洛沙坦和依那普利对SHR血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的动态观察自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC)的凋亡,探讨血管紧张素II AT1-R阻滞剂洛沙坦和血管紧张素转换酶抑制剂依那普利降压治疗对SHR VSMC凋亡的影响.方法末端标记法(TUNEL)和透射电镜技术检测细胞凋亡,RT-PCR和免疫组化方法分别检测Bax、Bcl-2基因及其蛋白的表达.结果从12 ～ 24周龄,SHR VSMC凋亡逐渐减低,24周龄时,凋亡指数(APOI)低于同周龄正常血压大鼠(WKY)(P<0.05);洛沙坦和依那普利降压治疗8和12周,分别使APOI增加了36%、51%和71%、35%(P<0.05).随周龄增加,SHR胸主动脉Bax基因表达逐渐下调,与APOI变化趋势一致,依那普利治疗12周时,使Bax基因表达上调(P<0.05);各实验组均未检测出Bcl-2基因的表达.依那普利和洛沙坦降压治疗可使SHR胸主动脉Bax蛋白表达上调,BCL-2蛋白下调.结论 VSMC凋亡不足可能是血管肥厚的主要原因之一;洛沙坦、依那普利长期降压治疗,可促进血管平滑肌细胞凋亡,其机制可能是通过促进Bax蛋白表达和/或抑制Bcl-2蛋白表达实现.     

厄贝沙坦对大鼠血管平滑肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响

目的：观察自发性高血压大鼠（SHR）心肌间小血管平滑肌细胞（SMCs) Bcl-2和Bax蛋白的表达及心肌细胞凋亡指数（APOI）；同时观察血管紧张素Ⅱ－1型受体（AT1R）拮抗剂－厄贝沙埋SHR心肌间小血管SMCsBcl-2和Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响。方法：24只16周龄SHR等分为厄贝沙坦（30mg/kg/d,20w)组和非厄贝沙胆组，另选16周龄Wistar大鼠（12只）作为正常对照组。分别采用SP免疫组化法和末端脱氧核苷酸转移介导dUTP缺口末端标记法（TUNEL）及病理检查方法检测Bcl-2和Bax蛋白水平的表达和APOI。结果：非厄贝沙坦组与正常对照组比较：收缩压明显增高（P＜0．01），左室重量指数（LVW／BW）明显增加（P＜0．05）；心肌间小血管SMCBcl-2蛋白的表达明显增强（P＜0．05），心肌细胞APOI明显增加（P＜0．05，而Bax蛋白的表达两组无显著差别。厄贝沙坦组与非厄贝沙坦组比较：收缩压明显降低（P＜0．01），LVW／BW明显下降（P＜0．05）；SMCsBcl-2蛋白的表达及心肌细胞APOI明显减少（P＜0．05），Bax蛋白的表达明显增强（P＜0．05）。厄贝沙坦组与正常对照组比较：Bax蛋白表达明显增强（P＜0．05），Bcl-2蛋白表达和APOI无明显差别。结论：（1）SHR的小血管SMCs的凋亡受到抑制可能与Bcl-2蛋白的过度表达有关，而AT1R拮抗剂－厄贝沙坦可能通过促进SMCsBax蛋白达到心肌细胞亡的恢复。（2）厄贝沙坦可有效抑制心肌细胞凋亡和逆转心肌肥厚。     

TGF-β和ERK1/2在自发性高血压大鼠主动脉中的表达

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和转化生长因子-β(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)和血管内皮细胞(EC)中的表达及其意义。方法将SHR分为4、8、16和20周龄组,采用免疫组化和Western blot方法检测主动脉血管EC和VSMC中ERK1/2和TGF-β1蛋白的表达。结果 SHR从8周龄开始血压升高,20周龄组收缩压达到(180±21)mmHg;Western blot检测显示,ERK1/2和TGF-β1在SHR16和SHR20周龄组VSMC和EC中的表达与4周龄组相比增高(P<0.05),且ERK1/2和TGF-β1蛋白积分光密度值与血压呈正相关;ERK1/2免疫组化结果显示,在SHR16和20周龄组,主动脉中内皮细胞阳性率分别为72.69%和70.14%、VSMC阳性率分别为35.01%和28.54%,明显高于SHR4周龄组(P<0.01);在SHR主动脉中,TGF-β1免疫组化表达均为阴性。结论在SHR动脉血管平滑肌细胞和内皮细胞中ERK1/2和TGF-β1的表达随着血压的增高呈现增加的趋势,推测ERK1/2和TGF-β1相互共同作用参与主动脉血管改变。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠胰腺纤维化过程中细胞凋亡的调节作用

