联胺对人脐静脉内皮细胞中IL-8表达及NF-κB蛋白活化的影响

目的探讨联胺对培养的人脐静脉内皮细胞表达IL-8及核因子-κB活化的影响。方法酶联免疫吸附法检测IL-8蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应法检测IL-8mRNA的表达,细胞免疫化学法观察NF-κB的活化。结果联胺（1、5和10μmol/L）可诱导IL-8在蛋白及mRNA水平表达,与对照组差异有显著性意义（P〈0.05）,且与联胺呈浓度依赖性。联胺（5μmol／L）作用人脐静脉内皮细胞30min后发现NF-κB从胞质向胞核转移,60min达高峰,持续到120min。结论联胺能诱导IL-8在蛋白及mRNA水平表达,其机制可能是通过NF-κB活化实现的。     

二苯乙烯苷对氧化损伤人脐静脉内皮细胞NF-κB表达的影响

目的 研究二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法 以不同浓度(0.1、1.0和10.0 μmol/L)的二苯乙烯苷孵育体外培养人脐静脉内皮细胞4 h后,用200 μmol/L过氧化氢作用内皮细胞24 h,采用电镜观察、MTT等方法 测定各组细胞活力;RT-PCR、Western-blot检测基因NF-κB、IκB表达.结果 与对照组比较,不同剂量组TSG均可以提高过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性,降低NF-κB mRNA及蛋白水平的表达,其中以1 μmol/L TSG组的作用最明显(P<0.01),但对IκB基因表达的影响差异均无显著性(P>0.05).结论 二苯乙烯苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞具有抗氧化保护作用,其作用机制可能与下调NF-κB的表达、阻断细胞NF-κB/IκB信号通路有关.     

氧化应激对内皮细胞NF-κB、iNOS和NO信号表达的影响

目的观察氧化剂第三丁基过氧化氢（t-BHP）对体外培养的内皮细胞存活率及核转录因子κB（NF-κB）、iNOS和一氧化氮（NO）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用不同浓度的t-BHP处理,具体如下：（1）检测细胞存活率。t-BHP作用浓度分别为12.5,25,50,100μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用MTT法观察;（2）检测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量及细胞内NO水平。t-BHP的作用浓度为50μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用Western blot测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量,Griess化学显色法测细胞内NO水平;（3）iNOS抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME,600μmol/L）预处理内皮细胞24 h,用Griess化学显色法检测细胞内NO水平。结果 t-BHP可降低内皮细胞的存活率,且呈时间及剂量依赖性,50μmol/Lt-BHP作用30 min细胞核NF-κB活化片段p65蛋白表达达高峰,作用60 min细胞质iNOS蛋白达高峰;iNOS抑制剂L-NAME可明显抑制内皮细胞NO升高。结论氧化应激可引起内皮细胞损伤,其效应可能通过NF-κB-iNOS-NO途径介导。     

青藤碱对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞IL-8表达的影响

目的探讨青藤碱对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞表达IL-8的影响。方法用不同浓度的青藤碱(25、50、100μmol/L)预处理24 h后,再加入1μg/ml的脂多糖(LPS)处理人牙龈成纤维细胞。采用RT-PCR、ELISA法检测青藤碱对脂多糖诱导细胞表达IL-8的影响;用Western blot法检测青藤碱对NF-κB核转位及IκBα降解的影响。加入NF-κB抑制剂Bay11-7085 10μmol/L、TPCK 20μmol/L预处理细胞24 h后,再用LPS刺激细胞4 h,采用ELISA法检测NF-κB抑制剂对脂多糖诱导的IL-8表达的影响。结果青藤碱剂量依赖性地抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞中IL-8 mRNA及蛋白表达(P<0.05);与脂多糖组比较,青藤碱基本上把NF-κB阻滞在细胞质中,而细胞经脂多糖处理1 h后,大部分NF-κB被转运到细胞核中,经100μmol/L青藤碱预处理细胞的细胞质中NF-κB含量为脂多糖组的2倍;脂多糖处理细胞1 h后,50%的IκBα降解,但经青藤碱预处理细胞后,呈浓度依赖性抑制脂多糖诱导IκBα的降解(P<0.05)。50μmol/L的青藤碱使脂多糖诱导IκBα的降解恢复到正常水平;脂多糖处理组IL-8表达量为对照组的2.4倍,但加入NF-κB抑制剂Bay11-7085(10μmol/L)、TPCK(20μmol/L)后IL-8蛋白的表达量分别下降为对照组的1.8倍和1.6倍。结论青滕碱可能通过阻断NF-κB的核转位以及IκBα的降解来抑制牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞IL-8的合成。     

