二氢杨梅素诱导凋亡抗肿瘤作用

目的以He La细胞为研究对象,研究二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)的诱导凋亡作用,进一步研究和验证DMY诱导肿瘤凋亡的作用和机制,为探索研发治疗宫颈癌新药提供思路的同时,对DMY在抗肿瘤方面的应用提供进一步的资料。方法倒置显微镜观察给药后细胞形态的变化,MTT实验研究DMY对于He La细胞的抗肿瘤作用,流式细胞术研究DMY对He La细胞的诱导凋亡作用,Western blotting检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制。结果 DMY浓度越大,对He La细胞的抑制作用越明显,48 h的IC50约125μg/ml;流式细胞术显示在DMY为140μg/m L时He La细胞凋亡明显;Western blotting结果显示DMY可诱导He La细胞中Bax蛋白表达增加,同时Bcl-2蛋白减少。结论 DMY可以通过诱导He La细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。     

芹菜素诱导膀胱癌5637细胞凋亡的机制研究

目的:研究芹菜素诱导人膀胱癌5637细胞凋亡的作用机制。方法:采用25~100μmol/L芹菜素处理膀胱癌5637细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用Western blotting检测细胞凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和PARP蛋白的表达水平。结果:芹菜素处理使细胞Bcl-2蛋白表达降低且呈浓度依赖性,并使Bax的表达增加和导致PARP蛋白发生切割且呈浓度依赖性。结论:芹菜素能够抑制人膀胱癌5637细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2并上调Bax表达,导致Bcl-2/Bax比值下降,PARP活化有关。     

高良姜素诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的研究高良姜素促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡作用。方法采用CCK-8法检测高良姜素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3和cleaved-PARP等相关蛋白的表达水平。结果高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,24 h和48 h的IC50分别为43.71μmol·L~(-1)和20.68μmol·L~(-1);高良姜素能够诱导MCF-7细胞凋亡,呈浓度依赖关系;高良姜素能上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,通过线粒体途径调节凋亡相关蛋白的表达水平诱导MCF-7细胞凋亡。     

羟基积雪草苷对人宫颈癌细胞C-33A/CaSki细胞凋亡的影响

目的:探索羟基积雪草苷对人宫颈癌细胞C-33A/CaSki细胞凋亡影响。方法:不同浓度的羟基积雪草苷干预C-33A/CaSki细胞,MTT法检测药物对细胞的增殖抑制作用。TUNEL技术检测细胞的凋亡率。ELISA法测定细胞中Bcl-2、Bclxl及Bax的表达变化。QRT-PCR检测Bcl-2、Bcl-xl及Bax的mRNA表达改变。结果:Madecassoside对C-33A/CaSki细胞具有增殖抑制作用,并呈现浓度时间依赖性。不同浓度的Madecassosid能引起细胞凋亡率增加。ELISA与QRT-PCR结果显示,Madecassoside能下调抑制凋亡的因子Bcl-2、Bcl-xl的表达,上调能促进凋亡的因子Bax的表达,在mRNA上呈现相同变化。结论:Madecassoside可以通过上调促进凋亡的因子的表达,下调对凋亡具有抑制作用的因子表达从而发挥抗肿瘤作用。     

甘草酸抑制UVB诱导HaCaT细胞凋亡的机制研究

目的:研究甘草酸抑制中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)凋亡的机制。方法:以不同浓度的甘草酸作用于人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞),噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用30 mJ/cm~2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)法检测Bax、Bcl-2 m RNA表达水平变化;Western Blot法检测各组细胞上清中Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01);细胞总凋亡率显著显著升高(P0.01);Bax m RNA表达水平显著升高,Bcl-2m RNA表达水平显著降低(P0.01);Bax蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01)。与UVB组比较,1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01);细胞总凋亡率显著降低(P0.01);Bax m RNA表达水平显著降低,Bcl-2 m RNA表达水平显著升高(P0.01,P0.05);Bax蛋白表达量显著降低,Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.01,P0.05)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其下调促凋亡基因Bax m RNA和蛋白的表达,上调抑凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白的表达有关。     

苦参碱对SiHa细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究苦参碱对宫颈癌Si Ha细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法:苦参碱作用于Si Ha细胞,倒置显微镜下观察其形态变化;MTT法检测苦参碱对Si Ha细胞增殖的影响,并筛选苦参碱作用的适当浓度及时间。Western blot法检测所筛选各浓度苦参碱对Si Ha细胞凋亡相关蛋白bcl-2与bax表达的影响。结果:同空白对照组相比,苦参碱作用后倒置显微镜下见Si Ha细胞出现皱缩、变圆,细胞质浓缩、水泡化等凋亡形态学改变。苦参碱能够抑制Si Ha细胞的增殖,且在一定时间、剂量范围内,呈时间-剂量依赖性。苦参碱能降低bcl-2蛋白表达量,增加bax蛋白表达量,差异具有显著统计学意义(P0.05)。结论:苦参碱对宫颈癌Si Ha细胞增殖具有抑制作用,可诱导其细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达从而降低Bcl-2/Bax比率可能是其机制之一。     

虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨虎眼万年青总皂苷(Ornithogalum caudatum AIT saponins)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡的机制,为开发应用于治疗乳腺癌的药物提供实验依据。方法用MTT比色法检测虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax与Bad表达的变化。结果虎眼万年青总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;能诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性;能下调Bcl-2蛋白的表达,升高Bax/Bcl-2的比值,其高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01),能上调Bad蛋白的表达,其低、中、高剂量组具有显著统计学差异(P<0.01)。结论虎眼万年青总皂苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与升高Bax/Bcl-2的比值,上调Bad蛋白的表达相关。     

天然脑活素对Aβ1-40诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用研究

目的：探讨天然脑活素对Aβ1-40诱导的阿尔茨海默病（AD）细胞模型PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法：采用Aβ1-40处理PC12细胞复制AD细胞模型,不同剂量的天然脑活素孵育细胞,镜下观察细胞形态学变化,免疫细胞化学染色法观察细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax,Caspase-3）的表达水平。结果：天然脑活素处理组细胞突起生长明显,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达较模型组显著上调,同时细胞凋亡促进蛋白Bax及介导细胞凋亡的蛋白Caspase-3的表达明显下调（P〈0.05或P〈0.01）。结论：天然脑活素可通过调节细胞凋亡相关蛋白的表达水平,对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显拮抗作用。     

应用基因芯片技术研究异紫堇碱处理后的SiHa细胞差异基因表达谱

目的:应用基因芯片技术研究异紫堇碱处理后的Si Ha细胞差异基因表达谱改变,以寻找异紫堇碱抑制宫颈癌Si Ha细胞HPV基因表达的分子机理。方法:抽提经异紫堇碱处理后不同时段的Si Ha细胞和未经异紫堇碱处理的Si Ha细胞中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机扫描分析未经异紫堇碱处理的Si Ha细胞和处理后的Si Ha细胞基因表达谱的差异情况。结果:在每组60000多个候选基因中,各筛选出200多条差异表达倍数在2倍以上的基因,在异紫堇碱处理后12小时的样本中下调基因206条,上调基因70条,未知基因217条;24小时后下调基因95条,上调基因137条,未知基因166条;48小时后下调基因150条,上调基因101条,未知基因159条。结论:基于基因芯片技术的基因表达谱分析能够高通量筛选与异紫堇碱抑制宫颈癌Si Ha细胞HPV基因表达的分子机理相关的基因。     

刺五加多糖下调Survivin蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡

目的观察刺五加多糖对人宫颈癌细胞株He La的增殖、凋亡作用,探索其诱导细胞凋亡的可能机制。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测刺五加多糖对He La细胞增殖活力的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测刺五加多糖对细胞凋亡的诱导作用,免疫组化SP法检测凋亡细胞中存活素(Survivin)蛋白表达的变化。结果刺五加多糖以剂量和时间依赖的方式抑制He La细胞增殖;诱导细胞凋亡;并且Survivin蛋白在凋亡的He La细胞中表达量降低。结论刺五加多糖通过下调Survivin蛋白表达,诱导He La细胞凋亡。     

X射线诱导人滋养细胞周期及凋亡改变的研究

目的:观察X射线对人滋养细胞JEG-3肿瘤细胞株的生物学特性的影响及作用。方法:体外培养人滋养细胞肿瘤细胞系(JEG-3细胞),采用不同剂量的X射线(2Gy、6Gy、8Gy)照射JEG-3细胞,MTT法测定照后不同时间(12、24、36h)的细胞增殖能力;流式细胞术检测6Gy照后不同时间(12、24、36h)的细胞凋亡的变化;western-blot检测P53、Bcl-2蛋白的表达量的变化。结果:6GyX射线照后36h细胞增殖活性下降;8Gy照后对细胞产生了明显的毒性,照后12、24、36h时细胞增殖均明显下降(P0.05)。6Gy照后36h时凋亡率显著增加(P0.05)。6Gy照后36h,凋亡相关蛋白P53的蛋白表达量显著增加、Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:6GyX射线照射可抑制人滋养细胞的增殖,提高细胞凋亡率;同时诱导P53蛋白表达增加和Bcl-2表达降低。     

