子电流明显衰减,可引出的钠电流在-40 mV处较正常组减少45.6%。细胞外给予滇黄芩总黄酮不影响钠通道激活曲线:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的半激活电压(V1/2)分别为(-50.4±1.7)mV和(-50.1±3.1)mV(n=6差异无统计学意义)。细胞外给予滇黄芩总黄酮可影响钠通道失活曲线,106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮对电压依赖性稳态失活钠电流会引起一个大约12 mV的负向漂移,延缓失活钠通道的恢复:对照组与106 mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的V1/2分别为(-69.4±1.6)mV和(-79.3±3.2)mV(n=7,P<0.05),两者间的差异有显著性意义,斜率分别为(-8.2±0.9)mV和(7.1±0.7)mV。细胞外给予滇黄芩总黄酮也可影响失活钠通道的恢复,使钠通道的复活时间常数显著延长:对照组和106mg.L-1的滇黄芩总黄酮组的时间常数分别为(15.6±6.3),(29.8±14.8)ms(n=6,P<0.05),差异有显著性意义。结论:滇黄芩总黄酮可阻滞豚鼠心肌细胞钠通道,是稳定的豚鼠心肌组织钠通道阻断剂。     

中药对细胞钙通道作用研究现状

随着膜片钳技术的发明、改进与完善,钙通道药理学研究进入了一个崭新的阶段。目前发现心肌细胞上有B型、L型和T型三种钙通道。B型钙通道即背景钙通道（baek-ground Ca2＋channels）,是静息钙通道;L型（1ong-lasting）钙通道是细胞兴奋过程中钙离子内流的主要途径；     

中药甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜L型钙通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对L型钙通道的影响.结果 浓度为3,5,10,20,50 μg/g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制L型钙电流,在浓度为10μg/g时,给药后电流密度抑制约为(45.7±3.5)%(n=5,P＜0.01), 可使心肌细胞L型钙电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;使激活曲线向正电位方向变化,V1/2从(-5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P＜0.05);使失活曲线向负电位方向变化, V1/2从(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P＜0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜L型钙通道电流,使I-V曲线上移;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的抑制作用

目的拟调查龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的影响。方法运用全细胞膜片钳实验检测龙血竭对Kv1.3通道电流及Jurkat细胞膜电位的影响;运用ELISA实验检测龙血竭对细胞炎性因子白细胞介素-2释放的影响。结果龙血竭对外源性表达在HEK293T细胞及内源性表达在Jurkat T细胞上的Kv1.3通道产生了浓度依赖性抑制作用;龙血竭尚可以诱导Jurkat T细胞膜电位发生去极化改变,抑制植物血凝素激活的Jurkat T细胞炎性因子白细胞介素-2的释放。结论该研究首次报道了Kv1.3通道是龙血竭赖以产生免疫抑制作用的受体靶蛋白,部分阐明了龙血竭产生免疫抑制效应原细胞和分子机制。     

葛根素对大鼠心肌细胞L型钙离子通道的影响

目的 :观察葛根素对大鼠L型钙离子通道的作用。方法 :恒流Langendorff灌流 ,I型胶原酶解分离 ,全细胞膜片钳技术记录离子电流。结果 :2.4 mmol·L^-1葛根素可以抑制单个大鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流 ,且成时间依赖性 ;葛根素可以促进L型钙通道电流 电压 (I-V)曲线的上移。结论 :葛根素可以抑制大鼠心室肌细胞的L型钙离子通道电流 ,并提示葛根素的抗心肌缺血和抗心律失常作用可能与抑制L型钙离子通道电流有关。     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 4 0mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L- 1和 30 μmol·L- 1对BayK86 4 4和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P >0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用     

五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的探讨五味子乙素对大鼠心室肌细胞钠电流(I_(Na))的影响。方法应用Langendorff主动脉逆向灌流、单酶解法获得单个大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的五味子乙素对大鼠心室肌细胞膜上I_(Na)的影响。结果五味子乙素(3μmol/L)对I_(Na)可产生显著抑制作用(P0.05,P0.01),并呈浓度依赖性。五味子乙素(10、30μmol/L)可使钠通道的I-V曲线显著上移,但I-V曲线的激活电位、峰电位及形态未发生改变,使I_(Na)的激活曲线向去极化方向迁移(P0.01),半数激活电位由给药前(-53.90±5.21) mV变为(-43.69±5.34) mV和(-40.80±3.23) mV。五味子乙素能使I_(Na)失活曲线向超级化方向移动(P0.01),半数失活电压(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(-57.80±6.21) mV、(-71.16±6.45) mV和(-81.03±7.53) mV。此外,五味子乙素还能显著延长I_(Na)失活后恢复时间(P0.01),τ(对照、10μmol/L、30μmol/L)分别为(16.68±1.72) ms、(25.73±2.93) ms和(43.79±3.87) ms。结论五味子乙素能浓度依赖性阻滞大鼠心室肌细胞I_(Na),对其激活、失活和失活后恢复动力学特征均有影响。     

