氧化苦参碱对TGF-β1诱导心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的新生SD乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:胰酶消化差速贴壁法分离纯化SD乳鼠原代心肌细胞。实验分为4组,包括正常组,模型组[转化生长因子-β_1(TGF-β_1),20×10-5g·L~(-1)],OMT高剂量组(TGF-β_1+0.1 g·L~(-1)OMT),OMT低剂量组(TGF-β_1+0.05 g·L~(-1)OMT)。OMT预保护2 h后,采用TGF-β_1孵育48 h建立心肌细胞损伤模型。利用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,生化法检测乳酸脱氢酶(LDH)外漏量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测p38,细胞外信号调节蛋白激酶(ERK),c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的表达水平。结果:TGF-β_1显著引起心肌细胞损伤,OMT(0.1,0.05 g·L~(-1))能够抑制TGF-β_1诱导的心肌细胞存活率下降及LDH外漏量增加。OMT高剂量组(0.1 g·L~(-1))可下调TGF-β_1诱导的心肌细胞p-p38,p-ERK1/2,p-JNK的蛋白表达,但对p38,JNK,ERK1/2总蛋白表达无影响。结论:OMT对TGF-β_1诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与其抑制p38,ERK1/2,JNK蛋白的磷酸化有关。     

木豆枝叶的化学成分研究(Ⅱ)北大核心

目的:研究木豆枝叶的化学成分。方法:采用结晶、重结晶、正相硅胶色谱、ODS、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱、MCI柱、大孔树脂柱及HPLC等技术对木豆枝叶进行分离纯化,并采用核磁共振氢谱、碳谱及质谱等波谱学方法对所得到的化合物进行结构鉴定。结果:从木豆枝叶醇提物中分离得到11个化合物,分别鉴定为:叶黄素(1)、3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene-23-caffeate(2)、3β,23,28-trihydroxy-12-oleanene-3β-caffeate(3)、白桦脂醇(4)、5,22-二烯-7-酮-3β-羟基豆甾烷(5)、7-oxo-β-sitosterol(6)、(22E,24R)-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(7)、alternamide B(8)、n-butyl-β-D-fructofuranoside(9)、leonuriside A(10)、(2S)-1-O-heptatriacontanoyl glycerol(11)。结论:化合物1~11均为首次从该植物中分离得到。     

完善绩效考核管理机制,提升服务质量和效率的思考

目的:通过完善绩效考核管理机制来激发员工工作积极性,提升服务质量和效率,最大限度地保障人民群众急诊急救医疗需求。方法:根据洛阳市第一人民医院急诊科(急救站)的实际情况对员工工作的各个环节、服务结果做出评价,绩效考核,与劳动分配挂钩。结果:完善绩效考核管理机制极大地调动了员工的工作主动性,服务质量和效率显著提升。接警应答时间由原来8~12s提高到现在的3~4s,接警出车反应速度由原来的3min左右降至现在的1min以内,车载状态反馈达99%,抢救成功率95%左右,急诊诊断符合率达98%以上,患者满意度明显提高。结论:完善绩效考核管理机制对提升急诊科(急救站)服务质量和效率效果显著。     

艳山姜挥发油通过Nrf2/Notch1信号通路抑制高糖诱导的内皮间质转分化

目的:分析艳山姜挥发油(EOFAZ)抑制高糖(HG)诱导的内皮间质转分化(EndMT)的作用及其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分析EOFAZ对HG诱导EndMT及氧化应激损伤的药效学作用,设定空白组,EOFAZ低、高剂量组(1,4μg·L~(-1)),高糖组(35 mmol·L~(-1)),EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h复制EndMT细胞模型。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测波形蛋白(vimentin)和血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白表达水平,血管生成实验检测细胞迁移能力以分析EOFAZ对EndMT的影响;采用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测活性氧(ROS)水平的变化以及试剂盒法检测细胞内丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)的含量,以分析EOFAZ对氧化应激的影响;采用Western blot检测核转录因子E2相关因子2(Nrf2)与Notch1的蛋白表达水平。通过腺病毒(AD)转染实现Nrf2的过表达,进一步分析EOFAZ抑制EndMT的作用机制,设定空白组,AD-Nrf2+EOFAZ组(4μg·L~(-1)),AD-Nrf2组,高糖组(35 mmol·L~(-1)),EOFAZ组(4μg·L~(-1))。Nrf2基因重组腺病毒过表达质粒感染细胞6 h,更换为正常培养基24 h,EOFAZ预孵育2 h后加入HG共同孵育72 h诱导EndMT。通过Western blot检测Nrf2,CD31,vimentin,Notch1和Snail的蛋白表达。结果:与高糖组比较,EOFAZ干预给药后明显上调HG诱导的CD31蛋白表达水平和下调vimentin蛋白表达水平(P0.05,P0.01),降低细胞迁移能力(P0.01),同时降低ROS和MDA的水平(P0.05,P0.01),提高CAT和SOD的水平(P0.01)。此外,EOFAZ干预给药能够显著上调抗氧化信号Nrf2的蛋白表达水平(P0.01),下调Notch1的蛋白表达水平(P0.01)。通过稳定的腺病毒转染HUVECs可实现Nrf2的高表达,Western blot结果显示,与高糖组比较,各给药处理组显著提高Nrf2和CD31的蛋白表达水平(P0.01),显著下调vimentin,Notch1和Snail蛋白表达水平(P0.01);与AD-Nrf2组相比,AD-Nrf2+EOFAZ组能够进一步上调Nrf2和CD31的蛋白表达水平(P0.05,P0.01),降低vimentin,Notch1和Snail蛋白表达水平(P0.01)。结论:EOFAZ可改善HG诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤,从而抑制EndMT,其作用与Nrf2/Notch1信号通路相关。     

