不同作用机制的5-脂氧化酶抑制剂筛选方法的建立和应用

目的拟建立体外高通量的用于筛选不同作用机制的5-脂氧化酶（5-lipoxygenase,5-LOX）抑制剂的方法。方法以花生四烯酸为底物,2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸为荧光反应物,建立荧光测活方法,并通过不加Fe3+和外加10mmol/LFe3+的方法建立两种不同的5-LOX酶反应体系。结果 5-脂氧化酶在不加Fe3+和外加10mmol/LFe³⁺的反应体系中的信号/本底（S/B）值分别为5.02和37.81,两种反应的Z’因子值均约为0.7。5-脂氧化酶铁离子螯合抑制剂齐留通在未加Fe³⁺的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC₅₀值为0.21μm,在外加10mmol/L Fe³⁺的反应体系对酶无抑制作用。非铁离子螯合抑制剂去甲二氢愈创木酸在两种反应体系对酶均有抑制作用,其IC₅₀值分别为0.52和0.93μM。利用该方法从微生物代谢产物中筛选到两个活性化合物WF-5239和Trivaric acid,其中化合物WF-5239在未加Fe³⁺的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC₅₀值为2μmol/L,在外加10mmol/L Fe³⁺的反应体系对酶无抑制作用,推测可能为铁离子螯合型抑制剂。化合物Trivaric acid在两个筛选体系对酶的抑制作用基本一致,其IC₅₀值均约为5.36μmol/L,推测可能为非铁离子螯合型抑制剂。结论本研究建立了灵敏、稳定的可用于筛选不同作用机制5-LOX抑制剂的方法。     

TiO2纳米管表面聚合物辅助沉积Ta2O5涂层对MC3T3-E1细胞生物学活性的影响

目的 探讨TiO₂纳米管表面聚合物辅助沉积五氧化二钽(Ta₂O₅)涂层对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1生物学活性的影响。方法 制备出Ta/TiO₂纳米管(Ta/NT组)、Ta₂O₅/纯钛(Ta₂O₅/PT组)及Ta₂O₅/TiO₂纳米管(Ta₂O₅/NT组)3组样本，其中后2组的Ta₂O₅涂层通过聚合物辅助沉积法制备。对3组样品进行表征检测：扫描电镜(SEM)观察表面形貌，X射线光电子能谱(XPS)分析表面元素组成，X射线衍射(XRD)检测表面化合物。选用MC3T3-E1细胞探讨3组样品对细胞生物学活性影响；荧光显微镜观察细胞骨架和细胞核的黏附；CCK-8法测定细胞活性；检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性；茜素红染色后半定量分析钙沉积；Real-time PCR...     

通关藤苷G在不同条件下的降解动力学研究

目的:研究通关藤苷G在不同pH、温度、光源、金属离子和氧化条件下的降解动力学特征。方法:采用HPLC法测定不同条件下通关藤苷G的含量。根据不超过250 h研究窗口内所得数据，将其含量随时间的变化分别与零级、一级和二级化学反应公式进行拟合，尝试建立降解动力学模型。结果:在pH 2.5溶液中，通关藤苷G的降解最接近二级动力学方程，理论半衰期(t_1/2)为188.09 h。在35℃、70℃、日光灯和紫外灯条件下，通关藤苷G的降解所得数据与3个动力学方程的区别不大，理论t_1/2均大于900 h。在Fe³⁺溶液中，通关藤苷G的降解最接近一级动力学方程，理论t_1/2为38.09 h。在30%H₂O₂溶液中，通关藤苷G的降解最接近零级动力学方程，理论t_1/2为31.25 h。在考察的其他条件下，通关藤苷G较稳定。结论:强酸性溶液、高温环境、日光灯、紫外灯、Fe³⁺和30%H₂O₂溶液...     