丹参酮ⅡA通过CaN信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:利用异丙肾上腺素(Iso)诱导的肥大心肌细胞模型,从钙调神经磷酸酶(Calcineurin,Ca N)信号通路角度探讨丹参酮IIA(Tan IIA)对乳鼠心肌细胞的保护作用及其可能机制。方法:利用原代培养新生乳鼠心肌细胞,以10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察环孢菌素-A(Cs A)、丹参酮IIA 0.1,1,10 mol/L剂量组对肥大心肌细胞的影响。采用考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞面积;Till阳离子测定系统及Fura-2/AM荧光探针观察细胞内[Ca2+]i瞬间变化;Wertern blot检测心肌细胞Ca N和活化T细胞核因子(nuclear factor 3 of activated T cells,NAFT3)表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组总蛋白含量、细胞体积、细胞面积、钙离子瞬间变化幅度、钙离子频率、Ca N和NAFT3表达分别增加97.90%、56.27%、49.75%、60.60%、56.88%、209.52%和200.00%。丹参酮IIA有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,丹参酮IIA 10 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.25%、面积减小32.14%、总蛋白含量降低35.61%、钙离子瞬间变化幅度和频率分别降低34.71%和36.68%,Ca N和NAFT3的表达分别降低50.77%和39.13%。结论:丹参酮IIA可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca2+-Ca N-NFAT3信号通路有关。     

参松养心胶囊治疗心律失常药理学机制研究概况

参松养心胶囊是脉络学说指导下依据"温、清、通、补"用药规律研制而成的抗心律失常中成药。基础研究证实,参松养心胶囊不仅具有对心室肌细胞Na+、L型Ca2+、K+通道、肺静脉肌袖心肌细胞L-型钙通道电流、内流整合钾、瞬间外向钾电流通道、起搏电流通道超极化激活的阳离子通道等多离子通道阻滞作用,同时具有调节心脏自主神经功能、改善心脏传导功能、抑制心肌重构等非离子通道调节作用,显示出其"快慢兼治,整合调节"心律失常的系统效应。     

三七皂甙单体Rg1对心肌细胞膜钙离子通道的影响

目的 :探讨Rg1对豚鼠心肌细胞膜L 型电压依赖性钙通道的影响。方法 :采用标准全细胞膜片钳技术。结果 :在保持电位 -40mV ,细胞去极化至 + 40mV ,刺激频率 0 .5Hz,时程 1 5 0ms条件下Rg11 0 μmol·L^-1和 30 μmol·L^-1对BayK8644和Nifedipine敏感的钙内向电流均无明显影响 (P>0 .0 5 ,n =5 )。结论 :Rg1对L 型钙通道无抑制作用。     

甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响

目的 研究甘松挥发油对大鼠心室肌细胞膜钠通道的影响,探讨甘松挥发油在离子通道水平抗心律失常的作用机制.方法 用急性酶解法分离大鼠心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术,观察不同浓度的甘松挥发油对钠通道的影响.结果 ①浓度为1,3,5,10,20,100 μg /g甘松挥发油可浓度依赖性地抑制钠电流;②可使心肌细胞钠电流-电压曲线上移,但激活电位、峰电位及反转电位无改变;③使激活曲线向正电位方向变化,V_(1/2)从(-43.65±0.98)mV右移至(-40.25±1.01)mV(n=6,P<0.05);④使失活曲线向负电位方向变化, V_(1/2)从(-100.92±0.68)mV左移至(-111.20±0.86)mV(n=6,P<0.05).结论 甘松挥发油可通过浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞膜钠通道电流,在不同膜电位水平对钠通道电流具有均匀一致的抑制作用;使激活曲线右移,使失活曲线左移.     

