耐多药分枝杆菌药物MIC快速测定

目的 探讨一种新型的变色液体培养基检测系统对耐多药分枝杆菌药物MIC快速测定。方法 采用NCCL推荐的绝对浓度法设计的一种新型快速变色液体培养基和9种药物试验剂盒,每种药物均有11种浓度梯度。结果 耐多药结核分枝杆菌对9种药物MIC测定药物效果好,快速,平均测定时间仅需5.6天。结论 这种新型变色液体培养基检测系统具有快速,操作简便等特点,可为临床早期合理用药提供有效的实验室数据,适合于广大基层实验室采用和推广。     

结核分支杆菌耐药性检测方法研究进展

结核病至今仍是世界上一个严重的公共卫生问题,结核分支杆菌(MTB)的高耐药问题是结核病疫情恶化的重要原因。结核分支杆菌耐药性的快速检测,对于其防治具有重要意义,目前临床正在使用和研究的耐药性检测方法归纳起来,有表型检测和基因检测两大类。1表型检测1·1常规药敏试验方法用L-J或Middlebrook7H10培养基做直接或间接药敏试验。此方法由于受结核菌缓慢的生长速度的影响而费力费时(需6~8周甚至更长时间),不能满足临床之急需。1·2BACTECTB-460放射性液体培养基法是目前最常用的结核菌快速药敏试验方法。其原理为利用细菌生长需要代…     

双向培养基快速分离培养结核分支杆菌研究

[目的]建立一种快速、经济、准确培养分离结核分支杆菌的方法. [方法]用双向培养基培养不同稀释度标准结核分支杆菌H37Rv,记录出现阳性结果的时间,并与改良罗氏培养基配对比较;将200份肺结核患者痰液标本直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种在双向培养基和改良罗氏培养基,比较两种培养基的阳性率. [结果]标准结核分支杆菌H37Rv在双向培养基上平均(10.3±5.2)d出现阳性结果,而改良罗氏培养基平均(26.0±11.5)d出现阳性结果,两者差异有统计学意义(P<0.01);在双向培养基和改良罗氏培养基上结核分支杆菌总阳性率分别为37.5%、36.0%.涂阳标本在双向培养基和改良罗氏培养基上阳性率分别为97.14%、95.71%,涂阴标本在两种培养基上阳性率分别为5.38%、3.84%,组组各自比较差异均无统计学意义(P>0.05). [结论]双向培养基能快速分离培养出结核分支杆菌,结果可靠,操作简单,价格低廉,适合广大基层医疗单位推广应用.     

两种双向培养联合应用法在结核病快速诊断中的应用

[目的]应用两种快速双向培养基对正常结核分支杆菌和L型结核分支杆菌进行分离培养,探讨在结核病诊断中的应用价值。[方法]以经改进的快速双向培养和快速双向L型培养基,对临床结核病人痰标本250份进行分离正常和L型结核分支杆菌,比较2种联合培养法的快速诊断作用。[结果]快速双向培养基培养总阳性率35.2%(88/250);双向L型培养基分离L型结核分支杆菌总阳性率31.2%(78/250)。2种培养基联合应用,总阳性率62.8%(157/250),明显高于单一培养基的检出率(2=38.10、50.11,P值均0.01),亦显著高于传统改良罗氏培养基的检出率36.0%(90/250,2=35.92,P0.01)。[结论]2种双向培养基联合应用,能明显提高结核病检出率,对快速诊断与控制结核病有重要作用。     

