安体舒通、双氢克尿噻和呋塞米对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2的影响

目的 探讨利尿剂安体舒通、双氢克尿噻片、呋塞米对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2(AQP2)浓度的影响.方法 慢性心力衰竭患者(CHF)303例,分别归入安体舒通组、双氢克尿噻组和呋塞米组,用放射免疫法检测血浆AVP浓度、间接ELISA法检测尿液AQP2浓度,比较用药前后7d血浆AvP浓度、尿液AQP2浓度的变化.结果 呋塞米组血浆AVP浓度较用药前增加明显(P<0.05);与用药前比较,各利尿剂组CHF患者尿液中AQP2浓度明显增加(P<0.05).结论 三类利尿剂均可增加CHF患者尿液AQP2的排出,呋塞米引起尿液中AQP2大量排出被认为可能与过多利尿后引起AVP分泌增加有关,是机体防止水钠过多丢失引起的继发性代偿反应.     

卡托普利和洛沙坦对大鼠肾脏水通道蛋白-2mRNA和尿液水通道蛋白-2的影响

目的 探讨卡托普利和洛沙坦对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AQP2)mRNA表达的影响及尿液水通道蛋白-2浓度的改变。方法 30只健康大鼠随机分成3组:正常对照组,卡托普利组,洛沙坦组。经用药后观察血Na⁺、尿量以及尿渗量水平,用RT-PCR半定量检测肾内髓质AQP2及血管加压素2型(V₂)受体mRNA水平,用酶联免疫吸附测定法检测尿液AQP2浓度。结果 卡托普利组与洛沙坦组大鼠尿量均较正常组显著增多,卡托普利组尿渗量低于洛沙坦组和正常组,但尿液中AQP2浓度却高于洛沙坦组和正常组。RT-PCR半定量显示卡托普利组AQP2mRNA较正常组显著降低(P<0.05),V₂受体mRNA没有显著差别。结论 卡托普利可以抑制正常大鼠肾内髓质AQP2mRNA的表达,同时促进肾内AQP2经尿液排出。     

卡托普利和洛沙坦对大鼠肾脏水通道蛋白-2 mRNA和尿液水通道蛋白-2的影响

目的 探讨卡托普利和洛沙坦对正常大鼠肾脏水通道蛋白-2(AOP2)mRNA表达的影响及尿液水通道蛋白-2浓度的改变。方法 30只健康大鼠随机分成3组；正常对照组，卡托普利组．洛沙坦组。经用药后观察血Na^+、尿量以及尿渗量水平，用RT-PCR半定量检测肾内髓质AOP2及血管加压素2型(V2)受体mRNA水平，用酶联免疫吸附测定法检测尿液AOP2浓度。结果 卡托普利组与洛沙坦组大鼠尿量均较正常组显著增多，卡托普利组尿渗量低于洛沙坦组和正常组，但尿液中AQP2浓度却高于洛沙坦组和正常组。RT-PCR半定量显示卡托普利组AOP2 mRNA较正常组显著降低(P<0．05)，V2受体mRNA没有显著差别。结论 卡托普利可以抑制正常大鼠肾内髓质AOP2 mRNA的表达，同时促进肾内AOP2经尿液排出。     

禁水大鼠肾脏与尿液水通道蛋白2表达的改变及意义

目的　研究禁水大鼠肾脏及其尿液AQP2 (aquaporin2 )水通道蛋白量的改变 ,阐明尿液AQP2蛋白与抗利尿激素 (ADH)的关系及其在监测机体水平衡中的作用。方法本实验通过建立禁水大鼠模型 ,用免疫组化和Western印迹分析法测定肾脏内髓及尿液AQP2的含量 ,并比较禁水组大鼠尿液AQP2含量与对照组的差别。结果禁水组大鼠肾脏AQP2蛋白表达量较正常对照组明显增加 ,且AQP2蛋白可在尿液中检测到 ,禁水时尿液AQP2含量明显增多 (P <0 0 1)。结论AQP2是机体缺水时维持机体水平衡的关键蛋白质之一 ,检测尿液AQP2含量是监测机体重吸收状况的一种较好的方法。     

