掌叶半夏总蛋白作用人卵巢癌SKOV3细胞的蛋白质组学研究

目的研究掌叶半夏总蛋白作用于人卵巢癌SKOV3细胞后蛋白质组学的变化。方法体外培养SKOV3细胞,应用CCK-8比色法观察不同时间（24、48、72、96 h）、不同浓度（0、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mg/mL）掌叶半夏总蛋白对SKOV3细胞的生长抑制作用。取对数生长期SKOV3细胞,加入0.296 mg/mL掌叶半夏总蛋白作用于细胞48 h,提取细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）筛选差异表达的蛋白质。结果 0.10～0.50 mg/mL掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,且具有一定的时效和量效关系（P〈0.05,P〈0.01）。经2-DE和质谱分析成功鉴定43个差异蛋白质点（其中21个上调,22个下调）,包括α-烯醇化酶1、真核翻译起始因子3α、亲环素B等。结论掌叶半夏总蛋白可显著抑制SKOV3细胞的生长,并引起SKOV3细胞株蛋白质组学的改变,可能与其抗癌机制相关。     

红芪多糖对人肺腺癌A549细胞蛋白表达图谱影响的研究

目的:研究红芪多糖(Hedysari Radix polysaccharide,HRP)对人肺腺癌A549细胞蛋白双向电泳图谱的影响。方法:以300μg/ml红芪多糖体外作用于A549细胞后提取细胞总蛋白,使用丙酮沉淀法和2-DE Cleanup Kit对蛋白进行纯化。采用双向凝胶电泳分离纯化后的细胞总蛋白,银染显色并扫描凝胶图片,使用PDQuest 8.0图像分析软件对不同处理组双向凝胶电泳图谱进行对比分析,筛选出差异蛋白点,并分析差异蛋白的理论等电点和分子量。结果:应用双向电泳方法建立了A549细胞分辨率较高和重复性较好的蛋白表达图谱。红芪多糖处理可使A549细胞2-DE图谱中35个蛋白点发生明显变化,其中24个表达上调,8个表达下调,3个仅在对照组中表达,并分析得出了35个蛋白点的理论等电点和分子量。结论:红芪多糖可使人肺腺癌蛋白表达图谱发生明显改变,应用蛋白质组学筛选出的35差异蛋白点可能是红芪多糖抑制人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的关键调控蛋白质。     

胃癌及其癌前病变胃黏膜蛋白质组双向电泳图谱的差异分析

目的：对胃癌与萎缩性胃炎胃黏膜双向电泳（2-DE）图谱进行比较分析,筛选差异表达蛋白质。方法：利用双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE〉分离胃癌组和萎缩性胃炎组总蛋白质,并通过优化的计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果：在胃癌组织中点检测共有蛋白质点1137个,萎缩性胃炎组织中点检测共有蛋白质点1096个,发现两者间共有104个差异蛋白质点,其中40个点仅在胃癌组织中表达,21个点仅在萎缩性胃炎中表达,33个点在胃癌组织中高表达,47个点在胃癌组织中低表达。结论：通过优化的双向凝胶电泳和图像分析技术对胃癌及萎缩性胃炎蛋白质组进行研究,获得了胃癌蛋白质组与萎缩性胃炎组的差异蛋白质点,为进一步利用质谱分析技术做差异蛋白质鉴定奠定了基础。     

健胃愈疡颗粒对乙酸性胃溃疡复发大鼠作用的蛋白质组学研究

目的分析健胃愈疡颗粒（JWYY）对乙酸性胃溃疡复发大鼠蛋白质表达谱的影响,寻找JWYY抗胃溃疡复发作用的相关蛋白。方法采用二维凝胶电泳（2-DE）分离JWYY处理组和JWYY未处理组大鼠胃组织的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,NCBInr及SWISS-PROT数据库搜索鉴定蛋白质。结果所获2-DE图谱分辨率高、重复性好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,其中JWYY处理组有8个蛋白质点表达上调,4个蛋白质点表达下调,大多数蛋白与溃疡复发的形成、生长、凋亡及免疫等环节相关。结论JWYY抗胃溃疡复发作用可能与多种蛋白直接或间接相关,这些蛋白质的鉴定及进一步研究有助于抗溃疡复发药物新型靶标的发现。     

新生小鼠肠边缘群细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异表达

目的筛选肠道干细胞特征性的差异蛋白质或蛋白质群。方法采用双向凝胶电泳方法分离新生小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞总蛋白,表达差异超过1.5倍的为差异蛋白质。结果成功建立小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞的双向电泳图谱,筛选出差异蛋白点39个。结论小鼠肠干细胞与上皮细胞的蛋白表达谱存在差异,有可能成为潜在的、有应用价值的肠道干细胞鉴别分子标志。     

