西洋参茎叶总皂苷抑制氧糖剥夺/复氧引起的BV-2小胶质细胞炎性活化作用及其机制研究

目的：研究西洋参茎叶总皂苷（PQS）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）引起的小鼠BV-2小胶质细胞炎性活化的抑制作用，并初步阐明其作用机制。方法：BV-2细胞分为对照组、OGD/R组、PQS各剂量+OGD/R组。对照组细胞在常规条件下培养；OGD/R组细胞在OGD/R条件下培养；PQS各剂量+OGD/R组细胞给予PQS(30、60、90μg/mL)预处理后，转入OGD/R条件培养。通过酶联免疫法检测上清液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的含量，通过CCK-8法检测PQS对OGD/R条件下细胞增殖活性的影响，流式细胞术检测胶质细胞活化标志蛋白离子钙结合适配器分子1(Iba-1)和酸性溶霉菌糖蛋白（CD68）的表达，Western blot检测核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化及其抑制因子NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)和NF-κB抑制因子（NKRF）蛋白的表达。结果：OGD/R诱导能够明显增加BV-2细胞上清液中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量（P<0.01），增强BV-2细胞对数期增殖活性（P<0.0...     

高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响

摘要：目的探讨常压高浓度氧暴露对N9小胶质细胞功能的影响。方法体外培养N9小胶质细胞,分别在900 ml/L高浓
度氧中暴露2、6、12、16、24、48 h后（1）流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率;（2）DCFH-DA荧光探针检测活性氧（ROS）含
量的变化;（3）RT-PCR检测Toll样受体4（TLR4）mRNA表达变化;（4）ELISA检测N9细胞培养上清中IL-1β和TNF-α的含
量;（5）免疫荧光化学染色检测TLR4蛋白的表达变化。结果流式细胞术结果示,细胞凋亡率在高氧暴露12 h后明显高于
空气对照组（P<0.05）,16 h达高峰（P<0.01）;高氧暴露2 h后,细胞内ROS含量明显增加,呈一定时间依赖性;TLR4 mRNA
及蛋白表达水平明显高于空气对照组（P<0.05）;高氧暴露后细胞上清中TNF-α及IL-1β含量随暴露时间延长而增加,均在
6 h开始升高,12~16 h达高峰（P<0.05）,IL-1β增高较TNF-α更为明显。结论高氧暴露后N9小胶质细胞TLR4通路激活,
产生大量神经毒性因子（ROS、IL-1β及TNF-α）,细胞凋亡增加。
     

比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞损伤的影响

目的研究比索洛尔预处理对缺氧/复氧诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用,并探讨该作用的机制。方法对大鼠心肌细 胞株（H9c2）进行缺氧复氧（6 h/2 h）,模拟大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,将H9c2细胞随机分成4组：正常对照组（control组）、缺 氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理组（H/R+B组）、缺氧/复氧+比索洛尔预处理+PI3K/AKT阻滞剂LY294002组（H/ R+B+LY组）;分别采用MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡、ROS水平,Western免疫印迹法检测心肌 细胞p-AKT及p-GSK3β蛋白表达情况。结果与正常组相比,H/R组细胞活力下降,细胞凋亡率增加、ROS水平升高;经比索洛 尔预处理后,细胞活力明显提高,细胞凋亡率下降、活性氧水平降低,p-AKT/GAPDH、p-GSK3β/GAPDGH显著提高,而加入 PI3K/AKT阻滞剂LY294002后比索洛尔的保护作用消失。结论比索洛尔能减少缺氧/复氧所引起的氧化应激,对心肌细胞具 有明显的保护作用,其作用机制是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路而提高AKT、GSK3β磷酸化水平,减少ROS产生,增加细胞 的活性实现的。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

