HPLC法和氨基酸分析仪(AAA)法测定肠外营养注射液(25)中18种氨基酸的含量的比较

目的:RP-HPLC法和氨基酸分析仪(amino acid analyzer,AAA)法测定氨基酸含量的比较。方法:采用高效液相色谱仪和氨基酸分析仪测定肠外营养注射液(25)中18种氨基酸的含量。采用C18柱和异硫氰酸苯酯进行柱前衍生化,加入二硫代二丙酸作为保护剂,同时测定半胱氨酸;AAA法采用离子交换色谱柱和茚三酮柱后衍生化进行,不需加入保护剂,直接测定半胱氨酸。结果:RP-HPLC法和AAA法的重复性分别小于1.1%和3.1%,2种测定方法的相对偏差在0.19%～8.2%之间。结论:AAA法更适于肠外营养注射液(25)种18中氨基酸的测定。     

13种氨基酸和牛磺酸的柱前衍生化HPLC测定

建立了OPA—FMOC柱前衍生化HPLC法同时测定复方氨基酸注射液中13种氨基酸和牛磺酸的含量。采用C18柱，梯度洗脱，自动在线衍生，检测波长338／262nm。结果表明13种氨基酸和牛磺酸均线性关系良好（r〉0．9992），各组分的平均回收率为99．2％～101．5％，RSD为0．11％～0．92％（n=9）。     

柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量比较

摘 要 目的：比较柱前衍生高效液相色谱法（HPLC法）和柱后衍生阳离子交换色谱法（AARO法）测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量的差异。方法: HPLC法采用 C₁₈柱和2,4 二硝基氯苯（DNCB）进行柱前衍生化,加入0.1 mol·L^-1硼砂缓冲液（pH=9.1）,进行测定;AARO法采用强酸性阳离子交换色谱柱和柱后衍生化,直接测定。结果: 柱前衍生高效液相色谱法和柱后衍生阳离子交换色谱法的重复性考察,AARO法各组分RSD为0.91%～1.84%,HPLC法RSD为1.04%～1.87%。结论:柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液种 18种氨基酸,均可采用,两种方法对测定上述各氨基酸结果一致性较好, 但柱前衍生HPLC法可能易造成衍生不彻底和衍生物不稳定。     

复方α-酮酸片中氨基酸的柱前衍生化-HPLC法测定

采用柱前衍生化法同时测定复方α酮酸片中——L-醋赖氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸、L-酪氨酸五种氨基酸的含量。采用ODS柱，以流动相乙腈-水（1：1）和0．14mol／L磷酸盐缓冲液（pH8．2）梯度洗脱，检测波长360nm。衍生化试剂为2，4-二硝基氯苯。五种氨基酸的平均回收率为99．6％～100．9％，RSD小于1．1％。     

HPLC法测定阿胶中6种氨基酸的含量

目的：通过柱前衍生化,高效液相色谱（HPLC）法测定阿胶中6种氨基酸的含量。方法色谱柱为Hypersil C18（4.6 mm＆#215;250 mm,5μm）;流动相A：乙腈-0.1mol/L乙酸钠（7：93）,用乙酸调节pH为6.5,流动相B：乙腈-水（4：1）,梯度洗脱;柱温为42℃;流速为1.0 ml/min;检测波长254 nm;异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化。结果30 min内6种氨基酸分离完全,峰面积与浓度的线性关系良好, r=0.999。加样回收率97.33%~100.17%, RSD〈3。结论 HPLC法测定阿胶中6种氨基酸的含量方法操作流程简单、快速、准确,可用于该制剂的质量控制和检验。     

HPLC测定转移因子注射液中游离氨基酸含量探讨

目的探讨转移因子注射液中游离氨基酸含量的测定方法。方法采用高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定,色谱柱为Diamonsil C18（250.0 mm×4.6 mm,5μm）;检测波长：360 nm;进样量：20μL;柱温：（40±1）℃,流速：1.0mL/min;梯度洗脱;流动相：A液为0.1%三氟乙酸,B液为0.1%三氟乙酸乙腈,用0.45μm滤膜过滤并脱气,2,4-二硝基氟苯柱前衍生,梯度洗脱。结果游离氨基酸面积线性关系良好,r^2=0.997 7,相对标准偏差为0.6%。结论 HPLC法测定转移因子注射液中游离氨基酸含量简便、快捷、准确,值得推广应用。     

