树鼩腺病毒(Ⅰ和Ⅱ型)的生物学性状、抗原关系和血清抗体的研究

树鼩已作为实验动物用于各方面的研究.70年代以来,国内、外先后报道的树鼩病毒有疱疹病毒(THV)、腺病毒(TAV.1个血清型)、逆转录病毒、副流感病毒和弹状病毒等.1981～1985年从云南野生树鼩的咽拭子、肾细胞培养物和粪便分离出2个血清型的TAV(TAV-Ⅰ和TAV-Ⅱ),对其生物学特性、抗原关系和血清抗体进行研究报道如下.     

产生抗脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株单克隆抗体细胞系

用Polio病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin疫苗株分别免疫BA1b/c小鼠,取脾脏细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,得到25株具有中和作用的MCAb。其中Sabin-1型13株,Sabin-2型3株,Sabin-3型9株,它们是一些生物学性质各异十分有价值的MCAb。应用Ⅰ型的MCAb对国内64个分离毒株和WHO6个毒株及本实验室4个参考毒株进行了抗体分析工作,初步表明这些MCAb抗体的特性不同,作用位点不同,可将Polio型病毒毒株分作10个亚型,并能对其相互的抗原关系作进一步分析。     

分泌抗脊髓灰质炎Ⅰ型和Ⅲ型标准强毒株McAb的杂交瘤细胞系

取Polio Ⅰ型Brunhilde株和Ⅲ型Saukett株用腹腔和肌肉注射方法免疫BALB/C小鼠,取免疫脾细胞与NS-1或SP2/0细胞融合,所获分泌特异抗体的杂交瘤细胞克隆化及适应性培养后,测其上清和腹水的中和抗体效价,并检验它们对Polio各型代表毒株的中和活性差异。26次试验共获60个抗Polio Ⅰ型Brunhilde株和48个抗Polio Ⅲ型Saukett株的阳性杂交瘤孔。选其中部分进行克隆化,得19株分泌抗Polio Ⅰ型和6株分泌抗Polio Ⅲ型免疫毒株     

氯化铯密度梯度离心纯化轮状病毒

纯化是研究病毒理化特性、生物学和免疫学特性的重要步骤和要求。在纯化病毒的方法中，氯化铯（CsCl）密度梯度离心法是较为常用的方法之一，方法简便易行，获得的病毒样品较纯。本文报道一种轮状病毒（RV）的CsCl密度梯度离心纯化方法，在离心前用聚乙二醇（PEG 6000）浓缩得到的病毒增殖液中加入56％CsCl，使其成为均匀混合液，经水平转头密度梯度离心后，可以将病毒分成3条乳白色区带。在密度梯度离心前，病毒样品是否用三氟三氯乙烷抽提，结果也有差别。经SDS—PAGE、Western、病毒的感染性滴度测定结果表明，所纯化的病毒具有较高的纯度和很好的回收率。     

抗脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株的McAb

用Polio 3个血清型的Sabin疫苗株LSc2ab (Sabin-1)、P712ch2ab (Sabin-2)和Leon12a,b (Sabin-3),分别免疫小鼠,取其牌细胞与SP2/0细胞融合,12次试验共获101个分泌特异抗体的阳性杂交瘤孔。经克隆化,抗Sabin-1、Sabin-2和Sabin-3的分别有13、3和9株。取其培养上清和腹水与10个强弱代表毒株进行交叉中和试验,结果证明,上述细胞所分泌的McAb,对型间毒株均无交叉反应,具有严格的型特异性。     

树鼩EB病毒有关补体结合抗体的研究

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清EB病毒有关补结抗体动态,初步探讨它的特异性及与树鼩自身疱疹病毒感染间的关系。 材料和方法 (一)血清来源 采自云南中部的树鼩(Tupaiabelangeri chinensis)。从1:5稀释度开始试验。 (二)补结试验方法 含EB病毒的B95-8细胞株(本院肿瘤所提供)和不含EB病毒的BJAB细胞株(本院病毒所提供)的粗制抗原用常规传代细胞制备,PBS洗涤并配成约10~7细胞/毫升,用液氮冻融或     

增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达

目的构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与轮状病毒（RV）VP6基因融合表达载体,研究融合蛋白表达及在细胞中的分布。方法提取A组人RVTB-Chen株VP6基因,用PCR扩增VP6编码cDNA片段。将此基因片段与真核表达载体pEGFP-C1携带的EGFP融合;运用脂质体的方法,将获得的重组质粒转染到MA104细胞中,在荧光显微镜下观察蛋白的表达及其在细胞中的分布情况。结果成功构建了融合表达质粒;转染细胞后,融合蛋白可在MA104细胞中表达且主要分布在胞质中。结论RVVP6可与EGFP融合表达,融合蛋白在细胞质中呈均匀的分布,与RV感染细胞中合成的VP6蛋白的分布有较大的差别。     

轮状病毒感染细胞蚀斑纯化及感染性滴度测定

目的 建立稳定易操作的轮状病毒（RV）蚀斑滴定方法，为纯化和定量测定RV感染性研究提供简易可行的技术。方法 胰酶处理的SAll和Wa株RV吸附MA104细胞单层，覆盖0．9％琼脂（含1μ/ml胰酶），4天后再覆盖一层含有0、9％中性红的琼脂，观察和计数蚀斑，经蚀斑纯化和传代，测定病毒感染性滴度。结果 第二层琼脂覆盖后1～2天可见到明显的蚀斑形成；经蚀斑纯化后病毒感染性滴度可达10^7～10^8（PFU／ml）；可提高0．62（Wa）和0．73（SAll）（LgPFU／ml）感染性滴度。结论 建立了RV蚀斑纯化和蚀斑滴定测定法简便可行，为进一步研究RV的感染性及免疫原性提供了可靠的实验基础。     

抗脊髓灰质炎Ⅰ型病毒Brunhilde株的单克隆抗体

近两年来,应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎(Polio)病毒的单克隆抗体(McAb),国内外均有报道。我们继1981年建立7株分泌抗Polio Ⅱ型病毒McAb的杂交瘤细胞系后,又进行了抗PolioⅠ型病毒McAb的研究,获得阳性杂交癌细胞19株。 材料与方法 (一)病毒株 PolioⅠ型的Brunhilde、Mahoney、LSc2ab和中Ⅰ_0株,Ⅱ型MEF_1株和Ⅲ型Saukett株,均为本所保存毒株。