骨髓基质干细胞诱导成神经元样细胞分化相关基因的表达

目的:分析骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化前后相关基因的表达。方法:用β-巯基乙醇诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化,诱导后8 h,提取诱导前后的骨髓基质干细胞mRNA,进行微管相关蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、中间丝nestin和神经丝(NF)基因的RT-PCR,观察其诱导前后的表达。结果:NSE在诱导前后均有表达, MAP-2、GAP-43、nestin和NF诱导前无表达, 诱导后有表达。结论: 骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化与MAP-2、GAP-43、nestin和NF可能有关。     

黄连素诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

目的:黄连素体外定向诱导SD大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。方法:用全骨髓细胞悬液体外扩增和纯化骨髓间质干细胞。选用第5代以后骨髓间质干细胞进行诱导分化,用含10 μg/L碱性细胞生长因子(bFGF)的完全培养液预诱导24 h,后更换含黄连素的无血清DMEM诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。免疫组化鉴定神经元烯醇酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:大鼠骨髓间质干细胞体外扩增第5代后细胞形态达到均一,成梭形。加黄连素诱导1h-8 h,间质干细胞胞体逐渐增大并伸出细长突起,形似神经细胞。免疫组化显示诱导的神经元样细胞NSE、NF表达阳性,GFAP阴性。结论:黄连素可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

丹参酮ⅡA定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,FGF-2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元样细胞,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10⁶,15代可获得(2-3)×10¹²个细胞,流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。FGF-2促进hMSC生长,并且对MSC的分化能力基本没有影响。丹参酮ⅡA诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:丹参酮ⅡA可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

BDNF诱导骨髓间质干细胞分化中神经元特异性蛋白表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）体外诱导骨髓间质干细胞（MSCs）分化中神经元特异性蛋白表达与细胞凋亡的关系。 方法： 分别用BDNF和β-巯基乙醇（β-ME）诱导MSCs分化为神经元样细胞，在诱导1 h、6 h、12 h及24 h后用蛋白质印迹法检测神经元特异性蛋白（nestin、NSE、MAP-2及GFAP）的表达，同时用流式细胞仪检测各时点的细胞生长周期及细胞凋亡。 结果： 蛋白质印迹法结果显示β-ME和BDNF诱导的细胞均能表达神经元特异性蛋白：nestin和NSE，不表达MAP-2；神经胶质细胞特异性蛋白GFAP也有较弱表达。β-ME组诱导12 h后nestin的表达转为阴性，NSE表达也减弱，而BDNF组直至24 h nestin和NSE表达才渐转阴性；BDNF诱导的细胞S期百分率均较同时点的β-ME组高，β-ME在诱导后12 h出现了凋亡峰，BDNF诱导组在观察的时点内均未出现凋亡峰。 结论： β-ME诱导细胞的神经元特异性蛋白表达的减少与细胞凋亡在时间上一致，说明分化后细胞死亡的原因可能与凋亡有关；而BDNF诱导细胞的蛋白表达减少与细胞凋亡无关，提示BDNF诱导分化后的细胞死亡可能还与其它因素有关或者BDNF可能有抗凋亡作用。     

成人骨髓间质干细胞定向诱导为神经元样细胞的研究

目的：体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法：采用Ficoll-Paque液（1.077×10³ g/L）离心分离成人MSC,体外扩增,分别采用含巯基乙醇和硫代甘油等试剂的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：成人骨髓间质干细胞在体外扩增5代可获5×10⁷个细胞。加入巯基乙醇等或硫代甘油等诱导剂诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF表达阳性,GFAP阴性。结论：成人骨髓间质干细胞在体外可以分化为神经元样细胞。     

