补肾活血方对家兔膝骨关节炎模型滑膜组织MMPs的影响

目的 观察自拟补肾活血万时家兔膝骨关节炎(OA)模型滑膜组织MMPs调控的作用.方法 Hulth方法建立膝骨关节炎模型,给予朴肾活血方干预,常规抽提和纯化RNA,采用Affymetrix Rat 230 2.0 Array芯片检测滑膜组织的基因表达变化.结果 芯片结果显示模型组滑膜组织MMP2、MMP3、MMP7、MMP9、MMP12表达明显高于正常组滑膜组织,补肾活血方对其有明显下调作用.结论 MMPs在膝OA滑膜组织表达升高,导致关节软骨降解,促进骨关节炎的形成,而补肾活血方可以下调MMPs的表达,促进软骨的修复,是补肾活血法中药治疗骨关节是的机制之一.     

自拟补肾活血方对家兔膝关节骨性关节炎模型滑膜组织MMPs的影响

目的:观察自拟补肾活血方对家兔膝关节骨性关节炎(OA)模型滑膜组织MMPs的调控作用.方法:采用Hulth方法建立膝关节骨性关节炎模型,给予补肾活血方干预,常规抽提和纯化RNA,采用Affymetrix Rat 230 2.0Array芯片检测滑膜组织的基因表达变化.结果:芯片结果显示模型组滑膜组织MMP-2、MMP-...     

补肾法与活血法治疗兔膝骨关节炎的病理形态学对比研究

通过观察纯补肾中药与活血中药对兔膝骨关节炎模型的软骨及滑膜的影响,以探讨补肾法与活血法的疗效与骨关节炎发病时间是否有关。以兔膝关节腔内注入木瓜蛋白酶造成骨关节炎模型,分别用补肾中药,活血中药灌胃治疗。造模６周及１０周后取材作光镜及透射电镜下观察。结果示６周后活血组的滑膜损伤程度较补肾组低（Ｐ〈０．０５）。而１０周后补肾组的软骨硫坏较活血组为轻（Ｐ〈０．０５）。由此可认为在骨关节炎发病初期活血中药治     

化痰中药对C57黑鼠膝骨关节炎滑膜中COMP表达的影响

目的:研究化痰中药对C57黑鼠膝骨关节炎滑膜中COMP基因表达的影响。方法:以7周龄C57黑鼠48只为模型,随机分为4组:空白组(K)、模型组(M)、化痰组(T)、芬必得组(F)。每组12只,雌雄各半。先进行4周跑步造模,再分别予生理盐水、化痰方(牛蒡子汤)、芬必得灌胃,在给药4周后取材,应用Trizol法抽提总RNA,RT-PCR技术半定量检测膝关节滑膜中COMP基因表达,采用天能GIS凝胶图像处理系统分析各组表达灰度值。结果:模型组与空白组相比,滑膜中COMP基因表达明显升高(P<0.01),两个治疗组与模型组比较,滑膜中COMP基因表达明显降低(P<0.05),化痰组与芬必得组比较,滑膜中COMP基因表达明显降低(P<0.01),两者有显著性差异。结论:化痰中药可以下调C57黑鼠膝骨关节炎滑膜中COMP基因的表达水平,可以延缓滑膜的增生和纤维化,减少滑膜分泌炎症介质和软骨降解酶,对骨关节炎有明显的防治作用,化痰中药组明显好于芬必得组。     