双向培养基快速分离培养结核分支杆菌

目的建立一种快速、经济、准确培养分离结核分支杆菌的方法。方法用双向培养基培养不同稀释度标准结核分支杆菌H37Rv,记录出现阳性结果的时间,并与改良罗氏培养基配对比较;将200份肺结核患者痰液标本直接涂片镜检,按涂阳和涂阴标本配对接种于双向培养基和改良罗氏培养基上,比较其阳性率。结果标准结核分支杆菌H37Rv在双向培养基上（10．3±5．2）d出现阳性,而改良罗氏培养基（26．0±11．5）d出现阳性,两者差异有显著性（P〈0．01）;在双向培养基、改良罗氏培养基上结核分支杆菌总阳性率分别为37．5％和36．0％,涂阳标本在双向培养基、改良罗氏培养基上阳性率分别为97．14％和95．71％,涂阴标本在2种培养基上阳性率分别为5．38％和3．84％,组组各自比较差异均无显著性（P〉0．05）。结论双向培养基能快速分离培养出结核分支杆菌,结果可靠,操作简单,价格低廉,适合广大基层医疗单位推广应用。     

单链探针反向杂交试验快速检测结核分支杆菌5种耐药基因

目的:建立可同时检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),评价该技术检测结核分支杆菌利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇耐药性的应用价值。方法:采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因。将PCR-LiPA结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA结果与药敏结果比较,了解结核分支杆菌耐药性表型与耐药基因突变的相关性。结果:50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,12株耐INH,7株耐RFP,15株耐SM,2株耐EMB。PCR-LiPA方法分析结果:耐RFP菌株中4株rpoB基因突变;耐INH菌株中5株KatG基因突变;耐SM菌株中7株、SM敏感株1株rpsl基因突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株embB基因突变。与DNA测序结果的符合率为100%。结论:用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌耐药株的rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变,可用于临床结核分支杆菌耐药性的辅助诊断手段。     

绵竹市复、难治肺结核患者的耐药及L型结核菌监测研究

目的 :为加速本市结核病控制进程。方法 :按照结核病诊断细菌学检验规程的要求 ,对本市 2 6例复、难治肺结核患者进行现场痰涂片、改良酸罗氏培养、 L型结核菌培养、菌型初步鉴定、药物敏感试验。结果 :分离出 11例结核耐药菌株 ,其中结核分支杆菌 10例 ,非典型分支杆菌 1例。同时耐 HR 1种药物以上患者 5例。 L型结核菌检出率 5 0 % (13/2 6 ) ,其中涂片 (- )常规培养 (- )的肺结核病人 L型结核检出 5例。结论 :采取医务人员直接督导化疗 (DOTS)是防止耐药产生关系 ,并建议在判定结核细菌学治愈的标准时 ,若 L型结核菌也为阴性 ,才是真正的细菌学治愈。     

单链探针反向杂交试验技术检测结核分支杆菌链霉素耐药基因

[目的]建立同时检测结核分支杆菌链霉素耐药基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),同时从分子水平分析结核分支杆菌链霉素耐药性表型与耐药基因rpsL、rrs突变的相关性,评价单链探针反向杂交技术检测结核分支杆菌链霉素耐药性的应用价值.[方法]采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpsL、rrs耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因.将PCR-LiPA方法结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA方法结果与药敏结果比较.[结果]50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,15株耐SM.PCR-LiPA方法分析分析结果:耐SM菌株中7株rpsL基因突变、SM敏感株1株rpsl基因突变,rrs基因未发现突变;与DNA测序结果的符合率为100%.[结论]用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌链霉素耐药株的rpsL、rrs基因突变,可作为临床结核分支杆菌链霉素耐药性的辅助诊断手段.     

1684株结核分支杆菌单一、联合药敏试验结果分析

目的了解长沙市结核分支杆菌耐药情况。方法采用绝对浓度法进行结核分支杆菌药敏试验。结果1 684株结核分支杆菌药敏试验显示:单一药敏试验耐药率高低次序是:RFT(15.50%)、SM(12.59%)、RFP(10.69%)、INH(8.37%)、PZA(6.47%)、PAS(2.79%)、EMB(2.32%)、KM(1.72%);总耐药率为26.03%。结论长沙市结核分支杆菌总的耐药率低于全国平均水平。     