新生乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间质干细胞向视网膜神经样细胞分化

目的：探讨体外培养的新生乳鼠视网膜细胞对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法： 取成年Wistar大鼠股骨全骨髓细胞体外培养，经多次传代后获得高纯度的骨髓间质干细胞。以新生乳鼠视网膜细胞作诱导条件，采用分层共培养的方法诱导骨髓间质干细胞。倒置相差显微镜观察骨髓间质干细胞与新生乳鼠视网膜细胞共培养后形态的改变；免疫组织化学法检测诱导后的细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微丝微管相关蛋白-2(Map-2)、Thy 1.1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等特异性标记物的表达；RT-PCR进一步分析诱导后细胞表达nestin、NF、NSE、Thy 1.1及Ran等mRNA的情况。结果：新生乳鼠视网膜细胞作诱导剂，诱导48 h后可见部分细胞长出突起并向视网膜神经元特性样的细胞分化，最长可维持10 d。结论： 骨髓间质干细胞在体外培养的新生乳鼠视网膜细胞的诱导作用下可以向视网膜神经元样细胞分化。     

骨髓间质干细胞定向分化的实验研究

为了探讨体外定向诱导人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞的机制,本研究将分离的人MSC进行体外扩增培养,并观察脑心舒定向诱导MSC分化为类神经元样细胞的效应。在光镜下观察细胞形态,用免疫细胞化学法检测神经细胞特异性抗原标志。结果显示人MSC可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。脑心舒诱导120min后大部分MSC转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE、nestin呈阳性和GFAP阴性。上述结果提示人骨髓间质干细胞可在体外诱导分化为神经元样细胞。     

胞内cAMP浓度的增加可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞

目的:探讨胞内cAMP浓度的增加与骨髓间质干细胞 (MSC)分化为神经元样细胞的关系。方法:采用Ficoll-Paque液 (1077g/L)离心分离成人MSC,体外扩增,采用含腺苷酸环化酶激动剂Forskolin及磷脂酶抑制剂 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤 (IBMX)的无血清DMEM诱导MSC分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得 5×10⁵,10代可获得 2×10¹⁰ 个细胞。加入Forskolin、IBMX以及两者联用诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出,呈典型神经元样形态;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M表达阳性,GFAP阴性。结论:胞内cAMP浓度的增加可诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞.     

天然脑活素定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的： 探讨天然脑活素（NC）诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法: 取6-8周龄SD大鼠,无菌获取胫骨和股骨骨髓,全骨髓贴壁筛选法分离培养并纯化大鼠MSCs,应用天然脑活素诱导MSCs向神经元分化。倒置相差显微镜追踪比较观察分化过程中细胞形态的变化,免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)方法检测神经元特异性标志物：巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶(NSE) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。免疫细胞化学检测细胞微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果：经全骨髓贴壁筛选法获得了纯度较高（90%以上）的大鼠MSCs,天然脑活素含药血清诱导分化后的细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经元细胞的形态,分别从mRNA和蛋白水平上证实诱导分化后的细胞表达神经元标记物NSE和nestin,不表达神经胶质细胞标记物GFAP。诱导分化后细胞MAP-2的表达明显。结论：天然脑活素可诱导MSCs向神经元样细胞的定向分化。     

黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外分离和培养方法,并用黄芪体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞样细胞。方法利用梯度离心从大鼠骨髓中分离单核细胞进行培养,去除不贴壁的细胞,分离纯化,对其生长特性进行分析。采用含黄芪的无血清L-DMEM诱导分化为神经细胞样细胞,观察细胞形态变化,用免疫组织化学方法检测分化细胞中巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果用含10%胎牛血清(FCS)的培养基培养,原代细胞贴壁生长,细胞形态均一,为纺锤形,有克隆团形成。传代培养时,形态变为成纤维细胞样,有较强的增殖能力。经黄芪诱导后,骨髓间充质干细胞形态发生改变,nestin、NSE和GFAP阳性,分化为神经元或胶质细胞样细胞。结论骨髓间充质干细胞可以体外分离、培养,在一定条件下向神经样细胞分化。     

