结缔组织生长因子单链抗体对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度及羟脯氨酸含量的影响

目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv)对博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠的治疗作用.方法:昆明小鼠36只,随机分为对照组、模型组和治疗组,每组12只;对照组气管内滴入生理盐水,模型组和治疗组气管内滴入博莱霉素(5 mg·kg-1)制备肺纤维化模型.第2天开始治疗组尾静脉注射ScFv(4 mg·kg-1),对照组和模型组给予等量的生理盐水(约100 μl·次-1),3次·周-1.第14、28天分两批处理动物,用HE染色行病理组织学检查并进行纤维化分级,用酸水解法测定肺组织羟脯氨酸的含量.结果:对照组小鼠肺组织无纤维化形成;模型组肺组织可见肺泡破坏,肺泡间隔大量纤维化,肺组织中羟脯氨酸含量及纤维化程度较对照组明显增高(P<0.01).治疗组肺组织纤维化程度较模型组明显减轻,且羟脯氨酸含量较模型组显著降低(P＜0.01).结论:ScFv作为CTGF单链抗体可明显减轻纤维化程度,有可能成为治疗肺纤维化一种新的药物.     

氨茶碱对平阳霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

目的:探讨氨茶碱对平阳霉素诱发的大鼠肺纤维化的干预作用及机制.方法:48只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和氨茶碱组,每组16只.后2组气管内滴入平阳霉素(5 mg·kg-1)制备肺纤维化模型,滴入前1d分别经腹腔注入生理盐水和氨茶碱溶液(60 mg·kg-1),对照组仅给予生理盐水;气管内滴药后第7 d、28 d分2批处理动物,收集血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本.肺组织病理切片行HE和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度;光镜下计数BALF中炎症细胞的数量;根据血浆与BALF上清中总蛋白的含量计算肺通透系数.采用放免法测定BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和血浆中环腺嘌呤单核苷酸(cAMP)浓度,比色法测定肺匀浆中丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)水平.结果:第7 d,模型组肺泡炎明显,氨茶碱组病变较轻微;模型组BALF中炎症细胞总数、肺通透系数均高于对照组和氨茶碱组(P＜0.01);模型组BALF中TNF-α活性和肺匀浆中MDA和HYP水平均高于对照组,氨茶碱组以上各指标均较模型组降低(P＜0.05或0.01).第28 d,模型组出现肺纤维化和蜂窝肺,氨茶碱组病变明显减轻.模型组肺匀浆HYP水平明显高于氨茶碱组;但氨茶碱组血浆中cAMP浓度不论第7 d、28 d均高于模型组.结论:氨茶碱对平阳霉素诱发的肺纤维化有阻断作用,其机制可能与增加cAMP从而缓解肺泡炎有关.     

雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠的干预效果

目的 研究雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的干预作用.方法 45只SD雌性大鼠随机分成3组(每组15只):模型组、对照组和布地奈德吸入组.各组大鼠分别于干预后第7、14、28天用随机数字表法处死5只,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的含量.结果 ①HE和Masson染色结果证实成功复制经典肺纤维化模型,肺纤维化主要发生在肺组织局部,同时伴有不同程度全身反应.②布地奈德吸入组和模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重(P＜0.05),且布地奈德吸入组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较模型组有明显改善(P＜0.05).③ELISA法显示各组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF表达水平不同,BALF中TGF-β和CTGF表达水平较血清水平高.④与对照组比较,模型组和布地奈德吸入组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF明显增加(P＜0.05),布地奈德吸入组中TGF-β和CTGF水平较模型组明显降低(P＜0.05).结论 雾化吸入布地奈德能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能与肺泡灌洗液和血清中TGF-β和CTGF表达有关.     

