正常人肝细胞中HBV-PHSA受体基因表达的研究

作者根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｄｒ型ＰｒｅＳ２基因序列设计合成一对聚合酶链反应（ＰＣＲ）引物，经特异性试验后，用于扩增正常人肝细胞中多聚人白蛋白受体（ＰＨＳＡｒ）基因转录产物。结果：ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ－ＰＣＲ扩增结果均为阳性，而相应骨骼肌总ＲＮＡ扩增结果呈阴性，提示乙型肝炎病毒ＰｒｅＳ２区与ＰＨＳＡｒ基因外显子序列具有一定程度的同源性；同时表明ＰＨＳＡｒ基因在肝组织中处于表达状态，而对ＨＢＶ不敏感的组织如骨骼肌则不表达。该研究结果与其它ＨＢＶ－ＰＨＳＡｒ研究相比，进一步证实了ＰＨＳＡｒ在ＨＢＶ感染肝细胞的作用。     

西安地区献血员HGV与HBV及HCV混合感染

研究西安地区献血员中庚型肝炎病毒与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）混合感染情况。方法采用ＥＬＩＳＡ方法检测献血员３４２例血清中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ,用逆转录聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果发现在西安地区ＨＢｓＡｇ与抗－ＨＣＶ均为阴性的献血员中ＨＧＶ－ＲＮＡ,阳性率为３．５０％（７     

2.2.15细胞中HBV DNA前C和C区PCR扩增及其产物测序

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及其扩增产物的直接测序技术对２．２．１５细胞中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因前Ｃ和Ｃ区进行测序。结果表明，根据ａｙｗ亚型ＨＢＶ基因设计的引物能够扩增２．２．１５细胞中ＨＢＶＤＮＡ扩增产物位于２２１－２９８碱基对之间，而对ａｄｒ亚型ＨＢＶＤＮＡ无扩增作用，说明ＰＣＲ扩增是特异性的，所测到的１３２个碱基序列与ａｗｙ１亚型ＨＢＶＤＮＡ完全符合，提示２．２．１５细胞中ＨＢＶＤＮＡ属ａ     

多重PCR扩增HBVDNA，HCVRNA和HDVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ，ＨＣＶＲＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭晏海（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３）关键词聚合酶链反应；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；丁型肝炎病毒中图号Ｑ５２３乙型肝炎病毒（ＮＢＶ）和丙型...     

广西原发性肝癌与丙型肝炎病毒感染关系探讨

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）法检测３０例原发性肝癌（ＰＨＣ）患者和３０例非肝病患者血清中的丙型肝炎病毒（Ｈｃｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）。结果：ＰＨＣ组Ｈｃｖ－ＲＮＡ（＋）为２７％明显高于对照组（７％）（Ｐ＜０．０５），而ＰＨＣ组ＨＢｖＭ（＋）为８７％，明显高于对照组（２３％）（Ｐ＜０．０１）；ＰＨＣ组ＨＢＶ－Ｍ（＋）和ＨＢＶＭ（一）时ＨＣＶ－ＲＮＡ结果无差异（Ｐ＞０．０５）．提示广西ＰＨＣ发病与ＨＣＶ感染有一定关系。     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞 …

目的 构建丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ融合蛋白的真核表达载体。方法 用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,用脂质体转染试剂将其转入ＣＯＳ７细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白,结果Ｅ２－ｐｒｅＳ融合蛋白基因包括了全长的ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,嵌合基因长度约１．６ｋｂ表达载体在ＣＯＳ７细胞表达出     

外参照PCR及其产物酶联杂交定量检测HBV DNA

建立一种敏感,特异和精确的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因ＰＣＲ及其产物的酶联杂交定量分析技术。方法：（１）常规ＰＣＲ法扩增ＨＢＶ ＤＮＡ质粒和血清ＨＢＶ ＤＮＡ,引物（ＳＰ１,ＳＰ２）为一对ＨＢＶ ＤＮＡ Ｓ区基因特异引物,扩增片段长３１９ｂｐ,ＳＰ２的５′端用生物素修饰。扩增条件经过严格优化组合,以最大限度减少非特异片段,包括引物二聚体产生。设定５个不同梯度的ＨＢＶ ＤＮＡ外参照管,制作标准曲线。（     

中国人丙型肝炎病毒囊膜蛋白2HVR1 cDNA的序列分析

目的：了解中国ＨＣＶ流行株高变区１（ＨＶＲ１）的特点。方法：对来自山东（ＳＤ）、上海（ＳＨ）两地患者血清ＲＮＡ进行逆转录－巢式ＰＣＲ，扩增ＨＣＶ囊膜蛋白２基因片段，用ＰＣＲ直接测序法对该片段进行序列测定。结果：（１）扩增片段（命名为Ｐ３８８）对应于日本ＨＣＶ－Ｊ株序列核苷酸１４３９￣１８２６位（氨基酸位３７１￣４９８）；（２）中国人ＨＣＶ ＨＶＲ１位于氨基酸位３８４￣４１０，与发表的ＨＣＶⅡ型ＨＶ     

