菟丝子总黄酮对来曲唑致多囊卵巢综合征大鼠模型的影响

目的:探讨菟丝子总黄酮对来曲唑致大鼠多囊卵巢综合征(PCOS)模型的影响。方法:正常组除外,其余大鼠每天灌服来曲唑1 mg·kg~(-1)复制PCOS动物模型,连续21 d。造模第16天,阴道涂片检测动物周期,以阴道上皮细胞持续角化者为PCOS成模大鼠,并随机分为模型组、达英-35组(0. 339 2 mg·kg~(-1))和菟丝子总黄酮高、中、低剂量组(200,100,50 mg·kg~(-1))。依据组别给予相应药物,连续21 d。给药结束后,取材,计算卵巢指数;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清雌激素(E_2),睾酮(T),促性腺激素释放激素(GnRH),卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)水平;取大鼠右侧卵巢,苏木素-伊红(HE)染色光镜观察病理改变;免疫组化法检测下丘脑、垂体、左侧卵巢雄激素受体(AR)表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清T,GnRH,LH水平显著升高,卵巢指数和LH/FSH值显著升高,FSH和E_2水平显著降低(P 0. 05,P 0. 01),卵巢组织闭锁卵泡增多、卵泡膜细胞层增厚明显,下丘脑、垂体和卵巢组织AR表达显著升高(P 0. 01)。与模型组比较,菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可显著降低PCOS模型大鼠血清T,GnRH和LH水平,降低卵巢指数和LH/FSH值(P 0. 01);菟丝子总黄酮高、中剂量组可显著升高PCOS模型大鼠血清E_2水平(P 0. 01),明显升高FSH水平(P 0. 05),菟丝子总黄酮低剂量组可明显升高PCOS模型大鼠血清E_2水平(P 0. 05)。菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可不同程度改善PCOS模型大鼠卵巢组织皮质增厚胶原化、闭锁卵泡增多、黄体减少等病理改变。免疫组化结果表明,菟丝子总黄酮高、中、低剂量组可显著降低下丘脑、垂体和卵巢AR表达(P 0. 01)。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节雌雄激素分泌、影响下丘脑-垂体-卵巢轴途径发挥对PCOS模型大鼠的保护作用。     

改良多囊卵巢综合征大鼠模型卵泡颗粒细胞中凋亡调控蛋白Bcl-2 Bax表达的研究

目的:探讨凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在改良多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型卵巢的卵泡中颗粒细胞中的表达。方法:分别在来曲唑(Letrozole)和脱氢表雄酮(DHEA)造模基础上加用高脂乳剂,建立改良PCOS动物模型,结合阴道脱落细胞涂片、大鼠血清性激素水平、处死时体重增加幅度和卵巢形态学的改变进行模型验证,选用免疫组织化学法检测大鼠卵巢组织Bcl-2、Bax的表达。结果:模型建立成功。免疫组织化学结果显示高脂模型组、Letrozole模型组、Letrozole改良组、DHEA模型组和DHEA改良组Bax平均灰度均值均高于空白对照组,Bcl-2平均灰度均值均低于空白对照组,差异无统计学意义。结论:Bcl-2在卵巢的卵泡颗粒细胞中表达下调,Bax表达上调,推测两者表达改变可能是导致改良PCOS模型大鼠卵巢中颗粒细胞凋亡增多的关键因素。     

