白花蛇舌草提取物诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的机制研究

目的探讨白花蛇舌草提取物在体外诱导结肠癌HT-29细胞株凋亡的机制研究。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定对照组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h。倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测定不同浓度白花蛇舌草提取物对HT-29细胞增殖的影响,DNA Ladder试剂盒检测药物作用后细胞凋亡情况,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位变化,应用比色法分析Caspase-9和Caspase-3的活化情况。结果白花蛇舌草提取物干预HT-29细胞24 h后,HT-29细胞密度明显减少,细胞变小,可明显抑制HT-29细胞增殖,细胞凋亡增加,线粒体膜电位丧失,具有显著地剂量依赖,并出现明显的DNA Ladder条带;Caspase-9和Caspase-3的活化随着药物浓度的升高而增加。结论白花蛇舌草提取物能通过线粒体通路诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

白花蛇舌草提取物逆转结肠癌细胞5-Fu耐药的作用

目的 探讨白花蛇舌草提取物逆转结肠癌细胞5-Fu耐药的作用及其可能作用机制. 方法 白花蛇舌草提取物对结肠癌5-Fu耐药细胞HCT-8/5-Fu进行药物干预,用MTT法检测结肠癌5-Fu耐药细胞的活力;采用Transwell细胞迁移和细胞黏附实验,在倒置显微镜下观察药物对细胞迁移和黏附的影响;RT-PCR法检测耐药相关基因ABCG2的mRNA表达. 结果 白花蛇舌草提取物能显著抑制HCT-8/5-Fu细胞的活力及细胞迁移、黏附的作用,呈现明显的剂量和时间依赖;同时白花蛇舌草提取物能明显抑制ABCG2的mRNA表达. 结论 白花蛇舌草具有抗大肠癌5-Fu耐药的作用,下调耐药基因ABCG2的mRNA表达是白花蛇舌草逆转耐药的重要作用机制之一.     

20(S)-人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响

目的研究20(S)-人参皂苷Rh2对人结肠癌Caco-2和HT-29细胞增殖及周期的影响。方法采用荧光微孔法测定20(S)-人参皂苷Rh2对人结肠癌Caco-2、HT-29细胞增殖的影响;利用显微镜观察给药后HT-29细胞形态变化;流式细胞术分析20(S)-人参皂苷Rh2对HT-29细胞周期分布的影响。结果 20(S)-人参皂苷Rh2对Caco-2、HT-29细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;20(S)-人参皂苷Rh2作用48 h后,对HT-29、Caco-2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为19.68、26.79μg/mL;流式细胞分析结果显示,与对照组细胞相比,20(S)-人参皂苷Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例,增加S期细胞比例。结论 20(S)-人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞增殖,主要原因是阻滞细胞处于S期。     

半枝莲提取物对人结肠癌细胞HT-29Pim-1和Pim-2mRNA表达的影响

目的探讨半枝莲提取物对人结肠癌细胞HT-29 Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响。方法采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(0.5、1.5、2.5、4 mg/mL)半枝莲提取物组,干预24h。倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响,并用2.5 mg/mL浓度干预1、3、6、12、24、48 h观察对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2mRNA的表达。结果半枝莲提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少、细胞变小,抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量一效和时一效作用;Pim-1和Pim-2 mRNA表达随药物浓度的增加而减少。结论半枝莲提取物能显著地抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖,下调Pim-1和Pim-2的mRNA表达。     

白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究

目的:应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制实验,观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法:通过体外培养的方法培养人结肠癌HT-29细胞株和结肠癌HCTI16细胞株,对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。结果:白花蛇舌草提取物对HT-29、HCTI16细胞株的影响为:3mg/ml浓度时抑制率分别为(25.64±1.36)%、(27.36±1.87)%;5mg/ml浓度时抑制率(37.25±2.01)%、(39.01±1.65)%;7mg/ml浓度时抑制率(49.87±1.68)%、(51.22±2.33)%,其抑制率均优于对照组(P0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的增值,具有显著的抗肿瘤效果。     

片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2mRNA表达的影响

目的 探讨片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响.方法 分别用不同剂量的片仔癀干预体外培养人结肠癌HT-29细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响:RT-PcR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达.结...     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

钩吻总碱对人结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制。方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化。结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L~(-1)钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17%。DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡。RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P0.05)。结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关。     

