小檗碱诱导大鼠神经元毒性死亡的研究

目的：研究小檗碱对原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元的直接作用及Ｂｅｒ与间接胆红素的相互作用。方法；采用二乙酸荧光素（ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ＤＮＡ染色法，观察神经元的存活率及形态学特征；用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析Ｂｅｒ诱导神经元死亡的生化学特征。结果：Ｂｅｒ呈剂量（０￣２０μｍｏｌ／Ｌ）依赖性诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元死亡。其死亡的机制呈现坏死的特征：包括神     

小檗碱诱导大鼠神经元毒性死亡的研究

目的：研究小檗碱（Ｂｅｒ）对原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元的直接作用及Ｂｅｒ与间接胆红素的相互作用。方法：采用二乙酸荧光素（ＦＤＡ）和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＤＮＡ染色法，观察神经元的存活率及形态学特征；用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析Ｂｅｒ诱导神经元死亡的生化学特征。结果：Ｂｅｒ呈剂量（０～２０μｍｏｌ／Ｌ）依赖性地诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元死亡。其死亡的机制呈现坏死的特征：包括神经元胞体肿大、无明显核染色质浓缩、ＤＮＡ随机断裂而在凝胶电泳图上呈弥散样改变、流式细胞仪分析未见凋亡峰。用蛋白质合成抑制剂预处理神经元，不能阻断Ｂｅｒ的神经毒性作用。无毒性剂量下的Ｂｅｒ（１μｍｏｌ／Ｌ）与无毒性剂量下的胆红素相加，可产生神经元的毒性。结论：Ｂｅｒ诱导原代培养的大鼠大脑皮质和小脑颗粒神经元坏死，并增强胆红素的神经毒性作用。     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞凋亡的实验研究

观察幽门螺杆菌（Ｈｐ）对胃上皮细胞凋亡与增殖的影响。方法用粗制Ｈｐ总蛋白与胃上皮细胞细胞株ＭＫＮ－２８共同孵育,测定细胞增殖（ＭＴＴ染色）与细胞凋亡（ＤＮＡ梯度、流式细胞仪和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色法）。结果粗制Ｈｐ总蛋白能明显抑制胃上皮细胞的增殖,促进胃上皮细胞的凋亡,且此作用随着作用浓度的提高和时间的延长而增加。结论Ｈｐ可能通过促进胃上皮细胞凋亡导致胃癌和溃疡     

γ—射线诱导HL—60细胞凋亡的观察

目的 观察γ－射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的时间和剂量效应,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡分子机制。方法 分别以２．５、５、７．５、１０、１５Ｇｙ γ－射线照射ＨＬ－６０细胞,于照后继续培养３、６、９、１２、２４、２７、３０ｈ,分别收获细胞。电泳检测ＤＮＡ梯状带;流式细胞术（ＦＣＭ）细胞凋亡定量并观察细胞周期变化;Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＰＩ复染荧光显微镜计数凋亡细胞及已死亡细胞百分率。结果 ＨＬ－     

茶碱对小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及其作用机理

为探讨茶碱对神经元凋亡的影响及其作用机理,建立小脑颗粒神经元的低钾凋亡模型,用ＤＮＡ凝胶电泳、ＦＤＡ染色和放射免疫等方法,发现经不同浓度茶碱（１～２０ｍｍｏｌ／Ｌ）处理,低钾培养的小脑颗粒神经元存活率相应提高２２％～１００％,量效关系有高度显著性（Ｐ＜０．０１）,ＥＣ５０＝２．９７ｍｍｏｌ／Ｌ;经茶碱（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）处理的细胞,其ＤＮＡ凝胶电泳带没有“梯子”状分布;与不同浓度茶碱（５～８０ｍｍｏｌ／Ｌ）在ＣＯ２培养箱孵育１５ｍｉｎ,小脑颗粒神经元内ｃＡＭＰ均升高,且是剂量依赖性的。认为茶碱对撤去极化浓度氯化钾诱发小脑颗粒神经元的凋亡有保护作用,此作用产生除与其升高小脑颗粒神经元内ｃＡＭＰ有关外,还有其它机理。     