60例散发性急性病毒性肝炎的病原学分型

对６０例已排除甲型、乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的急性病毒性肝炎患者，以酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测抗－ＨＣＶ、抗－ＨＥＶ、抗－ＨＥＶ－ＩｇＭ、ＨＤＶ－Ａｇ、抗－ＨＤＶ－ＩｇＭ，抗－ＨＤＶ、抗－ＣＭＶ－ＩｇＭ及抗－ＥＢＶ－ＩｇＭ，同时应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果表明：１３．３％（８／６０）为丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染，６１．７％（３７／６０）为戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染，     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S和S区基因突变及基因分型

 【目的】 研究HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S(前S1和前S2)及S区的基因突变模式和基因分型,为从病毒因素探讨HBV母婴传播免疫阻断失败提供实验基础。【方法】 选取血清HBsAg阳性且HBV-DNA≥105 IU/ mL的孕妇41 例,提取血清HBV-DNA,靶向设计HBV各基因型的前S及S区通用引物, 经PCR 扩增测序进行序列分析, 检测和分析前S及S区基因的突变情况,并进行基因分型。【结果】 ①在 41 例样本中, 共有29例( 70.73%)样本存在前S1、前S2及S区基因突变,突变方式以碱基置换为主;前S1、前S2及S区基因的突变频率分别为8.96%、9.88%和3.24%,前S1和前S2区的突变频率显著高于S区(P < 0.05)。②对41例样本根据S区点突变的特点进行基因分型及同源树簇集分析,结果B基因型22例,C基因型19例,两基因型在全S区的基因突变频率相比,差异无统计学意义(P > 0.05);B、C两基因型分别形成独立的簇集,簇集间同源性<90%,但簇集内B、C两个基因型的同源性分别达96%和95%。【结论】 ①HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S及S区的基因突变普遍存在,突变形式以碱基置换为主,突变频率以前S1和前S2区常见,S区则相对稳定;②不同HBV基因型间同源性差异较大,按HBV不同基因型分别进行前S和S区基因突变模式的分析将更有意义。     

慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒DNA序列异质性及准种特点的研究

目的 以乙型肝炎病毒(HBV)基因异质性来探讨HBV准种群在慢性感染者中的存在状态。方法应用聚合酶链反应（PCR)法,自18例慢性患者血清中分别扩增前C／C基因、P基因逆转录酶区(RT)、HBV全S区、X基因和全基因组序列,克隆人pGEM Teasy质粒,挑选81克隆进行DNA测序以确定病毒的变异程度。结果除外大段缺失突变的克隆,来源于同一患者前C／C区、RT区、全S区、X区和全基因组不同克隆之间的碱基序列同源性分别为98．0％-99．1％、98．7％-99．3％、97．5％-100％、93．0％-98．20A,和96．6％-97．5％。前C区A83点突变、C抗原内部缺失较为常见,缺失突变、终止替换突变、短序列的插入或缺失突变造成的移框突变在各个区域中均可检出,X基因(核心蛋白启动子区,CP)内部缺失突变不仅导致X蛋白羧基端的多样性,而且调控HBeAg的表达。编码截短型表面抗原中蛋白和缺陷病毒基因亦在患者外周血中。结论 多区域测序结果提示HBV慢性患者体内HBV呈现准种群共存,X区(CP区)内存在热点缺失突变区,CP区的变异可能影响前C蛋白的表达,这些变异可能与患者不良预后有关。病毒蛋白的氨基酸的替换突变表现的个体特异性值得进一步研究。     

HBsAg无症状携带者血清HBV DNA与Pre S_2关系初探

应用Dig-HBV DNA探针点杂交检测96例HBsAg无症状携带者血清HBV DNA,同时检测其HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc及Pre S_2。结果表明,HBV DNA与HBeAg及Pre S_2有着极为密切的平行关系。Pre S_2与HBV DNA阳性强度基本符合,Pre S_2可作为HBV复制的敏感指标。HBVDNA与抗HBc无直接关系,说明抗HBc仅能作为HBV感染的一项指标。抗HBe阳性,患者传染性低,但不排除其具有传染性的可能。     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV血清标志物之间的相关性探讨

目的: 探讨乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV血清标志物(即"乙肝五项")之间的相关性。方法: 用EL ISA法检测457例HBsAg(+)血清,分析其"乙肝五项"与前S1抗原之间的关系。结果: 前S1抗原与"乙肝五项"有不同的相关性,其具有独立的检测价值。结论: 前S1抗原作为HBV感染、复制的指标较HBeAg更敏感,与乙型肝炎的活动性有关,对"乙肝五项"检测有重要的补充作用。     