黄芪甲苷对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其自噬机制研究

  目的  研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用,并探讨其潜在的作用机制。  方法  提取并培养新生大鼠心肌细胞,随机分为6组:对照组,H/R组,H/R+低、中、高浓度AS-Ⅳ（AS-Ⅳ终浓度0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L）组,和H/R+高浓度AS-Ⅳ（10 μmol/L）+AKT抑制剂（5 μmol/L）组。H/R前分组预处理心肌细胞（对照组和H/R组不进行预处理）48 h后,除对照组外,其余各组心肌细胞建立细胞H/R损伤模型。MTT法检测各组心肌细胞活力,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测自噬基因LC3-Ⅱ、p62的表达,Western blot 检测LC3-Ⅱ、P62蛋白和磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（PI3K/AKT）通路蛋白〔包括AKT、磷酸化（p-）AKT（p-AKT）、p-雷帕霉素（p-mTOR）〕和自噬启动因子未配位的51样激酶1（ULK1）的表达,免疫荧光染色检测心肌细胞自噬体P62的表达。  结果  AS-Ⅳ在本研究低、中、高浓度范围内以浓度依赖的方式改善H/R损伤下心肌细胞活力,并抑制H/R损伤后的心肌细胞自噬基因LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达,抑制ULK1蛋白的表达（P<0.05）,添加AKT抑制剂后,AS-Ⅳ的以上作用被部分抑制（P<0.05）。AS-Ⅳ对AKT和mTOR蛋白的表达没有影响（P>0.05）,但可以促进AKT和mTOR的磷酸化（P<0.05）。免疫荧光染色检测结果显示,高浓度AS-Ⅳ可以逆转H/R损伤诱导的自噬体P62的表达。  结论  AS-Ⅳ对H/R损伤心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT途径中的mTOR信号降低自噬水平,从而预防H/R损伤。     

雌激素受体GPR30通过TXNIP/NLRP3信号通路减弱氧糖剥夺/复氧诱导的BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应

目的 通过研究雌激素受体G蛋白偶联受体30（G protein-coupled receptor 30，GPR30）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation and reperfusion，OGD/R）BV-2小胶质细胞的氧化应激损伤和炎症反应的调控作用，探讨其对OGD/R BV-2小胶质细胞的保护作用及其相关机制。方法 取BV-2小胶质细胞ODG 4 h后再灌注2、4、6或12 h。Western blot检测细胞中GPR30的蛋白表达水平。将pcDNA3.1、pcDNA3.1-GPR30、sh-NC、sh-GPR30质粒转染BV-2小胶质细胞，OGD 4 h后再灌注12 h。qRT-PCR检测GPR30 mRNA的表达水平，验证其转染效率，Western blot检测细胞中GPR30、硫氧还蛋白相互作用蛋白（thioredoxin-interactingprotein，TXNIP）、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶剪切体-1（cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1，cleaved Caspase-1）的蛋白表达水平，ELISA检测细胞中活性氧（reactive oxygen species，ROS）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-18（interleukin-18，IL-18）水平。结果 GPR30在OGD/R后显著上升，在6 h时达到峰值，而在12 h时与对照组没有显著差异。随后确定OGD处理4 h，复氧12 h的时间点进行后续实验。qRT-PCR验证慢病毒转染成功，与对照组相比，OGD/R组细胞中ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleaved-Caspase-1蛋白表达水平显著上升，SOD活性显著下降（P<0.05）；过表达GPR30抑制了ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平及TXNIP、NLRP3、cleaved-Caspase-1蛋白表达水平，促进了SOD活性；而干扰GPR30表达发挥了相反的作用。结论 GPR30能抑制 ODG/R处理后BV-2细胞内TXNIP/NLRP3信号通路分子的表达，抑制ODG/R诱导的 BV-2细胞氧化应激损伤和炎症反应，这可能是其保护ODG/R细胞的分子机制之一。     

瓜子金皂苷己通过SOCS3抑制氧糖剥夺/复氧所致小胶质细胞的炎症反应

目的:观察瓜子金皂苷己(Polygalasaponin F,PGSF)是否影响氧糖剥夺/复氧(Oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)处理的BV-2小胶质细胞炎性细胞因子及细胞因子信号抑制因子3(Suppressors of cytokine signaling3,SOCS3)表达,初步探讨PGSF对抗OGD/R炎症反应的机制.方法:构建BV-2小胶质细胞OGD/R体外模型,分为正常对照组、模型组、PGSF低剂量组、PGSF中剂量组及PGSF高剂量组.BV-2细胞氧糖剥夺2 h、复糖复氧6 h后提取总RNA,通过实时荧光定量多聚酶链式反应检测BV-2细胞炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及SOCS3的基因表达.结果:I/R后BV-2细胞中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6及SOCS3的mRNA表达明显增加;给予PGSF处理可以逆转上述观察指标的改变.结论:PGSF在体外实验中具有抑制神经炎症的作用,SOCS3信号通路可能参与介导了PGSF的抗炎作用.     

