人乳腺癌细胞MCF-7紫杉醇耐药株的建立及其生物学特性研究

目的建立紫杉醇(Taxol)的人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/Taxol,并初步研究其生物学特性。方法采用低浓度加量持续诱导法建立MCF-7/Taxol;细胞模型的多药耐药性以SRB法检测;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组化法检测细胞表型变化;高效液相鉴定细胞中药物蓄积;光镜和电子扫描显微镜观察细胞形态。结果SRB法检测,MCF-7/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50)是亲代MCF-7细胞的525倍,撤药3mon后细胞的耐药指数保持在150倍以上,并对羟喜树碱、表柔比星、多柔比星、米托蒽醌、硫酸长春新碱、博来霉素和丝裂霉素等多种化疗药物产生交叉耐药性。MCF-7/Taxol细胞分化程度低于同步传代的MCF-7细胞,倍增时间明显高于亲本细胞,S期细胞明显增加,G1期细胞减少;随撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快。MCF-7/Taxol细胞P-gp、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER、PR阳性表达丢失;光镜下MCF-7/Taxol细胞明显变大并且形态不规则;电镜下其表面纤绒毛成小球状隆起和絮状突起;在稳定生长的耐药细胞和撤药培养的细胞中都有Taxol蓄积。结论该MCF-7/Taxol模型具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药机制药的研究,推测耐药细胞株中含有天然MCF-7肿瘤干细胞。     

人乳腺癌细胞系MCF-7/W和MCF-7/ADM细胞中阿霉素结合蛋白的分析

目的通过比较野生型和耐药型人乳腺癌细胞系MCF-7中阿霉素(ADM)结合蛋白的差异,探讨耐药型MCF-7的多药耐药机制。方法酯化脱水法制备生物素化ADM,HPLC纯化,MS分析确证。以ADM耐药指数≥200的MCF-7细胞(MCF-7/ADM)和野生型MCF-7细胞(MCF-7/W)为研究材料,采用链亲和素-亲和甄别磁珠法从两种细胞全蛋白中分离出与ADM结合的蛋白。经SDS-PAGE,肽质谱指纹图谱(MALDI_TOF_MS)分析ADM结合蛋白的种类。细胞迁移实验比较MCF-7/W和MCF-7/ADM细胞的运动能力。结果生物素化ADM、ADM对MCF-7/W的IC50分别为0.796μmol.L-1和0.547μmol.L-1。分别从MCF-7/W和MCF-7/ADM中采用亲和甄别磁珠法获得ADM结合蛋白20种及17种,SDS-PAGE分析两者有一条差异条带,序列分析共同蛋白为myosin,beta-actin,alpha-actin,keratin。MCF-7/W和MCF-7/ADM细胞在培养72h后,前者的迁移速度较快。结论除了因方法学灵敏度限制未能解析的结合蛋白外,MCF-7细胞内的主要ADM结合蛋白是细胞骨架蛋白和参与细胞运动的蛋白。ADM与MCF-7细胞中的骨架蛋白结合后,对细胞的迁移运动有一定的影响作用。     

乳腺癌细胞的HER2过表达降低其对紫杉醇的药物敏感性

目的紫杉醇的耐药性由多种因素引起,本文研究乳腺癌细胞中的HER2蛋白水平是否影响细胞对紫杉醇的药物敏感性。方法以HER2低表达的MCF-7/pcDNA3.1细胞和经稳定转染获得的HER2高表达的MCF-7/HER2细胞为研究对象,MTT方法测定紫杉醇对这两种细胞的生长抑制作用,流式细胞仪测定紫杉醇对细胞周期分布的影响,An-nexin V-FITC/PI实验测定紫杉醇诱导的细胞凋亡,两种细胞的裸鼠移植瘤实验测定紫杉醇的抑瘤率。结果紫杉醇对MCF-7/HER2细胞的IC50值是MCF-7/pcDNA3.1细胞的6.2倍;紫杉醇诱导细胞G2/M期阻滞,且是HER2非依赖性的;0.01、0.1和1.0μmol.L-1紫杉醇诱导MCF-7/pcDNA3.1细胞凋亡的百分比分别是15.1%±2.1%、21.0%±2.9%和35.7%±3.8%,诱导MCF-7/HER2细胞凋亡的百分比分别是7.5%±1.7%、14.1%±2.3%和24.2%±3.4%,同一浓度的紫杉醇诱导两细胞的凋亡百分比差异有显著性;5、10和20 mg.kg-1的紫杉醇对裸鼠移植MCF-7/pcDNA3.1肿瘤生长抑制率分别是36.9%、58.7%和75.4%,对裸鼠移植MCF-7/HER2肿瘤生长抑制率分别是20.1%、33.3%和67.3%。在相同剂量下紫杉醇对裸鼠移植的两种肿瘤的抑瘤率差异有显著性。结论HER2蛋白的高表达可降低乳腺癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

