应用PCR技术检测慢性乙肝病毒性肝病血清及外周血单个…

本文应用多聚酶连反应技术检测了１０４例慢性乙肝病毒性肝病患者血清及外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＰＮＡ，并与放免法进行了比较。结果显示，ＰＣＲ检测结果更能客观地反应ＨＢＶ在体内存在的状态，在外周血单个核细胞中有ＨＢＶ感染；１０４例慢性肝病患者外周血单个核细胞中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为２８．８％，而血清中测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性的２０例患者有７例ＰＢＭＣ中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ，占３５％。     

慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞HBV DNA的PCR检测

①目的 探讨慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染情况及其临床意义。②方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１２８例慢性乙型肝炎病人和２０例健康人进行了ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶＤＮＡ检测。③结果 慢性乙型肝炎病人ＰＢＭＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ的感染率为６４．２％,和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染率具有一致性倾向（Ｘ＾２－０．６３,Ｐ〉０．０５）,慢性肝病病     

HBV感染者外周血单个核细胞中HBV DNA的检测

目的；研究乙型肝炎毒（ＨＢＶ）感染者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）中ＨＢＶ ＤＮＡ的存在及其与血清ＨＢＶ ＤＮＡ的关系。方法：用ＰＣＲ法及斑点杂交法对５０例ＨＢｓＡｇ（＋）的感染者ＰＢＭＣｓ ＨＢＶ ＤＮＡ进行检测。同时用ＰＣＲ法检测感染者血清ＨＢＶ ＤＮＡ。结果：ＰＣＲ法和斑点杂交法分别从３５份和３２份ＰＣＭＣｓ检出率均为６０．０％左右。ＰＣＲ法检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率为３６．０％。结论：Ｈ     

多聚酶链反应检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的HBVDNA

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了６９例乙型肝炎患者（其中慢性迁延性肝炎１７例，慢性活动性肝炎２３例，肝炎后肝硬化１２例，重症乙肝１７例）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶＤＮＡ存在状态。结果显示，ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ总阳性率为４６％，而各型乙肝间ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢＶ对ＰＢＭＣ的感染，似与乙型肝炎的临床类型无明显的相关性。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞HCV—RNA检测

目的：了解丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶ－ＲＮＡ存在情况及其意义。方法：采用套式ＰＣＲ检测３８例急性丙肝炎和３６例慢性丙型肝炎患者血清和外周血ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ《结果：７４例丙型肝炎血清ＨＣＶＲＮＡ阳性６８例,ＰＢＭＣ阳性４４例;急性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（３９．５％）,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中阳性２９例（８０．６％）。慢性丙型肝炎患者ＰＢＭ     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV.DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ．ＤＮＡ阳性率分别为７６．７％和４５％，尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳性或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ．ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高血清，提示ＨＢＶ．ＤＮＡ普遍存在乙肝患者甚至ＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病病变反复活动及病毒重复感染的来源。因此也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传     

α－干扰素对外周血单个核细胞中HBVDNA的清除作用

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法动态观来了α－干扰素治疗的６例慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）与血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的清除情况。血清ＨＢＶＤＮＡ在治疗５周后（３－１０周）６例转阴，其中２例在结束治疗时复转阳性，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ在治疗１５周（１２－２０周）时５例转阴，１例始终阳性，并出现ＡＬＴ复升高。结果显示α－干扰素能清除ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ，但滞后于血清病毒的清除，ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ持续阳性，可能使治疗中期效果较差。     

应用聚合酶链反应检测乙肝患者外周血单个核细胞HBV·DNA的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测６０例乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及血清ＨＢＶ·ＤＮＡ，阳性率分别为７６．７％与４５％。尤其在急性乙肝（ＡＨ）或抗ＨＢｅ阳生或抗ＨＢｓ阳性的患者中，ＨＢＶ·ＤＮＡ在ＰＢＭＣ中检出率显著高于血清。提示ＨＢＶ·ＤＮＡ普遍存在于乙肝患者甚ＩＨＢｓＡｇ转阴的病人ＰＢＭＣ中，可能是肝脏病变反复活动及病毒重复感染的来源．因而也导致既往有ＨＢＶ感染史的ＨＢｓＡｇ阴性献血员传播ＨＢＶ的可能。     