补肾活血方对Wnt/β-catenin信号通路介导的人滑膜细胞与正常软骨细胞共培养体系的调控作用

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎发病中的作用,观察补肾活血方对异常的滑膜-软骨微环境的调控作用,初步阐释补肾活血方治疗骨关节炎的分子作用机制。方法:构建β-catenin过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,Transwell小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞模拟滑膜软骨关节体系内环境;各时间点不同浓度药物干预共培养体系,Western bolt方法检测补肾活血方对滑膜细胞β-catenin蛋白表达的影响;ELISA方法检测补肾活血方对共培养体系中滑膜细胞、软骨细胞培养上清液基质金属蛋白酶-7(MMP-7),人Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅱ),软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达的影响。结果:Western blot检测发现β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞后滑膜细胞胞浆及胞核中β-catenin表达明显上调(P0.01),补肾活血方能够明显下调共培养滑膜细胞中β-catenin蛋白的表达(P0.01);同时,ELISA法检测发现补肾活血方能够明显下调滑膜细胞与软骨细胞培养上清液中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达(P0.01)。结论:β-catenin过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/β-catenin信号通路,Wnt/β-catenin信号通路激活后共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的水平明显上升;补肾活血方可以抑制滑膜细胞Wnt/β-catenin信号通路,下调共培养体系中MMP-7,CTX-Ⅱ,COMP的表达,减轻异常滑膜细胞对软骨细胞的损害,减缓软骨基质的降解,有利于骨关节炎的缓解和恢复。     

补肾活血中药治疗膝骨关节炎作用机制研究进展

膝骨关节炎的重要病机在于肾虚血瘀,临床多采用补肾活血中药治疗,可取得较好疗效。现有文献主要针对补肾活血单味药,以及中药复方,如包含补肾活血中药的经典方右归丸、独活寄生汤,或基于补肾活血思路自拟的经验方补肾活血方、补肾通络方等开展研究。补肾活血中药主要通过调控氧化应激反应、调节炎性细胞因子水平、调节NO水平、调控淋巴功能...     

补肾活血“对药”对兔膝骨关节炎模型基质金属蛋白酶-3及其组织抑制剂-1的影响

目的通过观察补肾活血各＂对药＂组分对兔膝骨关节炎模型软骨、滑膜基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响,筛选出对骨关节炎作用靶点明确的治疗药物。方法将48只兔随机分为空白对照组、模型组、补肾对药组、活血对药组、补肾活血对药组和补肾活血药物组,每组8只。除正常组外,余均以1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液关节腔注射造成日本大耳白兔膝骨关节炎模型。各药物组经相应药物治疗6周后,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法观察各组兔膝关节软骨和滑膜MMP-3、TIMP-1的mRNA表达情况,并进行统计学分析。结果软骨MMP-3检测结果,模型组显著高于其他各组（P〈0.01）,仅活血对药组与正常组存在差异（P〈0.01）;TIMP-1检测结果,补肾活血对药组显著高于模型组（P〈0.05）,补肾对药组、补肾活血药物组显著高于模型组（P〈0.01）;滑膜MMP-3检测结果,模型组显著高于其他各组（P〈0.01）,与补肾对药和活血对药组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;滑膜TIMP-1检测结果,空白对照组显著低于模型组和各给药组（P〈0.01）,补肾活血对药组显著高于模型组（P〈0.05）,补肾活血药物组显著高于模型组（P〈0.01）。结论各药物组均能使得软骨和滑膜中的MMP-3含量下降,补肾活血对药组和补肾活血药物组能使软骨和滑膜中TIMP-1含量升高。表明药物治疗能够更好地从分子水平维持MMP-3和TIMP-1比例的相对稳定,而补肾活血药物组比补肾活血对药组的效果更显著。     

补肾活血方对骨关节炎模型大鼠关节滑液IL-1β及关节软骨DDR2水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠骨关节炎模型IL-1β、盘状结构域受体2(DDR2)以及MMP-1的影响。方法:采用SD大鼠造模成功后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。进行血清IL-1β水平以及关节液IL-1β水平的检测。采用免疫组化方法检测DDR2的表达,采用RT-PCR方法检测MMP1的基因表达。结果:关节滑液的IL-1β水平中药组与西药组没有明显差异,而两者均低于空白对照组,差异有统计学意义(P0.01)。软骨及软骨下骨DDR2表达结果显示中药组与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。中药组关节滑膜MMP1表达明显减少。结论:补肾活血方具有抑制滑膜细胞分泌IL-1β的作用,同时可以在一定程度上抑制骨关节炎信号分子DDR2。     

补肾活血方干预小鼠膝骨关节炎软骨修复的机制

目的 观察补肾活血方干预对小鼠膝骨关节炎模型的影响,初步探讨其作用机制.方法 将C57BL/6雄性小鼠,随机分为假手术组,模型组,补肾活血方低、高剂量组.补肾活血方低、高剂量组分别给予相应剂量的补肾活血方灌胃,模型组、假手术组给予等体积的蒸馏水灌胃,干预8周后取材,采用HE染色及番红O-固绿染色观察膝关节组织形态学改变...     