荧光微量检测细胞内DNA与蛋白质含量

应用荧光试剂（３３２５８Ｈｏｅｃｈｓｔ）微量测定细胞内ＤＮＡ含量,应用荧光胺（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）微量测定细胞内蛋白质含量。结果：荧光试剂与ＤＮＡ的Ａ－Ｔ碱基形成复合物后,其激发波长（ＥＸ）由３２０ｎｍ移至３５０ｎｍ,发射波长（ＥＭ）由４８０ｎｍ移至４６０ｎｍ,且荧光强度大为增强。荧光胺与蛋白质反应生成强荧光化合物,在ＥＸ３９０ｎｍ,ＥＭ４７５ｎｍ条件下最低检测限为０．５μｇ／μｌ。该法操     

氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞凋亡及其分子学机制 …

目的 研究氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）诱导血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡的机制。方法 采用电镜观察、Ｈｏｅｃｈｅｔ３３３４２染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ印迹分析法观察Ｏｘ－ＬＤＬ诱导ＶＳＭＣｓ调亡的效应及其分子学机制。结果Ｏｘ－ＬＤＬ作用ＶＳＭＣｓ２４ｈ后,电镜下ＶＳＭＣｓ出现凋亡的形态学特征：细胞核固缩、凋亡小体形成;Ｈｏｅｃｈｅｓｔ３３３４２染色可见,凋亡的细胞核或细胞质内出     

荧光微量检测细胞内DNA与蛋白质含量

应用荧光试剂（３３２５８Ｈｏｅｃｈｓｔ）微量测定细胞内ＤＮＡ含量,应用荧光胺（Ｆｌｕｏｒｅｓｃａｍｉｎｅ）微量测定细胞内蛋白质含量。结果：荧光试剂与ＤＮＡ的Ａ－Ｔ碱基形成复合物后,其激发波长（ＥＸ）由３２０ｎｍ移至３５０ｎｍ,发射波长（ＥＭ）由４８０ｎｍ移至４６０ｎｍ,且荧光强度大为增强。荧光胺与蛋白质反应生成强荧光化合物,在ＥＸ３９０ｎｍ,ＥＭ４７５ｎｍ条件下最低检测限为０．５μｇ／μｌ。该法操作简便,微量快速,重复性好。可用于荧光微量测定ＤＮＡ与蛋白质含量,还可用于观察细胞的增殖。     

蛋白合成抑制剂促进TNFα诱导大肠癌细胞凋亡

目的探索放线菌酮和ＴＮＦ。协同诱导人大肠癌Ｌ。ＶＯ细胞凋亡的发生规律。方法用细胞体外培养方法，以放线菌酮和均小剂量作用于人大肠癌ＬｏＶｏ细胞，经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察形态改变，并用流式细胞术检测ＤＮＡ断裂情况。结果单用ＴＮＦａ５万［Ｊ／Ｌ或放线菌酮４ｍｇ／Ｌ，均未引起ＬｏＶｏ细胞凋亡效应。而两者协同，作用１２ｈ至４８ｈ，ＬＯＶＯ细胞逐渐出现明显的凋亡形态学改变和ＤＮＡ断裂。结论小剂量的放线菌阴和ＴＮＦＱ协同作用于人大肠癌Ｌ。ＶＯ细胞，出现明显的凋亡效应。     

p38 MAPK抑制剂通过抑制JNK活性抑制培养的小脑颗粒神经元凋亡

【目的】研究特异性p38分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB203580对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子（KCl25mmol*L-1）的培养基中转移至低钾培养基（KCl5mmol*L-1）中诱导神经元凋亡。凝胶电泳分析DNA片段,SAPK/JNK分析盒测定c-JunN-末端蛋白激酶(JNK)活性。【结果】低钾诱导小脑颗粒神经元的具有典型形态学和生化特征的凋亡。特异性的p38MAPK抑制剂SB203580通过抑制细胞凋亡,促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元存活。这种保护作用具有浓度依赖性。培养于低钾环境中的颗粒神经元,c-Jun表达和磷酸化水平升高了,且激活了JNK活性。当小脑颗粒神经元生长在含SB20358025μmol*L-1的低钾培养基中,c-Jun表达、磷酸化水平和JNK活性都明显降低。【结论】SB203580抑制JNK活性,降低c-Jun的磷酸化而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用。     