虫草头孢菌粉中16种氨基酸的含量测定

摘要目的建立测定虫草头孢菌粉中16种氨基酸含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法。方法样品以6 mol·L－1盐酸于110 ℃水解24 h,内标为正亮氨酸,以异硫氰酸苯酯（PITC）为衍生化试剂,衍生后进行HPLC分析。采用Agela Venusil XBP C18（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,柱温为40 ℃;流动相A为0.1 mol·L－1醋酸 醋酸钠缓冲液（pH 6.5） 乙腈（95：5）,流动相B为乙腈 水（4：1）,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min－1;检测波长为254 nm。结果16种氨基酸浓度在1.81～7.50 μg·mL－1范围内呈良好的线性关系（r＝0.998 3～1.000 0）;平均回收率除组氨酸、甲硫氨酸分别为92.9%和90.6%外,其余14种氨基酸在95.3%～104.1%之间;RSD除组氨酸、甲硫氨酸分别为2.8%和3.3%外,其余均＜2.0%。结论该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于虫草头孢菌粉中氨基酸的检测。     

HPLC法测定L-肌肽中的游离氨基酸的含量

目的采用柱前衍生高效液相色谱法对L-肌肽原料药中的游离氨基酸进行测定。方法采用异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)柱前衍生高效液相色谱法,使L-肌肽中游离的β-丙氨酸和L-组氨酸衍生物达到完全分离,并测定其含量。色谱柱为DiamonsilTM C18(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol.L-1醋酸钠溶液(体积比为13∶87),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为254 nm,柱温为35℃。结果HPLC法测定β-丙氨酸和L-组氨酸的线性范围分别为2.01～20.10 mg.L-1(r=0.999 7)和2.00～20.00 mg.L-1(r=0.999 3);平均回收率分别为110.6%和98.2%。结论HPLC法无需专业的氨基酸分析仪,可用于L-肌肽中游离氨基酸的检查。     

反相高效液相色谱—紫外吸收法测定灵芝中氨基酸的含量

采用本实验室自行制备的反相高效液相色谱柱，以醋酸钠缓冲液和乙腈－水线性梯度洗脱，在室温下对常见的１６种１－氟－２，４－二硝基苯（ＦＤＮＢ）衍生长氨基酸进行了有效的分离，用紫外吸收检测器（３６０ｎｍ）和外标定量法对灵芝蛋白中各种氨基酸的含量进行了测定。结果表明：ＦＤＮＢ衍生化氨基酸在一周内是稳定的，回收率在９６％～１０２％之间，相对标准偏差小于４％，灵芝中含有人体必需的赖氨酸、苯丙氨酸和组氨酸等组分     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC法测定氨肽素的氨基酸含量

目的用二硝基氟苯 (DNFB)柱前衍生化RP HPLC法测定氨肽素中氨基酸的含量。方法采用二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生 ,ODS(KromasilC18,4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱分离 ,以乙腈 0 0 5mol·L-1乙酸钠水溶液为流动相 ,梯度洗脱 ,3 60nm检测 ,在 3 0min内 ,测定氨肽素的氨基酸组成与含量。结果线性范围 (总氨基酸 1 4种 )为 0 1 5～ 0 75 g·L-1;回收率为 94 8%～ 1 0 3 5 % ;RSD为0 2 6%～ 1 47% (n =5 )。结论DNFB柱前衍生化RP HPLC法可有效控制产品质量     

血液中氨基酸的RP-HPLC测定

目的 建立HPLC法测定人体血液中氨基酸浓度。方法 柱前邻苯二甲醛衍生化应生成荧光衍生物,以4－氨基丁酸为内标。反相高效液相色谱法测定。结果 在本实验条件下,正常人血浆中10种氨基酸（Ala、Arg、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Ser、Val）均能检出。且干扰因素少,基线稳定,具有较高的灵敏度。结论 本法无需特殊反应装置,具有高效,简便,快速,价格低廉的优点。     

柱前衍生化RP-HPLC测定芜菁子中的12种游离氨基酸

目的采用柱前衍生化PR-HPLC测定芜菁子中的游离氨基酸。探讨芜菁子的药用价值,挖掘新疆的芜菁子资源。方法采用水中超声提取异硫氰酸苯酯柱前衍生化后,用HPLC法测定芜菁子中的氨基酸。结果芜菁子中含有苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、丙氨酸、胱氨酸、色氨酸、异亮氨酸等12种游离氨基酸,其中人体必须氨基酸7种,约占总游离氨基酸的65.7%,12种氨基酸在45 min内可很好地分离,平均回收率为92.7%~98.2%。结论所建方法不需专门的氨基酸分析仪,操作简便、灵敏度高、准确可靠。芜菁子中氨基酸的种类齐全,含量丰富,具开发价值。     

