霍乱毒素及妊娠对金黄地鼠视网膜节细胞再生的作用

目的:观察霍乱毒素(CTx)及妊娠对成年金黄地鼠视神经扎断后视网膜节细胞(RGCs)轴突再生的促进作用.方法:确定成年金黄地鼠交配3d后,扎断视神经(ON)近端,玻璃体内注射CTx.动物随机分为实验组和对照组:对照组为单纯扎断ON为损伤组、损伤PBS组;实验组分为CTx组与妊娠后扎断ON妊娠损伤组与妊娠CTx组.术后动物存活3周.用荧光金逆行标记再生的视网膜节细胞( RGCs),在荧光镜下观察视网膜平铺片再生RGCs的数量变化,并比较实验组各组再生RGCs的周长.结果:CTx组、妊娠损伤组、妊娠CTx组视网膜再生RGCs平均数比损伤组及PBS组增加,差异具有统计学意义.妊娠CTx组比CTx组、妊娠损伤组视网膜再生RGCs平均数增加.实验组各组再生的RGCs周长相比差异无统计学意义.结论:妊娠及玻璃体注入CTx具有促进视神经扎断后视网膜节细胞轴突再生的作用,两者有协同作用,各组再生的RGCs大小无明显差别.     

视网膜肽能无长突细胞的研究

近年随着生化、免疫学和免疫组织化学等技术的发展及应用,发现、分离和提纯了几十种神经肽,它们广泛分布于中枢和外周神经系统,对神经信息的处理和传递起着十分重要的作用。视网膜是脑研究的重要模型,它含有哪些神经肽,这些神经肽定位于视网膜哪些神经元,不同神经肽是     

不同靶细胞在基因治疗中枢神经损伤中的应用

近年来基因治疗逐步运用到CNS损伤及再生的研究中 ,获得理想的靶细胞是CNS基因治疗的一个关键问题。一般认为能用于基因修饰并植入CNS内进行基因治疗的理想靶细胞应具备以下几个要素 :容易被修饰、具有表达和分泌转基因产物的能力、具有在体外及移植后在宿主内生存的能力 ,以及基因修饰前已经具有促神经元生长的固有特性等等。目前运用于CNS基因治疗的靶细胞主要是雪旺细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞、神经干细胞和成肌细胞。本文对这些靶细胞本身在中枢神经再生方面的作用、在基因治疗研究中的应用情况以及各自的优缺点等问题进行了综述     

移植神经干细胞促进脊髓全横断大鼠结构与功能修复的研究

目的 探讨移植神经干细胞对脊髓全横断性大鼠部分结构与功能修复的影响。方法 在脊髓全横断处移植神经干细胞60d后，在横断处下方3mm注射荧光金逆行标记轴突再生的上运动神经元，用免疫组织化学检测神经干细胞在宿主内的分化，同时用体视学方法观测脑干红核和大脑皮质感觉运动区内锥体细胞层的神经元密度变化。用BBB评分法和爬网格法观测大鼠后肢运动功能的恢复等。结果 移植的神经干细胞能在宿主内存活并向前后方向迁移到脊髓内，部分神经干细胞分化为GFAP、NF-200和GAP-43阳性细胞。移植神经干细胞后在红核和感觉运动区内锥体细胞层可见有被荧光金标记的神经元胞体，脊髓横断处附近脊髓组织的溃变程度减轻，红核及躯体感觉运动区内神经元密度高于未移植组，大鼠后肢的自主运动功能明显好于未移植组。结论 神经干细胞移植入损伤脊髓后能分化为神经元及神经胶质细胞，能减轻脊髓的继发性损伤，保护受损伤的神经元，促进运动功能的恢复。     

蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂对促进远端视神经损伤后视网膜神经节细胞轴突再生的影响

背景：近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生，但其确切的机制仍不清楚。目的：探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计；随机对照动物实验。单位：广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料：实验于2000-01／2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组，手术模型组；实验对照组；霍乱毒素组；霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂组；霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组，每组5只。方法：取自体坐骨神经2cm，剥去近端的神经外膜，接于视神经断端（近侧端），明胶海绵封闭窗口，坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA／NaCl；霍乱毒素组：对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素（1000pg／眼）；霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂组：手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89（60μmol／L），其余同霍乱毒素组；霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μL PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin（1μmol／L），其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药，蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射，共4次。于取材前3d，将沾有30g／L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端，逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察，记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标：各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果：手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生（2．6&;#177;0．87，2．4&;#177;0．95），霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[（432&;#177;1．36），q=73．294及73．655，P〈0．001）。霍乱毒素＋蛋白激酶A抑制剂H-89组平均再生数与手术模型组及实验对照组比较无明显差别[（3．2&;#177;0．16），q=1．083及1．444，P〉0．05]；显著低于霍乱毒素组，差异有显著性（q=72．211，P〈0．001）。霍乱毒素＋PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数（9．6&;#177;1．85）均高于手术模型组及实验对照组（q=12．637及12．998。P〈0．05）；明显低于霍乱毒素组（q=60．657，P〈0．001）。结论：蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。     

