MSCs旁分泌对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡的影响

目的: 探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）旁分泌因子肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡的影响及其机制。方法: 将SD大鼠MSCs传代至第3代后分为未转染组、转染HGF-siRNA组及转染阴性对照（NC）-siRNA组,分别进行相应处理。通过ELISA、蛋白质印迹法检测各组MSCs细胞上清中及细胞中HGF、转化生长因子β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）含量和蛋白表达量。用浓度为1 μmol/L的多柔比星处理H9C2细胞4 h后分为4组：单独培养组、MSCs共培养组、与HGF-siRNA-MSCs共培养组及与NC-siRNA-MSCs共培养组。培养24 h后通过流式细胞术Annexin Ⅴ/PI双染法检测H9C2细胞凋亡率。结果： HGF-siRNA组MSCs上清中TGF-β1浓度为（519.23±24.34）pg/mL,明显高于未转染组［（459.65±11.78）pg/mL］及NC siRNA组[（459.33±11.78）pg/mL]（P均＜0.05）;转染HGF-siRNA组MSCs中TGF-β1表达量亦明显高于其他两组。HGF-siRNA-MSCs与H9C2细胞共培养组中H9C2细胞凋亡率为（18.54±0.64)%,较MSCs共培养组［(6.65±0.49)%］及NC-siRNA-MSCs共培养组［(9.70±1.62)%］明显增加（P均＜0.05）。结论： MSCs旁分泌因子HGF通过抑制TGF-β1的表达对多柔比星诱导的H9C2细胞凋亡起保护作用。     

外源性FGF-2对高糖环境下内皮祖细胞功能的影响

目的 观察外源碱性成纤维细胞生长因子-2（basic fibroblast growth factor-2, FGF-2）对高糖环境下内皮祖细胞（endothelial progenitor cells, EPCs）功能的影响。方法 体外分离和培养小鼠EPCs,并采用流式细胞分析和免疫荧光染色进行细胞鉴定,分别在高糖（30mmol/L）和高糖（30mol/L）+FGF-2（30、50、100、150、300ng/mL）条件下干预培养,正常EPCs作为空白对照组,TUNEL检测细胞凋亡,Transwell小室和基质胶在体外观察EPCs的迁移和成管能力;Western印迹法检测活化β-catenin和总β-catenin的表达,构建小鼠后肢缺血模型,分别注射空白组、正常组、高糖组及高糖+FGF2（150ng/mL）组EPCs,使用激光多普勒血流仪观察小鼠缺血后肢血流恢复情况。结果 高糖组EPCs比空白对照组凋亡率显著增高（P＜0.01）,迁移和血管形成能力显著降低（P＜0.01）;高糖+FGF-2组EPCs与高糖组相比,细胞凋亡显著减少（P＜0.05）,迁移和血管形成能力显著增强（P＜0.05）,且在150ng/mL FGF-2时效果最强(P＜0.01）。Western印迹法分析表明,高糖组较空白对照组活化β-catenin/总β-catenin显著下降（P＜0.01）,而高糖+FGF-2组与高糖组相比则显著升高（P＜0.05）。体内实验显示,高糖组小鼠缺血后肢较正常组血流恢复显著减少,而高糖+FGF-2组较高糖组显著增加。结论 外源性FGF-2处理可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路发挥对高糖下受损EPCs的功能修复作用。     

红景天苷对H9c2心肌细胞应激高糖损伤的保护作用及机制研究

目的?利用氧化应激联合高糖复合损伤心肌细胞,建立H9c2心肌细胞应激及高糖损伤模型,探讨应激高糖H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法?将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组（C组,正常培养基）;②高糖组（G组,高糖培养基）;③H₂O₂组（H组,H₂O₂处理2小时后,更换为正常培养基继续培养）;④高糖+H₂O₂组（GH组,H₂O₂及高糖处理2小时后,更换为高糖培养基继续培养）;⑤红景天苷+高糖+H₂O₂组（SGH组,H₂O₂+高糖+红景天苷处理2小时后,更换为红景天苷+高糖培养基继续培养）。分组加药培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率;Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平;JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果?①与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与C组比较,H组及GH组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低,线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。②与GH组比较,SGH组Drp1蛋白表达水平显著降低,OPA1蛋白表达水平显著升高,线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论?①氧化应激联合高糖通过降低线粒体膜电位,抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。②红景天苷可抑制氧化应激联合高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与升高线粒体膜电位水平以及增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡有关;红景天苷对应激高糖心肌细胞具有一定的保护作用,值得进一步深入研究。      

