分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合，对影响人一鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以PWM TT体外刺激PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高，且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗TT的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定IgG2株，IgM3株。冻存10个月后复苏，传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人IgM的分泌量为0．42～1．15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

抗人肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

用国人肝癌细胞免疫BALB/c鼠,经三次细胞融合、反复筛选及克隆化,得到了15株杂交瘤;又经正常肝组织及肝癌细胞吸收试验,进一步选出两株杂交瘤。它们分别能持续稳定地分泌特异性抗人肝癌单克隆抗体A-QGY_1和A-QGY_2。此两株单克隆抗体只与体外培养或患者组织中的肝癌细胞产生反应,而不与正常成人和胎儿肝组织及其他多种正常或肿瘤组织发生反应,与乙肝病毒抗原及甲胎蛋白、癌胚抗原等也无免疫交叉反应。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备及初步应用

将人绒毛膜促性腺激素(hCG)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,阳性孔经2～3次克隆化、液氮冻存后多次再克隆化和动物接种,获得了12株分泌抗hCG单克隆抗体(McAbs)的稳定杂交瘤株。12种McAbs除1种为IgM外,均为IgG_1;RIA滴度及亲和常数分别在0.2～7.0×10~4和0.4～5.1×10~8M~(-1)之间。有些McAbs已成功地用于血清和尿中hCG一步双位快速ELISA及滋养叶肿瘤组织切片的免疫细胞化学染色等。     

人骨髓间充质干细胞表面抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备人骨髓间充质干细胞(MSCs)的特异性细胞表面抗原的单克隆抗体.方法以人骨髓MSCs为抗原,常规方法免疫Balb/c小鼠,细胞融合制备杂交瘤细胞,并用免疫荧光法在流式细胞仪上对杂交瘤产生的抗体进行初测和复测.结果通过分泌的抗体与人MSCs表面抗原特异性结合的鉴定,进行杂交瘤筛选,将复测为阳性的克隆连续克隆化培养,获得两株持续分泌抗人MSCs的杂交瘤细胞株:8g8、8f9.两株单抗经体外连续传代培养,生长良好,稳定分泌抗体.结论人骨髓MSCs的特异性细胞表面抗原单克隆抗体可望在MSCs的提纯和体外富集、特异性骨病的诊断等方面有广阔的应用前景.     

β_2-微球蛋白单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及鉴定

以人淋巴细胞为抗原免疫BALB/c小鼠,然后取脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,经以人淋巴细胞为抗原的间接ELISA初筛和以纯化的8_2m为抗原的间接ELISA筛选,获一株分泌抗β_2 m抗体的淋巴细胞杂交瘤。两次克隆化后,阳性率达100％。细胞表面抗原免疫荧光试验和兔抗人β_2 m抗血清阻断荧光抗体试验鉴定结果表明,此杂交瘤分泌β_2 m专一性抗体。该抗体为1gG_1。该杂交瘤命名为GA9。     

10株分泌HSV—Ⅱ型单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用HSV-ⅡUW268株免疫BALB/c鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆化后获得10株分泌抗HSV-ⅡUW268株单克隆抗体的细胞系。其中1株仅与HSV-ⅡUW268株发生特异免疫反应,9株与HSV-Ⅱ和HSV-IF_(17)均发生免疫反应。用免疫沉淀试验检测单克隆抗体的Ig类型为IgG_1。保存的杂交瘤细胞仍能稳定地分泌抗HSV-ⅡUW268株的单克隆抗体。     

分泌抗脊髓灰质炎Ⅰ型和Ⅲ型标准强毒株McAb的杂交瘤细胞系

取Polio Ⅰ型Brunhilde株和Ⅲ型Saukett株用腹腔和肌肉注射方法免疫BALB/C小鼠,取免疫脾细胞与NS-1或SP2/0细胞融合,所获分泌特异抗体的杂交瘤细胞克隆化及适应性培养后,测其上清和腹水的中和抗体效价,并检验它们对Polio各型代表毒株的中和活性差异。26次试验共获60个抗Polio Ⅰ型Brunhilde株和48个抗Polio Ⅲ型Saukett株的阳性杂交瘤孔。选其中部分进行克隆化,得19株分泌抗Polio Ⅰ型和6株分泌抗Polio Ⅲ型免疫毒株     