水合肼还原制备3-氨基-2-[(2'-氰基联苯-4-基)甲基]氨基-苯甲酸乙酯的工艺研究

目的研究3-氨基-2-[(2’-氰基联苯-4-基)甲基]氨基-苯甲酸乙酯的最优合成工艺。方法以2-[(2’-氰基联苯-4-基)-甲基]氨基-3-硝基苯甲酸乙酯为原料,水合肼为还原剂,Pb/C为催化剂,还原制得。结果原料与还原剂的最佳物质的量比为1.92:1,催化剂Pd/C为1.2g,反应温度为75℃,反应时间2h的最优条件下,收率为92.0%。结论本合成工艺稳定,条件温和,产率高,适合3-氨基-2-[(2’-氰基联苯-4-基)甲基]氨基-苯甲酸乙酯的工业化生产。     

人参蛋白协同H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤

目的:探讨人参蛋白(GP)协同H₂O₂诱导人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)氧化应激损伤的作用,并筛选二者的最佳联合浓度。方法:首先采用不同浓度H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤,然后采用不同浓度GP联合200 μmol·L^-1H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤;采用倒置荧光显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活,Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡。结果:SH-SY5Y细胞经GP-H₂O₂作用后,细胞数量减少,轴突缩短或消失,胞体变圆、缩小,大小不等;细胞存活率降低;Heochst 33342染色呈现高蓝光;GP 60 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1为联合诱导氧化应激损伤的最佳浓度。结论:GP有协同H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡是其可能的作用机制。     

3D打印技术构建不同比例PLA/TiO2复合支架及其性能评估

目的 利用3D打印技术构建不同比例的聚乳酸/二氧化钛(PLA/TiO₂)纳米复合支架,探究其相关性能。方法 在PLA中分别添加1%、1.5%、2.5%、5%和10%的TiO₂纳米颗粒。通过3D打印技术构建PLA/TiO₂纳米复合支架,对其形貌、力学性能、孔隙率、热性能和生物性能进行表征。结果 与纯PLA支架相比,PLA/TiO₂-1.5%、PLA/TiO₂-2.5%支架具有更高的孔隙率和更好的力学性能。所有支架均为层层交互叠加的网状结构,孔径约200μm,孔隙均匀规则。体外细胞增殖实验发现,所有支架均可促进小鼠胚胎成骨细胞增殖,PLA/TiO₂-1.5%组支架的细胞增殖效果优于其他组支架(P<0.05)。结论 相比于其他支架,PLA/TiO₂-1.5%支架具有适宜的力学性能,高孔隙率,更好地促进细胞增殖能力,可为骨缺损修复材料研究奠定基础。     

香豆素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对过氧化氢诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨香豆素调节Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的改善作用。方法 将人卵巢颗粒细胞株COV434分为空白组(正常培养)、模型组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂)、香豆素组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+320μmol·L^-1香豆素)、抑制药组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+10μmol·L^-1 Keap1/Nrf2/ARE通路抑制药compound 20c)、联合组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+320μmol·L^-1香豆素+10μmol·L^-1...     

维生素K3激活黄嘌呤氧化酶的动力学和分子机制

目的 考察维生素K₃对人肝来源的黄嘌呤氧化酶(XO)的激活作用及其作用机制。方法 以人肝S9(0.1 g·L^-1)作为XO来源,分别与底物黄嘌呤(0,2,4,8和16μmol·L^-1)在37℃孵育90 min,液相色谱二极管阵列法测定反应的米氏常数(K_m)。黄嘌呤在K_m浓度下,三点法(维生素K₃1,10和100μmol·L^-1)检测维生素K₃激活剂的活性,多点法(维生素K₃1,2,5,10,20,50,100,200和400μmol·L^-1)测定其激活XO的半数有效浓度(EC₅₀)。使用1/2EC₅₀,EC₅₀和2EC₅₀维生素K₃进行动力学参数(K_m和V_max)的测定和双倒数曲线的拟合,考察不同浓度维生素K_...     