地塞米松诱导乳腺癌细胞对紫杉醇耐药的研究

目的:探讨紫杉醇(PTX)对不同浓度地塞米松(DEX)预处理人乳腺癌细胞MCF-7耐药及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酯酶-1(MKP-1)mRNA表达的影响。方法:四唑盐(MTT)试验测定紫杉醇对MCF-7细胞的存活率,筛选出药物的半数抑制浓度(IC50)。用不同浓度地塞米松预处理MCF-7细胞,再予紫杉醇作用于MCF-7细胞,MTT试验测定细胞存活率,RT-PCR法检测细胞中MKP-1 mRNA的表达水平。结果:不同浓度的地塞米松预处理MCF-7细胞后能诱导其对紫杉醇产生耐药,细胞耐药率及MKP-1 mRNA的表达水平随着地塞米松浓度的增加而增高。结论:地塞米松预处理MCF-7细胞后能诱导其对紫杉醇产生耐药,其机制可能与MKP-1抑制细胞凋亡而介导乳腺癌耐药有关。     

阿霉素和紫杉醇诱发的人乳腺癌耐药细胞株的比较研究

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7Adr及MCF-7Tax。SRB法测定细胞生长曲线、半数致死浓度(IC50)、耐药指数(RF)和耐药谱;显微镜观察细胞形态,FCM分析细胞动力学周期,免疫组化检测细胞表型变化;Hoechst33342染色分析侧群细胞(side population,sp)比例。结果MCF-7Adr及MCF-7Tax细胞较MCF-7亲本细胞对相应药物的IC50提高500倍,撤药培养100 d后RF仍维持在150倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的亲本细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,但S期细胞明显增加,G1期细胞减少,且随着撤药时间的延长,耐药细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER阳性表达丢失;耐药细胞中SP细胞比例明显增高。结论MCF-7Adr和MCF-7Tax具有多药耐药细胞的基本生物学共性,两者均可作为研究MDR机制的耐药细胞模型。     

索拉非尼联合紫杉醇体外抗肺癌A549/Taxol细胞作用机制研究

目的：探讨索拉非尼联合紫杉醇体外对肺癌A549/Taxol细胞的作用机制。方法将对数生长期的A549/Taxol细胞进行分组,空白对照组和药物处理组,药物处理组包括紫杉醇组、索拉非尼组、紫杉醇联合索拉非尼组,各组分别加入不同浓度的相应药物。利用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度紫杉醇及其联合索拉非尼对A549/Taxol细胞增殖与凋亡的影响。通过蛋白印迹法、Real-Time PCR观察埃兹蛋白( Ezrin)、磷酸化埃兹蛋白( p-Ezrin)及抗凋亡蛋白(bcl-2)的表达水平。结果与空白对照组比较,紫杉醇组与索拉非尼组分别随着浓度的增加对细胞生长的抑制作用逐渐加大(P<0．05),相对于上述3组,索拉非尼联合紫杉醇组抑制细胞生长更显著(P<0．01);空白对照组A549/Taxol细胞凋亡率仅为6%,紫杉醇组为14%,索拉非尼组为8%,而紫杉醇联合索拉非尼组明显提高为50%,与前3组比较,差异有统计学意义(P<0．01,P<0．05,P<0．01);与空白对照组相比,索拉非尼组、紫杉醇组bcl-2基因表达水平显著下降(P<0．05),而索拉非尼联合紫杉醇组bcl-2表达水平显著低于上述3组(P<0．01);与空白对照组比较,紫杉醇组、索拉非尼组Ezrin、p-Ezrin均有所下降( P<0．05),紫杉醇联合索拉非尼组的Ezrin、p-Ezrin得到明显抑制(P<0．01)。结论索拉非尼联合紫杉醇用药可通过抑制Ezrin及其Bcl-2表达,促进肺癌A549/Taxol细胞凋亡,具有抗肿瘤的作用。     