柱前衍生RP-HPLC法测定桑叶中16种游离氨基酸的含量

目的:建立柱前衍生法测定桑叶中游离氨基酸的含量。方法:以水超声提取桑叶中的氨基酸,以异硫氰酸苯酯柱前衍生,采用反相高效液相色谱法测定氨基酸的含量。结果:桑叶中含有苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、天门冬氨酸、γ-氨基丁酸、丙氨酸、组氨酸、胱氨酸、色氨酸、异亮氨酸等16种游离氨基酸;其中人体必需氨基酸有7种,人体半必需氨基酸有1种,含量占氨基酸总量的20%左右。结论:本法不需要专门的氨基酸分析仪,操作简便、灵敏度高,结果准确、可靠。桑叶中氨基酸的种类齐全、含量丰富,具有很高的开发利用价值。     

柱前衍生高效液相色谱法测定注射用骨肽中15种氨基酸含量

目的 建立测定注射用骨肽中15种氨基酸含量的柱前衍生高效液相色谱法.方法 色谱柱为Zorbax Eclipse AAA柱(150 mm×4.6 mm,5μm),衍生剂为邻苯二甲醛(自动衍生化进样程序),流动相A为40 mmol/L磷酸二氢钠溶液(pH 7.8),流动相B为乙腈-甲醇-水(45:45:10,V/V/V),...     

柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中游离氨基酸和水解后总氨基酸的方法。方法以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,采用KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,140 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 5.10)和57%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,同时测定胎盘多肽注射液中21种游离氨基酸和水解后氨基酸含量。结果该方法重现性好,精密度高,各氨基酸浓度在0.005～0.50 mmol/L范围内线性关系良好;各氨基酸检出限≤1.57 ng。结论建立的AQC柱前衍生-高效液相色谱法可用于检测胎盘多肽注射液中氨基酸的含量,测定的结果为胎盘多肽注射液的质量研究和评价提供了依据。     

AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为2...     

水解蛋白注射液中游离氨基酸含量的测定及分析

目的:建立二硝基氟苯(DNFB)柱前衍生化法测定水解蛋白注射液中游离氨基酸含量,并对水解蛋白注射液质量进行分析。方法:采用DNFB为衍生化试剂进行衍生,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05 mol.L-1醋酸钠溶液(含1%N,N-二甲基甲酰胺,调pH为6.4)与50%乙腈水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长360nm。结果:各氨基酸的线性关系良好;平均回收率(n=6)为98.7%～100.8%,RSD为0.46%～3.3%。结论:本研究建立了水解蛋白注射液游离氨基酸测定方法,为质量标准中游离氨基酸含量测定限度的制定提供了依据。     

建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量

目的通过优化色谱条件建立UPLC法测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量。方法以9种氨基酸对照为外标物,异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂,采用ACQUITY UPLCBEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)柱,流动相A为0.1 mol/L的醋酸钠溶液(用冰醋酸调整pH至6.50)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),检测波长254 nm,流速为0.45 mL/min,柱温36℃。结果复方氨基酸胶囊(9-5)中9种氨基酸出峰时间与对照品出峰时间一致,其他物质无干扰;仪器精密度RSD为0.5%~1.2%,中间精密度RSD为1.3%~1.9%;各氨基酸的溶液浓度与其峰面积线性关系良好(r≥0.999),溶液稳定性RSD为0.6%~1.8%,各氨基酸的平均回收率在95.0%~105.0%之间。含量测定方法比对实验中UPLC法与HPLC法分析结果无明显差异,分析速度明显提高。结论建立的UPLC法高效,快速,灵敏,准确,可用于测定复方氨基酸胶囊(9-5)中氨基酸的含量。     

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量

目的建立柱前衍生-反相高效液相色谱法同时测定阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量。方法该方法以异硫氰酸苯酯为衍生剂,以Phenomenex Gemini C 18110(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱;以乙腈-水(4∶1)为流动相A,以乙腈-0.1 mol·L^-1乙酸钠溶液(用乙酸调节pH值为6.5)(7∶93)为流动相B,进行梯度洗脱;柱温为43℃;流速为1 mL·min-1;检测波长为254 nm。结果L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和L-脯氨酸分别在0.12~0.72,0.21~1.26,0.16~0.96和0.11~0.66μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r值均为0.9999;平均回收率分别为99.47%,98.51%,98.91%和98.84%;RSD值分别为1.6%,1.4%,1.6%和1.4%(n=9)。结论该方法快速灵敏,重复性好,可作为阿胶补血口服液中主要氨基酸的含量测定方法。