AMPK介导线粒体融合与裂变在抑制P2X7受体抗神经元缺氧/复氧损伤中的作用

目的探讨AMPK介导下线粒体融合与裂变在抑制P2X7受体抗神经元缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤中的作用。方法培养原代神经元细胞,并随机分为正常对照（Control）组、缺氧/复氧（H/R）组、H/R+Bright Blue G（BBG）组、H/R+BBG+Dorsomorphin组。采用Calcein-AM/PI双染法检测细胞存活率;采用活性氧（ROS）试剂盒检测ROS的产生;采用Mito Tracker TM Green FM检测线粒体形态;采用Western blotting法检测p-AMPK、p-Drp1、Mfn2蛋白的表达。结果与Control组相比,当神经元细胞发生H/R损伤时,其细胞死亡率、线粒体裂变、ROS的含量都明显增加,BBG预处理后,H/R损伤神经元细胞的死亡率、线粒体裂变、ROS的含量都明显减少,而AMPK抑制剂Dorsomorphin则减弱了BBG对H/R损伤神经元细胞的保护作用（P < 0.01）。Western blotting结果显示,与Control组相比,H/R组神经元细胞p-AMPK与Mfn2的表达显著降低,而p-Drp1的表达显著增高（P < 0.01）;BBG预处理后,H/R损伤神经元细胞p-AMPK与Mfn2的表达显著增高,而p-Drp1的表达则显著降低（P < 0.01）;AMPK抑制剂Dorsomorphin则减弱了BBG增加H/R损伤神经元p-AMPK与Mfn2的表达而降低p-Drp1的表达的作用（P < 0.01）。结论抑制P2X7受体可通过抑制线粒体裂变促进线粒体融合减轻神经元缺氧/复氧损伤,其机制可能与激活AMPK有关。     

樟芝多糖通过ROS-NOX2-NLRP1信号减轻皮层神经细胞炎症损伤的作用研究

目的探讨樟芝多糖（ACP）通过抑制活性氧（ROS）-NADPH氧化酶2（NOX2）-NLRP1信号减轻皮层神经细胞（CNC）炎症损伤的作用和机制。方法在研究ACP抗炎症反应作用的实验中,将CNC分为对照组、脂多糖（LPS）组、ACP5mg/L组、ACP10mg/L组和ACP20mg/L组。对照组为常规培养的细胞,无LPS和ACP干预;LPS组用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应;ACP各组分别使用终浓度为5、10、20mg/L的ACP进行预处理6h后,再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应。在研究ACP通过抑制ROS发挥作用的机制研究中,将CNC分为LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组和NAC+ACP组。LPS组用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应;NAC组用10mMNAC预处理4h后,再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应;NAC+ACP组同时用10mMNAC和20mg/LACP预处理4h后,再用0.1mg/LLPS诱导细胞炎症反应。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,探针检测ROS的表达,Westernblot法检测NOX2、NLRP1蛋白表达水平,ELISA法检测培养基中IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平。结果ACP预处理后,与LPS组比较,ACP5mg/L组、ACP10mg/L组和ACP20mg/L组细胞活力均明显上调,细胞凋亡率均下调,细胞中ROS的荧光光度值均降低,NOX2和NLRP1蛋白表达水平均降低,IL-1β、IL-6和TNF-α水平均降低（均P＜0.05）。ROS抑制剂NAC预处理后,与LPS组比较,NAC组和NAC+ACP组细胞凋亡率均下调,细胞中ROS的荧光光度值均降低,NOX2和NLRP1蛋白表达水平均降低,IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平均降低（均P＜0.05）;而NAC组和NAC+ACP组细胞凋亡率、细胞中ROS的荧光光度值、NOX2和NLRP1蛋白表达水平及L-1β、IL-6和TNF-α表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论ACP可以通过抑制ROS的表达来抑制NOX2-NLRP1的激活,从而减轻CNC的炎症反应。     