激发型鼠抗人4-1BBL单克隆抗体的研制

目的鼠抗人4—1BBL单克隆抗体的制备及其生物学特性研究。方法以高表达人4—1BBL分子的基因N-程细胞株L929／4—1BBL为免疫原免疫BALB／c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经过选择性克隆化培养及流式细胞术分析,筛选分泌特异性抗A4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株;采用快速定性试纸法鉴定单抗亚类、间接免疫荧光法检测单抗对肿瘤细胞株的识别谱。进而,将所获抗人4-1BBL单抗体外刺激白血病细胞株U937,通过细胞计数法分析单抗对U937生长的影响。结果获得一株持续、稳定分泌鼠抗人4—1BBL单抗的杂交瘤细胞株,并将其分泌的单抗命名为39A8。单抗39A8可有效识别不同肿瘤细胞株表达的4—1BBL,经细胞计数分析,39A8对U937细胞的生长具有明显的促增殖作用。结论单抗39A8是可激发4-1BBL逆向信号的单克隆抗体,是研究4—1BBL分子及其功能的重要工具。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

A human monoclonal antibody HMD4 against ovarian carcinoma associated antigen.

Lymphocytes from regional lymph nodes of patients with ovarian carcinoma were immortalized by fusing them with a nonsecreting cell line of murine myeloma (Sp2/0-Ag14). The fusion rate was 0-87.5%. By early cloning and recloning, a hybrid cell line, named HMD4, was established. It has stably secreted human IgG for more than 15 months. Chromosome analysis showed the characteristics of human-mouse hybridoma. The cells of HMD4 were injected into the abdominal cavities of nude mice and 2-3 weeks later large quantities of ascites were obtained. Human IgG of lambda light chain was detected and purified from the ascites. The specificity of HMD4 human McAb was tested by ABC or PAP immunoperoxidase stainings of paraffin-embedded tissue sections, cryostat sections, cell smears of various tissues and different cancer cell lines. 60.5% (26/43) of epithelial ovarian cancers was positive, while nonepithelial ovarian cancers, most cancers from other organs and almost all nonmalignant and normal tissues were negative. The molecular weight of the antigen recognized by HMD4 was 55 KDa determined by Western blotting. The problems of maintaining the IgG secreting function of human-mouse hybridoma and its screening were also discussed.

     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

Characteristics of monoclonal antibodies against chorionic gonadotropin receptor]

We reported the production of monoclonal antibodies (McAb) against chorionic gonadotropin (CG) receptor by fusing spleen cells of BALB/c mice immunized with purified pseudomonas maltophilia CG receptor with mouse myeloma line (SP 2/0). Four hybridoma cell lines secreting CG receptor McAbs were obtained (ED 490, DG 390, AB 890, GE 590). GE 590 is IgG 1; ED 490, DG 390, AB 890 are IgG2b. I125-HCG and ED 490, DG 390. AB 890 recognized CG receptor different antigenic determinant. Increased concentrations of GE 590 were in inverse proportion to the amount of I125-HCG binding to human ovarian tissues showing that normal ovarian tissues and ovarian malignant tumors have different HCG receptor antigenic determinant. This study indicated that these McAbs may be useful in studying the structure of CG receptor and in providing a valuable evidence for early diagnosis and treatment of ovarian malignant tumors.     

细胞杂交技术及其应用

本文报告了1980年以来我们在细胞杂交技术及其应用研究中取得的各项阶段性成果。在细胞杂交技术方面,用分子量在1000、2000、4000、6000的PEG为融合介质,获得了中国仓鼠成纤维细胞Wg3-h、人HeLa细胞、人胃腺癌细胞SGC-T901的同种异核体,以及雄性麂肺细胞KIZ-7901-中国仓鼠成纤维细胞Wg3-h、中国仓鼠卵巢细胞CHO-人外周血港巴细胞、中国仓鼠卵巢细胞CHO-正常人骨髓细胞、中国仓鼠卵巢细胞CHO-白血病患者骨髓细胞的异种异核体,并成功地显示了上述各种细胞组合的PCC图象。获得了在体外长期传代培养的小鼠骨髓瘤细胞NS-1-Ag8-BALB／c小鼠脾脏淋巴细胞以及小鼠骨髓瘤细胞SP2／0-Ag14-免疫后的BALB／c小鼠脾脏淋巴细胞的种内杂种细胞系。在细胞杂交技术的应用方面,重点在诱导“熟前凝聚染色体”(PCC),分析白血病患者骨髓细胞的群体增殖潜能。并据以判断白血病患者病情进展、疗效和预后,以及制备分泌抗人C4单克隆抗体的杂交瘤细胞系。本文对PEG的融合性能、白血病患者PPI值升高的机制、杂交瘤细胞的亚克隆化等问题进行了初步探讨。     