补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用

目的：比较补肾、健脾、益气、活血法对衰老细胞周期基因表达的调控作用。方法：采用上述4种不同的含药血清对衰老的人胚肺二倍体成纤维细胞2Bs细胞株进行处理,通过细胞寿命实验、流式细胞仪、RT—PCR、Westemblot方法研究不同中药对衰老细胞周期及其相关基因(P16^INK4、Cyclin D1及PCNA)的mRNA转录和蛋白表达的影响。结果：补肾、益气中药对衰老细胞周期有一定的促进作用,并可下调衰老细胞增殖抑制基因P16和周期蛋白Cyclin D1的mRNA／蛋白表达;上调细胞周期促进增殖基因PCNAmRNA／蛋白的表达。而健脾、活血中药对细胞周期及其相关基因和蛋白表达的作用不明显。结论：补肾、益气方药对细胞周期有促进作用,其中的作用可能是通过促进P16途径的基因表达来实现。     

补肾法与活血法对SD大鼠膝骨性关节炎滑膜IL-1β、TNF-α及软骨MMP-13、ADAMTS-5的影响

目的：探讨补肾活血法、活血法、补肾法、祛风法对SD大鼠膝骨性关节炎IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5的作用及其机制。方法：取SD大鼠180只,随机分为活血组、祛风组、补肾组、补肾活血组、预防组及模型组,每组各30只,以4%木瓜蛋白酶行膝关节注射制作大鼠膝骨性关节炎模型。模型制作成功后连续给药,预防组在模型制作同时予以活血药。治疗以1个月为1疗程,6组大鼠分别于模型制作成功给药后30、60、90d分批处死。处死后取大鼠膝关节滑膜及软骨,分别运用免疫组化及反转录-多聚酶链反应（RT-PCR）测定SD大鼠膝关节滑膜IL-1β、TNF-α及膝关节软骨组织中MMP-13、ADAMTS-5mRNA含量的表达。结果：模型组与祛风组IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5mRNA含量表达显著高于其他各组,且随着治疗进行降低不显著。早期,预防组比其他组降低显著（P〈0.05）;活血组与补肾活血组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但两者比祛风组、补肾组及模型组降低显著（P〈0.05）;晚期补肾活血组、补肾组与其他组比较降低显著（P〈0.05）,且补肾活血组与补肾组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：补肾法与活血法对SD大鼠膝骨性关节炎IL-1β、TNF-α及MMP-13、ADAMTS-5mRNA的影响在不同时期具有不同的作用,早期时活血法作用较补肾法显著,且预防性给予活血药治疗效果更佳;晚期补肾法较活血法显著,同时补肾活血法治疗效果最为明显。     

滋阴补肾对绝经后膝骨关节炎雌激素和C-反应蛋白表达的影响

目的：探讨滋阴补肾法对绝经后膝骨关节炎雌二醇（E2）和c-反应蛋白（CRP）表达的影响。方法：2012年2月-2013年3月在我院门诊就诊的86例绝经后膝骨关节炎患者随机分为滋阴补肾组（A组）、盐酸氨基葡萄糖组（B组）各43例。检测两组治疗前后雌二醇（E2）和c-反应蛋白（CRP）水平。结果：A组治疗后2、6周雌二醇（E2）和C-反应蛋白（CRP）表达改善明显优于B组（P〈0．05）;A组在治疗后2、6周其膝关节评分和视觉模拟评分明显优于B组（P〈0．05）。结论：滋阴补肾法能有效改善绝经后膝骨关节的症状,可能通过调节雌二醇（E2）和C-反应蛋白（CRP）水平,实现改善关节软骨功能和减轻滑膜炎症的目的。     

补肾活血方对高糖高脂诱导损伤的小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激和RAGE/LRP-1蛋白表达的影响