异甘草酸镁注射液联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞株凋亡及其机制

目的 探讨异甘草酸镁注射液、紫杉醇以及两药联合诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡作用及分子机制。方法 将不同浓度的异甘草酸镁注射液单药以及联合紫杉醇干预乳腺癌细胞MCF-7,采用细胞增殖毒性(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白磷酸化B淋巴细胞瘤-2基因(phosphate-B-cell lymphoma-2,pBcl-2)、半胱天冬酶 (cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-3以及缺口蛋白(Notch)通路Notch2的表达情况。结果 异甘草酸镁注射液处理48 h对乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖具有抑制作用,并在100 mmol/L达到最大值27%;两药联合组对MCF-7细胞增殖的抑制作用较单药组明显增强尤其在100 μmol/L(60.89% 比26.98%,t=-0.017,P<0.05);两药联合处理MCF-7细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均与空白对照组、异甘草酸镁注射液组和紫杉醇组差异有统计学意义(F=209.839,P<0.001;F=40.742,P<0.001);凋亡相关蛋白pBcl-2在空白对照组、异甘草酸镁注射液组、紫杉醇组和联合组差异有统计学意义,F=11.064,P<0.001,联合组的pBcl-2蛋白表达均高于其他三组(1.94,0.79,0.83和1.01,均P<0.001)。与空白对照组相比,异甘草酸镁联合紫杉醇可上调细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Notch2表达(3.17 比 2.01,P=0.027;1.17 比 0.67,P=0.018),联合组与单药紫杉醇的Casepase-3和Notch2表达差异无统计学意义(3.17 比 2.46,P=0.160;1.17 比0.82,P=0.121)。结论 异甘草酸镁注射液与紫杉醇能协同诱导乳腺癌细胞MCF-7的细胞凋亡,其机制可能与部分促进紫杉醇通过Notch通路上调MCF-7细胞pBcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表达有关。     

MiR-497-5p对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-497-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞的影响,并探讨其作用机制。方法取乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇。将MCF-7/紫杉醇细胞,分别转染miR-497-5p模拟物(miR-497-5p mimics组)、miR-497-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-497-5p抑制剂(miR-497-5p inhibitor组)及miR-497-5p抑制剂阴性对照(NC组)。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-497-5p表达,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的表达。结果miR-497-5p在MCF-7/紫杉醇细胞中表达水平0.44±0.02,显著低于MCF-7细胞的0.73±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后miR-NC组、miR-497-5p mimics组、NC组及miR-497-5p inhibitors组细胞增殖抑制率分别为(19.67±2.08)%,(46.33±5.86)%,(17.33±1.53)%,(9.33±3.51)%;细胞凋亡率分别为(4.18±0.07)%,(16.37±1.10)%,(5.56±0.41)%和(2.44±0.13)%,以上指标,miR-NC组与miR-497-5p mimics组相比,NC组与miR-497-5p inhibitors组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-497-5p mimics组中PD-L1蛋白表达显著较miR-NC组低;miR-497-5p in-hibitor组中PD-L1蛋白表达显著较NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-497-5p通过调控PD-L1表达抑制乳腺癌紫杉醇耐药细胞增殖并促进细胞凋亡。     

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg&#183;ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23&#177;0．04）μg&#183;ml^-1和（0．26&#177;0．02）μg&#183;ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63&#177;0．31）μg&#183;ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞系的建立及生物学特性研究

目的 探讨紫杉醇(Taxol)诱导的人肺腺癌细胞A549耐药细胞系A549/Taxol生物学特性和耐药机制.方法 采用Taxol浓度递增间歇诱导法,建立A549/Taxol细胞系,MTT法测定耐药性,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室法检测细胞侵袭力,荧光定量RTPCR检测乳腺癌易感基因1(BRCA1)、受体相关蛋白80(RAP80)、微管相关蛋白T(Tau)、多药耐药基因1(MDR1)mRNA表达水平.结果 A549/Taxol细胞对Taxol及多西紫杉醇均有耐药性,对前者耐药性更强(RI=48.36 vs.27.21)(P＜0.01).与A549细胞相比,A549/Taxol细胞G1期的细胞比例增加[(50.56±0.25)％ vs.(57.75±0.16)％],而S期细胞比例减少[(37.85±1.48)％ vs.(30.21±1.87)％],细胞凋亡率增加幅度减小[(56.43±1.12)％ vs.(9.23±1.18)％],细胞侵袭力增强[(38.6±9.97)个vs.(116.8±21.73)个],BRCA1、RAP80 mRNA表达降低,而MDR1、Tau mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论 成功建立Taxol耐药细胞系A549/Taxol,有助于进一步研究肺癌耐药机制.     