益髓解毒方对骨髓增生异常综合征骨髓细胞治疗反应性的体外研究

目的 :探讨益髓解毒方治疗骨髓增生异常综合征 -难治性贫血 ( MDS-RA)的作用机理。方法 :通过体外培养 ,观察 MDS-RA患者骨髓单个核细胞经益髓解毒方不同剂量作用后 ,细胞增殖、凋亡的变化。结果 :MDS-RA骨髓单个核细胞在培养的第 4天细胞凋亡明显增加 ,高凋亡发生在细胞分裂的 S期。益髓解毒方大剂量组对细胞凋亡有直接的抑制作用 ,经其处理过的骨髓单个核细胞体外培养 CFU -GM集落数增加。结论 :益髓解毒方有明显促进造血祖细胞增殖、抑制过度凋亡的作用。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

大黄素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大黄素对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western-Blot)检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:在5～20mg/L浓度范围内,大黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用呈时间剂量依赖性20mg/L作用72h后,抑制率分别达到(19.8±2.7)%,(58.8±4.4)%和(73.8±5.7)%;流式细胞术检测发现:大黄素5、10和20mg/L作用24h后,细胞凋亡率分别为(15.5±3.4)%、(56.0±3.4)%和(71.1±5.0)%,与对照组(1.01±0.06)%有显著性差异(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带。大黄素作用24h后,Bcl-2蛋白的表达水平随药物波度增加呈逐渐下降趋势。结论:大黄素能够抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的观察康莱特注射液对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞,分为对照组和康莱特不同浓度组(10、20、40μL/mL)。RPMI-1640培养基培养24 h后药物处理,采用MTT法检测康莱特注射液对MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Hochest荧光染色法检测细胞核变化,ELISA及Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果康莱特注射液作用12、24、48 h对MCF-7细胞增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01);与对照组比较,康莱特注射液作用48 h后G1/G0、G2/M期细胞比例增加(P0.001,P0.01),S期细胞比例下降(P0.01),细胞凋亡率升高(P0.05,P0.001),Bcl-2蛋白表达明显降低、Bax蛋白表达明显升高(P0.01,P0.001)。结论康莱特注射液能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制与降低Bcl-2蛋白表达和增加Bax蛋白活性有关。     

力达霉素抑制HL-60细胞增殖和诱导分化作用

 目的 研究力达霉素对人急性髓性白血病细胞(HL-60) 增殖和诱导分化的作用。方法 用不同浓度的力达霉素处理HL-60 细胞,通过MTT法检测力达霉素对细胞的增殖抑制作用;利用瑞氏-姬姆萨染色法观察力达霉素对细胞形态的影响;通过硝基蓝四氮(NBT)还原比色法测定力达霉素对HL-60细胞的诱导分化作用。结果 不同浓度力达霉素处理细胞后,HL-60 细胞的增殖能力明显受到抑制。当力达霉素的作用浓度超过100 μmol·L-1时,抑制率可高达99%,并且抑制作用呈现时间依赖性和剂量依赖性的特点。Wright-Giemsa染色结果显示,力达霉素作用HL-60 细胞后,细胞在形态学方面发生很大变化。同时,力达霉素能够提高细胞的NBT还原能力。1 nmol·L-1和0.1 nmol·L-1浓度的力达霉素可以使HL-60细胞的NBT还原率分别提高到39.2% 和54.5 % ;0.01 nmol·L-1和0.001 nmol·L-1浓度的力达霉素则使阳性细胞的百分率增加到78.6%和89.9% ,与对照组相比,差异具有显著性（P<0.01）。结论 力达霉素具有较强的抑制HL-60细胞增殖的能力,同时,低浓度力达霉素能使HL-60细胞形态发生改变,NBT还原阳性率升高,诱导细胞发生分化,其作用机制有待于进一步深入研究。     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。     

蝎毒及其提取物免疫调节作用的研究进展

蝎毒及其提取物具有抗肿瘤作用近年来得到广泛证实,蝎毒提取物的蛋白成分对肿瘤增殖及转移过程中免疫功能调节具有重要意义。蝎毒及其提取物可活化或提高巨噬细胞、NK细胞、淋巴细胞及树突状细胞功能,并能与放化疗联合产生良好的协同抗肿瘤效应。文章就蝎毒及其提取物对免疫系统的影响及可能的作用机制进行系统阐述。     

加味四逆散含药血清对HSC凋亡影响的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用流式细胞仪和TUNEL法检测加味四逆散对HSC-T6凋亡的影响。结果:(1)流式细胞仪分析结果显示:加味四逆散各浓度组、复方鳖甲软肝片组与HSC作用12h、24h、48h后,细胞凋亡与空白对照组比较均有差异(P<0.05);与鳖甲软肝片组比较,除加味四逆散低浓度组作用12h时细胞凋亡无差异外(P>0.05),其余各浓度组细胞凋亡均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)TUNEL检测表明:加味四逆散各浓度药物血清作用48h后,细胞凋亡率与空白对照组及鳖甲软肝片组药物血清比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可显著促进HSC-T6凋亡,且以高剂量和作用48h最为明显。