慢性乙肝患者Th1／Th2应答与乙肝病毒感染单个核细胞的关系

目的 探讨乙肝病毒侵儿淋巴细胞对慢性乙肝口才免疫功能状态的影响。方法 采用双抗体夹心法检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）培养上清液中细胞因子的水平,ＰＣＲ方法扩增乙肝病毒ＤＮＡ片段,血清中ＨＢＶ ＤＮＡ检测采用斑点杂交法。结果与正常对照组比较,慢性乙型肝炎患者的ＩＮＦ－γ水平降低,但无显著差异性,而Ｈ－４水平明显增高（Ｆ＝１７４,Ｐ〈０．０１）。血清中ＨＢＶ ＤＮＡ水平与ＰＢＭＣ培     

TT病毒感染者外周血单个核细胞中TT病毒的研究

目的 了解ＴＴＶ阳性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况。方法 采用巢式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）技术和绿豆芽核酸酶消化单链ＤＮＡ方法研究在ＰＢＭＣ中的ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况，并克隆测序分析证实。１６例血标本（血清和ＰＢＭＣ）和粪便标本来自北京地坛医院１９９７年１０月～１９９８年１０月住院患者。结果 １６ＴＴＶ阳性肝炎患者ＰＢＭＣ中有１４例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，粪便中有５例     

HBV垂直传播的细胞分子机制研究(英文)

目的:探讨HBV垂直传播状况、细胞分子机制及其对胎儿的影响。方法:将46例HBV感染孕妇按HBeAg(+)和HBeAg(-)进行分组,以PCR法对46例HBV感染孕妇产前血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA进行检测,并对新生儿脐血血清及脐血单个核细胞(CBMC)中HBV-DNA进行检测,同时选取10例健康孕妇为正常对照。结果:HBV感染孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为69.57％(32/46)和41.30％(19/46),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为56.52％(26/46)和21.74％(10/46)。其中HBeAg(+)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为100.00％(25/25)和60.00％(15/25);分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为88.00％(22/25)和32.00％(8/25)。HBeAg(-)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别33.33％(7/21)和19.05％(4/21),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为19.05％(4/21)和9.52％(2/21)。两者相比差异有显著性(P<0.01和P<0.05)。健康孕妇血清、PBMC及其所分娩新生儿脐血血清、CBMC中均未检出HBV-DNA。结论:HBV确可经胎盘垂直传播,其传播途径可通过直接传播,亦可通过PBMC介导,PBMC介导的HBV垂直传播较隐匿,HBeAg(+)孕妇发生HBV垂直传播的危险性高。     

HBV垂直传播的细胞分子机制研究

目的:探讨HBV垂直传播状况、细胞分子机制及其对胎儿的影响.方法:将46例HBV感染孕妇按HBeAg(+)和HBeAg(-)进行分组,以PCR法对46例HBV感染孕妇产前血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA进行检测,并对新生儿脐血血清及脐血单个核细胞(CBMC)中HBV-DNA进行检测,同时选取10例健康孕妇为正常对照.结果:HBV感染孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为69.57%(32/46)和41.30%(19/46),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为56.52%(26/46)和21.74%(10/46).其中HBeAg(+)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别为100.00%(25/25)和60.00%(15/25);分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为88.00%(22/25)和32.00%(8/25).HBeAg(-)组孕妇血清及PBMC中HBV-DNA的阳性率分别33.33%(7/21)和19.05%(4/21),分娩时新生儿脐血血清及CBMC中HBV-DNA的阳性率分别为19.05%(4/21)和9.52%(2/21).两者相比差异有显著性(P＜0.01和P＜0.05).健康孕妇血清、PBMC及其所分娩新生儿脐血血清、CBMC中均未检出HBV-DNA.结论:HBV确可经胎盘垂直传播,其传播途径可通过直接传播,亦可通过PBMC介导,PBMC介导的HBV垂直传播较隐匿,HBeAg(+)孕妇发生HBV垂直传播的危险性高.     