脑梗死肝阳化风证外周血淋巴细胞相关蛋白质鉴定和分析

目的 应用比较蛋白质组学方法分析并鉴定脑梗死肝阳化风证和阴虚生风证的相关蛋白质,探讨中医肝阳化风证及阴虚生风证的本质内涵.方法 设计选择脑梗死肝阳化风证,阴虚生风证患者及健康人各15例,提取外周静脉血淋巴细胞总蛋白质,经双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色获取凝胶图谱,PDQuest V7.3.1软件比较分析3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达蛋白质,对有意义的蛋白进行质谱分析和数据库检索鉴定.结果 经比较分析,发现肝阳化风证组与阴虚生风证组差异蛋白质点23个,鉴定出22个共15种蛋白质,相同表达蛋白质点8个,鉴定出6个蛋白质点共5种蛋白质.包括代谢酶类、信号传导蛋白、细胞骨架蛋白,抗氧化蛋白等多类蛋白质表达异常.结论 脑梗死肝阳化风证与阴虚生风证具有相同蛋白和差异蛋白,提示二者具有相同的物质基础和不同的本质内涵.     

光剥舌苔的差异蛋白质组学研究

目的 利用蛋白质组学方法,识别剥苔差异表达的蛋白质,为进一步探讨病理舌苔产生机制奠定基础.方法 运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离正常组和剥苔组舌苔组织的总蛋白质、银染显色、凝胶扫描入计算机,ImageMaster 2D Platinum软件分析比较电泳图谱.应用图象分析软件比较分析,识别差异表达的蛋白质:应用质谱仪(mass spectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass finger print,PMF),搜索数据库鉴定差异蛋白质.结果 建立正常舌苔和剥苔双向凝胶电泳图谱;对四组舌苔组织的蛋白质组进行分离分析,发现凝胶中可检测的蛋白质斑点数分别为1082±105个和1143±140个:较正常组8个蛋白质点表达上调、7个表达下调,鉴定出9种差异表达蛋白质.结论 建立了分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱;可识别和鉴定出一些与剥苔相关的差异表达蚩白质.     

掌叶半夏研究概况

分别从化学成分、药理作用等方面概述掌叶半夏的研究进展,阐述了掌叶半夏具有镇静、镇痛作用、抗惊厥作用及对心血管作用,尤其是从掌叶半夏对卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR、A0、3A0的抑制作用和其浸出液对Hela细胞的抑制作用等方面,重点阐明了掌叶半夏抗肿瘤作用,尤其是对宫颈癌的治疗应用.     

脾阴虚证大鼠海马蛋白质组双向凝胶电泳的研究

目的:应用双向凝胶电泳方法初步分析脾阴虚证大鼠海马蛋白质组的表达,为进一步探讨脾阴虚所致脑损伤的分子机制提供依据。方法:采用饮食不节、劳倦过度联合耗伤阴液法建立脾阴虚证大鼠模型,对脾阴虚组和空白对照组海马蛋白质组表达进行比较,观察分析其差异。结果:脾阴虚组出现易激惹、咬斗,肛温升高,饮水量增加等脾阴虚表现(P<0.05)。通过双向凝胶电泳图谱比较发现脾阴虚组海马蛋白质组中有6个蛋白点表达发生明显改变,其中5个蛋白点表达明显下调,1个表达显著上调。结论:应用双向凝胶电泳方法初步筛选出脾阴虚大鼠海马蛋白质组的差异表达,推测与学习记忆相关。     

亚健康肾阴虚证的血浆蛋白质组学初步研究

目的:初步观察亚健康肾阴虚证患者血浆蛋白质组的变化与表达差异,为进一步探讨亚健康的发生机制奠定基础.方法:采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离亚健康肾阴虚证患者与正常人血浆总蛋白,银染显色;PDQuest 软件对凝胶图象进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF-MS)分析,获取肽质量指纹图谱(PMF);通过Mseot-Wizard软件进行数据库搜索,鉴定蛋白质.结果:获得了重复性和分辨性较好的血浆双向凝胶电泳图谱;在亚健康肾阴虚证血浆较正常人血浆表达量升高的蛋白质斑点11个,表达量降低的蛋白质斑点6个;选取其中表达量升高相差10倍以上的3个蛋白质斑点进行PMF鉴定,得到1个匹配精确的蛋白质(热休克蛋白27).结论:亚健康肾阴虚证血浆与正常人血浆中存在差异表达蛋白质,利用蛋白质组学技术有望对亚健康的发生机制进行阐释,并将促进中医证候研究的拓展和深入.     