模拟失重条件对大鼠肾小管水通道蛋白2表达影响的研究

目的 探讨模拟失重条件下大鼠肾小管水通道蛋白2(AQP2)表达的变化.方法 采用尾部悬吊法建立失重模型.48只健康雄性Wistar大鼠分为对照组及尾吊3d组、尾吊5d组、尾吊7d组、尾吊2周组、尾吊4周组.分别于观察终点处死各组大鼠,处死前留取血尿标本,分别检测肾功能和尿渗透压.剥离肾脏组织,分离肾皮质和髓质.电镜观察肾小管超微结构.Western blot方法检测AQP2的表达.ELISA检测血清中抗利尿激素(ADH)的水平.结果 ①电镜下尾吊组大鼠肾脏均表现为肾小管不同程度受损,尾吊5d组大鼠肾小管损伤最严重.②Western blot显示尾吊组AQP2的表达较对照组均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),其中尾吊5d组大鼠肾脏AQP2表达最明显(P＜0.01).③尾吊5d组尿渗透压显著升高,与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.01).各组间ADH及肾功能指标差异无统计学意义.④AQP2蛋白表达量与尿渗透压呈正相关性(r =0.468,P=0.003).结论 模拟失重条件能引起大鼠肾小管AQP2表达上升,以尾吊5d组升高最明显.     

糖尿病大鼠肾组织中水通道蛋白2的表达及意义

目的:检测水通道蛋白2(AQP2)在糖尿病大鼠肾脏表达的变化,探讨其意义.方法:Wistar大鼠随机分为对照组和模型组.模型组40只链脲佐菌素建模,成模后15d、30d、45d、60d取材,每次10只,对照组10只60d一次取材.观察大鼠的一般指标、肾组织病理改变、AQP2免疫组化染色、实时聚合酶链反应法检测肾髓质集合管AQP2的表达.结果:和对照组大鼠相比,模型组均出现多饮、多食、多尿、体重减轻;同时血糖、血肌酐、血渗透压值升高,而尿渗透压值下降(P<0.05).HE染色显示模型组在15d、30d、45d肾脏结构基本正常.而在60d时.部分开始出现肾小球肥大.系膜区增宽,系膜细胞增生、基质增多.AQP2免疫组化染色显示肾脏外髓质部分集合管管腔内壁细胞阳性染色,而肾小球和肾间质未见表达,并且模型组阳性率高于对照组.同样,RT-PCR 半定量显示模型组大鼠肾脏AQP2的表达高于对照组(P<0.05).结论:AQP2在糖尿病大鼠肾髓质集合管组织中的表达增强;AQP2的上调表达可能是糖尿病水代谢异常的机体代偿机制.     

氯沙坦钾对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2的影响

目的 探讨氯沙坦钾对慢性心力衰竭患者尿液水通道蛋白2(AQP2)浓度的影响.方法 慢性心力衰竭(CHF)患者203例,分为常规治疗组(100例)和氯沙坦钾组(103例),另设正常对照组(50例),用放射免疫法检测血浆血管加压素(AVP)浓度、间接ELISA法检测尿液AQP2浓度,用药12周,治疗前后各1天采血检测血浆AVP浓度、留尿检测尿液AQP2浓度,比较其变化.结果与正常对照组比较,氯沙坦钾组治疗前后AVP和AQP2浓度均显著升高(P均＜0.05),常规治疗组治疗前后AVP和AQP2浓度均显著升高(P均＜0.05).氯沙坦钾组治疗后AVP和AQP2浓度低于药物治疗前,也低于常规组治疗后(P均＜0.05).结论 CHF患者尿液AQP2排出增多,氯沙坦钾减少尿液AQP2排出,抑制集合管对水的重吸收,减轻水钠潴留,减轻心脏前负荷,延缓心力衰竭发展.     

水通道蛋白5和水通道蛋白9在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的 研究水通道蛋白5(AQP5)、水通道蛋白9(AQP9)蛋白及mRNA在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学和原位杂交方法检测10例正常卵巢组织,80例卵巢上皮性肿瘤组织中AQP5、AQP9蛋白及mRNA的表达,分析其表达与临床病理特征的关系.结果 卵巢上皮性恶性肿瘤组织中AQP5、AQP9蛋白及mRNA的阳性表达高于正常和良性肿瘤组织(P＜0.05),交界性肿瘤中AQP5蛋白表达的高于正常组(P＜0.05),且交界组AQP5和AQP9 mRNA的阳性表达高于正常和良性肿瘤组织(P＜0.05);随着FIGO分期的增高、组织学分级的降低、伴淋巴结转移及腹水的增多,卵巢上皮性肿瘤组织中AQP5、AQP9蛋白及mRNA的表达增高,差异均有统计学意义(均P＜0.05);AQP5、AQP9蛋白及mRNA在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达呈正相关(r =0.610,0.594,均P=0.000).结论 AQP5、AQP9蛋白及mRNA在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达均上调,其表达上调可能与卵巢上皮性肿瘤的发生及发展有关,有望成为卵巢上皮性肿瘤检测及治疗的潜在靶点.     