树突状细胞对LAK细胞抗人鼻咽癌细胞的促进作用

本研究对人血树突状细胞(Dendritic cell,DC)联合LAK(Lymphokine Activated Killer cell,LAK)细胞和IL-2对人鼻咽癌细胞株Hep-2的抗肿瘤活性进行了体外观察。实验分为LAK组、LAK+DC组和LAK+DC+IL-2组;效靶比例分别采用10:1和20:1二种。37℃、5％CO_2、饱湿条件下培养48h后,用中性红摄入比色法检测细胞毒活性。结果:各组的细胞毒活性依次为LAK+DC+IL-2组>LAK+DC组>LAK组(P<0.001),随着效靶比例升高,各组细胞毒活性增强(P<0.01).表明DC和IL-2有协同作用,能增强LAK细胞对Hep-2的细胞毒活性。     

骨髓间充质干细胞体外诱导为神经细胞的研究

本实验观察了大鼠MSCs向神经细胞方向的诱导分化情况,以期为MSCs在神经移植领域的临床应用提供理论基础。用含10 ng／ml bFGF+20％FBS的DMEM对MSCs进行预诱导24 h后,以含200μmol／L的BHA+2％DMSO的无血清DMEM对MSCs进行诱导,观察诱导后细胞的光、电镜形态学变化,通过免疫组织化学法对诱导后细胞进行神经细胞表型及神经递质合成酶鉴定。结果显示:MSCs经BHA和DMSO诱导后,80％以上的细胞表现出神经元样形态,胞浆内可见较多Nissl体,并表达nestin、NSE、NF、MAP、SYN,部分诱导后的细胞表达ChAT、TH、GAD;电镜下观察,诱导后细胞核大而圆,核仁明显,胞浆内细胞器发达,可见大量粗面内质网和游离核糖体。提示,MSCs体外可被诱导分化为神经元样细胞,诱导后的细胞有合成某些神经递质的能力并具有发育早期神经元的超微结构特点。     

成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

目的 探讨二甲基亚枫(DMSO)对成年大鼠骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用.方法 用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养,加入1%DMSO诱导3 d后,HDMEM培养7～10 d.通过形态学观察、双硫棕(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 1%DMSO诱导后第3 d有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第1 d MSC呈nestin免疫反应阳性,诱导后第10 d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第10 d检测到胰岛素1(Ins1)、胰岛素2(Ins2)、胰高血糖素(glu)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外经DMSO诱导,大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞.     

人类羊水源类ES细胞多能性干细胞的分离培养

Stem cells are classified into embryonic stem (ES) cells and adult stem cells, which are the progenitors of any cell types of the body or tissues, and have the ability to self-renew and produce one or more differentiated cell types.     

LANGERHANS CELLS AMONG BILE DUCT EPITHELIAL CELLS IN CHRONIC LIVER DISEASE

Langerhans cells were found among bile duct epithelial cells in a biopsy specimen from a patient with chronic liver disease showing cholangitic features. The bile duct was 90 μm In diameter and surrounded with mononuclear cell infiltration. Under the electron microscope, the cell had a clear cytoplasm and contained a deeply indented nucleus, a centriole, well-developed Golgi complexes and many rod-shaped bodies (Birbeck granules).     

NT-3基因修饰施万细胞促进移植的神经干细胞在损伤脊髓内分化为神经元样细胞

目的探讨神经营养素-3（NT-3）基因修饰施万细胞（SCs）对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞（NSCs）分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67d后用免疫组织化学方法观测NSCs的分化,并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在损伤脊髓内可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与未基因修饰的SCs的作用相比,NT-3基因修饰的SCs能更有效地提高NSCs向神经元样细胞的分化率,而LacZ基因修饰的SCs与未修饰SCs没有明显区别。结论NT-3基因修饰SCs能促进NSCs在损伤脊髓内向神经元样细胞分化。     