双氢青蒿素对甲型流感病毒H1N1诱导人支气管上皮细胞TNF-α和IL-6表达的影响及机制研究

  目的  探讨双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）对甲型流感病毒（influenza A virus,IAV）A/PR/8/34（H1N1）诱导人支气管上皮细胞（BEAS-2B）促炎症因子和细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK）信号通路蛋白表达的影响。  方法  采用不同浓度的DHA（即0、12.5、25、50和100 μmol/L）作用BEAS-2B细胞24 h ,CCK8法检测DHA对BEAS-2B细胞活性的影响。IAV吸附BEAS-2B细胞1 h ,分别采用不同浓度的DHA（低、中、高浓度DHA ,即12.5、25和50 μmol/L）作用24 h,同时设置正常对照组和IAV组。采用实时荧光定量PCR法（real time quantitative PCR, RT-qPCR）和酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）的mRNA和蛋白表达水平,蛋白质印迹法（Western blot）检测磷酸化ERK（phospho-ERK, p-ERK）蛋白表达水平。采用特异性ERK激动剂（ERK agonist,20 ng/mL）作用BEAS-2B细胞（分组为正常对照、IAV、DHA、DHA+IAV、ERK agonist、DHA+IAV+ERK agonist组）24 h,观察对DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α、IL-6和p-ERK表达的影响。  结果  DHA浓度在12.5、25、50 μmol/L时,BEAS-2B细胞存活率与正常对照组比较差异无统计学意义;与正常对照组比较,IAV组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白及p-ERK蛋白表达水平增高 (P<0.05),与IAV组比较,IAV+ DHA低、中、高浓度组细胞TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6、p-ERK蛋白表达水平呈剂量依赖性的下降(P<0.05);而ERK激动剂减弱了DHA抑制IAV诱导BEAS-2B细胞ERK信号通路蛋白p-ERK表达和促炎症因子TNF-α、IL-6的分泌。  结论  DHA可通过ERK信号通路抑制IAV诱导BEAS-2B细胞TNF-α和IL-6的表达。     

宁泌泰胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的研究

  目的  研究宁泌泰(NMT)胶囊改善慢性前列腺炎引发疼痛的作用及潜在机制。  方法  将50只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、NMT低剂量组、NMT中剂量组、NMT高剂量组, 每组10只。造模后低、中、高剂量组分别灌胃给药6、12、18 g·kg-1NMT溶液, 空白组、模型组灌胃等量的生理盐水。采用热辐射甩尾法和热板法进行行为学检测; 免疫组化法检测各组前列腺神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量; qPCR法检测前列腺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA的相对表达量; ELISA法检测前列腺组织中IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平; Western blot法检测p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达水平。  结果  与模型组比较, NMT低、中、高3个剂量组小鼠的热板法和甩尾法所测定痛阈值均显著提高(P < 0.01,P < 0.001), 前列腺组织中GFAP和TNF-α表达量明显降低(P < 0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA水平均显著降低(P < 0.05,P < 0.01,P < 0.001), p-ERK/ERK、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白水平显著降低(P < 0.05,P < 0.01)。  结论  NMT胶囊可能通过抑制炎性介质的释放和星形胶质细胞的激活, 发挥对慢性前列腺炎引起小鼠疼痛的抑制作用。      

N-乙酰半胱氨酸对乙醇诱导张氏肝细胞损伤的保护作用

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对体外乙醇处理诱导的张氏肝细胞损伤的保护作用。方法体外培养张氏肝细胞,实验分为对照组、乙醇处理组和NAC高、中、低剂量进行预处理的保护组,并测定NAC预处理对乙醇诱导的肝细胞损伤模型的细胞存活率,细胞内天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、活性氧（ROS）、细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响,评价NAC是否对乙醇造成的肝细胞损伤具有保护作用。结果NAC预处理后,细胞的存活率高于乙醇处理组（P < 0.05）,细胞形态学观察结果显示,NAC的干预组细胞形态优于乙醇处理组;NAC预处理显著降低细胞内AST、ALT、ROS和细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量（P < 0.05）。结论NAC干预可减轻体外乙醇处理诱导的肝细胞损伤,并降低细胞内ROS和炎性因子的水平。     