半夏内生菌的分离及抗菌活性筛选

目的：分离三叶半夏和掌叶半夏的内生菌,并对分离的内生菌进行抗菌活性筛选。方法：采用组织块分离法从不同品种半夏中分离内生菌,并对分离所得内生菌进行初步鉴定。利用对峙法进行抗菌活性筛选,获得具有抑菌活性内生菌。结果：共分离得到内生菌39株,其中内生细菌15株、内生真菌24株。对峙法筛选实验结果表明：5株菌对大肠杆菌具有较强拮抗性,5株菌对金色葡萄球菌有较强拮抗性,4株菌对枯草杆菌有较强拮抗性。结论：半夏含有丰富的内生菌菌种资源,实验表明多株菌具有代谢抑菌活性物质的特性,在获取天然药用生物活性成分方面存在很大潜能。     

透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞Caspases蛋白表达的影响

目的：研究透骨草提取物对人卵巢SKOV-3细胞凋亡的影响及其机制。方法：吖啶橙染色法观察透骨草提取物对SKOV-3细胞形态的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SKOV一3细胞Caspas-es蛋白表达的影响。结果：37．8μg／ml透骨草提取物作用于SKOV-3细胞24h后,SKOV-3细胞形态不规则,细胞核固缩、呈月牙形紧贴在核膜周围。SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,表明透骨草提取物可下调SKOV-3细胞Caspase-9、Caspase-3、Caspase-7蛋白的表达。结论：透骨草提取物可以通过Caspases依赖途径诱导SKOV-3细胞凋亡。     

百里醌抑制卵巢癌生长及其机制研究

目的研究百里醌对卵巢癌生长的影响及其作用机制。方法百里醌作用卵巢癌细胞株SKOV3后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;Western blotting检测胞核蛋白Nrf2、胞浆蛋白Keap1、Akt、p-Akt、NQO1、GCLC的表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中NQO1和GCLC mRNA水平。制备裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察百里醌对肿瘤生长的影响;免疫组化检测肿瘤组织Nrf2、NQO1和GCLC的阳性表达。结果与对照组比较,百里醌明显抑制SKOV3细胞生长(P0.05、0.01),并诱导细胞凋亡(P0.01);升高细胞内ROS水平(P0.05);下调胞核Nrf2蛋白及胞浆p-Akt蛋白表达(P0.05),上调Keap1蛋白表达(P0.001);下调NQO1、GCLC的mRNA和蛋白表达(P0.05、0.01)。百里醌抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的生长(P0.01),降低肿瘤组织中Nrf2、NQO1、GCLC的阳性表达(P0.05、0.01)。结论百里醌抑制卵巢癌生长,其机制可能是抑制胞核Nrt2蛋白表达,促进癌细胞内ROS的产生,诱导细胞凋亡。     

罗勒多糖对人卵巢癌细胞SKOV3细胞骨架的影响

目的:观察罗勒多糖对人卵巢癌细胞SKOV3细胞骨架的影响,探讨罗勒多糖抗卵巢癌细胞侵袭转移的可能机制。方法:将卵巢癌SKOV3细胞分为4组,A组为不加罗勒多糖处理的空白对照组,B、C、D组分别用不同浓度罗勒多糖处理,以罗丹明-鬼笔环肽标记微丝,免疫荧光法标记微管,用荧光显微镜观察。结果:罗勒多糖作用的SKOV3细胞微丝重排、伪足减少、微管蛋白弥散分布、细胞骨架的网络结构发生改变;这一作用与剂量呈正相关。结论:罗勒多糖可能通过影响人卵巢癌SKOV3细胞微丝、微管来调节其运动性和侵袭力。     

黄芪对IgA肾病小鼠肾脏功能和肾组织蛋白质表达的作用

目的：研究右旋糖苷所致IgA肾病小鼠的肾组织蛋白表达变化和黄芪提取物（AEAR）对IgA肾病小鼠的作用。方法：给正常小鼠注射右旋糖苷建立IgA肾病小鼠模型。部分模型小鼠给予AEAR10g-kg^-1·d^-1。作为AEAR治疗组。为探究AEAR的作用，运用双向电泳（2-DE）技术分别获得正常对照组、IgA肾病模型组、AEAR组小鼠的肾组织蛋白凝胶，银染后，图像用PDQUEST双维分析软件分析比较，得到相应图谱。结果：连续12周给予AEAR的IgA肾病小鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）和尿蛋白含量明显降低，且它们的肾组织蛋白图谱相应恢复接近正常鼠的图谱形态。与正常组比较，模型组有334个蛋白表达有显著性差异，其中142个蛋白表达增强2倍，61个蛋白表达增强5倍，121个蛋白表达减弱2倍；10个蛋白在模型组特异表达，在正常组不表达。以上334个差异蛋白中的50％个蛋白在给予AEAR治疗后，表达水平趋近于正常对照组水平；上述10个特异表达的蛋白经过AEAR干预后，有5个蛋白恢复至正常的不表达状态，4个蛋白表达明显减弱接近正常水平，只有1个蛋白表达上调甚至高于模型组对应蛋白的表达水平，分析可能与IgA肾病发病或AEAR药物作用密切相关。结论：AEAR不仅具有保护IgA肾病小鼠肾脏功能的作用，而且能调节小鼠肾脏组织蛋白表达，有助于发现AEAR作用于IgA肾病的靶蛋白。     