Ki-67在肥胖PCOS大鼠模型卵巢颗粒细胞中的表达研究

目的:探讨子宫内膜生存素Ki-67在肥胖多囊卵巢综合(PCOS)大鼠模型卵巢颗粒细胞中的表达。方法:分别在来曲唑(Letrozole)和脱氢表雄酮(DHEA)造模基础上加用高脂乳剂,建立肥胖PCOS动物模型,结合血清性激素、大鼠处死时体重增加幅度及脏器指数改变进行模型验证,选用免疫组织化学法检测大鼠模型卵巢组织卵泡颗粒细胞中Ki-67的表达。结果:模型建立成功。Letrozole模型组和DHEA模型组Ki-67积分光密度总和、平均灰度均值显著低于空白对照组(P0.05),此外,Letrozole肥胖模型组和DHEA肥胖模型组Ki-67积分光密度总和、平均灰度均值极显著低于空白对照组和高脂模型组(P0.01);Letrozole肥胖模型组Ki-67平均灰度均值显著低于Letrozole模型组(P0.05),DHEA肥胖模型组Ki-67平均灰度均值显著低于DHEA模型组(P0.05),差异有统计学意义。结论:Ki-67在PCOS大鼠模型卵巢的卵泡颗粒细胞中表达降低可能是PCOS发生发展的重要原因,且Ki-67在肥胖PCOS大鼠模型卵巢卵泡颗粒细胞中表达降低更明显。     

菟丝子总黄酮对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用

【目的】 探讨菟丝子总黄酮通过卵泡刺激素（FSH）-环磷酸腺苷（cAMP）信号轴对大鼠卵巢储备功能减退的改善作用。 【方法】 从68只雌性SD大鼠中抽取10只为正常组,其余构建卵巢储备功能减退模型。将成功建模的48只大鼠随机分为抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组,每组12只。抑制剂组灌胃H-89 0.1 mg/kg,抑制剂+菟丝子总黄酮组灌胃H-89 0.1 mg/kg+菟丝子总黄酮 530.1 mg/kg,菟丝子总黄酮组灌胃菟丝子总黄酮530.1 mg/kg,模型组、正常组灌胃等体积生理盐水,均连续4周,每周休息1 d。给药4周后,称取各组大鼠卵巢湿质量,计算卵巢指数,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测大鼠血清性激素水平,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织形态学变化,ELISA 法检测卵巢组织中 cAMP 含 量,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测卵巢组织卵泡刺激素受体（FSHR）、蛋白激酶A（PKA）及磷酸化PKA（p-PKA）表达。 【结果】 模型组大鼠进食、二便、毛色、动情周期出现异常,卵巢萎缩明显,卵泡数量、黄体减少;与模型组比较,抑制剂组大鼠进食、二便、毛色、动情周期异常情况更严重,卵巢萎缩更明显,卵泡与黄体数量更少,而抑制剂组+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组大鼠进食、二便、毛色、动情周期,卵巢、卵泡与黄体数量明显改善。与正常组比较,抑制剂组、模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数降低,FSH、FSH/LH、E2水平升高,卵巢组织中cAMP含量降低,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量降低（P＜0.05）;与抑制剂组比较,模型组、抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与模型组比较,抑制剂+菟丝子总黄酮组、菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）;与抑制剂+菟丝子总黄酮组比较,菟丝子总黄酮组的左侧和右侧卵巢湿质量及卵巢指数升高,FSH、FSH/LH、E2水平降低,卵巢组织中cAMP含量升高,FSHR、p-PKA蛋白相对表达量升高（P＜0.05）。【结论】 菟丝子总黄酮可能通过FSH-cAMP信号轴改善大鼠卵巢储备功能减退。     