乙型肝炎病毒核心启动子热点突变与HBeAg存在状态

目的 :研究乙型肝炎病毒 (HBV)核心启动子 (BCP)区 176 2位和 176 4位热点突变对HBeAg存在状态的影响。方法 :采用错配引物的PCR结合限制性内切酶技术检测 90例不同HBeAg状态的HBV无症状携带者的HBVBCP热点突变。结果 :6 0例HBeAg阴性者中HBVBCP热点突变者 2 6例 (4 3.3% ) ,其中 2 0例伴有HBV前C区 (Pre C)区1896位热点突变 ;30例HBeAg阳性者中仅 3例 (10 % )出现HBVBCP热点突变 ;无HBVPre C区热点突变者中 ,19例HBeAg阴性者有 6例存在HBVBCP热点突变 (31.6 % ) ,2 8例HBeAg阳性者仅 2例有HBVBCP热点突变 (7.1% ) ,两组间比较差异具显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :HBVBCP热点突变在HBeAg阴性HBV感染者中较常见 ,且常伴有HBVPre C区 1896位突变 ,HBVBCP热点突变可能是HBeAg阴性的另一原因     

siRNA抑制乙型肝炎病毒在HepG2.2.15细胞中的复制与表达

目的 探讨靶向HBV S基因的siRNA表达质粒在HepG2.2.15细胞中对HBV病毒的复制与表达的抑制效应及其抗病毒活性.方法 设计并构建了两个靶向HBV S基因的siRNA表达质粒S1和S2,随机设计的用于对照的非同源siRNA表达质粒S3.首先在HepG2.2.15细胞中通过实时荧光定量PCR评估该siRNA表达质粒对HBV mRNA表达的抑制效应,接着在HepG2.2.15细胞中通过ELISA方法进一步枪测它们的抗病毒活性细胞上清液中HBV标志性蛋白HBsAg、HBeAg的表达水平.结果 在siRNA表达质粒转染HepG2.2.15细胞后48 h,HBV S基因mRNA表达量下降64%～88%,HBsAg和HBeAg的表达水平分别降低了60%～82%和56%～78%.S1+S2联合使用转染细胞中显著抑制HBV病毒的复制与表达的效率,而对照组S3无抑制效果.结论 发现靶向HBV S基因的siRNA表达质粒能够在HepG2.2.15细胞中有效的抑制HBV病毒的复制与表达,并能够降低细胞上清液中HBsAg和HBeAg的表达水平.S1+S2联合使用转染细胞中可以显著抑制HBV的复制与表达的效率.RNAi可能成为防治HBV感染有效的全新的抗病毒防御策略.     

用合成肽制备乙型肝炎病毒前S_2抗体及其诊断应用

根据乙型肝炎病毒(HBV)前S_2抗原(Pre S_2)氨基酸顺序合成了P120-145多肽,制备抗血清,用于检测乙肝患者血清中Pre S_2,并研究了与HBV DNA及其他HBV标志物的相关性。结果表明:HBeAg阳性77例,Pre S_2阳性74例(96.1％)。抗HBe IgM及PHSA-r阳性23例,血清Pre S_2阳性19例(82.6％)。HBV DNA阳性26例,血清Pre S_2阳性25例(96.2％)。说明血清Pre S_2阳性可以反映HBV复制。     

EXPRESSION OF HBV PRE S1 PEPTIDE IN E. Coli AND PRODUCT CHARACTERIZATION

HBV Pie S1 sequence is supposed to play an inaportajtt role in the infection of HBV. Presence of Pre S1/anti-Pre S1 in serum has valuable clinical implications. In order to improve the study of Pre S1,Pre S1 sequence was overexpressed in E, coti as a fusion protein with MBP (Maltose-binding protein), and anti-Pre S1 antiserum was elicited in rabbits by Pre S1-NIBP purified by affinity chromatography. The recombinant plasmid constructed from pMAL-cRI expressed the 106aa Pre S1 sequence at the C terminal of MBP by tae promoter. The resulting protein is about 54kD in size. Western-blot analysis confirmed its reactivity with antiserum derived from synthetic Pre S1 peptide and serum from patients with acute hepatitis B (AHB). ELISA showed that Pre S1-MBP and Dane particles purified from AHB patient‘s serum reacted with antiserum against synthetic pie S1 peptide,and this reaction was specifically inhibited by synthetic Pre S1 peptide, ELISA also demonstrated that antiserum against Pre S1-MBP reacted with synthetic pre S1 puptide,but not with synthetic HCV puptide or HEV peptide.     

HBeAg阳性患者血清中Pre-S1抗原与C基因启动子变异的检测

目的 研究HBV C基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)与前S1(Pre-S1)抗原基因变异的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法 分别对94例HBeAg阳性乙肝患者进行酶联免疫吸附法(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBV DNA，PCR—微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变。结果 在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性有65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性有29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。74例BCP基因突变血清中，55例(74．3％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5 CPS／ml；而在20例非BCP基因突变血清中，只有6例(30％)的HBV DNA拷贝数超过了10^5CPS／ml。结论 e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异并无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数则成正相关，它们都可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。