阿齐沙坦的合成工艺优化

目的 改进阿齐沙坦合成中的硝基还原反应工艺。方法 以2-{[(2-氰基联苯-4-基)甲基]氨基}-3-硝基苯甲酸乙酯(SM1)为起始原料，以甲酸铵为供氢体，经催化转移氢化，还原得到3-氨基-2-[(2-氰基联苯-4-基)甲基]氨基苯甲酸乙酯(AQ-1),AQ-1与原碳酸四乙酯环化得到2-乙氧基-1-{[(2′-氰基联苯-4-基)甲基]苯并咪唑}-7-羧酸乙酯(AQ-2),AQ-2依次经过肟化、CDI环合和酯基水解，共计5步反应得到阿齐沙坦。结果 目标产物结构经¹H-NMR、¹³C-NMR、MS谱和元素分析确证，硝基还原反应收率由74.5%提高至90.6%。结论 新工艺反应进程快、易操作，且有较好的反应选择性，避开了污染大、压力高等落后工艺，具有较高的商业化价值。     

正交设计法优化鼻渊净胶囊超临界CO2萃取工艺条件研究

目的:优选鼻渊净胶囊的SFE-CO₂萃取工艺条件。方法:用正交设计法,以萃取温度、萃取压力、萃取时间为考察因素,以木兰脂素含量、欧前胡素和异欧前胡素含量之和、总萃取得率为评价指标,用L₉(3⁴)正交设计表优选鼻渊净胶囊超临界CO₂最佳工艺条件。结果:萃取温度对综合评价值有显著性影响(P<0.05);萃取压力和萃取时间对综合评价值无显著性影响(P>0.05);优选的萃取条件为:萃取温度50 ℃,萃取压力20 MPa,提取时间2 h。结论:本文优选的SFE-CO₂萃取工艺条件可行、稳定、萃取率高。     

灯盏细辛通过VDAC1/ROS/NLRP3通路减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨灯盏细辛(EB)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 建立体外H₂O₂诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型。将体外培养的HL-1小鼠心肌细胞分为空白组(常规培养)、对照组(4 mg·L^-1 EB 1 h)、模型组(800μmol·L^-1 H₂O₂ 1 h)、实验组(4 mg·L^-1 EB+800μmol·L^-1 H₂O₂ 1 h)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力；用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞损伤情况；用流式细胞术检测活性氧(ROS)含量；用蛋白质印迹法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)和电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达水平；用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)含量；用钙黄绿素乙酰甲酯(Ca...     

人血清水溶性维生素B1、B2、B6和B9高效液相色谱串联质谱联用技术测定方法的建立和验证

目的：建立测定人血清中水溶性维生素B₁、B₂、B₆和B₉的高效液相色谱串联质谱联用法。方法：常规送检患者血清经乙酸乙酯萃取,经反相高效液相色谱分离,采用电喷雾离子化四级杆串联质谱多反应监测模式测定维生素B₁、B₂、B₆和B₉浓度。结果：维生素B₁、B₂、B₆、B₉线性范围分别为1~200,5~40,1~80,5~40 ng·mL^-1;R²值分别为0.991 6,0.996 8,0.992 2,0.991 4;最低定量限分别为1,5,1,5 ng·mL^-1;日内、日间RSD均小于8.5%。结论：所建立方法可用于常规送检患者血清水溶性维生素B₁、B₂、B₆和B₉测定。     

甘草非线性指纹图谱初步研究

目的：建立甘草的非线性指纹图谱。方法：以H₂SO₄-Ce（SO₄）₂（NH₄）₂SO₄-CH₃COCH₃-KBrO₃为化学振荡体系,甘草为反应底物,应用电化学工作站记录电位（E）随时间（t）的变化,绘制E-t曲线,考察各种因素对曲线的影响。结果：通过实验确定了最佳的反应条件,在300~325 K反应的平均活化能：E_in=84.69 kJ·mol^-1,E_p=72.90 kJ·mol^-1,样品的相似度较好,甘草与伪品相比非线性指纹图谱有明显区别,聚类分析将样品最终聚为两类。结论：该方法可用来鉴别甘草。     