针刺对雷公藤多苷片所致卵巢功能减退大鼠氧化应激及凋亡的影响

目的:探索针刺是否通过调节大鼠抗氧化应激状态及颗粒细胞凋亡来改善雷公藤多苷片所致的卵巢功能减退(DOR)。方法:将有正常动情周期的SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、激素组、针刺组,每组10只。采用雷公藤多苷片混悬液灌胃(50 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续14 d)制备DOR大鼠模型。激素组予雌孕激素序贯疗法干预,针刺组针刺双侧"肾俞"或"关元""中脘"(隔日轮流进行),连续14 d。第9天开始观察各组大鼠的动情周期;实验结束后观察各组大鼠卵巢指数;采用HE染色法观察各组大鼠卵巢形态;ELISA法检测各组大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量;免疫组织化学法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达水平;荧光定量PCR法检测各组大鼠卵巢内Bax及Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:与空白组比较,模型组卵巢内成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多,颗粒细胞形态多出现异常,动情周期紊乱比例升高(P<0. 01),卵巢湿重及卵巢指数明显降低(P<0. 01),血清E2含量显著降低(P<0. 01),FSH、LH、MDA含量明显升高(P<0. 05,P<0. 01),血清SOD含量明显降低(P<0. 01),卵巢组织Bax蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0. 01),卵巢组织Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0. 05,P<0. 01)。与模型组比较,激素组及针刺组卵巢内成熟卵泡增多,闭锁卵泡减少,颗粒细胞形态异常情况明显减少,动情周期紊乱比例显著下降(P<0. 01),卵巢湿重及卵巢指数显著升高(P<0. 01),血清E2含量升高(P<0. 05),FSH、LH、MDA含量降低(P<0. 01,P<0. 05),血清SOD含量明显升高(P<0. 05,P<0. 01),卵巢组织Bax蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0. 01),卵巢组织Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0. 01)。与激素组比较,针刺组SOD含量显著升高(P<0. 01),Bax及Bcl-2蛋白表达水平上升(P<0. 05,P<0. 01),Bcl-2 mRNA表达水平下降(P<0. 01)。结论:针刺可以提高大鼠对抗卵巢氧化应激的能力,降低颗粒细胞的凋亡情况,从而减轻雷公藤多苷片所致的DOR损伤。     

基于下丘脑-垂体-卵巢轴探讨藏药二十五味鬼臼丸对绝经后骨质疏松症大鼠的干预作用

目的基于下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)探讨藏药二十五味鬼臼丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只SD雌性未孕大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、二十五味鬼臼丸组,每组10只。除假手术组仅摘取卵巢旁同样大小的脂肪块,其余3组大鼠均摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)大鼠模型。手术1周后开始给药处理,雌二醇组ig0.1mg/kg戊酸雌二醇,二十五味鬼臼丸组ig441mg/kg二十五味鬼臼丸,假手术组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续12周后,ELISA法检测血清雌二醇、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)水平;RT-PCR检测下丘脑、垂体、左侧股骨远端雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)m RNA表达;免疫荧光染色法检测下丘脑、垂体和右侧股骨远端ERα、ERβ蛋白表达;HE染色法观察大鼠右侧股骨远端组织形态变化;Micro-CT检测右侧股骨远端微结构的改变。结果藏药二十五味鬼臼丸能显著降低大鼠体内血清LH、FSH、GnRH水平(P0.05、0.01),并在HPOA轴中显著性上调下丘脑及垂体ERαm RNA及蛋白表达(P0.01),同时显著性上调股骨ERβm RNA及蛋白表达(P0.01),并能显著回调大鼠股骨密度及骨微结构参数(P0.01)。结论藏药二十五味鬼臼丸可有效防治PMOP,其机制可能与药物直接作用骨组织雌激素受体或作用HPOA轴靶器官相关雌激素受体后,通过改变体内性激素的水平间接调控骨代谢有关。     

隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达的影响

目的观察隔药灸脐对卵巢早衰模型大鼠Bcl-2和Bax表达的影响,探讨其对卵巢的保护机制。方法采用腹腔注射环磷酰胺建立大鼠卵巢早衰模型。48只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸脐组、西药组,每组12只。隔药灸脐组大鼠隔药灸"神阙",30 min/d,隔日1次,连续14 d;西药组大鼠予戊酸雌二醇灌胃,每日1次,连续14 d。采用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表达。结果模型组大鼠卵巢质量明显低于正常组(P0.05)。Bcl-2、Bax蛋白主要表达在细胞胞浆中,隔药灸脐组和西药组较模型组卵泡颗粒细胞Bax表达范围明显缩小,Bcl-2表达范围明显增加。与正常组比较,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,隔药灸脐组和西药组大鼠卵巢Bcl-2蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05,P0.01),Bax蛋白和mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论隔药灸脐可能通过上调卵巢早衰模型大鼠卵巢Bcl-2和下调Bax的表达,改善卵巢功能。     