结缔组织生长因子在实验性大鼠肺纤维化中的变化及N-乙酰半胱氨酸的作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的大鼠肺纤维化模型的肺组织结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的蛋白和基因表达的变化及其意义.方法 取健康、雌性Wistar大鼠30只,随机分为BLM组(B组),NAC治疗组(N组)及正常对照组(C组),每组10只.B组及N组通过气管内注入BLM法制备肺纤维化模型.C组以等量的生理盐水替代,N组于BLM处理前1周及此后每日经强饲法口服NAC(3 mmol/kg).3组动物分别于气管灌注后第7天、第14天随机处死5只,取部分肺组织进行病理检测、免疫组化测定肺组织中CTGF的蛋白表达;RT-PCR检测肺组织CTGF mRNA的表达变化.结果 病理学观察发现B组大鼠肺纤维化程度最重,N组的肺泡炎和肺纤维化程度均比B组减轻(P＜0.05),C组无明显肺泡炎和肺纤维化.B组与C组比较各时间点肺组织的CTGF的蛋白含量均增高(P＜0.05),CTGF mRNA的表达升高(P＜0.05);N组与B组相比较,大鼠肺组织CTGF的蛋白水平显著降低,CTGF mRNA的表达下降(P＜0.05).结论 NAC可以使肺泡炎症及纤维化病变减轻,能降低肺纤维化大鼠肺组织CTGF的蛋白水平,下调CTGF rnRNA的表达,对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化具有显著的抑制作用.     

吉非替尼对博莱霉素致肺纤维化小鼠α平滑肌肌动蛋白的抑制作用

目的 观察吉非替尼对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠a平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达的影响,探讨EGFR在肺纤维化上皮间质转分化中的作用.方法 将30只SPF级雌性BALB/c小鼠分为三组:对照组(气管滴人生理盐水)、纤维化组(气管滴人博莱霉素3 mg/kg )、纤维化吉非替尼干预组(气管滴人博莱霉素+吉非替尼灌胃20 mg/Kg ).实验第14天杀鼠取肺,肺组织石蜡切片行HE染色与Masson染色;RT-PCR法检测a-SMA的mRNA表达水平;免疫组化检测总EGFR,磷酸化EGFR及a-SMA表达.结果 纤维化吉非替尼干预组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积减少,气道上皮及肺间质细胞磷酸化EGFR表达评分下降(P<0.05);同时,肺a-SMA的mRNA表达减少,免疫组化评分也明显降低(P<0.05).结论 吉非替尼抑制博莱霉素诱导小鼠肺纤维化可能与其抑制EGFR活性,下调a-SMA表达有关.     

C型钠尿肽对博莱霉素介导的小鼠肺纤维化的保护作用

目的 观察C型钠尿肽对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的抑制作用.方法 经气管注射博莱霉素制作肺纤维化小鼠模型,将实验动物分为三组,包括空白对照组、博莱霉素处理组(BLM组)和C型钠尿肽干预组(CNP组),于第1、3、7、14天进行肺泡灌洗,回收各组肺泡灌洗液并检测炎性细胞和IL-1β量;记录药物处理后小鼠死亡率;第14天处死小鼠,取肺组织制备病理切片后评价各组模型肺组织形态学变化,测定肺组织匀浆中羟脯氨酸含量.结果 BLM组的肺纤维化和炎症反应较明显,死亡率高;CNP组与BLM组相比,肺纤维化程度减轻,炎性细胞较少,组织羟脯氨酸含量减低,死亡率下降.结论 C型钠尿肽能减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化,与干预炎症因子的产生及纤维化过程有关.     