抑制线粒体活性氧自由基可减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡和铁死亡

目的 探讨抑制线粒体氧化应激和炎症小体减轻高糖诱导的H9C2心肌细胞焦亡和铁死亡的作用,分析线粒体活性氧自由基（ROS）和炎症小体之间可能的上下游关系。方法 将H9C2心肌细胞按照随机数字表法随机分为5组。正常对照组（CON）：含25 mmol/L浓度葡萄糖的DMEM完全培养基;高糖损伤组（HG）：含35 mmol/L浓度的高糖完全培养基;高糖+线粒体抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）组（HG+MitoQ）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为0.5 μmol/mL的MitoQ;高糖+ NLRP3抑制剂MCC950组（HG+MCC950）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950;高糖组+MCC950+线粒体电子传递抑制剂Rotenone（ROT）组（HG+MCC950+ROT）：35 mmol/L高糖完全培养基中加入终浓度为1 μmol/mL的MCC950和0.5 μmol/mL的ROT。各组心肌细胞干预24 h后,CCK-8法测定细胞活性;CellRox和MitoSox荧光探针分别测定心肌细胞内和线粒体氧化应激水平变化;免疫荧光法检测细胞内NLRP3炎症小体水平;Western blot检测心肌细胞中NLRP3、GSDMD和Cleaved-GSDMD（GSDMD-NT）等焦亡相关重要因子的蛋白表达和铁死亡相关因子GPX4蛋白表达。结果 与CON组相比,HG组细胞活性明显下降（P<0.01）,心肌细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及焦亡相关因子NLRP3,GSDMD和GSDMD-NT的蛋白表达（P<0.01）均明显升高,铁死亡相关因子GPX4蛋白表达下降（P<0.01）。与HG组相比,HG+MitoQ和HG+MCC950组细胞活性明显升高（P<0.01）,细胞和线粒体内ROS荧光强度（P<0.01）、NLRP3免疫荧光强度（P<0.01）以及 NLRP3、GSDMD 和 GSDMD-NT 的蛋白表达明显降低（P<0.05）,GPX4 蛋白表达增高（P<0.01）。与HG组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性和NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达无明显差异（P>0.05）;但与HG+MCC950组相比,HG+MCC950+ROT组细胞活性明显降低（P<0.01）,ROS荧光强度、NLRP3炎症小体免疫荧光以及NLRP3、GSDMD-NT的蛋白表达均明显升高,GPX4蛋白表达降低（P<0.05）。结论 MitoQ直接抑制线粒体ROS的产生减轻了高糖诱导的心肌细胞NLRP3炎症小体的生成,减少焦亡和铁死亡的发生;抑制NLRP3炎症小体减少线粒体ROS的产生;线粒体ROS和NLRP3之间可能存在着相互影响。     

雷公藤内酯醇干预高糖诱导足细胞转分化作用机制的研究

目的 观察不同浓度雷公藤内酯醇（TP）体外干预高糖环境下小鼠足细胞上皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）及TGF-β/Smad信号通路的调节作用,探讨其保护足细胞损伤的可能机制。方法 将培养成熟的小鼠足细胞随机分为25mmol/L葡萄糖培养液干预组（高糖组）,5mmol/L葡萄糖培养液干预组（对照组）和在25mmol/L葡萄糖培养液中分别加入浓度为8、16、32ng/ml的TP干预组（低、中、高TP组）。体外培养48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,采用RT-PCR和Western-blot技术分别检测各组足细胞NEPH1、desmin、TGF-β1和Smad7的mRNA和蛋白表达变化。结果高糖组和高、中、低TP组的小鼠足细胞NEPH1和Smad7mRNA和蛋白的表达水平均较对照组低,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均较对照组高,差异有统计学意义（P＜0.05或0.01）。高、中、低TP组足细胞NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于高糖组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于高糖组,差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）;中TP组NEPH1和Smad7的mRNA和蛋白的表达水平均高于低TP组和高TP组,desmin和TGF-β1的mRNA和蛋白的表达水平均低于低TP组和高TP组（均P＜0.01）。结论TP可能通过抑制TGF-β/Smad信号通路缓解高糖诱导的足细胞转分化。     