促红细胞生成素对缺血再灌注损伤大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对缺血再灌注损伤(IR)大鼠肾脏水通道蛋白(AQP2)表达的影响,以探讨EPO对IR的保护作用.方法 制备大鼠肾IR模型,将Wistar大鼠随机分为假手术组、肾IR组及EPO治疗组,通过免疫组化、聚合酶链反应及Wostem印迹等方法 ,检测肾组织中AQP2及其mRNA的变化,同时检测肾功能及尿量、尿渗透压的改变和肾组织形态学变化.结果 EPO治疗组肾脏中AQP2及其mRNA的变化、肾功能[血肌酐(51±5)μmol/L]及尿量[(26.0±2.3)μl·min-1·kg-1]、尿渗透压[(1508±121)mOsm/kg H2O]和肾组织形态学变化与肾IR组[血肌酐(141±5)μmol/L、尿量(59.1±1.3)μl·min-1·kg-1,尿渗透压(235±99)mOsm/kg H2O]相比均有明显改善(均P<0.05).结论 EPO可以促进IR大鼠肾脏AQP2表达,EPO具有改善大鼠肾脏IR的作用,EPO促进AQP2表达这一机制可能参与了其改善大鼠肾脏IR作用.     

丝瓜络对心衰大鼠肾脏水通道蛋白-2mRNA表达的影响

目的 观察丝瓜络(RLF)对慢性充血性心衰大鼠尿量及肾脏水通道蛋白-2(AQP-2)基因表达的影响,初步探讨RLF的利尿作用及其分子生物学机制.方法 选取Wista大鼠,采用异丙肾上腺素法建立慢性充血性心衰大鼠模型,分别给予RLF 5g·kg-1·d-1,10g·kg-1·d-1,灌胃给药,1次/d,连续用药28d.采用代谢笼法,测定各组大鼠24h尿量;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察各组大鼠肾脏髓质AQP-2 mRNA的表达.结果 丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量并降低心衰大鼠肾脏髓质AQP-2 mRNA的表达(P＜0.05).结论 丝瓜络对慢性充血性心衰大鼠有明显利尿作用,其分子生物学机制可能与降低肾脏髓质AQP-2 mRNA的表达有关.     

Messenger RNA expressions of vasopressin system and aquaporin-2 in adriamycin-induced nephrotic rats and effects of astragalus membranaceus

Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙｒａｔｓｗｉｔｈｆｏｕｒｗｅｅｋｓｏｆａｄｒｉａｍｙｃｉｎｉｎｄｕｃｅｄｎｅｐｈｒｏｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ(ＮＳ)ｗｅｒｅｕｓｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙＡｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐＮＳ ＡＭｗａｓｓｅｔｔｏｔｅｓｔｉｆｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＡＭｇｉｖｅｎ05ｇ/ｋｇｄａｉｌｙｏｎＮＳＨｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃＡＶＰｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｄｏｔｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄＲｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎ…     

Effect of Micardis on the Expression of Renal Medulla Aquaporin-2 in Diabetic Mice

In current study, the effect of angiotensin receptor blocker Micardis on the localization and expression of aquaporin-2 (AQP2) was investigated in the renal medullary collecting duct of mice with diabetic nephropathy (DN). Mice were divided into three groups:normal group, DN group and Micardis-treated group. Six weeks after establishment of STZ-induced DN model in mice, the expression of AQP2 in renal medulla was detected measured by semiquantitative immunofluorescence histochemistry and Western blot techniques, and the localization of AQP2 by confocal immunofluorescence laser scanning microscopy. The results showed that the urinary osmolality was decreased in DN group as compared with normal group (2.39±0.11 vs 3.16±0.16, P<0.05). Although the localization of AQP2 on the renal medulla was unchanged, the expression of AQP2 was increased significantly in DN group as compared with normal group. Micardis could partly attenuate above changes. It was concluded that treatment with Micardis could partly rectify the abnormal expression of AQP2 in renal medulla of DN mice, which suggested that rennin-angiotensin system (RAS) is implicated in the pathogenesis of DN by regulating the expression of AQP2.     