百草枯中毒后NF-κB及其下游产物变化的研究

目的 探讨百草枯处理后细胞内NF-κB的激活以及下游因子IL-6、IL-8的表达情况.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)建立百草枯处理模型.在半数死亡浓度的百草枯作用8 h、24 h、48 h后,利用免疫细胞化学方法检测细胞NF-κB P65蛋白活化及定位,利用RT-PCR扩增IL-6、IL-8,半定量分析其mRNA表达水平变化.结果 免疫组化显示正常细胞NF-κB P65定位于细胞胞浆,百草枯作用后开始出现细胞核转位,并随作用时间延长核转位数目明显增加;RT-PCR结果显示百草枯作用后NF-κB的下游产物IL-6、IL-8 mRNA表达水平均明显上调,并可持续到48 h.结论 百草枯处理后早期即可能出现NF-κB的激活,进而诱导了下游的重要炎性介质的合成,促发和推进炎症反应,说明百草枯中毒后早期即有炎症反应参与了组织的损伤.     

抑肽酶抑制凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞IL-8的表达

目的 研究抑肽酶对凝血酶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)IL-8表达和核因子κB(NF-κB)活性的影响.方法 将培养的HUVECs分为空白对照组、凝血酶组以及半量和全量抑肽酶组,抑肽酶组细胞采用800 KIU/ml(半量)和1 600 KIU/ml(全量)抑肽酶预处理1 h,后续处理与凝血酶组相同,均以凝血酶(4 U/ml)诱导刺激作用. ELISA法测定细胞培养上清液中IL-8的含量;荧光实时定量PCR检测IL-8 mRNA的表达,扩增产物进行熔解曲线图和琼脂糖电泳分析;采用激光共聚焦显微镜观察NF-κB p65在细胞胞质和胞核的分布情况.结果 凝血酶明显刺激HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,细胞中游离的NF-κB增加并发生核转位.半量和全量抑肽酶均能减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的分泌和IL-8 mRNA的表达,且对细胞内游离NF-κB的产生和核转位具有明显抑制作用,半量和全量抑肽酶组对NF-κB表达的抑制作用差异无显著性意义(P>0.05).结论 抑肽酶均能够减少凝血酶诱导的HUVECs IL-8的表达,该作用与其抑制细胞内活化的NF-κB核转位有关.     

青心酮对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞Toll样受体4表达及其相关信号转导的影响

目的 观察青心酮对脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞的Toll样受体4(TLR4)及其下游分子核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠的药理作用机制及TLR4信号系统在病理妊娠中的可能作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脐静脉内皮细胞TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法检测TLR4、抑制性κB(IκBα)蛋白的表达.结果 10-7、10-6、10-5 mol/L青心酮可显著降低LPS诱导的内皮细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),抑制IκBα蛋白的降解(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 青心酮能够抑制LPS诱导的内皮细胞TLR4表达及其相关信号转导,这可能是青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠时活血化淤药理作用的通路之一.TLR4信号通路可能参与妊娠期高血压病的发病.     

地塞米松抑制聚肌胞苷酸诱导人气道上皮细胞趋化因子表达及机制的初步研究

目的 初步探讨地塞米松对聚肌胞苷酸刺激气道上皮细胞后趋化因子表达的影响及其机制.方法 将人气道上皮细胞16hBE给予不同浓度的聚肌胞苷酸(0.001、0.01、0.1、1 μg/ml)及地塞米松(0.1、1、10 μmol/L)处理,用RT-PCR检测刺激6h后IL-8、IP-10 mRNA的表达水平,用ELISA法检测刺激24 h后培养上清液中IL-8和IP-10蛋白含量,用免疫组化方法检测细胞NF-κB p65亚单位的表达强度.结果 0.001、0.01、0.1 μg/ml聚肌胞苷酸处理16hBE细胞后IL-8和IP-10mRNA表达水平和蛋白分泌量呈浓度依赖性升高,在0.01 μg/ml及0.1 μg/ml浓度时,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);但在聚肌胞苷酸浓度为1μg/ml时,IL-8和IP-10 mRNA表达水平和蛋白分泌量都出现了下降.地塞米松(1、10 μmol/L)预处理0.5h明显抑制聚肌胞苷酸诱导的IL-8和IP-10 mRNA表达及蛋白分泌(P＜0.05,P＜0.01).1 μmol/L地塞米松预处理明显抑制了聚肌胞苷酸诱导的NF-κB p65表达强度(P＜0.01).结论 糖皮质激素可抑制聚肌胞苷酸诱导的气道上皮细胞趋化因子的表达,其机制可能与NF-κB的活化有关.     