高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响

目的: 研究高糖条件下心脏成纤维细胞对心肌细胞肥大的影响。方法: 将体外分离培养的SD乳鼠心肌细胞、心脏成纤维细胞随机分为心肌细胞低糖组（A组）,心肌细胞高糖组（B组）,心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养高糖组（C组）,心肌细胞、心脏成纤维细胞共培养加转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）中和抗体高糖组（D组）,心脏成纤维细胞低糖组(E组),心脏成纤维细胞高糖组（F组）。培养0,6,12,24,48,72 h后,倒置显微镜观察细胞形态、拍照并计算心肌细胞表面积,RT-PCR检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain,β MHC）mRNA表达水平,ELISA检测各组培养液中TGF β1表达量。结果： 培养48 h时,B组心肌细胞表面积比A组显著增加（P<0.05）,而C组在培养24 h时心肌细胞表面积已显著高于A组（P<0.05）。RT-PCR显示B组和D组细胞在培养12 h时,ANP、β-MHC mRNA显著升高（P<0.05）,培养24 h时达高峰;而C组在培养6 h时ANP、β-MHC mRNA即显著升高（P<0.05）,培养12 h时达高峰。ELISA检测结果显示,培养12 h起B组、D组TGF-β1的表达均显著高于A组（P<0.05）,而在培养6 h时C组TGF-β1的表达即已显著高于A组（P<0.05）。F组各时间点成纤维细胞TGF-β1的表达均高于E组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论： 心脏成纤维细胞在高糖条件下可能通过旁分泌TGF-β1促进心肌细胞的肥大。     

Vaspin通过Nrf2/ARE信号通路对高糖高脂诱导的INS-1细胞氧化应激的影响

目的：探讨Vaspin对高糖高脂诱导的INS-1细胞氧化应激的影响。方法：培养INS-1细胞,分为正常对照组（NC组）、高糖高脂组（HG+PA组）、高糖高脂+80ng/mLVaspin组（HG+PA+V1组）、高糖高脂+160ng/mLVaspin组（HG+PA+V2组）、高糖高脂+320ng/mLVaspin组（HG+PA+V3组）、高糖高脂+640ng/mLVaspin组（HG+PA+V4组）。通过DCFH-DA荧光探针染色法检测细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies,ROS）水平;比色法、酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）检测氧化应激相关指标;葡萄糖（3.3mmol/L和16.7mmol/L）刺激胰岛素分泌实验检测各组胰岛素分泌水平;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Westernblot检测核因子E2相关因子2（nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2,Nrf2）蛋白表达水平。结果：①与HG+PA组相比,HG+PA+V4组中低糖和高糖刺激后的胰岛素分泌水平均有明显升高（均P<0.05）;②与HG+PA组相比,HG+PA+V4组中高糖高脂诱导INS-1细胞中ROS、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷水平明显降低,总抗氧化能力、超氧化物歧化酶水平、谷胱甘肽过氧化物酶水平明显升高（均P<0.05）;③流式细胞实验发现,与HG+PA组相比,随着Vaspin浓度增加,高糖高脂干预后INS-1细胞的凋亡水平明显下降（均P<0.05）;④Westernblot结果表明,胞浆中Nrf2表达水平随着Vaspin浓度的增加呈上升趋势,胞核Nrf2表达水平仅在HG+PA+V4组较HG+PA组升高（0.798±0.080vs.0.579±0.065,P=0.039）。结论：Vaspin可以通过激活Nrf2/抗氧化反应原件（antioxidantresponseelement,ARE）信号通路,改善高糖高脂诱导的INS-1细胞氧化应激损伤,减少细胞凋亡,增加胰岛素分泌水平。     