Urinary excretion of aquaporin-2 water channel protein in chronic heart failure rats

目的　探讨慢性心力衰竭大鼠模型尿液aquaporin 2水通道蛋白 (AQP2 )浓度的改变及其与肾脏AQP2基因表达的相关性。方法　应用左冠状动脉结扎制备慢性心力衰竭大鼠模型 ,术后第 9周应用Western蛋白即迹测定尿液AQP2浓度和肾脏AQP2蛋白表达水平。结果　慢性心力衰竭大鼠和对照组大鼠尿液AQP2蛋白吸光度比分别为 365 5 %± 10 2 9%和 98 5 %± 4 7 6% (P<0 0 1) ,心力衰竭大鼠尿液AQP2浓度与肾脏AQP2基因表达水平有较好的相关性 (r =0 89,P <0 0 1)。结论　慢性心力衰竭大鼠模型尿液AQP2蛋白浓度明显增加。     

低渗液对星形胶质细胞水通道蛋白-4表达的影响

目的　探讨体外培养星形胶质细胞在低渗状态下水通道蛋白 4 (AQP4 )表达的变化特点及其所起的作用。方法　取生后 2d的Wistar大鼠大脑皮质进行星形胶质细胞纯培养 ,随机分为对照组和低渗组 ,每组分为 3、6、12、2 4h共 4个时间点 ,每个时间点细胞孔数为 6。对照组予以正常培养液常规培养 ,低渗组分别予以不同程度的低渗液作用于细胞 ,以建立星形胶质细胞对低渗液反应的实验模型。利用倒置显微镜和透射电镜观察低渗液对星形胶质细胞的形态学影响 ,并通过免疫细胞化学、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、乳酸脱氢酶活性的测定及图像分析等方法研究星形胶质细胞对低渗液的反应及AQP4的表达变化。结果　对照组在正常渗透压培养液培养 3、6、12、2 4h后 ,AQP4表达无明显差异 (均P >0 .0 5 )。在相同的作用时间条件下 ,各低渗组AQP4mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组 (均P <0 .0 5 )。而在同一低渗状态下的不同培养时间点和不同低渗状态下的同一培养时间点 ,AQP4表达随作用时间的延长和低渗程度的增加而增强 ,AQP4mRNA和蛋白的表达呈明显正相关 (r >0 .836 9,P <0 .0 5 ) ;同时星形胶质细胞表现出特征性的细胞水肿形态学变化 ,细胞存活能力明显下降 ,其严重程度与低渗液的作用时间和渗透压有关。结论　低渗液     

从肺脾肾不同组织水通道蛋白变化研究中医“水液代谢理论”的实验基础

目的从肺脾肾不同组织水通道蛋白变化研究中医“水液代谢理论”的实验基础。方法通过2%腺嘌呤混悬液灌胃4周制
备肾阳虚大鼠模型,并予肉苁蓉煎液进行干预6周,检测尿17羟皮质醇值含量、尿肌酐和尿渗透压,检测水通道蛋白1（AQP1）基
因在肺、脾、肾的表达量的变化,及AQP1蛋白在各组织的表达情况。结果腺嘌呤模型大鼠尿17羟皮质醇值含量较正常组降
低,符合肾阳虚,同时尿肌酐和尿渗透压降低。AQP1基因在腺嘌呤模型大鼠脾、肾组织的表达下调,肉苁蓉干预组AQP1基因
在肺、肾组织的表达较模型组显著上调。AQP1蛋白在腺嘌呤模型组肺脾肾各组织中表达均增加,经肉苁蓉干预的大鼠肺肾组
织中AQP1蛋白表达减少。结论肺、脾、肾均参与水液调节,AQP1是其分子基础之一,补益肾阳药物肉苁蓉有上调AQP1基因
的作用,AQP1蛋白的表达还受到其他因子的调控。
     

RNA干扰抑制胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的实验研究

目的 研究RNA干扰技术对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）基因表达的影响,探讨应用该技术治疗胸腔积液的可行性。方法体外培养大鼠胸膜间皮细胞,细胞鉴定后,采用免疫细胞化学、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测AQP1表达;设计并构建2个靶向大鼠AQP1基因的短发夹RNA（shRNA）重组质粒,脂质体转染大鼠胸膜间皮细胞48h后,采用RT—PCR及Western印迹方法分别在mRNA和蛋白质水平检测AQP1基因表达的抑制效果。结果胸膜间皮细胞存在AQP1表达,所设计的2个AQP1-siRNA重组质粒可不同程度地抑制AQP1在胸膜间皮细胞中的表达,在mRNA水平抑制率分别为83．5％和90．9％;在蛋白质水平抑制率分别为41．2％和67．6％,与空白对照组和阴性对照组比较,其差异有统计学意义（P〈0．01）。结论质粒介导的RNA干扰可明显抑制大鼠胸膜间皮细胞AQP1基因的表达,且抑制率具有序列相关性,是潜在的胸腔积液基因治疗新方法。