毛叶合欢的化学成分

目的 研究毛叶合欢Albizia mollis的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RP C-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果 从毛叶合欢中分得了13个化合物,经波谱解析分别鉴定为白桦酸(1)、桉脂素(2)、麦角甾醇过氧化物(3)、金合欢酸内酯(4)、桦木醇(5)、表儿茶素(6)、(-)-表阿夫儿茶精(7)、β-香树酯醇(8)、ergosta-7,22-dien-3β--O-β-glycopyranoside(9)、3-吲哚甲酸(10)、1--O-十八烷酸甘油酯(11)、正二十七烷醇(12)、1-O-β-D-葡萄糖苷-(-2S,3R,4E,8E)-2-N-(2′-羟基-二十一碳酰基)-十八碳鞘氨醇-4,8-二烯(13)。结论 所有化合物均为首次从该植物中分得。     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。     

滇杠柳的化学成分研究

目的研究滇杠柳Periploca forestti的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RP-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果从滇杠柳中分得了13个化合物,经波谱解析分别确定为滇杠柳苷元A(1)、杠柳苷元(2)、异甘草素(3)、8-羟基杠柳苷元(4)、甘草素(5)、大豆异黄酮(6)、(?)-高丽槐素(7)、芒柄花素(8)、大黄酚(9)、大黄素甲醚(10)、杠柳苷N(11)、原儿茶酸(12)、臭矢菜素A(13)。结论化合物3、5～9、12、13为首次从该植物中分离得到。     

基于TXNIP信号通路调控的艳山姜挥发油对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究艳山姜挥发油（EOAZF）对高浓度葡萄糖（HG）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用,为研究EOAZF改善糖尿病诱导的心血管疾病提供实验依据。方法 该项目研究分为正常组,模型组（25 mmol·L^-1葡萄糖组）,阳性药组（100 mg·L^-1维生素C）,EOAZF低、中、高浓度组（0.25,1,4 μg·L^-1）。通过建立HG诱导HUVECs损伤模型,检测不同给药组内皮细胞中的丙二醛（MDA）,一氧化氮（NO）和内皮素1（ET-1）的分泌量,评价EOAZF对高糖诱导HUVECs损伤的保护作用;采用AnnexinV-FITC/PI双染实验以及DCFH-DA荧光探针标记,考察EOAZF对HG诱导HUVECs的凋亡水平和活性氧（ROS）产生的影响;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）,检测硫氧还原蛋白相互结合蛋白（TXNIP）与硫氧还原蛋白（Trx-1）蛋白表达和转录水平,采用胰岛素二硫键还原法测定细胞内总Trx-1的酶活性。结果 细胞形态学结果显示,与正常组比较,模型组HUVECs增殖速度明显降低,细胞形态受损;与模型组比较,0.25,1,4 μg·L^-1EOAZF对HG诱导损伤的HUVECs具有保护作用,且呈浓度依赖性;与正常组比较,模型组显著上调HUVECs内MDA和ET-1分泌量（P<0.05）,下调NO的分泌（P<0.01）;与模型组比较,不同浓度EOAZF均能改善HG诱导的MDA,ET-1和NO的分泌,其中4 μg·L^-1EOAZF能明显降低HG诱导的HUVECs细胞MDA和ET-1的分泌量（P<0.05）,明显上调HUVECs细胞NO的分泌量（P<0.05）;细胞凋亡和ROS检测结果显示,与正常组比较,模型组细胞凋亡和ROS水平均显著上调（P<0.01）;与模型组比较,4 μg·L^-1EOAZF明显降低HG诱导的HUVECs中ROS水平和细胞凋亡率（P<0.05）;免疫印迹实验结果和Trx-1活性检测结果显示,与正常组比较,造模组细胞中TXNIP的mRNA和蛋白水平显著上调（P<0.01）,Trx-1的活性显著降低（P<0.01）;与模型组比较,4 μg·L^-1EOAZF明显下调HG诱导的TXNIP的mRNA与蛋白的表达上调（P<0.05）,同时增强细胞内总Trx-1的酶活活性（P<0.05）,发挥抗氧化应激的作用。结论 EOAZF能改善HG诱导损伤的HUVECs的内皮功能,降低细胞内ROS水平和凋亡水平,发挥显著的内皮细胞保护作用,其机制可能是通过降低TXNIP的mRNA和蛋白水平以及增强Trx-1的活性而发挥的抗氧化应激作用。