葛根素对多囊卵巢综合症大鼠糖代谢及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 观察葛根素对脱氢表雄酮(DHEA)诱导的多囊卵巢综合症(PCOS)大鼠糖代谢、炎性因子及TLR4/NF-κB信号通路的影响.方法 通过皮下注射DHEA建立PCOS大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍组、二甲双胍+葛根素组,每组20只.二甲双胍组灌胃给予二甲双胍粉末(270 mg/kg),二甲双胍+葛根素组灌胃给予二...     

二陈汤对多囊卵巢综合征大鼠卵巢组织IRS-1/IRS-2的调节作用

目的观察二陈汤化痰法对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢组织中胰岛素受体底物-1(IRS-1)及胰岛素受体底物-2(IRS-2)mRNA和蛋白表达的影响,探讨化痰法对PCOS模型大鼠胰岛素抵抗(IR)的生物学机制作用。方法采用颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)建立PCOS模型大鼠,以正常组为对照,将PCOS模型大鼠随机分为模型组、二陈汤组、二甲双胍组,予相应药物灌胃,连续给药4周。采用ELISA法检测各组血清雄激素(T)和胰岛素(INS)水平,采用Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠卵巢组织的IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠血清T水平明显升高(P0.05),卵巢组织中IRS-1、IRS-2的mRNA和蛋白表达水平明显下降(P0.01);与模型组比较,二陈汤组和二甲双胍组血清T水平明显下降(P0.05),卵巢组织中IRS-1、IRS-2 mRNA表达和IRS-2蛋白表达水平明显提高(P0.05,P0.01),二陈汤组IRS-1蛋白表达水平明显提高(P0.01)。结论二陈汤化痰法可以改善PCOS模型大鼠卵巢组织的IR状态,其机制可能与改善卵巢局部微环境、调节卵巢组织中IRS-1和IRS-2的mRNA和蛋白的表达水平有关。     

电针对多囊卵巢综合征大鼠下丘脑Kisspeptin蛋白表达的影响

目的:探讨电针对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠下丘脑Kisspeptin蛋白表达及下丘脑-垂体-卵巢轴的影响。方法:SD雌性大鼠分为正常组、模型组、针刺组,每组6只。采用来曲唑连续灌胃21 d建立PCOS大鼠模型。针刺组大鼠给予双侧"带脉"电针治疗,20 min/次,1次/d,共治疗15 d。每4日测量1次体质量,治疗结束后用放射免疫法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)水平,HE染色法观察卵巢黄体及囊状卵泡数量,Western blot法检测下丘脑Kisspeptin蛋白表达水平。结果:与同时点正常组比较,模型组体质量增加(P<0.05),血清LH、T含量升高(P<0.05,P<0.01),卵巢囊状卵泡明显增多(P<0.01),黄体数量明显减少(P<0.01),下丘脑Kisspeptin蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组大鼠血清LH、E2、T含量降低(P<0.05),卵巢囊状卵泡数明显减少(P<0.01),黄体数量明显增多(P<0.01),下丘脑Kisspeptin蛋白表达下降(P<0.05)。结论:电针可改善PCOS大鼠性腺轴功能,其机制可能与下丘脑Kisspeptin蛋白表达有关。     