慢性肝病患者血中白蛋白基因表达研究

目的研究慢性肝病患者外周血白蛋白mRNA表达与病变进程的关系。方法采用荧光定量PCR检测慢性肝病患者血清HBVDNA;采用逆转录巢式荧光定量PCR检测慢性肝病患者外周血单个核细胞(PBMNC)中白蛋白mRNA基因表达。结果 46例慢性乙型肝炎患者中,血清HBVDNA阳性26例,阳性率为56.5%。HBVDNA浓度为(3.6±3.4)×108copies/mL;而外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性17例,阳性率为40.0%。37例肝炎肝硬化患者中,血清HBVDNA阳性28例,阳性率为75.7%。HBVDNA浓度为(4.7±2.8)×108copies/mL;外周血单个核细胞白蛋白mRNA阳性12例,阳性率为32.4%。40例健康人外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性2例,阳性率为5%。慢性肝炎肝硬化患者血清HBVDNA明显高于慢性乙型肝炎患者(Р0.05);慢性乙肝活动期和肝硬化失代偿期外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA阳性率显著升高。结论血清HBVDNA与慢性肝病患者病变活动和进展密切相关;外周血单个核细胞中的白蛋白mRNA表达与肝脏损害相关,二者可作为慢性肝病病情进展临床疗效评价的重要指标。     

乙肝病毒DNA与血清免疫标志物的对比研究

目的探讨HBVDNA与乙肝五项免疫标志物之间的关系以及各型乙肝病人HBVDNA检出率。方法血清HBVDNA采用PCR法，乙肝五项免疫标志物采用ELISA法。结果HBsAHg、HBsAHg、抗HBc阳性者HBVDNA阳性率80．3％；HBsAg、抗HBc、抗HBe阳性者HBVDNA阳性率31．6％；抗HBs、抗HBc、抗HBe阳性者HBVDNA阳性率20％。慢性乙肝HBVDNA检出率明显高于急性乙肝及乙肝病毒携带者。结论HBVDNA较乙肝五项免疫标志物更准确，更灵敏的反映血中HBV复制情况。肝脏病变越重，HBVDNA检出率越高。     

乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对外周血IL-12和IL-18表达水平的影响

目的：探讨慢性乙型肝炎肝硬化患者HBV复制对血清中细胞因子白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-18（IL-18）水平变化的影响及其临床意义。方法：应用定量PCR、ELISA法检测136 例不同类型慢性肝病患者（102例慢性乙型肝炎和34例乙型肝炎肝硬化），95例HBV携带者及20名健康献血者（对照组）外周血HBV-DNA复制与IL-12和IL-18表达水平。结 果：慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化组IL-12及IL-18表达水平明显高于对照组（P<0.05）；慢性乙型肝炎、肝硬化患者HBV-DNA高复制组（HBV-DNA ≥10⁵•mL^-1）IL-12及IL-18表达水平明显高于HBV-DNA阴性组（HBV-DNA ＜10³•mL^-1）（P<0.05）；慢性乙型肝炎与肝炎肝硬化患者组及不同HBV携带者组之间IL-12及IL-18水平比较差异无显著性（P>0.05）；慢性肝病患者HBV复制水平与IL-12和IL-18表达水平呈正相关关系（ r=0.74,P<0.05；r=0.80,P<0.05）。结论： HBV复制活跃程度影响慢性乙型肝炎、肝硬化患者血清中细胞因子IL-12及IL-18的表达，HBV复制程度越活跃，慢性肝病患者IL-12及IL-18表达水平越高。     

350例病毒性肝炎患者检测HBV-DNA与HBV血清学标志物相关性研究

采用ＰＣＲ技术对３５０例各型病毒性肝炎进行检测，旨在研究血清ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－Ｍ之间的相关性，以确定ＰＣＲ法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ的临床意义。并以ＨＢＶ－ＤＮＡ为依据进一步考察ＨＢＶ－Ｍ的临床价值。结果显示：在ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）、抗－ＨＢｃ（＋）病例中ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）者１０２例（９０．２７％），说明ＨＢｅＡｇ基本可反应病毒处于复制状态；在１３７例ＨＢｅＡｇ（－）／抗－ＨＢｅ（＋）中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）为６８例（４９．６３％），表明病毒活动并未终止；在抗－ＨＢｓ（＋）１４例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２例（１４．２９％），说明抗－ＨＢｓ出现后仍然可有ＨＢＶ复制；在ＨＢＶ－Ｍ均阴性的８５例中，ＨＢＶ－ＤＮＡ（＋）２３例（２７．０６％），说明不能单纯依靠ＨＢＶ－Ｍ检测来诊断乙肝，需定期查ＨＢＶ－ＤＮＡ或肝活体组织检查ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ及ＨＢｃＡｇ。     