多烯紫杉醇对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响

目的 观察多烯紫杉醇对结肠癌 HT-29 细胞株增殖和bcl-2 和bax 表达的影响.方法 采用体外常规培养结肠癌HT-29 细胞,以不同浓度多烯紫杉醇干预24h,观察细胞形态变化;MTT 法测定不同浓度药物对HT-29 细胞增殖的影响;RT-PCR 检测药物作用后的bax 和bcl-2 的表达.结果 多烯紫杉醇作用后,细胞数量明显减少,细胞变小,细胞增殖受到抑制,并呈现出量-效作用;bcl-2 的表达随药物浓度增加而减少,bax 的表达随药物浓度增加而增加.结论 多烯紫杉醇能明显抑制结肠癌HT-29 细胞的增殖,通过下调bcl-2 和上调bax 的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29 细胞的作用.     

白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721基因表达的影响

目的:检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞生长及肝癌相关基因表达的影响。方法:利用MTT比色法检测白花蛇舌草对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖方面的影响;利用以肝癌cDNA抑制性消减文库构建的肝癌相关基因微阵列,检测白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721 36 h后基因的表达变化。结果:白花蛇舌草作用肝癌细胞SMMC-7721后36 h,观察到有1个基因的表达上调,14个基因表达下调。结论:证实白花蛇舌草对肝癌细胞的作用是通过影响多基因的表达改变实现的。本研究发现的差异表达基因为进一步研究白花蛇舌草抗肝癌的分子机制提供了线索,并为中草药筛选提供了一种可能的依据方法。     

半枝莲醇提物含药血清对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的:研究半枝莲醇提物(EESB,ethanol extract from Scutellaria barbata)含药血清对人结肠癌HT-29细胞株体外诱导其凋亡和周期的变化。方法:体外常规培养人结肠癌HT-29细胞株,制备含药血清,设置空白血清组、含有不同浓度EESB含药血清组、5-FU组,1应用MTT法评价EESB含药血清对HT-29细胞24 h、48 h、72 h的生长抑制率,2Annexin V-PE/7-AAD双染色分析在流式细胞仪上观察EESB含药血清处理HT-29细胞48 h后的细胞凋亡率,3PI法检测细胞周期变化。结果:1与空白组比较,MTT法显示EESB低、中、高剂量含药血清都能抑制HT-29细胞增殖(P0.05),抑制率与作用时间及血清含药浓度相关,72 h时其达到39%。2同空白组比较,低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后凋亡率显著高于对照组(P0.05),同时低、中、高剂量含药血清处理HT-29细胞48 h后,3与空白组比较,G0/G1期细胞明显较对照组增加(P0.05),提示半枝莲可促进细胞凋亡,并且将细胞生长周期阻滞于G0/G1期,并且S期减少。结论:半枝莲对人结肠癌HT-29细胞有抑制作用,作用机制可能不光与抑制细胞生长有关,还和阻滞细胞生长周期及诱导细胞凋亡有关。     

白花蛇舌草乙醇提取物对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨白花蛇舌草乙醇提取物在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对A549细胞增殖的影响;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;Western Blot 检测药物作用后的Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 白花蛇舌草乙醇提取物抑制A549细胞增殖呈时-效和量-效关系;Hoechst 33258检测白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞后可见凋亡细胞;40 mg/ml白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞12,24,36,48h,药物组G1～G0期细胞百分比分别为(42.82±3.95)%,(51.84±6.37)%,(54.76±8.85)%和(64.94±7.56)%,药物组细胞凋亡率分别为(5.72±0.98)%,(7.10±2.08)%,(19.89±4.25)%,(32.55±6.51)%,均高于对照组(P均﹤0.05),且G1～G0期细胞百分比和凋亡率随药物作用时间增加而增加;Western Blot显示,白花蛇舌草乙醇提取物作用A549细胞,Bax的表达随作用时间增加而增加,Bcl-2的表达随作用时间增加而减低.结论 白花蛇舌草乙醇提取物随着药物浓度和作用时间的增加对肺腺癌A549细胞的体外抑制效应增加;其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G1～G0期和通过上调Bax和下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的.     