大黄总蒽醌对雌性大鼠下丘脑、垂体功能和结构的影响及可逆性

目的:观察大黄总蒽醌对雌性大鼠下丘脑和垂体功能及结构的影响及其可逆性。方法:SD雌性大鼠40只,随机取10只作为正常组,其余30只灌胃大黄总蒽醌73 mg·kg-1,连续60 d。于末次给药后24 h,停药30,60 d分别处死1/3动物。酶联免疫(ELISA)法检测大鼠血清促性腺激素释放激素(GnRH),黄体生成素(LH),卵泡刺激素(FSH)水平;记录性周期;取垂体称重,计算脏器指数;HE染色观察下丘脑、垂体形态学变化。结果:给药60 d和停药30 d LH,FSH水平高于正常组,GnRH水平低于正常组(P0.05)。停药60 d LH,FSH水平低于给药60 d,GnRH水平高于给药60 d(P0.05)。给药30,60 d大鼠性周期紊乱率、动情间期天数高于正常组(P0.05);给药60 d大鼠性周期紊乱率、动情间期天数高于给药30 d(P0.05)。停药30 d性周期紊乱率高于正常组(P0.05)。垂体指数:给药60 d高于正常组(P0.05);停药30,60 d低于给药60 d(P0.05)。组织形态学检测,给药60 d,下丘脑神经元减少,有红色神经元、鬼影细胞、染色质边集;垂体细胞减少,排列不规整,血窦扩张,嗜酸性细胞适应性增生。停药30 d,下丘脑神经元增加,鬼影细胞、染色质边极减少;垂体细胞增加,血窦扩张减轻,嗜酸性细胞增生减少。停药60 d,下丘脑和垂体的上述病理改变进一步恢复。结论:灌胃60 d大黄总蒽醌对雌性大鼠性激素水平、性周期和下丘脑、垂体组织结构均有毒性,但这种损害是可逆的,停药60 d基本恢复。     

当归补血汤对慢性轻度不可预见性刺激抑郁模型大鼠行为学及HPA轴的影响

目的:观察当归补血汤对慢性轻度不可预见性刺激郁模型大鼠行为学和下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(HPA轴)的影响。方法:将120只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、当归补血汤高、中、低剂量组(8,4,2 g·kg-1)和阳性药组(盐酸氟西汀,3.33 mg·kg-1)。除正常组外,其余各组采用慢性轻度不可预见性刺激法(CUMS)制备抑郁大鼠模型。各给药组动物灌胃给相应药物,正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水;每日1次,连续21 d。分别于第0,7,14,21天采用强迫游泳实验、悬尾实验和旷场实验等方法对抑郁模型大鼠的行为学改变进行检测,并于21 d采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH),下丘脑、垂体和海马糖皮质激素受体(GR)mRNA表达水平。结果:当归补血汤高、中剂量组可显著减少抑郁模型大鼠强迫游泳实验和悬尾实验的不动时间(P0.05);显著增多旷场实验穿格数次数(P0.05);显著降低血清CORT和ACTH水平(P0.05);当归补血汤高剂量组可下调CRH mRNA表达水平;上调下丘脑、垂体和海马的GR mRNA的表达水平(P0.05)。结论:当归补血汤具有改善CUMS大鼠抑郁行为的作用,表现出抗抑郁作用,其调节HPA轴功能是抗抑郁作用的重要机制之一。     