ACE2基因通过调控Nrf2/HO-1通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞HK-2氧化应激、炎症、凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。 方法 将ACE2慢病毒转染HK-2细胞,按照实验需要分为常氧组(Control组)、缺氧复氧模型组(H/R组)、缺氧复氧转染阴性对照慢病毒组(H/R-NC组)和缺氧复氧转染ACE2慢病毒组(H/R-ACE2组)。细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力;RT-PCR及ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;Western blotting法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Nrf2、HO-1的蛋白水平。采用Nrf2抑制剂ML385以及HO-1抑制剂SnPPIX抑制Nrf2/HO-1通路,Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平变化,比色法检测SOD和MDA表达变化。 结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低(t=7.58,P<0.001),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均增加(t_MDA=11.08,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=5.82,P_PCR-IL6<0.001;t_PCR-TNF-α=7.69,P_PCR-TNF-α<0.001;t_PCR-IL-1β=4.80,P_PCR-IL-1β=0.001;t_ELISA-IL-6=34.11,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=14.12,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=9.63,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=2.73,P_Caspase-3=0.026;t_Bax=27.75,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平下降(t_SOD=7.74,P_SOD<0.001;t_Bcl-2=75.49,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=11.41,P_ACE2<0.001)。与H/R组相比,H/R-ACE2组细胞活力增加(t=3.61,P=0.002),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均下降(t_MDA=6.15,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=3.34,P_PCR-IL-6=0.006;t_PCR-TNF-α=3.65,P_PCR-TNF-α=0.007;t_PCR-IL-1β=4.06,P_PCR-IL-1β=0.004;t_ELISA-IL-6=14.62,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=10.42,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=8.65,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=3.74,P_Caspase-3=0.006;t_Bax=30.52,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平增加(t_SOD=3.58,P_SOD=0.007;t_Bcl-2=63.86,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=58.72,P_ACE2<0.001),Nrf2/HO-1信号通路被激活蛋白水平增加(t_Nrf2=44.55,P_Nrf2<0.001;t_HO-1=14.19,P_HO-1<0.001)。然而ML385和SnPPIX处理会抑制ACE2基因过表达在H/R中HK-2细胞的保护作用(F_Bax=11.02,P_Bax=0.003;F_Bcl-2=21.48,P_Bcl-2<0.001;F_Caspase-3=20.80,P_Caspase-3<0.001;F_SOD=133.49,P_SOD<0.001;F_MDA=14.06,P_MDA=0.001)。 结论 ACE2在HK-2细胞缺氧复氧损伤中具有抑制氧化应激、调节炎症、改善凋亡的作用,Nrf2/HO-1信号通路发挥重要作用。     

黄芩苷对脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞表达炎症因子的影响

  目的  从PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGFs)损伤的影响及机制。  方法  运用LPS诱导建立人牙龈成纤维细胞损伤模型,设置正常对照组、模型组和模型+黄芩苷(1、10和20μg/mL)组,每组设3个复孔,经不同浓度的黄芩苷干预后,Western blotting检测p-Akt、Akt、NF-κB p65等蛋白的表达,采用qPCR法检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6等基因的表达。用PI3K抑制剂LY294002作用半小时后,再用黄芩苷干预,qPCR和Western blotting法检测Akt、p-Akt、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6等基因和蛋白的表达。  结果  与模型组比较,黄芩苷低、中、高剂量能有效降低TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达水平,促进p-Akt蛋白表达,抑制NF-κB p65核蛋白表达,并呈剂量依赖性(均P < 0.05)。与模型组比较,模型+黄芩苷组p-Akt表达升高(P＜0.05),NF-κB p65表达降低(P＜0.01)。PI3K抑制剂LY294002作用后,模型+黄芩苷组p-Akt/Akt表达量(0.63±0.18)较模型组(0.56±0.14)升高(P＜0.05),模型+黄芩苷组NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量较模型组降低(均P＜0.01)。黄芩苷对LY294002作用后,p-Akt/Akt、NF-κB p65、IL-6、IL-1β、TNF-α表达量与模型组比较,差异无统计学意义。  结论  黄芩苷可抑制LPS诱导的人牙龈成纤维细胞损伤引起的炎症反应,其作用机制可能与促进Akt的磷酸化,抑制NF-κB p65核转录和炎性因子的释放有关。      