广西茉莉花叶不同极性部位提取物的抗氧化活性

目的测定茉莉花叶不同极性部位提取物的抗氧化活性。方法对茉莉花叶提取物用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位以及水部位。考察茉莉花叶提取物对清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、ABTS^+自由基、O^2-自由基、OH^-自由基的能力以及对还原Fe³⁺、螯合Fe²⁺的能力,并与2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)进行对照。结果茉莉花叶不同极性部位提取物对DPPH自由基和ABTS^+自由基都具有清除能力,清除氧阴离子自由基的能力石油醚部位最强,清除羟自由基的能力为正丁醇部位>乙酸乙酯部位>石油醚部位>水部位,还原Fe³⁺的能力中水部位的还原能力最强,乙酸乙酯部位的还原能力最弱,乙酸乙酯部位螯合Fe²⁺的能力高于BHT,正丁醇部位的螯合力最弱。结论广西茉莉花叶不同极性部位提取物具有一定的抗氧化活性。     

维生素D2注射液对80岁以上男性维生素D缺乏患者血清25-羟基维生素D和免疫功能的影响

目的 研究维生素D₂注射液对80岁以上老年男性维生素D缺乏患者血清25-羟基维生素D[25(OH)D]和免疫功能的影响。方法 选择48例年龄80岁以上男性维生素D缺乏[血清25(OH)D<20μg·L^-1]患者,给予维生素D₂注射液(60万单位,肌内注射,每月1次)治疗,直至血清25(OH)D≥30μg·L^-1后停用。检测治疗前后血清25(OH)D₂、25(OH)D3,T淋巴细胞亚群(包括CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺)和CD19⁺B细胞、血钙、血磷等水平,并观察不良反应发生情况。结果 共40例患者完成研究,25(OH)D达标用时(6.2±1.4)个月。与治疗前比较,治疗后25(OH)D₂升高(27.42±5.47)μg·L^-1,25(OH)D₃降低(5.25±3.38)μg·L^-1,25(OH)D升...     

灯盏乙素介入IP3R-Ca2+途径抑制β淀粉样蛋白诱导的神经细胞凋亡

目的：观察灯盏乙素（Scu）对β淀粉样蛋白（Aβ）诱导的细胞模型中1，4，5-三磷酸肌醇受体（IP₃R）-Ca²⁺途径的影响，探讨其在阿尔茨海默病（AD）病程中可能发挥的积极作用。方法：选用神经母细胞瘤细胞分为对照组、Scu处理组、Aβ处理组、Aβ+Scu （高、中、低）处理组及Aβ+IP₃R拮抗剂组，用CCK-8法筛选药物浓度并检测各组细胞生存率；用酶联免疫吸附法检测各组细胞中1，4，5-三磷酸肌醇（IP₃）的含量；用蛋白印迹和实时荧光定量聚合酶链反应方法检测各组细胞IP₃R和凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白及mRNA的表达水平；用激光共聚焦显微镜观察各组细胞内Ca²⁺浓度的变化；用AnnexinV/PI双染法测定各组细胞的凋亡率。结果：与对照组和Scu处理组相比，Aβ处理组细胞存活率下降，IP₃含量升高，IP₃R、Bax和Caspase-3的蛋白及mRNA表达上调，Bcl-2蛋白及mRNA的表达下调，细胞胞浆内Ca²⁺浓度及细胞凋亡率升高；Aβ+Scu处理组细胞中各检测指标的变化与Aβ处理组的结果正好相反，IP₃R通道下游指标的变化与Aβ+IP₃R拮抗剂组基本一致。结论：Scu能够下调通路蛋白IP₃、IP₃R的表达，抑制Aβ介导的Ca²⁺内流所致的细胞凋亡，可能通过对IP₃R-Ca²⁺途径的调控来影响AD病程。     

利福布汀的合成工艺改进

目的:探索利福布汀的最佳合成工艺。方法:以利福霉素S为起始原料,经溴代、硝基化、还原、亚氨基化,最后与侧链环合得到利福布汀;并对合成3-氨基利福霉素S的反应溶剂二氯甲烷的前处理方法(未处理、常压蒸馏、氢化钙干燥、分子筛干燥、氢氧化钾干燥)、合成3-氨基-4-亚氨基利福霉素S的反应温度(25³0、2030、20²5、1525、15²0、1020、10¹5℃)以及侧链N-异丁基哌啶酮的制备工艺进行改进。结果:利福布汀的收率为16.44%,高效液相色谱法检测纯度为99.17%。二氯甲烷的前处理选用氢氧化钾进行干燥;合成3-氨基-4-亚氨基利福霉素S反应温度控制为1515℃)以及侧链N-异丁基哌啶酮的制备工艺进行改进。结果:利福布汀的收率为16.44%,高效液相色谱法检测纯度为99.17%。二氯甲烷的前处理选用氢氧化钾进行干燥;合成3-氨基-4-亚氨基利福霉素S反应温度控制为15²0℃;侧链N-异丁基哌啶酮合成改为以异丁胺和丙烯酸乙酯为原料,其收率为85.2%、气相色谱法检测纯度为98.5%。结论:该改进工艺合成收率和纯度较高,原料易得、反应条件温和、操作简单。     