乙肝标志物模式与病毒载量的相关性研究

目的研究慢性乙肝患者血清标志物和病毒载量之间相关性。方法血清HBV DNA测定用荧光定量分析PCR法和乙肝标志物采用化学发光酶免疫定量法,分别对222例慢性乙肝患者血清HBV DNA和乙肝标志物检测并比对分析。结果血清学检测乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）＋乙肝病毒核心抗体（HBcAb）组与乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）组其病毒载量显著高于其它组（病毒载量高于105拷贝/m l分别达91.9%和77.8%）。结论 HbeAg与HBV DNA定量水平具有良好的相关性,同时检测乙肝标志物和HBV DNA才能准确反映不同个体HBV感染状态及病毒复制情况     

重型乙型肝炎的病毒复制状况

In order to elucidate the relationship between hepatitis B virus (HBV) replication and severity of hepatitis B, HBV serological markers and HBV-DNA in 56 patients with chronic hepatitis B were detected using the methods of ELISA and PCR, respectively. The results showed that the positive prevalence of HBeAg and/or HBV-DNA in chronic severe hepatitis B (5/25) was much lower than that in non-severe chronic hepatitis B (26/31) (P < 0.01). The study provides the suggestive evidence that viral replication is significantly reduced in severe hepatitis B. Also, increased replication of HBV appears to be not the cause of hepatic necrosis in severe hepatitis B.     

乙型肝炎患者血清HBV-DNA表达水平及其临床意义

目的　探讨乙型病毒性肝炎患者血清HBV DNA的表达水平及其与乙肝标志物的相互关系。方法　用定性PCR法和定量PCR同步检测 144例乙肝患者血清HBV DNA ,同时用ELISA法检测血清乙肝标志物。结果　定性PCR与定量PCRHBV DNA总体阳性率相同 ,均为 78 47%(113/ 144 )。乙肝患者血清HBV DNA平均滴度 (每毫升拷贝数 )为 4 3× 10 3 ,其中急性肝炎、慢性肝炎轻度、慢性肝炎中度、慢性肝炎重度、肝炎后肝硬化者血清HBV DNA平均滴度分别为 2 7× 10 3 、6 7× 10 2 、2 5× 10 5、6 .9× 10 5、9 9×10 4 。相互比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。HBeAg( )、HBeAg(- )患者血清HBV DNA平均滴度分别为 3 1× 10 5、6 7× 10 2 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　HBeAg( )患者血清中HBV DNA水平高 ,定量PCR可更准确反映体内HBV增殖水平和传染性强弱     

Expression of toll-like receptor 9 in peripheral blood mononuclear cells from patients with different hepatitis B and C viral loads

The aim of the present study was to investigate the expression of toll-like receptors （TLR） 9 in peripheral blood mononuclear cells （PBMC） of patients with chronic hepatitis B and C with different virus copies. The study group included 90 patients （60 with chronic hepatitis B, and 30 with chronic hepatitis C）, and 20 healthy people served as control group. The protein and mRNA levels of TLR9 were detected by using flow cytometry and real-time PCR. The serum viral copies of HBV and HCV were measured in all patients, and the correlation between HBV-DNA copies or HCV-RNA copies and the TLR9 expression was analyzed. Our results demonstrated that HBV or HCV infection led to a decreased expression of TLR9 mRNA and protein compared to the control group （P〈0.05）. The TLR9 protein and mRNA levels were negatively correlated with serum viral copies of HBV and HCV （r=-0.632, r=-0.909, P〈0.01）. It was concluded that TLR9 mRNA and protein are down-regulated in PBMC of HBV-infected or HCV-infected patients, and they are negatively correlated with serum viral copies and play an important role in detecting viral replication of HBV and HCV.