白藜芦醇抑制耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖的研究

目的观察白藜芦醇对耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖和细胞周期的影响及探讨其靶点蛋白质。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、光学显微镜观察观察白藜芦醇对MCF-7/ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响,Western blot法、亲和甄别磁珠法鉴定白藜芦醇的靶点蛋白质。结果白藜芦醇作用MCF-7/ADM 72 h之后,细胞增殖大量下降并且呈剂量依赖关系,而对正常肝细胞毒性很小。白藜芦醇可导致MCF-7/ADM细胞阻滞于G0/G1期。Cdk2、myosin和actin蛋白可能是白藜芦醇的靶点蛋白质之一。结论白藜芦醇可能是1种新发现的Cdk2的抑制剂,同时通过作用于细胞的骨架结构蛋白质来干扰细胞的有丝分裂过程,使细胞周期延长从而导致MCF-7/ADM的增殖受到抑制。提示白藜芦醇是1种活性强、低毒的抗癌化学前体分子。     

Proteomic analysis of prodigiosin-induced apoptosis in a breast cancer mitoxantrone-resistant (MCF-7 MR) cell line

Summary Prodigiosin (PG) is a bacterial, red-pigmented antibiotic with immunosuppressive and apoptotic activities. To better understand its mechanisms of action, we tried to identify proteins associated with apoptosis induced by PG. For this purpose, the variation of protein expression on exposure to apoptotic concentrations of PG was examined, by high-resolution two-dimensional gel electrophoresis (2D-E), in the MCF-7 cancer cell line resistant to mitoxantrone (MCF-7-MR). Six PG apoptosis-associated protein spots were further characterized by complementary peptide mass fingerprinting and tandem mass spectrometry data obtained on a matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight/time-of-flight (MALDI-TOF/TOF) mass spectrometer. The proteins identified were involved in various cellular functions, including cell defence, DNA repair and cellular organization. Our data provide novel information on cell response to PG, a new apoptotic drug with interesting anticancer activity.     

抗人stathmin单克隆抗体及其联合紫杉醇对人乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别单用或联用对乳腺癌细胞系MCF-7的生长抑制及促凋亡作用。方法：以不同浓度的抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的空白对照组,分别作用于MCF-7细胞24、48、72、96h,观察细胞数量和形态的变化。MTT法检测单克隆抗体、紫杉醇单用组、联用组以及对照组对MCF-7细胞的增殖抑制作用,用流式细胞仪通过AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡率的改变。结果：不同浓度的各实验组作用后细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联用组细胞抑制率较单药组明显增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,两药联用有交互效应（P〈0.05）。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能诱导MCF-7细胞凋亡,联合组更为明显（P〈0.05）。结论：抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡;两药联合作用于人乳腺癌MCF-7细胞具有协同作用。     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

SET protein overexpression contributes to paclitaxel resistance in MCF-7/S cells through PI3K/Akt pathway

Patient SE translation (SET) is a carcinogen in facilitating cellular growth and proliferation, and promoting tumorigenesis and metastasis. The present study was to investigate the resistance mechanisms associated with SET in paclitaxel-induced human breast cancer cells. The different expressions of SET, ATP-binding cassette (ABC) transporters and PI3K/Akt pathway between paclitaxel sensitive MCF-7/S and paclitaxel resistant MCF-7/PTX cells were identified using western blotting. We adopted plasmid transfection to upregulate SET in MCF-7/S cells and a novel SET antagonist COG112 to decrease SET in MCF-7/PTX cells. Subsequently, cell viability to paclitaxel was assessed by MTT assay and cell apoptosis was analyzed by flow cytometry. We found that levels of SET, ABC transporters and PI3K/Akt pathway were elevated in MCF-7/PTX. Upregulation of SET in MCF-7/S cells expressed resistant to paclitaxel and decreased cell apoptosis. Moreover, overexpression of SET promoted the mRNA and protein level of ABC transporters and PI3K/Akt signal pathway in MCF-7/S cells. Conversely, decreased level of SET by COG112 not only significantly sensitized MCF-7/PTX cells to paclitaxel, but also enhanced paclitaxel-induced cell apoptosis. Additionally, the levels of the ABC transporters and PI3K/Akt signal pathway were also reduced in the COG112-treated MCF-7/PTX cells. The above results demonstrated that SET was associated with paclitaxel resistance in MCF-7/PTX cells.     