6-姜酚预处理对乏氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用

  目的  探讨6-姜酚（6-G）预处理是否能够减轻乏氧/复氧（H/R）诱导的H9C2细胞损伤及相关机制。  方法  采用常规方法制备心肌细胞H/R体外模型〔H9C2细胞加入经氮气饱和后的乏氧液后放于培养箱,通入混合气体（体积分数1%O₂,5%CO₂,94%N₂）作用15 min,培养3 h后取出细胞,置于常氧培养箱（37 ℃,体积分数5%CO₂）进行复氧培养1 h〕。在建立心肌细胞H/R体外模型前给予6-G预处理,采用MTT法测定细胞活力,并筛选6-G干预下细胞活力最大的6-G质量浓度进行后续实验。采用DCFH-DA荧光探针检测6-G预处理对H9C2氧化应激水平的影响,荧光显微镜以及流式细胞仪观察细胞内氧化应激的作用。Western blot法检测H/R诱导细胞炎症反应因子中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）表达的变化。  结果  与H/R组相比,6-G+H/R组细胞活力从 50 μg/mL 6-G 组开始上升,200 μg/mL 6-G时细胞活力最大,后续实验选6-G干预质量浓度为200 μg/mL。与对照组相比,200 μg/mL 6-G组活性氧（ROS）含量无明显变化（P>0.05）,ROS荧光波峰未见明显迁移,H/R组ROS的含量升高,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向右侧迁移,与H/R组相比,6-G+H/R组ROS含量降低,差异有统计学意义（P<0.05）,ROS荧光波峰向左侧回移。与对照组相比,6-G组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达无明显变化（P>0.05）;H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与H/R组相比,6-G+H/R组TNF-α、IL-6、IL-1β的表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）。  结论  6-G预处理能够减轻H/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

雷公藤红素通过抑制肝癌细胞的糖代谢增强多柔比星对Huh7细胞的杀伤活性

目的:研究雷公藤红素是否能增强多柔比星对肝癌细胞的杀伤活性及机制。方法: MTT法检测多柔比星单独治疗及联合雷公藤红素治疗对肝癌细胞系Huh7的杀伤活性。用荧光定量PCR方法检测人正常胎肝细胞系L-O2及肝癌细胞系Huh7、HepG2和PLC的PKM2表达水平。将Huh7细胞用雷公藤红素和多柔比星处理后,用荧光定量PCR方法检测Huh7细胞PKM2的表达水平。将Huh7细胞用雷公藤红素和多柔比星处理后,检测Huh7细胞葡萄糖的摄取能力和乳酸生成能力。构建PKM2真核表达载体,MTT法检测PKM2表达载体转染对雷公藤红素联合多柔比星杀伤Huh7细胞疗效的影响。结果: 0.5μmol/L 雷公藤红素组对Huh7的细胞活力抑制率为2.6±0.9,1μmol/L雷公藤红素组为4.7±1.3,2μmol/L雷公藤红素组为8.8±1.9,0.1μg/mL多柔比星单治疗组为7.5±1.9,1μg/mL多柔比星单治疗组为61.4±4.2,1μmol/L雷公藤红素+0.1mg/mL多柔比星治疗组为58.7±3.8,1μmol/L雷公藤红素+1mg/mL多柔比星治疗组为89.7±6.7。L-O2细胞系的PKM2相对表达水平为1.0±0.05,Huh7细胞系为15.2±0.6,HepG2细胞系为11.8±0.5,PLC细胞系为13.4±0.7。雷公藤红素下调Huh7细胞的PKM2表达水平并减弱Huh7细胞对葡萄糖的摄取和乳酸的生成,0.5μmol/L 雷公藤红素组的PKM2相对表达水平为0.70±0.05,1μmol/L 雷公藤红素组为0.42±0.04,2μmol/L 雷公藤红素组为0.31±0.03,0.1μg/mL多柔比星单治疗组为0.98±0.07,1μg/mL多柔比星单治疗组为1.01±0.07,1μmol/L雷公藤红素+0.1mg/mL多柔比星治疗组为0.44±0.04,1μmol/L雷公藤红素+1mg/mL多柔比星治疗组为0.41±0.03。转染PKM2表达载体后,雷公藤红素对多柔比星的协同抗肿瘤作用受到抑制,1μmol/L雷公藤红素+0.1mg/mL多柔比星治疗组对Huh7的细胞活力抑制率为60.5±4.3,1μmol/L雷公藤红素+1mg/mL多柔比星治疗组为91.6±6.9,1μmol/L雷公藤红素+0.1mg/mL多柔比星+pcDNA3.1-PKM2组为19.3±2.0,1μmol/L雷公藤红素+1mg/mL多柔比星+pcDNA3.1-PKM2组为69.6±4.5。结论:雷公藤红素通过下调PKM2的表达抑制肿瘤细胞的糖代谢增强多柔比星对肝癌细胞系Huh7的杀伤活性。     

