肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义

目的通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用。方法20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水。比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达。结果与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高。结论LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用。     

地塞米松对变应性哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的 探讨地塞米松对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子(TARC)及其mRNA表达的影响.方法 30只清洁级雄性BALB/C小鼠分为3组:正常对照组、哮喘组和地塞米松组.以卵清白蛋白(OVA)致敏激发法制备小鼠哮喘模型,末次激发24 h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织.BALF行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测BALF中TARC和IL-4水平;免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测TARC蛋白和TARC mRNA在肺组织中的表达.结果 ①哮喘组BALF中细胞总数,EOS绝对数和EOS占细胞总数的百分数(EOS%)均显著高于正常对照组,地塞米松组上述指标均显著低于哮喘组(均P＜0.01);②哮喘组BALF中TARC,IL-4浓度均显著高于对照组,地塞米松干预后BALF中TARC,IL-4浓度均显著低于哮喘组(均P＜0.01).③免疫组化及RT-PCR结果显示,肺组织中TARC蛋白及其mRNA的表达,哮喘组显著高于对照组,地塞米松组较哮喘组显著减弱(均P＜0.01),免疫组化显示,TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞.④相关性分析显示,小鼠BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度均呈显著正相关(均P＜0.01).结论 糖皮质激素(地塞米松)可抑制TARC在哮喘小鼠气道上皮中的表达,可能是其治疗哮喘气道炎症的部分作用机制.     

MMP-2和TIMP-2在脂多糖诱导的新生大鼠急性肺损伤中表达的变化

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metallo proteinase-2,MMP-2)及其组织抑制剂(tissue inhibitors of metallo proteinase-2,TIMP-2)在脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠急性肺损伤中的作用.方法 选择30只新生7日龄SD大鼠,随机分为生理盐水对照组(n=6)和急性肺损伤组(n=24),后者进一步分为1、2、4及6h亚组,每组6只.以LPS 腹腔注射建立急性肺损伤模型,观察注射LPS后不同时间点大鼠肺组织的病理改变,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肺组织中MMP-2和TIMP-2的蛋白及mRNA表达.结果 病理学检查证实新生大鼠急性肺损伤模型复制成功.与生理盐水对照组比较,急性肺损伤组注射LPS后MMP-2蛋白及mRNA均表达增加,4～6h达高峰,差异有统计学意义(均P<0.05).TIMP-2蛋白及mRNA表达在6h内可见微弱增加趋势,但与生理盐水对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05).结论 LPS致新生大鼠的急性肺损伤存在MMP-2和TIMP-2的表达失衡,进而可能通过破坏基底膜参与急性肺损伤的病理过程.     

支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的 研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notchl基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系.方法 卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10).于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notchl蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notchl mRNA的表达.以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10).结果 免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notchl阳性染色程度明显强于对照组.半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notchl mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P＜0.05).结论 Notchl在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径.     

早产大鼠宫内感染肺损伤时支气管肺泡灌洗液及肺组织中脂肪型脂肪酸结合蛋白的表达

目的:观察宫内感染肺损伤时脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在早产大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达,探讨其与新型支气管肺发育不良(BPD)发病的关系。方法:定期受孕的SD大鼠分为LPS组和对照组,于孕15 d羊膜腔内注射LPS或生理盐水。2组动物均于出生后第1天(P1)、第4天(P4)和第7天(P7)各取8只,应用ELISA方法检测BALF中FABP4的含量,采用免疫组化法和RT-PCR技术检测肺组织中FABP4蛋白及mRNA的表达水平。结果:FABP4主要在肺泡巨噬细胞、血管内皮细胞及少量支气管上皮细胞表达。LPS组早产大鼠BALF中FABP4含量、肺组织中FABP4蛋白及mRNA的相对表达量较对照组均升高,且与时间存在交互作用(P均<0.05)。结论:宫内感染肺损伤时FABP4表达升高,可能是引起肺微血管病理性重塑及肺泡化进程受阻,进而导致新型BPD发生发展的重要因素。     

分泌型白细胞蛋白酶抑制剂对急性肺损伤大鼠趋化因子fractalkine表达的影响

目的: 探讨分泌型白细胞蛋白酶抑制剂(SLPI)对急性肺损伤新生大鼠肺组织中趋化因子fractalkine表达的影响.方法: 利用内毒素(LPS)气管内滴入制备新生大鼠急性肺损伤的模型;设立SLPI治疗组、LPS组、生理盐水(NS)对照组.SLPI治疗组在气管内滴入LPS前预先滴入400 μg SLPI.分别在6,12,24 h后取肺组织匀浆,用ELISA法分别测定各组趋化因子fractalkine蛋白水平.RT-PCR测定fractalkine的mRNA水平.结果: 在各时间点,SLPI治疗组肺组织中Fractalkine蛋白水平及mRNA水平均显著低于LPS组.24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine蛋白为(3 124.9±155.6)pg/ml,显著低于LPS组的(4 231.4±177.9)pg/ml和NS对照组的(4 412.4±201.5)pg/ml,F=42.8, P＜0.05,差异有统计学意义.24 h时SLPI治疗组肺组织中fractalkine的mRNA相对水平为47.0±5.1,显著低于LPS组的87.3±8.2和NS对照组的81.1±9.9,F=33.2, P＜0.05,差异有统计学意义.结论: SLPI能有效抑制新生大鼠急性肺损伤时肺组织中趋化因子fractalkine的表达.     