解郁化痰法对多囊卵巢综合征大鼠肝脏组织IRS-1及IRS-2表达的影响

目的:观察二陈汤、柴胡疏肝散、二陈汤+柴胡疏肝散及二甲双胍对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的肝脏组织胰岛素受体底物-1(IRS-1),胰岛素受体底物-2(IRS-2) mRNA和蛋白表达的影响,探讨解郁化痰法改善多囊卵巢综合征胰岛素抵抗的生物学机制。方法:通过颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)复制多囊卵巢综合征模型大鼠。将造模成功大鼠分为模型组、二陈汤组(9.135 g·kg^-1),柴胡疏肝散组(6.615 g·kg^-1),二陈汤+柴胡疏肝散组(合方组,9.135 g·kg^-1+6.615 g·kg^-1),二甲双胍组(0.158 mg·kg^-1),并以正常组作为对照。给予相应药物灌胃,每日1次,连续4周。于末次给药后,麻醉处死,分离大鼠卵巢、肝脏组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清睾酮(T),雌二醇(E2)激素水平,苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠卵巢组织病理学变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝脏组织的IRS-1,IRS-2 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清T水平显著上升,E2水平显著下降(P<0.01),卵巢组织病理可见大量囊状扩张卵泡,颗粒细胞层较薄,黄体少见,肝脏组织IRS-1,IRS-2 mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.01);与模型组比较,各给药组血清T水平显著下降,E2水平显著上升(P<0.01),卵巢组织病理可见囊状扩张卵泡数目减少,颗粒细胞层增厚,可见各级卵泡,二陈汤组IRS-1,IRS-2 mRNA及蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01);柴胡疏肝散组IRS-1 mRNA及蛋白表达显著上升(P<0.01),IRS-2 mRNA及蛋白表达有上升趋势;合方组IRS-1 mRNA及蛋白表达和IRS-2 mRNA表达明显上升(P<0.05),IRS-2 mRNA有上升趋势;二甲双胍组IRS-1蛋白和IRS-2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01),IRS-1 mRNA有上升趋势。结论:二陈汤改善PCOS模型大鼠的胰岛素抵抗效果较柴胡疏肝散更为显著,其机制可能与调控胰岛素信号转导通路的关键信号分子IRS-1,IRS-2 mRNA和蛋白表达水平有关。     

加味芍药甘草汤对多囊卵巢综合征模型大鼠的干预作用

目的:探究加味芍药甘草汤对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠的干预作用及机制。方法:SD雌性大鼠随机分为正常组,模型组,加味芍药甘草汤低、中、高剂量(12.5,25.0,50.0 g·kg-1·d-1)组,达英-35组(0.001 g·kg-1·d-1),每组6只。除正常组给予蒸馏水外,其余各组利用来曲唑(0.001 g·kg-1·d-1)灌胃给药21 d制备PCOS大鼠模型,造模后加味芍药甘草汤及达英-35组分别以相应剂量灌胃给药2周,正常组及模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。采用阴道涂片观察动情周期;卵巢组织切片观察形态变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测甾类激素(睾酮,雌二醇,孕酮,促黄体生成素)水平;并用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠卵巢组织中水通道蛋白-9(aquaporin-9,AQP-9)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠动情周期发生紊乱;体质量与卵巢质量明显增加;卵巢组织中存在大量初级囊性扩张卵泡,颗粒细胞疏松,成熟卵泡内未见卵母细胞,放射冠消失;血清睾酮和促黄体生成素的水平均显著升高(P0.05),而雌二醇和孕酮水平显著降低(P0.05)。与模型组大鼠比较,加味芍药甘草汤可以剂量依赖性地减轻体质量和卵巢质量,降低血清中雄激素和促黄体生成素水平,提高血清中雌激素及孕激素水平,并且与卵巢中AQP-9的表达呈相关性。结论:加味芍药甘草汤可能通过增加卵巢颗粒细胞中AQP-9表达干预PCOS大鼠卵巢多囊样变和高雄激素血症。     

肝郁、脾虚和肝郁脾虚证模型大鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的变化及柴疏四君子汤的作用

