结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变快速检测方法的建立

目的建立结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计覆盖rpoB、katG、inhA基因突变区的系列寡核苷酸探针，并检测临床样品中结核分枝杆菌的基因突变情况，以此来判断耐药结果。结果在56个利福平耐药菌株中，有50个菌株都在rpoB基因上榆出有突变，利福平耐药突变检出率为89．3％（50／56）；有30个利福平敏感菌株rpoB基因上都未检出突变。有58个异烟肼培养的耐药菌株中有47个在katG或inhA基因上检出有突变，异烟肼耐药突变检出率为81．0％（47／58）；有30个异烟肼敏感菌株katG或inhA基因上未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可用于临床结核分枝杆菌耐药性的检测。     

应用双重聚合酶链反应检测乙型、丙型肝炎病毒

常规聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法对患者ＨＢＶ和ＨＣＶ需要分别检测 ,因而操作繁琐 ,费时费力 ,且增加了污染的机会 ,为此 ,我们建立了双重ＰＣＲ技术 ,实现一步法同时进行ＨＢＶ和ＨＣＶ的检测。选取肝病患者血清标本 115例 ,2 0例正常对照标本采自ＨＢｓＡｇ阴性、肝功能正常的献血员。核酸提取采用蛋白酶Ｋ消化 ,酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀 ,将提取的ＤＮＡ和ＲＮＡ复悬于焦碳二乙酯处理过的蒸馏水中 ,并加入 2ＵＲＮＡ酶抑制剂ＲＮａｓｉｎ。ＰＣＲ反应在核酸提取管中进行 ,总体积 5 0μｌ,反应条件为 10ｍｍｏｌ/ＬＴｒｉｓ·Ｃｌ (ｐＨ8.3…     

水杨酸及其相关化合物对分枝杆菌耐药性影响的研究进展

水杨酸(salicylate)存在于自然界的柳树皮、白珠树叶及甜桦叶中。具有水杨酸盐成分的植物在医药领域的应用,可以追溯到古代。公元前400年,希波克拉底记述过柳叶有奇效,煎煮柳叶,所得的汤剂可用于缓解分娩疼痛和治疗耳痛。1829年Brugnateli和Fontana分别发现了柳树皮的有效成分是水杨酸苷。1838年,Piria等由水杨酸苷制得水杨酸。随后水杨酸应用于缓解急性痛风和类风湿性关节炎,取得了一定的疗效。1877年还记载了水杨酸钠在排泄方面的应用。Maclagan比较了水杨酸苷和水杨酸作为解热药的效果和对急性风湿病的效果,发现水杨酸苷的效果归功于其在体内转化为水杨酸。但由于水杨酸对肠胃     

结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达,分子量（30.3kDa）与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%（45/48）和35.7%（30/84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。     

结核分枝杆菌Rv3914抗原的克隆表达与纯化

目的构建结核分枝杆菌Rv3914蛋白的重组质粒,并在大肠埃希菌中表达及纯化,为结核病血清学诊断提供候选抗原。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv3914基因片段,插入到pET-28b(+)载体中,构建pET28b-Rv3914重组质粒,转化大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3),经IPTG诱导表达后,应用Ni-NTA亲和柱纯化重组蛋白。结果 PCR扩增出Rv3914基因序列,重组质粒经测序并经BLAST分析后发现无点突变。pET28b-Rv3914重组质粒在大肠埃希菌E.coli BL21plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,重组蛋白占细胞蛋白总表达量的30%以上,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度超过90%、相对分子质量约为14.7×103的目的蛋白质。结论高纯度结核分枝杆菌Rv3914重组蛋白的获得为研究结核互补特异性抗原组合在结核病血清诊断中的价值奠定了基础。     