大鼠Sertoli细胞与精原细胞的分离及共培养

目的 分离纯化14 d大鼠Sertoli细胞与精原细胞,用Sertoli细胞作为饲养层对大鼠精原细胞进行体外培养研究.方法 酶消化法制备大鼠睾丸组织单细胞悬液,采用牛血清白蛋白(BSA)不连续密度梯度沉降法分离Sertoli细胞和精原细胞.结果 经分离的Sertoli细胞与精原细胞的纯度分别达到92.73%和78.36%.Sertoli细胞与精原细胞共培养,可见精原细胞发生分裂增殖等行为.结论 在添加EGF、bFGF和GDNF等细胞因子的10%胎牛血清DMEM/F12培养基中,精原细胞能够存活一定时间;而Sertoli细胞表现为旺盛的生长状态,并可促进精原细胞的分裂与增殖.     

库普弗细胞对原代培养贮脂细胞激活的调节作用

目的：观察库普弗细胞在贮脂细胞激活中的促进转化、促增殖及促进细胞外基质合成的效应；方法：采用库弗细胞和贮脂细胞分离培养，流式细胞仪测定ＤＮＡ含量，免疫组化和图像分析对贮脂细胞中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白进行定量分析，液闪法检测贮脂细胞中＾３Ｈ－脯氨酸参入量；结果：（１）分离培养的贮脂细胞完全符合该细胞的各种特征；（２）贮脂细胞是肝纤维化中细胞外基质过度沉积的重要细胞来源之一；（３）库普弗细胞可     

PHAGOCYTOSIS OF LYMPHOBLASTOID CELLS AND CELL DESTRUCTION OF HUMAN MALIGNANT TUMOR CELLS

On the basis of the previous study^8,9 on the cell interaction between malignant tumor cells and other cells, especially with lymphocytes, the present study was carried out by investigating cell to cell interaction of human malignant tumor cells and human lymphoblastoid cells such as T-cell (MOLT-4 cell) and B-cell (Burkftt lymphoma cell).
As a result it has been revealed that live lymphoblastoid cells were not adhered on the cell surface of the tumor cells, nor is it ingested by tumor cells, but in the presence of HVJ (Sendai virus: 2,000 H.A. Units) it adheres slightly on the cell surface of tumor cell but no cell fusion of tumor cells and lymphoblastoid cells is observable. On the other hand, the tumor cell as well as T-cell and B-cell all have receptors to concanavah A (Con.A) on their cell surfaces, and they show a marked cell binding such as tumor cell and T-cell, tumor cell and B-cell, and there can be observed a marked phagocytosis of lymphoblastoid cells by tumor cells. Moreover, the tumor cells that have phagocythd lymphoblastoid cells undergo a marked cell destruction within 4 hours of cell-binding and phagocytosis, which is especially prominent in the case of phagocytosis of E.B cell by tumor cell.     

应用二甲基亚砜体外诱导P19细胞分化为心肌细胞

目的观察P19细胞经二甲基亚砜（DMSO）诱导及不同培养方法,培养形成细胞聚集体并向心肌分化的过程.方法将P19细胞接种于Petri塑料培养皿或铺有0.5%软琼脂的培养皿中,DMSO诱导悬浮培养7 d形成细胞聚集体,将聚集体用生长培养基黏附培养至19 d.观察细胞跳动情况,用α-sarcomeric actin、cardiac Troponin T（cTnT）抗体进行免疫组织化学染色,鉴定细胞分化.结果经DMSO诱导7d,将形成的细胞聚集体用生长培养基黏附培养至15 d,在聚集体周围的生长晕中出现自发性节律跳动的细胞团片,α-sarcomeric actin及cTnT染色阳性,至19d,阳性率分别可达26%和15%.结论 DMSO诱导结合聚集体形成培养方法可诱导P19细胞向心肌细胞分化,并出现自发性有节律跳动.