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激BEND3细胞,用CCK-8法筛选合适的补肾方(BS)、活血方(HX)、补肾活血方(BSHX)的最佳用药浓度;应用免疫蛋白印迹法检测BS、HX、BSHX最佳用药浓度对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)、核因子κB(NF-κB)抗体以及脑内与转运β淀粉样蛋白相关的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)的表达情况。结果:CCK-8检测细胞活力,最终选定补肾方100mg/L、活血方20mg/L和补肾活血方120mg/L;与正常对照组比较,高糖高脂刺激BEND3细胞后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE表达显著增加(P<0.01),LRP-1表达下降(P<0.01);药物干预后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE蛋白下调,BSHX组LRP-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01);且以BSHX组最为明显。结论:补肾方、活血方、补肾活血方对高糖高脂诱导的BEND3细胞损伤均有改善作用,但以补肾活血方疗效最为突出,且对高糖高脂导致的内质网应激和转运β淀粉样蛋白受体的蛋白表达具有调节作用。     

补肾活血化瘀方治疗轻型膝关节骨性关节炎（肝肾亏虚型）临床研究

目的:观察补肾活血化瘀方治疗轻型膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型)的临床疗效。方法:选取100例膝关节骨性关节炎患者,按区组随机法分为治疗组及对照组,每组50例。对照组给予硫酸氨基葡萄糖口服,治疗组在此基础上加服补肾活血化瘀方,4周为1个疗程,治疗2个疗程。对比治疗后2组的临床疗效、膝骨关节炎严重性指数(ISOA)评分、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)评分及视觉模拟评分法(VAS)评分情况。结果:与治疗前比较,治疗后2组ISOA评分、WOMAC评分、VAS评分均下降(P<0.05),且治疗组低于对照组(P<0.05)。治疗组总有效率为98%,高于对照组的88%(P<0.05)。结论:补肾活血化瘀方治疗轻型膝关节骨性关节炎(肝肾亏虚型)临床疗效显著,且可以显著降低膝关节ISOA评分、WOMAC评分、VAS评分,从而改善膝关节骨性关节炎症状,进一步提高临床疗效。     

补肾强筋胶囊含药血清对骨关节炎滑膜细胞、软骨细胞PGE2、NGF基因表达的影响

目的:观察补肾强筋胶囊含药血清对骨关节炎滑膜细胞、软骨细胞PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达的影响。方法:选取拟行全膝关节置换手术的膝关节骨性关节炎,术中取病变滑膜、软骨进行原代细胞培养,用IL-1β刺激复制骨关节炎细胞模型,用补肾强筋胶囊含药血清干预后,RT-qPCR检测PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达。结果:滑膜细胞RT-qPCR检测,与OA组比较,正常组、含药血清组PGE2、NGF、COX-2、MMP-13基因表达均有统计学差异(P<0.05);与正常组比较,含药血清组PGE2、NGF、COX-2、MMP-13基因表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。软骨细胞RT-qPCR检测,与OA组比较,含药血清组PGE2、COX-2、MMP-13基因表达比较差异均有统计学意义(P<0.05);与正常组比较,含药血清组PGE2、COX-2、MMP-13基因表达比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3组间NGF基因表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:补肾强筋胶囊含药血清治疗骨关节炎能下调滑膜细胞PGE2、NGF、COX-2、MMP13基因表达,下调软骨细胞PGE2、COX-2、MMP13基因表达,但对软骨细胞NGF基因表达无明显调节作用。     

中药萃取超导透入治疗兔膝骨关节炎疗效的实验研究

目的:研究中药组方补肾通络方萃取物经超导透入治疗膝骨性关节炎的疗效,探讨其防治骨性关节炎的可行性。方法:24只新西兰大白兔随机分为模型组(8只)、中药组(8只)、治疗组(8只)。右膝关节内注射木瓜蛋白酶建立兔膝骨性关节炎模型,左膝为正常对照组。成模后中药组患膝外涂中药组方萃取物,治疗组将中药萃取物经超导透入患膝,8周后镜下观察各组动物模型关节软骨、滑膜组织形态学变化及硝酸还原酶法测NO浓度。结果:中药组滑膜及软骨组织形态学改变略轻于模型组,治疗组关节改变较模型组明显减轻,且滑膜组织NO浓度明显降低(P<0.01);结论中药萃取物超导透入较传统外敷用药更能够减轻兔膝骨性关节炎的软骨退行性变和滑膜炎症。     