荧光标记人卵巢癌细胞株的建立

目的 建立稳定高表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人卵巢癌细胞株.方法 采用基因转染的方法,将EGFP基因导入人卵巢癌细胞HO8910PM中,通过G418筛选、亚克隆扩增获得稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-HO8910PM细胞株,并用流式细胞术检测所获细胞株的EGFP表达率,通过细胞生长曲线、黏附实验、侵袭迁移实验比较EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞的生物学行为.结果 筛选出的EGFP-HO8910PM细胞经流式细胞仪检测EGFP阳性表达率达99％以上,EGFP-HO8910PM细胞和HO8910PM细胞生长、黏附及侵袭迁移能力无统计学差异.结论 成功建立了稳定表达EGFP且保持母株细胞特性的人卵巢癌细胞株EGFP-HO8910PM,为人卵巢癌整体活体应用中可视化研究打下基础.     

人卵巢粘液性囊腺癌细胞系的系列研究:I-OMC685细胞系的建立及形态观察

目的：建立一株人卵巢癌细胞系并进行形态观察。方法：用卵巢癌患者手术切除的组织块进行贴壁培养，胰酶消化，传代培养，液氮冷冻保存和复苏，光镜和电镜观察形态。结果：于１９８５年建立了国内第一株人卵巢粘液性囊腺癌细胞系，命名为ＯＭＣ６８５，细胞已传至９１代，冻存８年多的细胞复苏后仍生长良好，性质稳定。光镜和电镜观察证实该细胞系细胞具有腺上皮恶性肿瘤细胞的特性。结论：ＯＭＣ６８５是一株性质稳定，可供科学研究应用的人癌细胞系。     

抗人肺表面活性物质相关蛋白A单克隆抗体的制备及其特性的鉴定

目的 制备抗人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)单克隆抗体并对其特性进行鉴定。方法 以自行制备的SP-A蛋白作为抗原免疫Balb／c小鼠，建立分泌抗人SP-A单抗的杂交瘤细胞株，诱发小鼠产生单抗腹水，用(NH4)2SO4盐析纯化腹水，用间接ELISA法测定单抗效价，用Westemblotting测定抗体特异性。结果 建立了3株能持续分泌抗SP-A单抗的杂交瘤细胞株，其中286杂交瘤细胞株抗体效价最高，其染色体数目均大于100条。间接ELISA法测定腹水和细胞培养上清效价，分别为l：50000和l：10000。用Westem blotting在SP-A蛋白泳道上相对分子质量3l000左右位置出现明显的一条染色条带。结论 自行制备的抗人SP-A单抗，其具有特异性强、效价高的特点。     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

Studies on monoclonal antibody against recombinant human granulocyte colony-stimulating factor.

Three hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies (McAb) against recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF) have been established by fusing mouse myeloma cell line SP2/0 cells with spleen cells from a BALB/c mouse immunized with rhG-CSF. Ascites was obtained from BALB/c mice by injecting the hybridoma cells intraperitoneally. Three McAbs were purified by the caprylic acid-ammonium sulfate method. For each, the IgG subclass, valence and activity, molecular weight, specificity and affinity were determined. The applications of McAbs against rhG-CSF in the clinic and laboratory are discussed.     

乙型肝炎表面抗原亚型决定簇“a”单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本研究中用纯化乙型肝炎表面抗原(HBsAg)“adr”免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP 2/0骨髓瘤细胞在PEG作用下融合。以ELISA和RIA法检测抗体,获得9孔抗-HBs阳性的杂交瘤,经过5次有限稀释,建立4株单克隆细胞。选其中一株SH_1D_9杂交瘤细胞进行体外连续传代,接种小鼠腹腔,抗-HBs滴度在组织培养上清液中为1∶10,000,小鼠腹水为1∶50,000。经特异性、稳定性鉴定,证明其抗-HBs对HBsAg具有持续的和良好的亲和性,正常人血清无交叉反应,经亚型及Ig亚类鉴定为抗-HBs“a”亚型决定簇,IgG型单克隆抗体,杂交瘤细胞染色体平均为104个。本文并对HBsAg免疫Balb/c小鼠采取的不同方案及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的实验方法加以讨论。