黄芪汤调节TLR4/NF-κB信号通路改善高糖诱导足细胞损伤的研究

  目的  探讨黄芪汤对高糖诱导足细胞损伤的作用及机制。  方法  体外培养人足细胞, 采用30 mmol·L-1葡萄糖干预24 h诱导足细胞损伤, 分别设置对照组、模型组、黄芪汤低浓度组(10 μg·mL-1)、黄芪汤中浓度组(30 μg·mL-1)和黄芪汤高浓度组(100 μg·mL-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖能力, 划痕实验检测细胞迁移能力,qPCR法检测TNF-α、IL-6等炎症因子mRNA表达, ELISA法检测足细胞上清TNF-α、IL-6的含量,Western blot法检测足细胞TLR4、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达。  结果  与对照组比较, 模型组细胞划痕愈合率明显降低(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6、CCL24 mRNA表达水平,上清液中TNF-α、IL-6的含量和TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α及IL-6蛋白表达均显著增加(P < 0.05,P < 0.01)。与模型组相比, 黄芪汤组细胞划痕率明显升高(P < 0.01),足细胞中TNF-α、IL-6的含量和mRNA表达,以及TLR4、p-NF-κB/NF-κB、TNF-α、IL-6蛋白表达均显著减少(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  黄芪汤能有效减轻高糖对人足细胞的炎症损伤, 增强细胞增殖、迁移能力, 抑制细胞凋亡, 其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、下调炎症因子的表达有关。      

右美托咪定预处理通过抑制NLRP3炎性小体激活减轻大鼠肠缺血再灌注诱导的急性肺损伤

目的 探讨右美托咪定（Dex）对大鼠肠缺血再灌注（II/R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用以及核苷酸结合域样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体活性的影响。方法 将32只健康雄性SD大鼠,随机分为4组（8只/组）。假手术组（Sham组）仅暴露肠系膜上动脉（SMA）,肠缺血再灌注组（II/R组）阻断SMA 1 h后再灌注2 h,II/R+右美托咪定处理组（Dex+II/R组）右美托咪定干预后行再灌注,Dex假手术组（Dex组）右美托咪定预处理假手术组。Sham组和II/R组腹腔注射等量生理盐水。采取夹闭SMA 1 h再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。测定各组大鼠肺部组织湿/干质量比值（W/D）、髓过氧化物酶（MPO）活性,HE染色评估肺组织病理学变化以及行肺损伤评分;ELISA检测肺部组织中炎性因子TNF-α、IL-18、IL-1β水平;Western blot检测肺部组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）蛋白的表达水平。结果 相较于Sham组,II/R组肺组织病理损伤明显,W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达显著升高（P<0.05）,肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（P<0.05）,p-AMPK蛋白表达减少（P<0.05）;相较于II/R组,Dex+II/R组肺组织病理损伤轻微,W/D值、MPO活性及肺组织中的TNF-α、IL-18、IL-1β表达明显下降（P<0.05）,肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达明显下降（P<0.05）,p-AMPK蛋白表达明显增加（P<0.05）。结论 右托美咪定通过对NLRP3炎性小体激活的抑制,减轻炎性反应,进而改善大鼠II/R所致的ALI。     

青蒿琥酯对甲型流感病毒肺炎的治疗作用研究

  目的  探讨青蒿琥酯（artesunate, ART）对甲型流感病毒肺炎的治疗作用。  方法  将36只小鼠随机分为6组:正常对照组（C组）、溶剂对照组（M组,10%DMSO）、阳性药物组（P组,奥司他韦1.25 mg/kg）、ART高剂量组（ART-G组,ART 120 mg/kg）、ART中剂量组（ART-Z组,ART 60 mg/kg）和ART低剂量组（ART-D组,ART 30 mg/kg）,每组6只。除C组不进行病毒干预和腹腔注射外,其余5组小鼠鼻腔滴入感染甲型流感病毒（influenza A virus, IAV）,12 h后按分组剂量进行每日一次腹腔注射;治疗过程中观察小鼠体征、体质量和存活情况;治疗7 d后,取小鼠肺组织,计算肺指数,HE染色观察小鼠肺组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测肺组织中Toll 样受体 4（Toll-like receptor 4, TLR4）、核因子κB（nuclear factor kappa-B, NF-κB）（p65）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α, TNF-α)、白细胞介素-6（interleukin-6, IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1, IL-1β）mRNA和蛋白表达水平。  结果  与C组比较,M组小鼠体征变差、体质量和存活率降低,肺指数增加,肺组织出现严重病理变化,肺组织中TLR4、NF-κB (p65)、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA和蛋白表达水平升高（P<0.05）;与M组比较,ART各组小鼠体征明显改善、体质量和存活率升高,肺指数降低,肺组织病理变化得到改善,肺组织中TLR4、NF-κB (p65)、TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,且上述指标变化以ART-G组最显著。  结论  ART对甲型流感病毒肺炎具有治疗作用,其机制与抑制TLR4/NF-κB (p65)信号通路活化和抗炎相关。     