目的：比较肝郁、脾虚和肝郁脾虚模型大鼠甲状腺功能的变化及应用疏肝健脾方后的效用。方法：大鼠随机分为正常对照组、肝郁组、脾虚组、肝郁脾虚组、肝郁柴疏四君子汤组（肝郁治疗组）、脾虚柴疏四君子汤组（脾虚治疗组）、肝郁脾虚柴疏四君子汤组（肝郁脾虚治疗组）7组,每组10只。肝郁组、脾虚组、肝郁脾虚组及其各治疗组大鼠分别采用慢性束缚、过度疲劳+饮食失节、慢性束缚+过度疲劳+饮食失节法造模,正常对照组不予处理;3个模型治疗组分别于造模第2周末（即造模第15天起）,按3.57 g·kg^-1给予大鼠柴疏四君子汤颗粒灌胃,连续2周;各模型组和正常对照组给予等量蒸馏水。实验第29天,测定各组大鼠血清三碘甲腺原氨酸（T₃）、甲状腺素（T₄）、促甲状腺激素（TSH）、血清和下丘脑促甲状腺激素释放激素（TRH）。结果：与正常组相比,肝郁组、脾虚组和肝郁脾虚组大鼠血清T3,T4,TRH均显著降低（P<0.05）,TSH均显著升高（P<0.05）;脾虚组和肝郁脾虚组大鼠下丘脑TRH均显著降低（P<0.05）;肝郁组大鼠下丘脑TRH无明显变化。与肝郁组相比,肝郁柴疏四君子汤治疗组大鼠血清T4显著升高（P<0.05）,TSH显著降低（P<0.05）,血清T3TRH和下丘脑TRH无明显变化;与脾虚组相比,脾虚柴疏四君子汤治疗组大鼠血清T3显著升高（P<0.05）,TSH显著降低（P<0.05）,下丘脑TRH有升高趋势,血清T4,TRH无明显变化;与肝郁脾虚组相比,肝郁脾虚柴疏四君子汤治疗组大鼠血清T3,下丘脑TRH均显著升高（P<0.05）,血清TSH显著降低（P<0.05）,血清T4,TRH无明显变化。结论：肝郁、脾虚、肝郁脾虚三证模型大鼠存在甲状腺功能减低并伴有下丘脑-垂体-甲状腺轴调节异常,其中肝郁证存在下丘脑TRH的释放障碍,脾虚和肝郁脾虚则同时还存在TRH合成的抑制。柴疏四君子汤对3个证候模型的甲状腺功能及其轴调节具有一定的改善作用,但以对肝郁脾虚证的作用最优。     

龙胆泻肝汤对PCOS模型大鼠的影响

目的:研究龙胆泻肝汤对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠药效观察及机制,为龙胆泻肝汤临床PCOS的应用提供初步实验依据。方法:将SD大鼠50只,随机分为2组,即正常组10只、模型制备组40只,采用胰岛素(INS)联合人绒毛膜促性腺激素(HCG)法复制大鼠PCOS模型,造模成功的大鼠分为模型组、达英-35(0.21 g·kg-1)及龙胆泻肝汤高、低剂量组(29.6,7.4 g·kg-1),除正常组外,其余各组连续灌胃给药15 d;动物处理后测量卵巢质量及体积大小,检测各组大鼠血清中促黄体生成素(LH)/卵泡刺激素(FSH),睾酮(T),空腹血糖,空腹胰岛素(INS)激素水平及炎症因子白细胞介素-2(IL-2),IL-4,IL-6,IL-10水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析各组卵巢组织中JAK2,STAT3,p-STAT3和IL-6蛋白的表达量。结果:与正常组比较,模型组卵巢质量及体积明显升高,血清LH/FSH,T,空腹血糖及INS均明显升高,IL-2,IL-6,IL-10水平明显升高,JAK2,STAT3和IL-6蛋白的表达量明显升高(P0.05);与模型组比较,龙胆泻肝汤高、低剂量组明显降低卵巢质量及体积,血清LH/FSH,T,空腹血糖及INS,IL-2,IL-6,IL-10水平,升高JAK2,STAT3蛋白的表达量,降低p-STAT3和IL-6蛋白的表达量(P0.05)。结论:龙胆泻肝汤对PCOS大鼠具有明显疗效,主要通过降低激素水平和抑制炎症反应;且其机制可能与JAK2/STAT3通路相关。     