地昔帕明对脂多糖急性肺损伤小鼠核因子-κB表达的影响

目的:观察地昔帕明(DP)对脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)的影响,进一步探讨DP对急性肺损伤的保护机制。方法:昆明小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、地昔帕明对照组(DP组)、模型组(LPS组)及地昔帕明处理组(DP+LPS组)。腹腔注射LPS建立小鼠急性肺损伤模型。造模6h后光镜下观察肺组织病理学改变,免疫组化检测NF-κB在肺组织的表达和分布。结果:病理切片显示LPS组肺泡和间隙水肿明显,大量中性粒细胞浸润,肺间隔增厚,充血明显,DP处理组病理改变较LPS组有不同程度减轻。免疫组化结果显示LPS组NF-κB p65表达较DP处理组明显升高。结论:DP对LPS急性肺损伤小鼠的保护机制可能抑制与NF-κB信号转导通路,减轻肺组织中性粒细胞浸润程度有关。     

抗炎多肽AF-2对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的保护

目的 研究抗炎多肽AF-2(antiflammin-2)对内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用.方法 Balb/c雄性小鼠37只,随机分为3组,对照组(n = 10)、急性肺损伤(ALI)模型组(n=14)和AF-2治疗组(n=13),模型组和治疗组腹腔注射大肠杆菌内毒素复制小鼠肺损伤模型,治疗组同时注射抗炎多肽AF-2,对照组和模型组注射等量的生理盐水.在0 h、6 h和12 h记录动物的呼吸频率,12 h处死动物,肺组织切片观察肺病理变化,ELISA法检测血清细胞因子.结果 6 h和12 h AF-2治疗组动物呼吸频率均低于模型组.肺组织病理显示AF-2对LPS诱导的小鼠ALI肺组织的渗出、炎细胞浸润有一定的抑制作用.AF-2治疗组与ALI模型组比较血清IL-6水平明显下降.结论 AF-2对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤有一定的保护作用.     

支气管哮喘BALB/c小鼠肺组织及肺T细胞中Notchl的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及其T细胞中Notch1基因的表达,探讨其与支气管哮喘发病的关系。方法卵清蛋白腹腔注射及雾化吸入建立BALB/c小鼠支气管哮喘模型(n=10)。于建模后24 h麻醉下放血处死动物,右肺组织分离T细胞并进行纯度鉴定,运用免疫组化染色观察左肺组织Notch1蛋白表达;半定量RT-PCR法检测左肺组织和右肺分离获得T细胞中Notch1 mRNA的表达。以腹腔注射和雾化吸入生理盐水的BALB/c小鼠作为对照(n=10)。结果免疫组化染色发现,哮喘模型组小鼠肺组织Notch1阳性染色程度明显强于对照组。半定量RT-PCR分析显示,哮喘模型组和对照组小鼠Notch1mRNA表达在肺组织分别为0.83±0.60和0.33±0.31,在肺T细胞中分别为0.36±0.20和0.11±0.21;组间比较均有显著差异(P<0.05)。结论Notch1在支气管哮喘发病环节中表现为促进作用,为研究支气管哮喘的发病机制提供了新途径。     

甲泼尼龙对哮喘模型MMP-9的表达及对气道炎症的影响

目的 探讨甲泼尼龙(MP)对哮喘小鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和气道炎症的影响.方法 30只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为哮喘组、MP治疗组和生理盐水对照组,每组10只.采用鸡卵清白蛋白(OVA)腹腔注射和滴鼻的方法 建立小鼠急性哮喘模型,HE染色观察肺组织病理学改变,并进行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数.采用免疫组化法和明胶酶谱法测定MMP-9蛋白的表达;RT-PCR法测定MMP-9 mRNA的表达.结果 哮喘组病理切片显示明显的气道痉挛,大量炎性细胞浸润,BALF细胞计数中嗜酸性粒细胞明显增高,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);而MP治疗组病理切片显示气道痉挛程度和炎性细胞浸润均减轻,BALF中嗜酸性粒细胞减少,与哮喘组比较差异均有统计学意义(P<0.05).免疫组化和明胶酶谱分析均显示哮喘组较对照组MMP-9蛋白表达明显增加.RT-PCR结果 显示,哮喘组MMP-9 mRNA表达增多,而MP治疗组较哮喘组表达降低.结论 MMP-9在哮喘小鼠肺组织中表达增高可能是导致哮喘急性炎症的机制之一.MP也可能通过抑制MMP-9表达抑制哮喘的炎症反应.