电针预处理对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响

  目的  观察电针预处理“足三里”穴和“尺泽”穴对脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活的影响, 探讨电针预处理在脓毒症ALI中发挥的保护效应及可能机制。  方法  将SD大鼠随机分为对照组、电针预处理+对照组、模型组、电针预处理+模型组, 每组10只。各模型组采用腹腔注射脂多糖(LPS)的方法建立脓毒症ALI大鼠模型。各电针预处理组于LPS造模前1周进行连续7 d电针预处理, 疏密波, 频率4 Hz/20 Hz, 强度1~2 mA, 持续30 min。检测各组大鼠肺功能; HE染色法观察大鼠肺组织病理学变化; 测定大鼠肺组织湿/干质量比值(W/D); ELISA法检测大鼠血浆及肺组织中炎症因子IL-1β、IL-18含量; 免疫荧光观察大鼠肺组织中ASC蛋白阳性表达; Western blot法检测大鼠肺组织中NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β蛋白的表达。  结果  与对照组相比, 模型组大鼠用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气量(FEV_0.1)、第0.3秒用力呼气量(FEV_0.3)、FEV_0.1/FVC、FEV_0.3/FVC均显著降低(P < 0.001);肺泡结构紊乱, 肺组织内炎性细胞浸润明显, 肺组织充血水肿; W/D比值显著升高(P < 0.001);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量明显升高(P < 0.001);ASC蛋白阳性表达明显增多(P < 0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1及IL-1β的表达水平均显著升高(P < 0.001)。与模型组相比, 电针预处理+模型组大鼠FVC、FEV_0.1、FEV_0.3、FEV_0.1/FVC、FEV_0.3/FVC均明显升高(P < 0.05, P < 0.001);肺组织内炎症细胞浸润及充血水肿有明显改善; W/D比值显著降低(P < 0.01);血浆及肺组织内IL-1β、IL-18含量显著降低(P < 0.01, P < 0.001);ASC蛋白阳性表达降低(P < 0.001);肺组织中炎症小体相关蛋白NEK7、NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达水平均显著降低(P < 0.05, P < 0.01, P < 0.001)。  结论  电针预处理可以减轻肺部炎性反应, 改善肺功能, 其机制与电针抑制脓毒症ALI大鼠肺组织中NEK7-NLRP3炎症小体激活相关。      

N-乙酰半胱氨酸对纳米二氧化硅所致细胞毒性的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对纳米二氧化硅(SiO₂)颗粒导致细胞中活性氧(ROS)水平升高的抑制作用,阐明纳米SiO₂颗粒致细胞毒性的机制。方法:选用粒径为68 nm的纳米SiO₂颗粒,以体外培养的人正常肝细胞(L-02)为模型,分为对照组和不同浓度(1、2、5、10 mmol·L^-1)NAC预处理组、不同浓度(10、20、50、100 mg·L^-1)纳米SiO₂颗粒暴露组和NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组。采用MTT法测定不同浓度NAC预处理后的细胞存活率以及不同浓度NAC预处理后暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞存活率;倒置显微镜观察NAC预处理后暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞形态;荧光酶标仪检测NAC预处理后暴露于不同浓度纳米SiO₂颗粒的细胞中ROS水平。结果:NAC预处理组细胞存活率均高于对照组,在5 mmol·L^-1 浓度时达到峰值,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度NAC能使暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞存活率升高,以5 mmol·L^-1 NAC的作用最明显(P<0.05);与纳米SiO₂颗粒暴露组比较,NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组细胞数目增多,细胞边界较明显;随纳米SiO₂颗粒浓度的升高,细胞中 ROS水平随之升高,呈现剂量依赖效应,在50和100 mg·L^-1浓度时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与相同浓度纳米SiO₂颗粒暴露组比较,NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组细胞中ROS水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NAC在一定程度上能够抑制纳米SiO₂颗粒所致的细胞存活率下降和细胞中ROS水平升高,细胞中ROS水平升高是纳米SiO₂颗粒导致人正常肝细胞毒性的作用机制之一。