白花蛇舌草石油醚部位对子宫内膜癌细胞的抑制作用

目的:探究白花蛇舌草石油醚部位体外对子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及机制。方法:白花蛇舌草石油醚部位处理子宫内膜癌Ishikawa细胞株,倒置相差显微镜观察细胞生长状态;MTT法检测细胞存活率;平板克隆形成实验检测癌细胞克隆形成能力;PI染色,流式细胞仪检测细胞周期。结果:白花蛇舌草石油醚部位对体外培养的人子宫内膜癌细胞具有明显的细胞毒性,其IC50值为32.917μg·m L-1。该药物显著抑制Ishikawa细胞增殖以及细胞的克隆形成能力,而且作用效果具有明显的剂量依赖效应。该部位可使细胞周期阻滞在G1期。结论:白花蛇舌草石油醚部位体外抗人子宫内膜癌活性显著,可能为该中药材发挥抗癌作用的主要活性成分,其机制可能与阻滞细胞周期的进展有关。     

氧化苦参碱抑制胰岛素诱导人结肠癌HT-29细胞的增殖及迁移作用

目的:利用胰岛素培养人结肠癌细胞HT-29,体外模拟糖尿病患者体循环中高胰岛素环境,研究氧化苦参碱(OMT)对胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖和迁移的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和平板克隆实验检测OMT(2,4,8 mmol·L~(-1))对胰岛素诱导HT-29的增殖作用,倒置显微镜观察该模型下细胞形态的变化;通过划痕修复实验评价OMT对胰岛素诱导的HT-29迁移能力,流式细胞术Annexin V/碘化丙啶(PI)双染实验检测该模型中HT-29细胞周期与凋亡的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞周期相关蛋白的表达以及细胞迁移相关蛋白的表达。结果:MTT比色法、平板克隆及划痕修复实验均显示,与空白组比较,胰岛素能促进人结肠癌HT-29细胞的增殖和迁移(P 0. 05);选择2,4,8 mmol·L~(-1)OMT处理细胞24 h,与胰岛素组比较,OMT 4,8 mmol·L~(-1)明显抑制其增殖作用(P 0. 05),可诱导HT-29细胞发生G_0/G_1期阻滞(P 0. 05),8 mmol·L~(-1)OMT下调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)表达(P 0. 05),上调周期负调节蛋白p27水平(P 0. 05);此外,划痕修复实验结果显示,与胰岛素组比较,OMT各浓度组均能抑制胰岛素诱导的细胞迁移作用(P 0. 05),其机制可能与增加黏附蛋白(E-cadherin)(P 0. 05)和降低波形蛋白(Vimentin)(P 0. 05)相关。结论:OMT能抑制胰岛素诱导的人结肠癌HT-29细胞增殖及迁移作用,其作用机制可能与调控细胞周期及迁移相关蛋白有关。     

苦参碱抑制人大肠癌HT29细胞增殖及诱导凋亡作用与机制

目的探讨苦参碱对人大肠癌HT29细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及其可能机制。方法分别采用MTT法检测细胞增殖活性、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡、透射电镜观察细胞结构变化、基因芯片检测细胞基因表达改变。结果0.0625～0.5mg/mL苦参碱处理48h后,细胞增殖明显受抑制;但1mg/mL时增殖抑制率降低而凋亡诱导作用明显增强;苦参碱对细胞G2/M和G1/S期均有阻滞作用;电镜下可见凋亡的形态学变化;基因芯片检测发现苦参碱影响细胞增殖、周期和凋亡相关基因的表达。结论苦参碱通过影响HT29细胞一些与增殖、周期和凋亡相关基因的表达发挥增殖抑制和凋亡诱导作用,且与苦参碱质量浓度相关。     

蟾毒灵调控PI3K/Akt 通路对结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期的影响

目的：研究蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞的能力并对其分子机制进行探讨。方法：将人结肠癌HT-29 细胞分为对照组（野生型细胞）,蟾毒灵（Bufalin） 处理组（0.25,0.5,1 μmol/L） 和顺铂（DDP） 组（1 μg/mL）。通过流式细胞术（FCM） 检测蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞的作用;使用蛋白质免疫印迹法检测经蟾毒灵处理HT-29细胞24 h 后磷脂酰肌醇-3 激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇-3 激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt） 和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达的变化。通过实时荧光定量PCR 法（RT-qPCR） 检测蟾毒灵对HT-29 细胞PI3K、Akt mRNA 表达的影响。结果：FCM结果显示,与对照组比较,蟾毒灵（0.25,0.5,1 μmol/L） 组能诱导结肠癌HT-29 细胞的凋亡（P＜0.05）,并呈剂量依赖性。与对照组比较,蟾毒灵（0.25,0.5,1 μmol/L） 组能够诱导结肠癌HT-29 细胞的周期阻滞于G2/M 期,并且蟾毒灵浓度越大,周期阻滞效果越显著（P＜0.05）。蛋白质印迹实验结果表明,与对照组比较,蟾毒灵能够下调PI3K、p-PI3K、Akt 和p-Akt 的表达水平,并呈一定的剂量依赖（P＜0.05）。RT-qPCR 结果显示,与对照组比较,蟾毒灵能够显著下调PI3K 和Akt mRNA 的表达。结论：蟾毒灵能够诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞,其机制可能与抑制PI3K/Akt 信号通路有关。     