可溶性高尿酸对人脐静脉内皮细胞NLRP3炎性体途径的影响

目的 研究可溶性高尿酸(uric acid,UA)是否通过NLRP3炎性体途径参与人脐静脉内皮细胞活化。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用200μg/ml的UA培养后,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞内NLRP3和pro-IL-1β mRNA表达量;检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、E-选择素(E-selectin)、干扰素诱导蛋白10(CXCL10)、C-C原件趋化因子26(CCL26)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA水平;用Western blot法测定NLRP3、pro-IL-1β和IL-1β蛋白表达量;用免疫荧光检测NLRP3与ASC共定位和NF-κB核移位情况;并用荧光探针测定胞质活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果 200μg/ml的UA上调黏附分子ICAM-1、E-选择素(P=0.000)和趋化分子CXCL10、CCL26mRNA水平(P<0.05),下调eNOS mRNA水平(P<0.01),并上调细胞内ROS水平,提示HUEVCs处于活化状态。UA对NLRP3、pro-IL-β mRNA和蛋白水平无显著影响;成熟IL-1β也无显著增加。NF-κB没有明显的核移位现象,但NLRP3-ASC复合体显著增加。结论 可溶性高UA诱导HUVECs活化,虽然UA诱导NLRP3-ASC复合体体形成,但对IL-1β的产生没有显著影响。因此,在细胞水平,可溶性高UA主要不是通过激活NLRP3炎性体途径诱导人脐静脉内皮细胞活化。     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

肿瘤坏死因子α对肠上皮细胞核因子κB的活化与细胞因子表达的影响

目的探讨炎症状态时肠上皮细胞核因子κB的活化对肠上皮细胞分泌促炎细胞因子的调节作用.方法将TNF-α(10 ng/ml)加入培养的结肠癌上皮细胞系H29细胞中,3 h后收集上清液,ELISA法测IL-8;分别提取细胞核蛋白、mRNA,经Western blotting检测核因子NF-κB P65的活化,PT-PCR检测IL-8的表达.结果对照组的HT29细胞低表达IL-8 mRNA,细胞核中很难检测出NF-κB P65,细胞培养液中IL-8的质量浓度为172 ng/L.经TNF-α刺激后,HT29细胞高表达IL-8 mRNA.核蛋白NF-κB P65表达明显增高,细胞培养液中IL-8的质量浓度为639 ng/L,明显高于对照组(P＜0.01). 结论炎症状态时,核因子κB的活化促进肠上皮细胞分泌促炎细胞因子,调节肠上皮细胞参与炎症反应.     

益肺活血方对香烟提取物诱导巨噬细胞炎症反应的影响

目的探讨益肺活血方对香烟提取物诱导巨噬细胞炎症反应的影响。方法用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇将U937细胞诱导为巨噬细胞,用1.2、2.4、4.8、9.6 g/L的益肺活血方及5、10、20、50、100 mL/L的香烟提取物处理巨噬细胞,于12、24、48 h用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法测定细胞活性。巨噬细胞分5组:正常细胞组、香烟提取物组、香烟提取物+益肺活血方低、中、高浓度组,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测培养上清白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,RT-PCR法检测胞内IL-8和TNF-αmRNA水平。机制实验分4组:正常细胞组、香烟提取物组、香烟提取物+益肺活血方(2.4 g/L)组及香烟提取物+NF-κB抑制剂组,蛋白印迹法(Western blot)检测胞内核转录因子-κB(NF-κB)p50、p65及p-IκB表达;免疫荧光法观察胞核内NF-κB p65及胞浆内p-IκB表达。结果益肺活血方(9.6 g/L)作用细胞24、48 h后及香烟提取物(100 mL/L)于各时间点均有细胞毒性(P0.05)。与正常细胞组相比,香烟提取物组IL-8及TNF-α表达上调,胞内NF-κB p50、p65及p-IκB表达亦升高(P0.05),NF-κB核转位增加(P0.05);益肺活血方可抑制诱导后的IL-8和TNF-α的表达以及NF-κB活性(P0.05)。结论益肺活血方可减少香烟提取物诱导的巨噬细胞表达IL-8、TNF-α,抑制NF-κB活化可能是其机制之一。     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达的机制研究

目的探讨川芎嗪(TMP)抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子(TF)表达的胞内信号转导机制。方法胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和mRNA;放射免疫法测PKC(蛋白激酶C)活性;免疫组织化学染色观察NF-κB的变化。结果TMP和Staurosporine(Sta)可显著减少PMA与TNFα刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达(P<0.01);PMA、TNFα使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNFα引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)均可抑制NF-κB的活化。结论TNFα诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNFα诱导TF的表达。     