HPLC法测定150种中药材中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的含量

目的:建立了HPLC法测定150种中药材中的黄曲霉毒素G₂、G₁、B₂、B₁含量。方法:样品经70%甲醇提取、免疫亲和色谱柱净化后,用HPLC-柱后衍生-荧光检测器测定结果:黄曲霉毒素G₁、B₂在0.15～6.00 ng·ml^-1范围内,黄曲霉毒素C₁、B₁在0.5～20.00 ng·ml^-1范围内线性关系良好回收率为85.6%～92.0%结论:本法操作简便,结果准确、重复性好,可用于中药材中黄曲霉毒素G₂、G₁、B₂、B₁的测定     

槐耳颗粒联合胸腺肽α1对原发性肝癌术后患者辅助性T细胞1型/2型平衡及肝功能的影响

目的：分析槐耳颗粒联合胸腺肽α₁对原发性肝癌术后患者辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)平衡及肝功能的影响。方法：选择2020年1月—2022年5月收治的原发性肝癌患者80例,按随机数字表法分为观察组与对照组,每组40例。对照组在基础治疗基础上联合胸腺肽α₁治疗,观察组在对照组基础上联合槐耳颗粒治疗。比较两组临床疗效、免疫功能、肝功能及不良反应。结果：两组客观缓解率、疾病控制率和不良反应发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前7 d,两组CD3⁺,CD4⁺,CD8⁺及CD4⁺/CD8⁺比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后28 d,两组CD3⁺,CD4⁺及CD4⁺/CD8⁺升高,且观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后28 d,两组CD8⁺均降低,且观察组低于对照...     

Hhcy大鼠血浆Hcy与阴茎海绵体H2S的相关性

目的:研究高同型半胱氨酸血症（Hhcy）大鼠血浆同型半胱氨酸（Hcy）浓度和阴茎海绵体组织硫化氢（H₂S）含量之间的关系。方法:将24只健康雄性Wistar大鼠适应喂养1周后随机分为8只正常组（C组）和16只模型组,给予C组（生理盐水3m L/次）和模型组(生理盐水3m L/次+蛋氨酸1g·kg^-1·d^-1)早晚各1次灌胃,持续6周。6周后采血测模型组血浆Hcy浓度均大于16.0μmol/L,提示造模成功,随机将模型组分为Hhcy组（H组）和叶酸、vit B₁₂组（V组）各8只,给予H组(生理盐水3m L/次+蛋氨酸1g·kg^-1·d^-1)和V组(生理盐水3m L/次+蛋氨酸1g·kg^-1·d^-1+叶酸0.5mg·kg^-1·d^-1+vit B₁₂50μg·kg^-1·d^-1)继续灌胃6周后测血浆Hcy和H₂S浓度,0、5V下阴茎海绵体内压/平均颈动脉压（ICPmax/MAP）检测后取阴茎组织测H₂S含量。结果:随着C组、V组、H组之间血浆Hcy浓度依次增高,而大鼠ICPmax/MAP（0、5V）值逐渐降低,阴茎组织H₂S含量依次均显著性降低（P<0.05）,且血浆Hcy浓度与阴茎组织H₂S含量之间为负性相关。结论:随着血浆Hcy浓度增高,致使阴茎海绵体内源性H₂S含量降低,这可能是Hhcy致勃起功能下降的原因之一,且叶酸和维生素B₁₂能够有效的降低血浆Hcy浓度,改善勃起功能。