淫羊藿素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及促凋亡作用

基于PI3K/Akt信号通路,观察人卵巢癌SKOV3细胞在不同浓度淫羊藿素(icaritin)干预下的增殖与凋亡变化过程,探讨可能存在的分子机制。研究对象为人卵巢癌细胞SKOV3,设置空白对照组和淫羊藿素不同浓度组(5,10,20μmol·L^-1),药物干预48 h,采用cell counting kit-8(CCK-8)法检测淫羊藿素对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制效果;通过EdU试验检测SKOV3细胞增殖能力;采用Hoechst 33342荧光染色法观察各组SKOV3细胞凋亡形态变化,通过流式细胞术检测各组细胞周期分布状况和细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR)法检测各组细胞中PTEN,PI3K,Akt基因的表达情况;Western blot法检测PTEN,PI3K,Akt,p-Akt蛋白的表达情况。结果显示,与空白对照组比较,各浓度淫羊藿素组SKOV3细胞增殖抑制率升高(P<0.05),Edu阳性细胞率均降低(P<0.05),SKOV3细胞均呈现凋亡形态学改变,SKOV3细胞凋亡率均显著上升(P<0.05),SKOV3细胞G0/G1期细胞比例均降低(P<0.05),S期细胞比例均升高(P<0.05),SKOV3细胞中PTEN的基因和蛋白表达升高,PI3K和Akt的基因表达下降,PI3K和p-Akt的蛋白表达下降(P<0.05)。结果表明,淫羊藿素可能通过调控PI3K/Akt信号通路,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、诱导细胞发生凋亡并影响细胞周期分布。     

PUVA诱导HL-60细胞凋亡时对Caspase8、3蛋白的影响

目的观察Caspase8、3蛋白在补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病HL-60细胞凋亡时的变化情况。方法用不同浓度中药补骨脂中提取的PSO和／或不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于HL-60细胞，检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达，用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加，上调Caspase8、3蛋白的表达，PUVA的作用显著强于前两者；PUVA处理后的HL-60细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导HL-60细胞凋亡。     

胆南星不同炮制品的药效和毒性实验研究

以对戊巴比妥钠催眠作用影响为指标,比较研究不同胆南星炮制品的混悬液、水浸液、醇提物对昆明种小鼠的中枢系统抑制作用。同时对两种制品进行了急性毒副作用实验观察。结果:两种制品均未见毒副反应;两种制品的水浸液腹腔给药,均可增强戊巴比妥钠催眠作用;混合蒸制法醇提物腹腔给药较发酵法醇提物有明显的增强作用。     

半夏及掌叶半夏毒针晶中共性毒蛋白的研究

目的:寻找天南星科半夏属有毒中药半夏及掌叶半夏毒性物质基础毒针晶中的共有蛋白,研究刺激性相关蛋白的致炎效应。方法:采用溶液内双酶解方法将半夏与掌叶半夏毒针晶中的蛋白降解为混合肽段,采用液相色谱与串联质谱偶联分析降解后的肽段,将质谱分析数据与BIOWORKS软件搜索的NCBI绿色植物Viridiplantae蛋白库比对进行蛋白质检索分析。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对半夏、掌叶半夏毒针晶蛋白进行分析,同时采用胶内酶解后液相色谱与串联质谱偶联的方法,分析并鉴定约13kDa蛋白。提取分离半夏中的凝集素蛋白,并采用中性粒细胞迁移试验和测定腹腔渗出液中PGE2的含量,考察毒针晶及凝集素的炎症刺激性效应。结果:半夏及掌叶半夏毒针晶中均含约13kDa的蛋白条带,此条带经鉴定为凝集素类蛋白,且此13kDa蛋白条带为毒针晶中的主要蛋白之一,凝集素类蛋白可诱导中性粒细胞向大鼠腹腔迁移,可显著增加小鼠腹腔渗出液中PGE2的含量。结论:天南星科有毒中药半夏及掌叶半夏毒针晶蛋白中均含有凝集素类蛋白,且此类凝集素蛋白具有显著的致炎作用,是半夏与掌叶半夏毒针晶中的共性毒蛋白。