榄香烯吗素与阿霉素联合应用对CEM／ADM细胞生长的影响

应用台盼蓝排染法,Ｗｉｒｇｈｔ－Ｇｉｅｍｓａ混合染色法,Ｈｏｅｃｈｓｔ３３４２荧光染色法及碘化丙啶（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ,ＰＩ）与Ｈｏｅｃｈｓｔ－３３４２共染计数坏死细胞的ＰＩ阳性率测定法,研究β－榄香烯吗素（ＰＩＣ－ＢＥ）及其与阿霉素（ＡＤＭ）联合应用对ＣＥＭ．ＡＤＭ细胞生长的影响。结果显示：①ＰＩＣ－ＢＥ能够显著抑制ＣＥＭ．ＡＤＭ细胞的生长,并诱导该细胞凋亡,其作用强度在一定范围内     

β—榄香烯吗素对K562细胞凋亡的诱导作用

研究榄香烯吗素对Ｋ５６２细胞凋亡的诱导。采用人工红白血病细胞株Ｋ５６２细胞常规培养，给不同浓度的榄香烯吗素，在不同的时间取细胞，用台盼蓝排染法，ＤＮＡ荧光染料Ｈｏｐｅｃｈｓｔ３３３４２荧光染色法，及碘化丙与Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２共染计数坏互细胞的ＰＩ阳性率测定法，检测其对Ｋ５６２细胞的影响。     

海洋甾体YC-1抑制低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元的凋亡

【目的】观察海洋甾体YC 1对低钾 (5mmol/L ,lowK )诱导小脑颗粒神经元凋亡的影响 ,并对其机制进行初步探讨。【方法】小脑颗粒神经元原代培养 ;采用二乙酸荧光素 (fluoresceindiacetate ,FDA)和Hoechst 332 5 8DNA染色法观察神经元存活率及形态学特征 ;用琼脂糖凝胶电泳分析神经元死亡的生化特征。【结果】低钾引起小脑颗粒神经元凋亡。Hoechst332 5 8DNA染色表现出染色体固缩 ,DNA凝胶电泳表现出由大小不一的断裂DNA片段形成的“梯形”条带。YC 1(1 2 5～ 2 0 μmol/L)呈时间和剂量依赖性地抑制上述现象的出现。蛋白质合成抑制剂放线菌酮 (cycloheximide)不能改变由不同孵育时间造成的YC 1对神经元不同保护效果的差异。【结论】YC 1抑制低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡 ,YC 1的这一作用可能属于一非基因效应。     

二苯乙烯类化合物对肺癌细胞株生长的抑制作用

研究二苯乙类类化合物（含３种结构类的成分：（１）（＋）－α－ｖｉｎｉｆｅｒｉｎ，（２）ｍｉｙａｂｅｎｏｌＣ，（３）ｋｏｂｏｐｈｅｎｏｌＡ，一种蛋白激酶对人肺癌细胞株Ａ５４９，９５－Ｄ，ＳＰＣ－Ａ－１，ＮＣＩ－Ｈ４６０及ＮＣＩ－Ｈ４４６细胞体外生长的抑制作用。方法锥虫蓝排除法ＭＴＴ法，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８ＡＰＯ ＩＱ ＩＶＳ ＱＣ ＥＹ 凝胶电泳 。结果药物处理时间越长及浓度越高，细胞生长抑制作     