补肾化痰通络法加针刺治疗肥胖型多囊卵巢综合征的临床研究

[目的] 观察补肾化痰通络中药加针刺治疗肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)的临床疗效。[方法] 将80例肥胖型PCOS患者随机分为中药组、中药加针刺组各40例。两组均建议运动和饮食控制相结合以减轻体质量,中药组口服补肾化痰通络中药,中药加针刺组中加用针刺治疗。两组均治疗3个月经周期,观察临床疗效,黄体生成素/卵泡刺激素(LH/FSH)、睾酮(T)、血糖(FPG)、胰岛素(FINS)的变化,评估胰岛素抵抗(IR).[结果] 中药加针刺组总有效率为80.0%;中药组总有效率为67.5%.体重指数(BMI)、LH/FSH、T、FINS、IR两组治疗后较治疗前均明显降低(P<0.05),BMI、T、FINS、IR治疗后中药加针刺组明显低于中药组(P<0.05),LH/FSH两组治疗后差异无统计学意义(P>0.05);FPG两组治疗前后差异无统计学意义。[结论] 补肾化痰通络中药加针刺治疗肥胖型PCOS临床疗效优于单纯应用中药组。     

电针对PCOS合并IR大鼠下丘脑瘦素/Kisspeptin信号的影响

目的:通过电针对多囊卵巢综合征(PCOS)合并胰岛素抵抗(IR)大鼠生殖内分泌与代谢功能的同时调节,探讨其与影响下丘脑瘦素(LEP)/Kisspeptin(KP)信号传导的关联性。方法:3周龄SD雌性大鼠以硫酸普拉睾酮钠皮下注射联合高脂饲料喂养21 d建立PCOS合并IR模型,建模后随机分为模型组、西药组、电针组,继续高脂饲料喂养。另设空白组,每组8只。电针组大鼠予三阴交、关元、中脘、足(后)三里穴位电针治疗,西药组大鼠予二甲双胍溶液灌胃,连续治疗28 d。检测血清T、LH、FSH、LEP、FINS和FPG水平变化,计算HOMA-IR;HE染色观察卵巢形态学变化;实时PCR法检测下丘脑LEP mRNA、Kiss-1 mRNA和GnRH mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测下丘脑LEP和KP蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠性激素紊乱、糖脂代谢异常(P<0.01),下丘脑LEP mRNA及蛋白表达降低且Kiss-1 mRNA、GnRH mRNA及KP蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组大鼠血清LH、LEP水平及HOMA-IR降低(P<0.01或P<0.05),下丘脑LEP mRNA及蛋白表达升高(P<0.01或P<0.05),GnRH mRNA表达降低(P<0.05);西药组大鼠血清T、LH、LEP、FINS水平及HOMA-IR降低(P<0.05或P<0.01),下丘脑LEP mRNA表达升高(P<0.01)。西药组和电针组大鼠卵巢结构均较模型组改善,电针组大鼠血清T、LH、FSH、LEP、FINS、FPG水平,HOMA-IR,下丘脑LEP mRNA、Kiss-1 mRNA及GnRH mRNA表达,以及LEP及KP蛋白表达与西药组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针干预PCOS合并IR大鼠,可影响下丘脑LEP/KP信号传导,可能是电针同时调节糖脂代谢与生殖内分泌治疗PCOS的机制。     

逆针灸关元穴对12月龄自然更年期大鼠体质量增长率、下丘脑和卵巢瘦素含量的影响

[目的]观察12月龄自然更年期大鼠体质量增长率、下丘脑和卵巢瘦素含量的变化及逆针灸关元穴对其的影响,探讨预先针灸对更年期早期机体异常的预防作用。[方法]通过阴道涂片筛查更年期雌性大鼠,以自然老化法获得大鼠更年期模型,以预先针灸关元穴为介入方法,采用放射免疫法检测瘦素水平,观察12月龄自然更年期大鼠体重增长率及下丘脑、卵巢瘦素含量及逆针灸对其的影响。[结果]自然更年期大鼠体质量呈正增长,下丘脑和卵巢瘦素水平升高(P0.01)。逆针灸降低大鼠体质量增长率(P0.01,P0.05),并降低下丘脑和卵巢瘦素水平(P0.01)。[结论]逆针灸可以通过改善更年期机体瘦素抵抗的状态,在一定程度上减缓更年期体脂的异常堆积和卵巢功能的减退。