高糖后低糖过程通过ERK1/2信号途径增强H9c2心肌细胞自噬的功能

目的 研究高糖后低糖H9c2心肌细胞自噬活性的影响及ERK1/2在此过程中对自噬的调节作用。方法 用25mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养H9c2细胞后用2.5mmol/L葡萄糖浓度培养基处理细胞2h作为低糖组（LG组）,高糖组（HG组）维持25mmol/L的葡萄糖浓度,空白对照组（Con组）维持5.5mmol/L的葡萄糖浓度;低糖组加入ERK抑制剂U0126作为抑制剂组。采用MTT法检测H9c2细胞增殖能力;LDH检测试剂盒检测细胞毒性;Western blot法检测 ERK、p-ERK、LC3、Beclin-1的表达量。结果 与Con组和HG组相比,LG组细胞增殖能力降低,LDH活性增加;与Con组相比,HG组LC3-Ⅱ、Beclin-1表达量升高,p-ERK表达无显著改变;与Con组和HG组相比,LG组p-ERK、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著增加;而与LG组比较,抑制剂组p-ERK明显降低,同时LC3-Ⅱ、Beclin-1表达以及细胞毒性降低,细胞活力增加。结论 ERK1/2信号途径促进了高糖后低糖过程中H9c2心肌细胞的自噬活性。     

3种主要短链脂肪酸减轻5-氟尿嘧啶诱发的THP-1细胞炎症反应

目的: 研究3种主要短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)即乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠,对5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)诱发人单核巨噬THP-1细胞炎症反应的影响及其可能机制。方法: 将THP-1细胞分为5组：对照组,细胞未经任何处理;5-FU组,2.5 mmol/L 5-FU处理细胞24 h;5-FU+乙酸钠组、5-FU+丙酸钠组、5FU+丁酸钠组,均经100 μmol/L相应SCFAs预处理24 h,再加入2.5 mmol/L 5-FU处理24 h。采用qRT-PCR法检测细胞炎症相关因子mRNA表达量;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、IL-6和IL-10含量;蛋白质印迹法检测细胞Toll样受体9(TLR9)、NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1、LC3-Ⅱ、Beclin-1表达量,以及细胞核和胞质中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB) p65蛋白表达量;流式细胞术检测细胞活性氧水平。结果： 与对照组相比,5-FU组TLR9、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-6、LC3-Ⅱ、Beclin-1、胞核NF-κB p65蛋白表达量以及活性氧水平显著增加(P均<0.01)。与5-FU组比较,5-FU+乙酸钠组TLR9表达量显著降低(P<0.01);5-FU+丙酸钠组IL-1β表达量以及活性氧水平显著降低(P<0.01);5-FU+丁酸钠组IL-1β表达量以及核内NF-κB p65蛋白表达量显著减少(P<0.01),而胞质内表达量显著增加(P<0.01);3种SCFAs预处理均可以显著降低NLRP3、Caspase-1、IL-6、LC3-Ⅱ及Beclin-1表达量(P<0.01),并增加抗炎因子IL-10表达量(P<0.01)。结论： 乙酸钠、丙酸钠和丁酸钠3种SCFAs可以显著抑制由5-FU诱发的THP-1细胞炎症反应,并抑制细胞自噬水平,减少细胞活性氧生成量,其可能是通过抑制TLR9/NF-κB/ROS途径产生抗炎作用。     