JNK抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

[目的]研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。[方法]把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl 25mmol/L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl 5mmol/L)中诱导神经元凋亡。以Western blot法检测JNK和c-Jun的磷酸化水平。[结果]低钾(KCl 5 mmol/L)磷酸化并激活JNK,诱导c-Jun磷酸化和小脑颗粒神经元凋亡。SP600125通过抑制c-Jun磷酸化而浓度依赖性地促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。其保护作用的半数有效量(ED_(50))为1.01μmol/L。[结论]SP600125通过特异性地抑制JNK活性而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用;提示JNK是介导低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关键激酶,它可能可以作为干扰神经元凋亡的药物的作用靶点。     

胆红素诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的研究

目的从细胞与分子水平探讨胆红素神经毒性的机制。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒和大脑皮质神经元,观察胆红素对其毒性的影响。并用ＤＮＡ染色及琼脂糖凝胶电泳法确定胆红素诱导神经元死亡时的形态学及生物化学改变的特征。结果胆红素在０～１７μｍｏｌ／Ｌ的浓度下,选择性地、剂量与时间依赖性地诱导小脑颗粒神经元死亡,呈现凋亡的特征为：核染色质浓缩与ＤＮＡ双链断裂成小片段;在凝胶电泳图上呈“梯形”样改变;用ＲＮＡ和蛋白质合成抑制剂预处理神经元,可阻断其死亡。说明胆红素诱导小脑神经元死亡的过程需要蛋白质的合成。而此浓度的胆红素对大脑皮质神经元的毒性明显低于小脑神经元。结论胆红素可以选择性地诱导小脑颗粒神经元凋亡。     

JNK抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

【目的】研究特异性c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。【方法】把体外培养的小脑颗粒神经元从含去极化浓度钾离子(KCl 25mmol／L)的培养基中转移至低钾培养基(KCl 5mmol／L)中诱导神经元凋亡。以Western blot法检测JNK和c-Jun的磷酸化水平。【结果】低钾(KCl 5mmol／L)磷酸化并激活JNK，诱导c-Jun磷酸化和小脑颗粒神经元凋亡。SP600125通过抑制c-Jun磷酸化而浓度依赖性地促进低钾环境中培养的小脑颗粒神经元的存活。其保护作用的半数有效量(ED50)为1．01μmol／L。【结论】SP600125通过特异性地抑制JNK活性而对低钾培养的小脑颗粒神经元具有保护作用；提示JNK是介导低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的关键激酶，它可能可以作为干扰神经元凋亡的药物的作用靶点。     

ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用

目的 探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制.方法 体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响.结果 低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物.分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P＜0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P＞0.05).结论 低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡.     

二苯乙烯类化合物对肺癌细胞株生长的抑制作用

目的研究二苯乙烯类化合物（含３种结构类似的成分：（１）（＋）－α－ｖｉｎｉｆｅｒｉｎ，（２）ｍｉｙａｂｅｎｏｌＣ，（３）ｋｏｂｏｐｈｅｎｏｌＡ，一种蛋白激酶Ｃ抑制剂）对人肺癌细胞株Ａ５４９，９５－Ｄ，ＳＰＣ－Ａ－１，ＮＣＩ－Ｈ４６０及ＮＣＩ－Ｈ４４６细胞体外生长的抑制作用。方法锥虫蓝排除法、ＭＴＴ法、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色及ＤＮＡ凝胶电泳。结果药物处理时间越长及浓度越高，细胞生长抑制作用越强，其中Ａ５４９细胞株ＩＣ５０为２０μｍｏｌ／Ｌ，敏感性最高，而ＮＣＩ－Ｈ４６０及ＮＣＩ－Ｈ４４６的ＩＣ５０为２００μｍｏｌ／Ｌ，敏感性最低；荧光染色结果为所有经药物处理的肺癌细胞的染色质均产生凝集现象，在ＤＮＡ凝胶电泳图中，出现梯状ＤＮＡ电泳条带。结论二苯乙烯类化合物可显著抑制Ａ５４９细胞的生长，且这种抑制作用表现出时间及浓度依赖性；此化合物对ＮＣＩ－Ｈ４６０及ＮＣＩ－Ｈ４４６细胞的生长未表现明显的抑制作用。另外，此类化合物体外可诱导肺癌细胞产生凋亡现象     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。