肺微血管内皮细胞IL-8的表达及NF-κB调控机制的研究

目的 探讨脂多糖（LPS）的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞（PMVEC）IL-8表达的影响及通过核因子κB（NF-κB）的调控机制。方法 以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0、0．5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml LPS刺激1h或6h为检测时相点，ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL-8及PMVEC内IL-8mRNA的表达；凝胶电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB的活化；并观察NF-κB活化抑制对IL-8表达的影响。结果 LPS能显著促进PMVEC表达IL-8，包括促进IL-8mRNA的表达及IL-8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL-8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF-κB，1h达到高峰，后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达（P〈0．01）。结论 表明细茵致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF-κB的活化，从而启动IL-8的高效表达和分泌，为多形核中性粒细胞（PMN）的迁移提供必需的物质条件，导致肺损伤。     

黄芪多糖对高血压病患者血清致伤血管内皮细胞TLR4、NF-κB表达的影响

目的 观察黄芪多糖(APS)对TLR-NF-κB信号转导通路的影响,探讨其对高血压病患者血清损伤的血管内皮细胞的保护机制.方法 用10%的高血压痛患者及健康人血清干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)24 h,实时荧光定量(PCR)法检测TLR4 mRNA表达.不同浓度的APS干预脂多糖(LPS)诱导的HUVEC-C TLR4表达(24 h)及核转录因子(NF-κB)活化(2 h),PCR法检测TLR4 mRNA及NF-κB mRNA的表达,免疫印迹(Western-blot)技术检测TLR4蛋白及NF-κB蛋白的表达.结果 血清作用24 h后,高血压病组TLR4 mRNA的表达较健康组增高(P＜0.01).APS可呈剂量依赖性减少LPS诱导的TLR4 mRNA高表达,抑制LPS诱导的TLR4蛋白高表达和IκBα蛋白的降解(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 TLR-NF-κB信号途径介导的炎症反应和免疫紊乱是高血压病血管内皮损伤的机制之一,APS可通过抑制其表达保护血管内皮细胞损伤.     

核转录因子-κB在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用

目的 研究核转录因子(NF-κB)在高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞凋亡中的作用.方法 大鼠胰岛素瘤细胞系(INS-1)细胞以RPMI 1640培养基常规培养.实验分对照组(11.1 mmol/l葡萄糖组)、高糖组(33.3 mmol/l葡萄糖组)、高糖+NF-κB抑制剂组(33.3 mmol/l葡萄糖+NF-κB抑制剂(5 μmol/l)干预组)3组.以荧光定量RT-PCR检测IKKβmRNA水平,Western blot法检测细胞核内NF-κB亚基P65蛋白表达量,Annexin V-PI双染法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比较,高糖组IKKβ mRNA水平显著升高(P＜0.01),INS-1细胞胞核内P65蛋白表达显著增多(P＜0.01),细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).与高糖相比较,高糖+NF-κB抑制剂组IKKβ mRNA水平显著下降(P＜0.01),胞核内P65蛋白表达显著减少(P＜0.01),INS-1细胞凋亡率显著下降(P＜0.05).结论 高浓度葡萄糖诱导INS-1细胞NF-κB活化,抑制NF-κB活化可有效抑制高糖诱导的INS-1细胞凋亡.     

三七皂苷FC通过MAPK/NF-κB途径抑制RAW264.7细胞炎症及凋亡的机制研究

目的:基于丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)途径探讨三七皂苷FC对RAW264.7巨噬细胞炎症及凋亡的作用机制。方法:(1)采用不同浓度的三七皂苷FC(0、1、10、20、50、100μmol/L)分别干预RAW264.7细胞和脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞,CCK8法检测细胞活力,筛选合适的药物浓度。(2)将RAW264.7细胞分为对照组、LPS组、LPS+三七皂苷FC低剂量(20μmol/L)组和LPS+三七皂苷FC高剂量(50μmol/L)组。先给予相应剂量的三七皂苷FC预处理6 h,再加入1μg/ml LPS。干预24 h后,PCR检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-1β(IL-1β)mRNA表达;Western blot检测TNF-α、iNOS、p38MAPK、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光检测NF-κB核转位;Transwell实验检测细胞迁移。结果:(1)20、50μmol/L三七皂苷FC干预24 h后,LPS诱导的RAW264.7细胞活力较对照组无显著差异(P0.05),用于后续实验。(2)与LPS组相比,低、高剂量的三七皂苷FC作用后,TNF-α、IL-6、iNOS、IL-1β的mRNA表达显著降低(P0.05,P0.01);TNF-α、iNOS蛋白表达明显降低(P0.05),p-NF-κB p65/NF-κB p65和p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达比值显著下调(P0.05,P0.01);细胞凋亡率显著降低(P0.05,P0.01);细胞核内NF-κB p65蛋白表达减少,阳性表达细胞数占比显著降低(P0.05);细胞迁移数显著减少(P0.01)。结论:三七皂苷FC能够显著改善LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,减少炎症因子的释放,抑制巨噬细胞凋亡和迁移,其作用机制可能与下调MAPK/NF-κB通路磷酸化水平及抑制NF-κB核转位有关。     