结核分支杆菌1293株的耐药性分析

目的　分析 1996年以来到福州肺科医院就诊的肺结核病人结核分支杆菌耐药态势 ,为结核病的防治提供依据。方法　应用固体罗氏培养基与快速分离培养技术 (BACTECMGIT 960 )作痰抗酸杆菌培养 ,经菌型鉴定为人型结核分支杆菌者 3 0 0 2株 ,作异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)、乙胺丁醇 (EMB)耐药性测定。结果　 3 0 0 2株结核分支杆菌耐药12 93株 ,总耐药率 43 1% ;耐多药 (MDR) 2 5 9株 ,耐多药率 8 6% ,原发及获得性耐多药率分别为 3 9%和 6 9%。耐单药顺位从高到低依次为SM(2 6 3 % ) ,RFP(2 5 5 % ) ,INH(14 3 % ) ,EMB(10 2 % )。耐 2种药及其以上耐药率 2 0 2 % ,MDR耐药率11 6%。各年龄组耐药及耐多药均为青年组 >中年组 >老年组。结论　结核分支杆菌耐药性结果反映了福州地区结核病耐药的基本现状 ,说明结核病患病率仍有升高的危险 ,防治工作任重道远。     

微量MIC检测结核分枝杆菌药物敏感性的应用评价研究

目的评价微量液体培养基最低抑菌浓度(MIC)快速法检测临床分离株耐多药结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)的临床应用价值。方法采用微量液体培养基MIC法对220株MTB临床分离株的链霉素(SM)、异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、氧氟沙星(OFLX)、左氧氟沙星(LVFX)、莫西沙星(MOX)、阿米卡星(AMK)、卡那霉素(KAN)和卷曲霉素(CPM)的最小抑菌浓度在96孔U型板微量液体培养基MIC中药物敏感性进行检测,并同传统的罗氏比例法药物敏感性进行比对。结果微量液体培养基MIC法药物敏感7~10 d获得结果,与罗氏比例法药敏结果进行比较,其敏感性分别为93.0%、95.9%、100.0%、93.8%、90.8%、88.6%、100.0%、90.0%、85.7%和93.7%,特异性分别为96.3%、95.9%、97.9%、94.9%、96.5%、97.7%、99.1%、93.9%、99.0%和95.2%,符合率分别为95.0%、95.9%、98.6%、94.5%、94.5%、95.9%、99.1%、93.2%、98.2%和95.0%。结论微量MIC药物敏性快速检测方法与罗氏比例法药物敏感性结果比较,10种药物微量MIC测定敏感性、特异性、符合率均较高,是目前较理想的一种快速检测结核分枝杆菌药物敏感性的方法,具有较高的临床应用价值。     

利用基因芯片技术检测结核分支杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的研究

目的利用基因芯片技术对我国结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变进行研究,建立大规模快速检测结核分支杆菌耐药基因型的基因芯片分子药敏试验方法. 方法利用寡核苷酸基因芯片技术分析19株结核分支杆菌临床分离株的rpoB基因突变,并经PCR-直接测序法(PCR-DS)验证,以结核分支杆菌H37Rv标准株为对照. 结果 7株结核分支杆菌药物敏感株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变,12株RFP耐药株中,1株芯片检测和PCR-DS分析均未见rpoB突变;11株rpoB基因有突变,其中5株为531位TCG→TTG或TGG突变,5株为526位CAC→TAC或GAC或CGC突变,531位和526位突变占耐药菌株rpoB突变的83.3%,其余为502、505、506、507、516、518、522、538位突变;芯片检测和PCR-DS分析结果符合率达100%. 结论大多数结核分支杆菌耐RFP是由于rpoB基因突变所致,采用基因芯片技术可以快速、准确、大规模地确定结核分支杆菌RFP耐药突变的部位和性质,是一种有前途的结核分支杆菌分子药敏试验方法.     

BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种初步鉴定及药敏中的应用

目的评价BACTEC MGIT 960系统在分枝杆菌属菌种鉴定及药敏中的应用价值。方法显微镜观察BACTEC MGIT 960系统分离的162株分枝杆菌在液体培养基中的形态,传统生化和核酸检测法同时鉴定分枝杆菌属菌种,分析细菌形态与菌种之间的关系;应用BACTEC MGIT 960系统对分离的141株结核分枝杆菌进行药敏试验。结果 162株分枝杆菌属在MGIT液体培养基中呈索条状、分枝状、点粒状和分散状4种形态;呈索条状132株分枝杆菌属均为结核分枝杆菌,呈点粒状10株和分散状6株分枝杆菌属均为非结核分枝杆菌;对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药率分别为9.9%、14.2%、9.2%和6.4%,总耐药率18.4%,同时耐利福平和异烟肼的为8.5%;药敏平均检测时间为9.3 d。结论 BACTEC MGIT 960系统可快速将分枝杆菌属初步鉴定为结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,能快速准确获得临床一线抗结核药物的药敏结果。     

1例痰标本的Xpert MTB/RIF检测与药敏试验结果对比分析

目的分析传统药敏试验与利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测结果差异的原因。方法对1例涂片阳性痰标本,同时进行Xpert MTB/RIF检测、培养及药敏试验。结果标本Xpert MTB/RIF检测结果为结核分枝杆菌(MTB)检出低、利福平耐药RIF;药敏试验菌群鉴定为非结核分支杆菌、利福平耐药。结论 Xpert MTB/RIF检测在实验室诊断中仍需结合传统的涂片镜检、分离培养、药敏试验等,才能使检测结果更加准确、全面。     

结核分枝杆菌荧光判读药敏试验的方法

目的 探讨结核分枝杆菌荧光判读药敏试验的方法,为临床提供有效检测手段.方法 采用MGIT液体培养结核分枝杆菌,利用结核分枝杆菌阳性的MGIT液体培养管作为原始管,进行一线抗结核药物利福平、异烟肼的药敏检测,与传统L-J培养比例法药敏检测结果比较.结果 148份标本结核分枝杆菌固体罗氏培养阳性检出率41.8％,MGIT液体培养阳性检出率48.0％,液体培养阳性检出率比固体培养高6.2％;45例液体药敏与比例法检测的药敏结果基本一致,平均8.4d报告药敏检测结果,与传统L-J培养比例法药敏检测28 d报告结果比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 荧光判读药敏试验法检测结核分枝杆菌药敏试验,具有快速、准确、方便等优点,可应用于临床的一种有效检测手段,值得推广.     

四种中药抗结核分枝杆菌药物敏感性的初步研究

目的初步探讨四种中药抗结核分枝杆菌的药物敏感性。方法对长沙市中心医院2009年1月-2010年3月确诊的结核病患者培养分离结核分枝杆菌,进行药物敏感性试验。采用改良罗氏培养基制备四种中药药物培养基,未加中药的改良罗氏培养基作为对照,分别观察结核分枝杆菌在四种中药药敏培养基上的生长情况。结果 1号中药培养基检测临床分离株79株,中药药物敏感性试验38株敏感,敏感率为48.10%;2号中药培养基检测临床分离株78株,中药药物敏感性试验62株敏感,敏感率为79.49%;3号中药培养基检测临床分离株41株,中药药物敏感性试验36株敏感,敏感率为87.80%;4号中药培养基检测临床分离株34株,中药药物敏感性试验31株敏感,敏感率为91.18%。四种中药对结核分枝杆菌药物敏感性不同,以3号和4号的抗菌效果最佳(χ2=35.82,P0.01)。结论 2号、3号和4号中药培养基均显示出良好的抑菌效果,其中3号和4号中药效果更好。可以进行临床用药进一步证实2种药在人体内对结核分枝杆菌的作用。     