熊果酸对Hacat细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察中药白花蛇舌草主要有效单体熊果酸对人永生化细胞株Hacat细胞增殖及凋亡的影响,明确百花蛇舌草治疗银屑病的机制。方法:体外培养人角质形成细胞株Hacat,使用WST-8法检测熊果酸对Hacat细胞增殖的影响,采用流式细胞仪检测熊果酸对Hacat细胞细胞周期及凋亡的影响,并采用免疫荧光染色的方法标记凋亡细胞,从而进一步验证熊果酸对Hacat细胞凋亡的影响。结果:熊果酸能有效抑制Hacat细胞的增殖,与药物浓度呈正相关,同时可以将Hacat细胞阻滞于G1/G0期,同时可促进Hacat细胞凋亡。结论:熊果酸对角质形成细胞增殖有抑制作用,角质形成细胞凋亡有促进作用,推断其可能是白花蛇舌草治疗银屑病的有效单体之一。     

白首乌苷B抗结肠癌作用的研究

目的:评价白首乌苷B(简称CGB)体内外抗结肠癌作用,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测CT-26、HT-29、SW-620和HCT-116四种结肠癌细胞在CGB处理24、48、72 h后的细胞活性;采用流式细胞仪检测PI单染和Annexin V-FITC/PI双染后的细胞周期及细胞凋亡率;采用Western Blot方法测定细胞内周期蛋白的水平;采用CT-26小鼠和HT-29裸鼠移植性肿瘤模型,评价CGB的体内抗肿瘤作用。结果:CGB体外对四种结肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;CGB能增加结肠癌细胞G0/G1期的比例,同时降低S期和G2/M期的比例,使细胞阻滞于G1期而无法进入S期;CGB能增加晚期凋亡细胞比例,但对早期凋亡和坏死细胞无明显影响;CGB能下调结肠癌细胞中周期蛋白CDK6、cyclin D1和CDK4的表达,且具有明显的量-效关系;CGB对移植性CT-26和HT-29肿瘤的生长具有明显的抑制作用。结论:CGB具有良好的抗结肠癌作用,其作用机制与诱导细胞凋亡、下调周期蛋白的表达、阻滞细胞周期、促使肿瘤组织坏死有关。     

白花蛇舌草水提物对白血病CEM细胞抑制作用及机制研究

目的研究白花蛇舌草对CEM细胞抑制作用及机制。方法以不同浓度的白花蛇舌草水提物作用CEM细胞24,48,72h后,通过MTT比色试验,检测其对CEM细胞的抑制率;用浓度分别为166μg/ml、33.2μg/ml、6.64μg/ml的白花蛇舌草水提物作用于CEM细胞24,48,72h后,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测P53基因的表达,探索白花蛇舌草抑制CEM细胞的可能机制。结果白花蛇舌草水提物能够抑制CEM细胞的生长;白花蛇舌草能促进CEM细胞的P53基因表达,且随用药浓度的升高及作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强、P53基因表达也逐渐增强。结论白花蛇舌草水提物能抑制白血病CEM细胞的生长,其作用强度与时间、浓度呈正相关,其抑制机制可能与上调P53基因的表达有较大关联。     

白花蛇舌草对人肝癌HepG2细胞Cdk2和E2F1 mRNA表达的影响

目的 探讨白花蛇舌草抗人肝癌细胞株HepG2增殖的作用机制. 方法 体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测HepG2细胞的增殖活力,流式细胞术检测HepG2细胞周期,相对荧光定量PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclin-dependent kinase,Cdk2)和核转录因子E2F1 mRNA的表达. 结果 HepG2细胞的存活率随着给药浓度的增大而降低,抑制作用呈现剂量依赖性;和空白组比较,给药组G0/G1期细胞百分含量明显升高(P＜0.05),S期细胞百分含量明显减少(P＜0.01),PI指教明显减少(P＜005),Cdk2和E2F1 mRNA水平显著下调(P＜0.01或P＜0.05). 结论 白花蛇舌草可能通过下调Cdk2和E2F1的mRNA表达,将HepG2细胞阻滞在G0/G1期,从而抑制HepG2细胞的增殖.