川芎嗪抑制肿瘤坏死因子诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子表达

[摘要]　目的 探讨川芎嗪（TMP）抑制肿瘤坏死因子 （TNF ）诱导人脐静脉血管内皮细胞组织因子（TF）表达的胞内信号转导机制。 方法　胰酶消化法分离培养人脐静脉血管内皮细胞,以一期凝固法、ELISA、RT-PCR分别测总的细胞促凝活性、TF抗原和 mRNA;放射免疫法测PKC（蛋白激酶C）活性;免疫组织化学染色观察NF－κB的变化。 结果 TMP和Staurosporine（Sta）可显著减少PMA与TNF 刺激的TF活性、抗原及mRNA的表达（P<0.01）; PMA、TNF 使胞浆中PKC活性明显降低(P<0.05),胞膜PKC活性显著增高(P<0.01),而TMP与Sta均能降低胞膜PKC活性(P>0.05);TNF 引起内皮细胞NF-κB从胞浆移入核内,TMP及吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）均可抑制NF-κB的活化。 结论 TNF 诱导HUVEC TF的表达中,PKC及NF-κB的活化发挥着重要的作用;TMP通过影响PKC途径及NF-κB的活化而抑制TNF 诱导 TF的表达     

白藜芦醇对TNF-α诱导的人支气管上皮细胞炎症反应的干预作用

【目的】探讨白藜芦醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人支气管上皮细胞炎症反应的干预作用及可能机制。【方法】培养人支气管上皮细胞16-HBE。实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测TNF-α诱导的16-HBE细胞中白细胞介素6(IL-6)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达水平及白藜芦醇对其预处理后的变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测白藜芦醇预处理TNF-α诱导的16-HBE细胞后其核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)和磷酸化核转录因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)及核转录因子κB p65(NF-κB p65)和磷酸化核转录因子κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白表达水平。【结果】与空白对照组比较,10 ng/mL TNF-α诱导24 h可明显诱导16-HBE细胞中IL-6、MMP-9、IL-1βmRNA表达上调(P 0.01或P 0.001)。与TNF-α诱导组比较,50、100、150μmol/L白藜芦醇预处理的TNF-α诱导16-HBE细胞中IL-6、MMP-9、IL-1βmRNA表达水平均降低(P 0.001),且呈剂量依赖性。与TNF-α诱导组比较,50、100、150μmol/L白藜芦醇组TNF-α诱导的16-HBE细胞中p-IκBα蛋白表达水平增高,且呈剂量依赖性,其中,100、150μmol/L白藜芦醇组差异有统计学意义(P 0.01或P 0.001),而p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P 0.001)。【结论】白藜芦醇可能通过调控NF-κB信号通路抑制TNF-α诱导的人支气管上皮细胞炎症反应。     

铁剥夺对柔红霉素诱导K562细胞多药耐药基因1表达及NFκB活化的影响

目的:探讨铁剥夺对柔红霉素(DNR)诱导K562细胞多药耐药基因1(MDR1)表达及核因子κB(NFκB)活化的影响.方法:以1.0μmol/L DNR单用或联合应用25μmol/L去铁胺(DFO)作用于人红白血病细胞株K56224h后,应用RT-PCR法、流式细胞仪分别检测对照组、DNR组和DNR+DFO组K562细胞MDR1 mRNA和P糖蛋白(Pgp)的表达情况,同时采用凝胶滞留试验检测NFκB的转录活性水平.结果:与对照组相比,DNR可同时诱导MDR1mRNA、Pgp表达上调和NFκB活化增强(P＜0.05);DFO联合DNR可显著抑制DNR诱导的MDR1 mRNA、Pgp表达及NFκB活化(P＜0.05).结论:铁剥夺可减少DNR诱导的MDR1、Pgp表达,其机制可能与抑制NFκB活化有关.