微卫星改变与肺癌发生发展的关系

目的 :研究肺癌组织中第 3号染色体短臂 (3P)和第 9号染色体短臂 (9P)上微卫星标志物的改变与肺癌发生发展的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)结合微卫星银染法检测 5 6例肺癌和 2 3例良性肺部病变 3P和 9P上的微卫星标志物的改变。结果 :5 6例肺癌组织标本中 3P上有微卫星改变 2 6例 ,检出率 46% ,9P上有微卫星改变的 2 3例 ,检出率为 41% ,5 6例肺癌组织中 ,3P和 9P上有微卫星改变的 3 9例 ,检出率 69 6% ,2 3例肺部良性疾病组织中均未出现微卫星标志物改变。肺癌组织标本中 3P上的微卫星改变与肺癌的分化程度有关 ,低分化肺癌的微卫星改变较高、中分化肺癌的微卫星改变明显增多 (P <0 .0 1)。而 9P上的微卫星改变与淋巴结转移有关 ,有淋巴结转移的肺癌组织标本上微卫星改变较不伴淋巴结转移的微卫星改变检出率明显增多 ,(P <0 .0 5 )。结论 :3P和 9P上的微卫星改变与肺癌发生、发展和转移密切相关 ,检测肺癌组织 3P和 9P上的微卫星改变对肺癌的早期诊断和判断有无淋巴结转移有一定的价值     

肺癌组织中微卫星标志物的检测

目的　研究肺癌组织中第三号染色体短臂 ( 3P)上微卫星标志物的改变及其诊断价值。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)结合微卫星银染法检测 3 2例肺癌和 15例良性肺部病变组织 3P2 4～ 2 5上的微卫星标志物的改变。结果　 3 2例肺癌病例中 5 0 % ( 16/3 2 )出现了微卫星标志物的改变 ,15例良性肺部病变组织中均未出现微卫星标志物的改变。结论　肺癌 3P上存在微卫星标志物改变。检测肺癌组织中微卫星标志物的特异性改变 ,对肺癌诊断有一定价值。     

肺癌K-ras基因点突变的研究

目的 :探讨肺癌发生的分子遗传学机理 ,了解肺癌中K ras基因的突变情况。方法 :采用聚合酶链式反应一单链构象多态性 (PCR SSCP)结合银染技术 ,对 3 2例肺癌组织及其相应的癌旁组织中K ras基因第 12、13、61位密码子的突变情况进行检测。结果 :肺癌组织中K ras基因总突变率为 2 5 % ( 8/3 2 ) ,其中腺癌突变率为 40 % ( 4 /10 ) ,鳞癌突变率为 2 3 % ( 3 /13 ) ,大细胞肺癌突变率为 3 3 % ( 1/3 )。小细胞癌突变率为 0 ( 0 /6) ,相应的癌旁组织突变率为 3 1% ( 1/3 2 )。结论 :K ras基因突变与肺癌发生发展有关。     

非小细胞肺癌组织中微卫星标志物测定的临床意义

1　对象与方法1 1　研究对象　 2 6例ＮＳＣＬＣ标本来自我院肺癌手术切除的患者。其中鳞癌 12例 ,腺癌 10例 ,混合癌 4例。按ＴＮＭ分期 ,Ⅰ期 13例 ,Ⅱ期 8例 ,ⅢＡ 期 5例。对照组 :15例手术切除的良性肺部疾病标本。其中肺结核 9例 ,肺囊肿 3例 ,支气管扩张 3例。待检标本于手术后立即收集 ,置液氮中存放。1 2　ＤＮＡ制备　取组织标本 1ｇ ,经蛋白酶Ｋ消化 ,酚 -氯仿抽提 ,乙醇沉淀 ,溶于ＴＥ液中 ,紫外分光光度计测定。将ＤＮＡ调整到每微升 5 0个细胞的ＤＮＡ量。1 3　微卫星测定　两个微卫星标志物位于 3Ｐ 2 4- 2 5 ,引物由北京京…     

结核分枝杆菌致病机制及结核病新型诊断技术研究

结核分枝杆菌(Mtb)是重要的全球性致病菌,引起的结核病是世界上致死率最高的传染病之一.据世界卫生组织报告,全球每年有约200万人死于结核病,其中98％的死亡都发生在发展中国家,如南非、印度和中国等.我们课题组通过基础研究与临床需求的紧密结合,在Mtb的进化和致病机制研究以及结核病诊断和药敏快速检测新方法的建立等方面都取得了较大的进展.