脂氧素A4通过p38 MAPK及Nrf2通路调控气道炎症反应

目的：研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导的人正常支气管上皮细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法：将对数生长期的BEAS-2B细胞分为3组。对照组：不做任何处理;LPS组：100 ng/mL LPS刺激24 h;LPS+LXA4组：100 nmol/L LXA4预处理30 min,加入100 ng/mL LPS刺激24 h。qPCR法检测IL-6、IL-1β、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶（NQO-1）mRNA表达水平;流式细胞术测定胞内活性氧（ROS）水平;谷胱甘肽（GSH）试剂盒检测GSH水平。为进一步了解LXA4的作用机制,Western blot法检测各处理组p38的磷酸化水平以及Nrf2的核转位及磷酸化水平。结果：与对照组相比,LPS组IL-6、IL-1β mRNA以及胞内ROS表达水平升高（P＜0.05）,HO-1 mRNA水平下降（P＜0.01）,p38磷酸化水平上升（P＜0.01）,胞核中Nrf2相对表达量下降（P＜0.01）,总Nrf2磷酸化水平下降（P＜0.05）。经LXA4干预后,与LPS组相比,除上述改变逆转外（P＜0.05）,NQO-1和GSH水平显著上升（P＜0.05）。结论：LXA4可减轻LPS引起的BEAS-2B细胞炎症反应并促进炎症消退,其机制可能一方面与抑制p38 MAPK通路,减少促炎因子的分泌有关;另一方面与增强Nrf2的核转位以及磷酸化,减轻氧化应激损伤有关。     

血管紧张素Ⅱ对高糖诱导NRK-52E细胞转分化作用研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E转分化的干预作用。方法细胞培养72 h后,Western blot检测对照组（0 mmol/L葡萄糖）、高糖组（25 mmol/L葡萄糖）、血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ）、高糖血管紧张素Ⅱ干预组（10 nmol/L AngⅡ＋25 mmol/L葡萄糖）中转化生长因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK-52E细胞中的表达。活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达。AngⅡ明显上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP的表达,并提高ROS含量。结论AngⅡ可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。     

山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其机制

目的： 探究山奈素对小鼠乙醇型胃溃疡的影响及其潜在机制。方法： 将60只SPF级昆明小鼠随机均分为6组,每组10只,分别为正常对照组,模型组,阳性对照组,山奈素低、中、高剂量组。正常对照组和模型组给予0.5% 羧甲基纤维素钠,其他4组分别给予雷尼替丁(100 mg/kg)、低剂量山奈素(31.7 mg/kg)、中剂量山奈素(63.4 mg/kg)、高剂量山奈素(126.8 mg/kg);所有小鼠灌胃容积均为20 mL/kg,连续给药7 d;然后用无水乙醇10 mL/kg灌胃建立急性胃溃疡模型;采用溃疡指数评估胃黏膜损伤情况,ELISA法检测血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO含量,免疫印迹法检测胃组织COX-2、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、NF-κB p65蛋白表达。结果： 与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜出现明显的血斑和上皮细胞脱落;与模型组相比,山奈素组可显著降低胃溃疡指数且高剂量组优于中、低剂量组(P均<0.05)。与正常对照组相比,模型组炎症介质COX-2、PGE2、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO血清含量明显升高,胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达明显增加(P均<0.05);与模型组相比,山奈素组胃组织COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白表达及血清中炎症介质含量均明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论： 山奈素对乙醇型胃溃疡具有保护作用,可能通过抑制NF-κB/COX-2通路,减少下游炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量,降低iNOS活性,进而抑制NO产生。     

间歇性高糖对大鼠肾小管上皮细胞NRK-52EA转分化的影响

目的:探讨间歇性高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞株NRK-52EA转分化干预作用。方法:NRK-52E细胞分为空白组、正常葡萄糖组、高糖组、间歇性高糖组,分别作用72 h后,Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶-2(MMP-2)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及甲状旁腺素相关肽(PTHrP)的表达;CM2H2DCFDA试剂盒检测活性氧(ROS)含量。结果:高糖组及间歇性高糖组NRK-52E细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达均上调;间歇性高糖组TGF-β1、MMP2以及α-SMA表达水平较高糖组高(P均<0.05),其ROS含量也显著高于高糖组(P<0.01)。结论:间歇性高糖能通过氧化应激诱导肾小管导管上皮细胞表达TGF-β1、MMP2,并促进NRK-52EA细胞转分化为α-SMA细胞。     

黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对小鼠结肠炎的干预作用

目的：探讨黄芩素通过TLR4/NF-κB信号通路对葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的实验性结肠炎的干预作用。方法：将C57BL/6 雄性小鼠随机分为5 组,即对照组、结肠炎组、黄芩素低剂量（Ba-L）治疗组[10 mg/（kg·d）]、黄芩素高剂量（Ba-H）治疗组[25 mg/（kg·d）]和5-氨基水杨酸（5-ASA）治疗组,每组各12只。对照组小鼠饮用清水,其余各组小鼠均连续7 d饮用3.5%的DSS溶液构建实验性结肠炎模型。在DSS造模开始前7 d和造模开始后给予不同剂量黄芩素或5-ASA灌胃治疗,共14 d。比较各组小鼠之间的平均体质量、疾病活动指数（DAI）以及结肠组织学活动程度评分（HAI）;采用实时荧光定量PCR法测定各组小鼠的结肠组织中IL-1β、TNF-α、IFN-γ、TLR4、NF-κB p65、MyD88的mRNA水平;采用免疫荧光技术测定肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率。结果：结肠炎组小鼠与对照组小鼠相比,出现严重的结肠炎,表现为小鼠体质量降低、全结肠长度缩短、DAI和HAI大幅度升高（均P ＜0.01）。与结肠炎组小鼠相比,Ba-L治疗组、Ba-H治疗组和5-ASA治疗组小鼠的结肠炎有明显改善（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的结肠组织中IFN-γ、TNF-α、IL-1β、MyD88、NF-κB p65、TLR4的mRNA表达水平均明显高于对照组小鼠（均P ＜0.01）;而Ba-L治疗组、Ba-H治疗组及5-ASA治疗组中上述mRNA表达水平则均明显低于结肠炎组小鼠（均P ＜0.05）。结肠炎组小鼠的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率明显高于对照组小鼠（P ＜0.001）,但Ba-L治疗组、Ba-H治疗组以及5-ASA治疗组的肠上皮细胞中NF-κB p65的入核率则明显低于结肠炎组（均P ＜0.001）。结论：黄芩素可能通过TLR4/NF-κB信号通路抑制DSS诱导的结肠炎症。     

晚期糖基化终产物对高糖诱导NRK-52E细胞的转分化作用

目的：探讨晚期糖基化终产物（AGEs）对高糖诱导大鼠肾小管导管上皮细胞株NRK-52E的转分化干预作用。方法：大鼠肾小管导管上皮细胞株设空白组（不给葡萄糖）、高糖组（25mmol/L葡萄糖）、AGEs干预组（100mg/LAGEs）、高糖AGEs干预组（100mg/LAGEs＋25mmol/L葡萄糖）,培养72h后,用Westernbolt检测转化因子β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原、金属蛋白酶2（MMP2）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及甲状旁腺素相关肽（PTHrP）在NRK-52E细胞的表达,活性氧（ROS）含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果：高浓度葡萄糖上调TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA以及PTHrP表达,AGEs显著上调高浓度葡萄糖状态下TGF-β1、Ⅰ型胶原、MMP2、α-SMA和PTHrP表达,提高ROS含量。结论：AGEs可以促进高浓度葡萄糖诱导肾小管导管上皮细胞转分化。     

血清TLR4、NF-κB在劳力性热射病患者中的表达及临床意义

目的 探讨血清Toll样受体-4（TLR4）、核转录因子-κB（NF-κB）在劳力性热射病（EHS）患者中的表达及其对患者预后的预测价值。方法 选取2017年1月-2019年4月期间在联勤保障部队第九00医院接受治疗的EHS患者51例作为EHS组,根据患者的预后情况分为预后不良组（11例）、预后良好组（40例）。另选取同期在我院体检的健康志愿者51例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清中TLR4、NF-κB、肿瘤坏死因子-ɑ（TNF-ɑ）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）的水平,记录患者的急性生理与慢性健康评分-Ⅱ（APACHE-Ⅱ）评分。结果 EHS组患者的血清TLR4、NF-κB、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6水平及APACHE-Ⅱ评分高于对照组（P<0.05）;预后不良组患者的血清TLR4、NF-κB、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6水平及APACHE-Ⅱ评分高于预后良好组（P<0.05）;EHS患者血清TLR4、NF-κB与TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、APACHE-Ⅱ评分均呈正相关（P<0.05）;ROC分析显示,TLR4的曲线下面积为0.705（95%CI：0.547~0.862）,NF-κB的曲线下面积为0.691（95%CI：0.528~0.854）,APACHE-Ⅱ评分的曲线下面积为0.830（95%CI：0.706~0.953）,三者联合检测,可进一步提高特异度和约登指数。结论 血清TLR4、NF-κB在EHS患者中异常高表达,且其表达水平与炎症反应、APACHE-Ⅱ评分呈正相关,APACHE-Ⅱ评分联合血清TLR4、NF-κB可提高对EHS患者预后的预测价值。     