急性脑梗死若干脑保护治疗药物研究近况

Ca^2 通道拮抗剂尼莫地平：在缺血半暗带向不可逆性损伤的演变机制的诸多理论中，细胞内Ca^2 超载及由其激活细胞内酶系列引起细胞损伤被认为是各种机制引起细胞不可逆损伤的共同途径。尼莫地平是非极性1，4一二氢吡啶衍生物，A旨溶性强，易透过血脑屏障，对脑血管和神经细胞、神经胶质细胞膜上的L型电压敏感性Ca^2 通道有较强的选择阻滞作用。     

宣导泻肺饮对大鼠心肌细胞L型Ca~（2＋）通道电流影响及机制研究

目的用血清药理学的方法研究宣导泻肺饮含药血清对大鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响。方法采用全细胞膜片钳技术记录L-型钙离子通道电流（Ica-L）,观察不同浓度的宣导泻肺饮对它们的影响。结果宣导泻肺饮含药血清对心肌细胞L-型钙离子通道的开放有抑制作用,在浓度10%时Ica-L峰值降低15%,浓度30%时Ica-L峰值降42%,均呈浓度依赖性;随着药物浓度的增加,电流-电压关系曲线逐渐上移,但出现电流峰值的电压不变。结论宣导泻肺饮含药血清抑制心肌细胞钙离子通道的开放,具有明显的浓度依赖关系,可能是其抗心律失常的分子基础。     

益心定悸方对快速性心律失常家兔模型心肌L型钙离子通道的影响

目的:观察益心定悸方对快速性心律失常家兔模型心肌L型钙离子通道的影响,探讨其可能的作用机理。方法:采用高脂血症快速性心律失常家兔模型,给予高脂饮食喂养后,注射肾上腺素,造模成功后测定空白对照组、模型对照组、益心定悸方防治组、益心定悸方治疗组和胺碘酮对照组心肌L型钙离子通道的表达。结果:益心定悸方防治组、胺碘酮对照组与模型组比较,心肌细胞钙离子通道(Ica-L)表达减低,差异有统计学意义(P<0.01),组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:益心定悸方能够阻断Ca2+通道,抑制Ca2+离子过度内流,这可能是益心定悸方改善心律失常的作用机制之一。     

丹红注射液抗H9c2细胞凋亡的作用机制研究

[目的]从线粒体损伤角度研究丹红注射对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响。[方法]培养H9c2细胞,分为对照组、10μmol/L ISO模型组,10μmol/L ISO和20、200μL/L丹红注射液组。按相应给药时间后采用流式细胞术检测细胞凋亡,明确药物对细胞凋亡的作用。活细胞荧光成像仪检测细胞线粒体膜电位变化、激光共聚焦检测细胞内活性氧簇(ROS)的产生、Fluo-3 AM ester荧光染料染色检测细胞内钙离子浓度研究丹红注射液抗心肌细胞凋亡的相关作用机制。[结果]与对照组(1.33%±0.42%)相比,ISO显著上升细胞凋亡率(5.13%±0.15%)(P0.01);与ISO组比较,20、200μL/L丹红注射液后,细胞凋亡率分别下降为(4.23%±0.15%)和(2.37%±0.38%)。与对照组相比,给予ISO后细胞内线粒体膜电位去极化程度显著增加,为对照的(151.76%±16.01%)(P0.01),20、200μL/L丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内线粒体膜去极化,分别为对照的(121.07%±11.53%)和(117.15%±12.91%)。此外,丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内ROS浓度及钙离子浓度的升高,差异具有统计学意义。[结论]丹红注射液可通过抑制ISO引起的细胞内线粒体膜电位去极化、降低细胞内ROS和钙离子浓度而发挥其抗H9c2细胞凋亡作用。     

肠道淋巴细胞归巢与自身免疫性葡萄膜炎的相关性探讨

葡萄膜炎是由眼组织特异性T细胞介导的自身免疫性疾病。肠道菌群激活的眼组织特异性T细胞已被证实可引发小鼠葡萄膜炎，肠道淋巴细胞归巢是其中的关键环节。循环系统中的T淋巴细胞通过表面归巢受体整合素α4β7与其配体黏膜地址素细胞粘附分子-1(MAdCAM-1)特异性识别结合后进入到肠道，再被激活为活化的眼组织特异性T细胞，随后这些眼组织特异性T细胞从肠道不断迁移到眼部，穿越血-视网膜屏障进入眼内，引发葡萄膜炎。因此，肠道淋巴细胞归巢在自身免疫性葡萄膜炎的发生发展中可能起重要作用。     

细辛含药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响

目的研究中药细辛舍药血清对大鼠心肌细胞钠通道的影响，在离子通道水平揭示细辛抗缓慢型心律失常作用的可能机制。方法用原代培养的方法获得单个心肌细胞，用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞钠通道电流加入含药血清前后的变化。结果25％细辛舍药血清对钠通道的激活曲线、1-V曲线均有影响。结论细辛含药血清对心肌细胞钠通道电流有增强作用。