槐耳颗粒逆转人乳腺癌细胞MCF-7耐药的初步机制

目的研究槐耳颗粒逆转乳腺癌细胞株MCF-7耐药的初步机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定敏感／耐药乳腺癌细胞MCF-7-S／A对单药阿霉素（ADM）和槐耳颗粒的药物毒性,耐药倍数和槐耳颗粒对MCF-7／A的耐药逆转倍数,分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和免疫组化SP法测定多药耐药基因mdr1、多药耐药相关蛋白基因MRP的mRNA和其相应的表达产物P-gp、MRP蛋白,在MCF-7／S及非细胞毒性剂量的槐耳颗粒处理前后MCF-7／A上的表达。结果非细胞毒性剂量（0．01mg／ml）的槐耳颗粒能显著降低ADM对MCF-7／A的IC50（5．06μm）,与逆转前MCF-7／A的IC50（25．8μm）,相比差异有统计学意义（P〈0．01）,其逆转倍数为5．1倍;0．01mg／ml的槐耳颗粒使MCF-7／A细胞的耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平均下调,与未加槐耳颗粒处理的对照组MCF-7／A相比有显著性差异（P〈0．01）。结论非细胞毒性剂量槐耳颗粒具有逆转MCF-7／A细胞耐药性的作用,逆转机制和其耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平下调相关,暗示槐耳颗粒是一种有潜力的耐药逆转剂。     

A microarray based expression profiling of paclitaxel and vincristine resistant MCF-7 cells

Resistance to the broad spectrum of chemotherapeutic agents in cancer cell lines and tumors has been called multiple drug resistance (MDR). In this study, the molecular mechanisms of resistance to two anticancer agents (paclitaxel and vincristine) in mammary carcinoma cell line MCF-7 were investigated. Drug resistant sublines to paclitaxel (MCF-7/Pac) and vincristine (MCF-7/Vinc) that were developed from sensitive MCF-7 cells (MCF-7/S) were used. cDNA microarray analysis was performed for the RNA samples of sensitive and resistant cells in duplicate experiments. GeneSpring GX 7.3.1 Software was used in data analysis. The results indicated that the upregulation of MDR1 gene is the dominating mechanism of the paclitaxel and vincristine drug resistance. Additionally the upregulation of the genes encoding the detoxifying enzymes (i.e. GSTP1) was observed. Significant downregulation of apoptotic genes (i.e. PDCD2/4/6/8) and upregulation of some cell cycle regulatory genes (CDKN2A, CCNA2 etc.) was seen which may be in close relation to MDR in breast cancer. Drug resistant cancer cells exhibit different gene expression patterns depending on drug treatment, and each drug resistance phenotype is probably genetically different. Further functional studies are needed to demonstrate the complete set of genes contributing to the drug resistance phenotype in breast cancer cells.     

Paclitaxel loaded nanosponges: in-vitro characterization and cytotoxicity study on MCF-7 cell line culture

Beta cyclodextrin (β-CD) based nanosponges were synthesized and paclitaxel inclusion complex with nanosponges were prepared using techniques of inclusion complex formation. The paclitaxel nanosponge's complexes were evaluated for their release. The nanosponges complexes were also evaluated using DSC, FTIR, and NMR techniques for confirmation of inclusion complex formation between paclitaxel and nanosponges. Particle size and morphology of paclitaxel nanosponge's complex were estimated using SEM, TEM and dynamic light scattering techniques. The particle sizes were found out to be in range of 400 to 600 nm. Cytotoxic efficacy of paclitaxel nanosponge complex was determined against MCF-7 cells and paclitaxel nanosponge's complex was found to be cytotoxic and more effective against this cell line.