华蟾素对TGF-β1诱导人结肠癌细胞上皮-间质化的实验研究

目的 研究华蟾素在体外对肿瘤坏死因子-β1(TGF-β1)诱导的人结肠癌细胞上皮-间质化(EMT)的作用.方法 将体外培养的人结肠癌细胞株(SW480)分为:(1)正常对照组;(2)TGF-β1 (10 ng/mL)单独处理组;(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5、10、20、40、80 mg/mL)共同处理组,并在体外培养48 h.CCK8检测细胞增殖抑制情况,利用倒置相差显微镜观察各处理组细胞形态学变化,Transwell小室检测细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在mRNA及蛋白水平表达的变化.结果 (1)与TGF-β1(10 ng/mL)单独处理组比较,TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(10、20、40、80 mg/mL)共同处理组对SW480具有显著的增殖抑制作用(P＜0.05).(2)与正常对照组相比,TGF-β1单独处理组、TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5 mg/mL)共同处理组呈现典型的间质化表型,TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(5 mg/mL)共同处理组则呈现经典的上皮表型.(3)TGF-β1(10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组相比侵袭和迁移能力均明显减弱(P＜0.05).(4) QRT-PCR和Western blot结果显示TGF-β1单独处理组与正常对照组比较,Vimentin表达水平明显增强,E-cadherin表达显著减弱.TGF-β1 (10 ng/mL)+华蟾素(2.5、5 mg/mL)共同处理组与TGF-β1单独处理组、对照组相比Vimentin表达水平显著降低,E-cadherin表达显著增强.结论 华蟾素可抑制TGF-β1诱导的人结肠癌细胞SW480的增殖,其机制可能与促进E-钙黏蛋白表达增强,同时使波形蛋白表达减弱,从而与抑制TGF-β1诱导的EMT过程有关.     

Rho／Rock 信号通路在 TGF －β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制

目的：探讨Rho／Rock信号通路在TGF－β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞（ ISMC）表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF－β1刺激组,以不同浓度（1、5、10、20、50 ng／mL） TGF－β1刺激细胞24 h,用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白（ SM22α）和骨桥蛋白（ OPN） mRNA的表达;再以上述得出的最佳TGF－β1浓度刺激细胞,在不同时间（6、12、24、48 h）收集细胞,采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平;经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后,随机分为以下各组：空白对照组、TGF－β1（10 ng／mL）刺激组及TGF－β1（10 ng／mL）＋法舒地尔（Fasudil）（10、30、50μmol／L）组,分别采用FQ－RT－PCR法检测SM22α、OPN、RhoA、Rock－1 mRNA的表达;Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平;根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。 TGF－β1＋Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF－β1刺激组高（P＜0．01）,且在Fasudil浓度为30μmol／L时达到高峰,随后下降;TGF－β1＋Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低,呈浓度依赖性,至30μmol／L达最低（ P＜0．05）,后又呈上升趋势。 Western blot结果显示TGF－β1＋Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF－β1刺激组低,至Fasudil浓度为30μmol／L达最低（ P＜0．05）。同时FQ－RT－PCR结果显示TGF－β1刺激组的RhoA和Rock－1 mRNA表达水平较空白对照组高（P＜0．01）,在Fasudil浓度为30μmol／L时TGF－β1＋Fasudil组的RhoA和Rock－1mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低（ P＜0．05）。电镜下观察各组细胞显示,空白对照组（×20000） ISMC高尔基体肥大,线粒体及粗面内质网正常,10 ng／mL TGF－β1刺激后细胞内线粒体增多,在上述基础上加入30μmol／L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化,且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现;Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF－β1刺激的SM22α的表达,下调OPN的表达水平,抑制大鼠ISMCs表型转化。