龙岩市308株分枝杆菌鉴定及药敏试验结果

目的了解龙岩市结核病耐药情况,为临床诊治提供依据。方法对2015年1月至2016年6月结核病定点医院采集、改良性酸性罗氏培养基培养的308株分枝杆菌进行菌种鉴定及药敏试验,分析耐药情况。结果 308株分枝杆菌标本中,结核分枝杆菌占95.5%(294/308),非结核分枝杆菌占4.5%(14/308)。非结核分枝杆菌对一、二线抗结核药的耐药率均为100.0%(14/14),结核分枝杆菌分别为19.4%(57/294)和12.9%(38/294);非结核分枝杆菌的耐多药率78.6%(11/14),高于结核分枝杆菌的7.8%(23/294);广泛耐药率78.6%(11/14),也高于结核分枝杆菌的3.4%(10/294)。结论对结核病患者进行痰培养、菌种鉴定和药敏试验非常必要,可为结核病非结核分枝杆菌病的临床诊治提供更为合理的方案。     

烧伤伤口分泌物中一株施氏假单胞菌的分离与鉴定

正施氏假单胞菌是一类具有单极性鞭毛的革兰氏阴性杆菌,临床感染比较罕见~([1-2])。我们在一名烧伤患者伤口分泌物中分离出一株革兰氏阴性杆菌,经质谱鉴定为施氏假单胞菌,报告如下。1材料与方法(1)材料及患者情况:普通血培养基、麦康凯培养基、巧克力培养基、VITEK2微生物鉴定和药敏系统、质谱仪(梅里埃上海生物制品有限公司)。某8岁患者,在垃圾堆玩耍时踩入煤灰内致双足烧伤。烧伤创面总面积约4%,左右足各约2%。(2)方法:①分离培养:取无菌棉拭子沾取     

应用PCR-SSCP检测耐异烟肼结核分支杆菌Kat G基因突变

结核分支杆菌对抗结核药物产生耐受性，已成为全球结核防治工作面临的一个严重问题［１，２］。传统的药敏试验需１～２个月，难以满足临床诊治的需要。近年来发展的ＢＡＣＴＥＣ法测定耐药性也需要３～４周，仍为生长依赖性，且需昂贵仪器设备，因而限制其推广应用。因此对结核分支杆菌耐药机制深入了解，并依此建立准确的药敏检测新方法已成为结核病防治工作的一项重要而紧迫的课题。异烟肼（ＩＮＨ）是一线抗结核药物，最近的研究结果表明，结核分支杆菌耐ＩＮＨ的产生与过氧化氢一过氧化物酶编码基因（Ｋａｔ Ｇ）改变有关。聚合酶链反…     

分枝杆菌快速变色液体培养基临床应用的评价

目的 :评价快速变色液体培养基对分枝杆菌的检测与肺结核病早期诊断的临床应用和推广价值。方法 :对 14 5例疑似肺结核痰标本在痰厚涂片萋尼氏染色法抗酸染色镜检后分别接种于变色液体培养基和 L - J培养基 37℃培养并观察结果。变色液体培养基接种后于两周前和两周后分别每天观察一次和隔天观察一次 ,若培养基变为紫红色 ,或底层有紫红色颗粒沉淀时 ,作抗酸染色镜检 ,证实有分枝杆菌则为分枝杆菌培养阳性。改良 L - J培养基接种后按操作常规观察结果 ,八周未见细菌生长则为分枝杆菌培养阴性。结果 :变色液体培养基培养阳性率 4 4 .8% ,略高于 L - J培养基 35 .9% (P>0 .1) ;痰标本接种 15 d时 ,变色液体培养基培养阳性率 98% (6 4 /6 5 ) ,L - J培养基 19% (10 /5 2 ) ;分枝杆菌平均生长天数前者 10 d,后者 2 5 d。上述两组数据经统计学分析 ,差异均有显著性 (P<0 .0 0 5 )。污染率变色液体培养基为 6 .9% ,L - J培养基 4 % ,差异无显著性 (0 .2 5 相似文献