神经干细胞与NT-3基因修饰雪旺细胞联合移植促进全横断脊髓损伤大鼠功能修复的实验研究

目的：探讨神经干细胞(NSCs)与神经营养素-3(NT-3)基因修饰雪旺细胞(SCs)联合移植对全横断脊髓损伤大鼠的后肢运动及神经传导功能修复的作用。方法：将：NSCs与NT-3基因修饰SCs或未基因修饰SCs联合移植，或NSCs单独移植到大鼠全横断性脊髓损伤处，60d后进行爬网格测验和BBB评分检测运动功能。第67d，进行皮质运动诱发电位(CMEP)和皮质感觉诱发电位(CSEP）检测脊髓的神经传导功能。结果：脊髓损伤大鼠后肢的运动功能及CMEP和CSEP的修复程度依次为NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植组，NSCs与未基因修饰SCs联合移植组，NSCs单独移植组和实验对照组。结论：NSCs与NT-3基因修饰SCs联合移植能够促进脊髓损伤后大鼠的后肢运动及神经传导功能的修复。     

蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂对促进远端视神经损伤后视网膜神经节细胞轴突再生的影响

背景:近年的研究显示中枢神经受损后在适宜的条件下如提高神经元内cAMP水平受损神经元的突起可以再生,但其确切的机制仍不清楚。目的:探讨蛋白激酶A抑制剂H-89及PI3-羟基激酶抑制剂wortman-nin对霍乱毒素促进成年金黄地鼠远端视神经受损后视网膜神经节细胞再生的影响。设计:随机对照动物实验。单位:广州医学院组胚教研室和中山医科大学组胚教研室。材料:实验于2000-01/2001-12在广州医学院和中山医科大学完成。实验动物选择健康成年雄性金黄地鼠25只。随机分为5组,手术模型组;实验对照组;霍乱毒素组;霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂组;霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组,每组5只。方法:取自体坐骨神经2cm,剥去近端的神经外膜,接于视神经断端(近侧端),明胶海绵封闭窗口,坐骨神经另一端置颅骨外缝合固定于颅顶肌肉上。手术模型组视神经近侧残端对接一段自体坐骨神经。实验对照组在对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素溶剂Na2EDTA/NaCl;霍乱毒素组:对照组基础上玻璃体内注射霍乱毒素(1000pg/眼);霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂组:手术前30min玻璃体内注射3μL蛋白激酶A抑制剂H-89(60μmol/L),其余同霍乱毒素组;霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组手术前30min玻璃体内注射3μLPI3-羟基激酶抑制剂wortmannin(1μmol/L),其余同霍乱毒素组。各组动物术后存活4周。术后每隔5天重复给药,蛋白激酶A抑制剂H89及PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin与霍乱毒素CTx之间相隔30min注射,共4次。于取材前3d,将沾有30g/L粒蓝的明胶海绵放置在视神经断端,逆行标记再生的视网膜神经节细胞。荧光显微镜下观察,记录视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。主要观察指标:各组视网膜有轴突再生的视网膜神经节细胞数。结果:手术模型组及实验对照组有极少数视网膜神经节细胞再生(2.6±0.87,2.4±0.95),霍乱毒素组明显高出对照组和实验对照组[(43.2±1.36),q=73.294及73.655,P<0.001)。霍乱毒素 蛋白激酶A抑制剂H-89组平均再生数与手术模型组及实验对照组比较无明显差别[(3.2±0.16),q=1.083及1.444,P>0.05];显著低于霍乱毒素组,差异有显著性(q=72.211,P<0.001)。霍乱毒素 PI3-羟基激酶抑制剂组视网膜神经节细胞平均再生数(9.6±1.85)均高于手术模型组及实验对照组(q=12.637及12.998,P<0.05);明显低于霍乱毒素组(q=60.657,P<0.001)。结论:蛋白激酶A抑制剂H-89和PI3-羟基激酶抑制剂wortmannin可抑制霍乱毒素对视神经远端切断后视网膜神经节细胞轴突再生的促进作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞的培养及鉴定

目的:分离培养和鉴定大鼠骨髓间充质干细胞.方法:分离SD青年大鼠股骨,L-DMEM冲洗骨髓腔,制备细胞悬液接种培养,消化传代纯化细胞.传代的骨髓间充质干细胞进行增殖曲线、克隆形成能力测定,用免疫组化检测增殖细胞vimentin、laminin的表达.结果:传代的细胞在培养第1～2天为潜伏期,第3～6天是细胞快速增殖期,第6天达高峰,第 9天后速度减慢,进入平台期,并且随传代次数的增加,细胞增殖速度逐渐下降.随传代次数增多,克隆形成能力逐渐下降.第5代以后细胞基本纯化为骨髓间充质干细胞,细胞呈长梭形.免疫组化检测增殖细胞vimentin表达阳性、laminin表达阴性.结论:本实验方法能有效扩增大鼠骨髓间充质干细胞,而且简单易行.     

Forskolin抗金黄地鼠视网膜节细胞凋亡作用与cAMP和JNK关系的研究

利用 Hoechst332 5 8荧光核染色和琼脂糖凝胶电泳、免疫印迹技术以及 Brown放射免疫法等实验手段 ,分别观察了forskolin对视网膜节细胞凋亡、视网膜细胞 phospho-JNK的表达以及 c AMP水平的影响。结果表明 :在近端切断金黄地鼠的视神经 ,视网膜 c AMP水平降低 ,phospho-JNK水平升高 ,视网膜节细胞发生凋亡 ;玻璃体内注射 forskolin可使 c AMP水平升高 ,phospho-JNK水平下降 ,凋亡的视网膜节细胞密度降低。提示 ,forskolin可能通过升高 c AMP水平而抑制 JNK的活性和产生抗凋亡的作用