益气活血法对博莱霉素致肺纤维化小鼠IFN-γ、IL-4的影响

目的研究具有益气活血作用的化纤汤对博莱霉素致肺纤维化小鼠的防治作用,及对肺泡灌洗液(BALF)中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的影响,从而探讨益气活血法治疗肺纤维化的作用机制。方法6～8周龄雄性ICR小鼠分6组,模型组经鼻滴入博莱霉素(BLM)5mg/kg建立肺间质纤维化模型,化纤汤防治组于滴入BLM前48h予化纤汤灌胃,化纤汤治疗组于滴入BLM后第14天化纤汤灌胃;地塞米松防治组及治疗组,并与正常组小鼠进行对照。第28天收获其支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,右肺行苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)三色染色,并观察电镜下细胞超微结构的改变,左肺经酸解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中IFN-γ、IL-4的浓度。结果各药物干预组与模型组比较,小鼠肺系数明显下降(P<0.05);肺泡炎、纤维化程度均有改善(P<0.05),其中化纤汤防治组改善最明显;肺HYP含量下降(P<0.05);模型组BALF中IFN-γ含量明显下降,应用化纤汤可使IFN-γ含量明显高于模型组(P<0.05),而应用地塞米松则无此作用;模型组BALF中IL-4含量明显升高,各药物干预组均可使之下降(P<0.05),而各组之间无明显差异。结论应用中药益气活血法可以明显减轻小鼠肺纤维化进程,不仅降低Ⅱ型细胞因子(IL-4)含量,而且升高Ⅰ型细胞因子(IFN-γ)含量,从而调整Ⅰ型/Ⅱ型细胞因子平衡达到抗纤维化作用。     

鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠肺纤维化模型的建立

目的:通过鼻腔滴注博莱霉素诱导ICR小鼠发病,寻求建立稳定且方法简单的肺纤维化模型。方法:ICR雌性小鼠分为对照组和模型组,模型组鼻腔滴注博莱霉素50μL(15 mg/kg),对照组滴注生理盐水。取小鼠肺组织进行HE、Masson染色、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化及羟脯氨酸含量测定。结果:与对照组小鼠相比,造模后第7天模型组小鼠的肺脏出现急性肺泡炎;第14天时,肺泡炎更加明显,开始出现肺纤维化;第28天时肺泡炎有所减轻,肺纤维化明显加重。第28天时模型组小鼠的肺脏HYP含量、α-SMA水平明显高于对照组。结论:鼻腔滴注博莱霉素(15 mg/kg)可诱导ICR小鼠建立相对稳定的肺纤维化模型。     

青蒿琥酯对肺纤维化大鼠肺泡灌洗液中TGF-β1及TNF-α的影响

目的观察青蒿琥酯对肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液中转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法40只大鼠气管内注入博莱霉素复制肺纤维化模型后,分为青蒿琥酯干预组和模型组,另取20只大鼠为正常对照组。各组动物于造模后第7,14,21,28天分别处死5只。收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本。测定肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1及TNF-α和肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)的浓度;通过HE染色、Masson染色观察肺组织形态的变化。结果①第7天,模型组肺泡炎明显,青蒿琥酯组病变较轻微;第28天,模型组出现肺纤维化和蜂窝肺;青蒿琥酯干预组病变明显减轻。②各时间点青蒿琥酯干预组肺组织HYP含量较模型组明显下降(P<0.01)③各时间点模型组BALF中TGF-β1及TNF-α的水平均高于对照组,青蒿琥酯干预组以上各指标均较模型组降低。结论TGF-β1及TNF-α是肺间质纤维化进展的重要因子,青蒿琥酯能抑制TGF-β1及TNF-α的表达,对博莱霉素诱发的肺纤维化有阻断作用。     

栝蒌薤白汤对肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液中层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原含量的影响

观察栝蒌薤白汤对肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)含量的影响.用平阳霉素复制大鼠肺纤维化模型后,用药组每天灌胃栝蒌薤白汤,28 d后处死,观察各组大鼠肺病理组织学改变.结果:模型组大鼠肺泡炎及纤维化程度、BALF中LN及PC-Ⅲ含量均明显高于正常对照组及用药组(P<0.05).说明栝蒌薤白汤能明显减轻平阳霉素所致的大鼠肺泡炎及纤维化程度,抑制BALF中LN、PC-Ⅲ含量的增高.