补肾活血方对膝骨性关节炎的临床观察

目的:观察补肾活血方治疗膝骨性关节炎的临床疗效。方法:将符合纳入标准的71例患者,采用随机对照法,分为治疗组35例和对照组36例。治疗组给予口服补肾活血方,对照组给予口服西乐葆,两组均以12周为观察期,对两组患者治疗前后肿胀、疼痛、Lysholms评分、临床主要症状、中医伴随症状、安全性进行评价。结果:治疗组总有效率97.14%,对照组总有效率94.44%,两组总有效率无明显性差异(P>0.05);与治疗前比较,治疗组和对照组治疗前后各症状、功能积分之间(临床症状、肿胀程度、疼痛程度、膝关节功能)均有显著性差异(P<0.001)。组间比较,两组治疗膝骨性关节炎在临床主要症状表现以及早期改善膝关节功能方面具有统计学意义(P<0.05),在中医伴随症状中,两组在缓解腰膝酸软、改善耳鸣等方面具有统计学意义(P<0.05),且治疗组优于对照组;两组在治疗膝骨关节炎疼痛程度、肿胀程度、膝关节功能方面效果相当(P>0.05)。结论:补肾活血方能明显改善膝骨性关节炎患者的症状及体征,在临床主要症状表现、早期改善膝关节功能以及中医伴随症状(如腰膝酸软、耳鸣等)方面,疗效优于西乐葆。     

补肾活血汤联合玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎60例临床研究

目的:观察补肾活血汤联合玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎(KOA)的疗效及对血清中Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)和Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)水平的影响。方法:将120例肾虚血瘀型KOA患者采用随机数字表法分为对照组和观察组各60例。2组均采用玻璃酸钠关节腔内注射,并同期进行功能锻炼。观察组加用补肾活血汤内服。2组均连续治疗4周。治疗前后采用西安大略和麦马斯特大学(WOMAC)骨关节炎指数可视化量表评价膝关节功能,以疼痛视觉模拟评分法(VAS)评定膝关节疼痛程度。检测2组治疗前后的血清CTX-Ⅰ和CTX-Ⅱ水平。结果:治疗后,观察组临床疗效优于对照组,差异有统计学意义(P <0.05)。2组WOMAC量表疼痛、僵硬、关节功能评分和总分,VAS评分均较治疗前下降(P <0.01),观察组各项评分低于对照组(P <0.01)。2组血清CTX-Ⅰ和CTX-Ⅱ水平均较治疗前下降(P <0.01),观察组血清CTX-Ⅰ和CTX-Ⅱ水平均低于对照组(P <0.01)。结论:补肾活血汤联合关节腔内注射玻璃酸钠能减轻KOA患者膝关节的疼痛程度,改善膝关节功能,临床疗效显著,调节患者的骨代谢指标(CTX-Ⅰ和CTX-Ⅱ)是其可能作用途径之一。     

补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白质因子的影响

目的:探讨补肾活血祛痰方对高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)的影响。方法:选择SD雌性大鼠60只,采用脱氢表雄酮注射建立高雄激素PCOS模型,并随机分为对照组(30只)和中药组(30只),中药组给予补肾活血祛痰方灌胃治疗,对照组给予等量的0.9%氯化钠溶液灌胃,观察治疗后两组大鼠卵巢组织形态学情况,比较治疗后两组大鼠血清激素水平情况; Western blot法检测治疗后两组大鼠StAR蛋白的表达情况。结果:治疗后,卵巢组织形态学观察结果显示,对照组仍存在多个囊泡,其囊泡即空卵泡,中药组卵巢组织形态明显改善; 与对照组相比,卵泡及黄体数较多(均P<0.05); 治疗后,中药组血清促黄体生成素(LH)和雄激素(T)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。治疗22 d后,中药组血清胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平比对照组明显降低(均P<0.05)。Western blot结果显示,治疗后中药组StAR蛋白表达明显比对照组降低(P<0.05)。 结论:补肾活血祛痰方可改善高雄激素PCOS大鼠卵巢功能,促进激素水平趋于正常,并可降低卵泡膜细胞的细胞膜附近StAR蛋白质,改善大鼠的生殖功能。