目的 探讨洛沙坦对TNBS诱导大鼠实验性胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡的影响及可能机制。方法 雄性SD大鼠100只随机分为正常组、对照组、治疗组，采用胰管内注射2％三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠胰腺纤维化模型。治疗组每天给予洛沙坦(10mg／kg)灌胃；对照组给予等容积的无菌蒸馏水。观察胰腺组织病理改变；TUNEL法原位检测凋亡胰腺腺泡细胞密度；透射电镜观察胰腺组织细胞形态学变化；逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Bcl-2凋亡相关基因家族成员Bcl-2、Bcl—XL、Bak、Bax mRNA表达。结果 洛沙坦治疗可逆转胰腺组织炎症细胞浸润、腺泡萎缩等异常改变。对照组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡较正常大鼠明显增加，胰腺组织Bax、Bak mRNA表达较正常增加，Bcl-2mRNA表达降低，Bcl-mRNA不表达；洛沙坦治疗后凋亡减少，洛沙坦治疗组Bax、Bcl-2mRNA表达及Bax／Bcl-2较对照组降低，Bak、Bcl—XLmRNA不表达。结论TNBS诱导大鼠胰腺纤维化形成过程中胰腺腺泡细胞凋亡增加；洛沙坦阻断1型血管紧张素Ⅱ受体(AT1R)可抑制其凋亡，其机制可能与调控bcl-2凋亡相关基因表达有关。由此可见，血管紧张素Ⅱ与AT1R可能介导了实验大鼠胰腺纤维化过程中胰腺腺泡凋亡的发生。     

新型气体信号分子二氧化硫对自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨新型气体信号分子二氧化硫(SO2)对自发性高血压大鼠(SHR)主动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的调节作用.方法 4周龄SHR大鼠随机分为SHR对照组、Na2SO3/NaHSO3组(外源性SO2供体组),每组8只.4周龄正常血压Wistar Kyoto(WKY)大鼠8只作为正常对照(WKY对照组).5周后检测大鼠血压及主动脉形态学指标,以高效液相色谱(HPLC)法测定血浆SO2水平;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡;采用免疫组织化学方法检测主动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas和半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-3的表达,并进行图像分析.结果 5周后SHR对照组血压、血管壁厚与内径比均明显高于WKY对照组[(172±10)mm Hg vs(112±9)mm Hg、0.073±0.004 vs 0.057±0.004,均P<0.01,1 mm Hg=0.133 kPa],血浆SO2水平显著低于WKY对照组[(6.4±1.5)μmol/L vs(11.3±1.0)μmol/L],主动脉平滑肌细胞增殖指数高(0.32±0.06 vs 0.05±0.03),而凋亡指数小(0.16±0.07 vs0.30±0.19),主动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达高(0.209±0.007 vs 0.202±0.006,P<0.01),Fas、caspase-3蛋白表达弱(0.205±0.006 vs 0.211±0.005、0.229±0.005 vs 0.244±0.010,均P<0.01).外源性SO2供体组与SHR对照组比较,血压低[(128±7)mm Hg],血管壁厚与内径比低(0.066±0.002),血浆SO2含量高[(8.3±1.0)μmoL/L],主动脉平滑肌细胞增殖指数低(0.14±0.03),凋亡指数高(0.40±0.11),主动脉平滑肌细Bcl-2蛋白表达低(0.199±0.006),Fas和caspase-3蛋白呈高表达(分别为0.218±0.003、0.251±0.011,均P<0.01).结论 SO2可抑制高血压大鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖、促进其细胞凋亡.SO2促进细胞凋亡的途径可能与其对主动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达的抑制作用以及对Fas和caspase-3蛋白表达的促进作用有关.     

PPA Rα与自发性高血压大鼠主动脉重构的关系研究

目的：阐明自发性高血压大鼠（SHR）主动脉血管重构（VR）与PPARα的关系,为进一步明确高血压动脉VR的分子机制奠定理论基础。方法：10只雄性SHR大鼠为实验组,10只同周龄雄性Wistar大鼠（WKY）为对照组,于16周龄和24周龄进行主动脉组织学观察和弹性纤维染色,观察VR的形态学表现,测定 PPARα蛋白在各组动物中的表达水平。结果：（1）16周龄SHR大鼠主动脉中膜血管平滑肌细胞（VSMC）总数无明显增加,24周龄SHR大鼠VSMC总数多于同周龄WKY组。（2）16周龄SHR主动脉管壁中层弹性膜排列紊乱,24周龄SHR弹性膜松散、断裂、厚薄不均。（3）PPARα蛋白在SHR组表达高于相同周龄WKY组,在16周龄SHR大鼠PPARα蛋白表达明显高于16周龄WKY大鼠。结论：PPARα蛋白的高表达在SHR主动脉VR中发挥重要作用。     

自发性高血压大鼠细胞凋亡相关基因蛋白的研究

目的：研究自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达的变化及其与心肌细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组化和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测Bax和Bcl-2基因蛋白及凋亡细胞。结果：(1)心肌细胞凋亡和Bax基因蛋白表达在1月龄SHR组(NLVH组)和18～20月龄SHR组(CHF组)显著增高且Bax基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著正相关(P均＜0.01)。(2)在10月龄SHR组(LVH组),心肌细胞凋亡显著降低但Bcl-2基因蛋白表达显著增高且Bcl-2基因蛋白表达与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。(3)NLVH组和CHF组Bcl-2/Bax比例显著降低,但LVH组Bcl-2/Bax比例显著增高且Bcl-2/Bax比例与心肌细胞凋亡呈显著负相关(P均＜0.01)。结论：SHR心肌细胞Bax和Bcl-2基因蛋白表达及心肌细胞凋亡存在动态变化,且Bax基因蛋白表达上调可能与SHR心肌细胞凋亡增加和CHF相关而Bcl-2基因蛋白表达上调则可能与SHR心肌细胞凋亡减少和LVH有关。因此,Bax和Bcl-2基因蛋白表达的动态变化可能在SHR心肌细胞凋亡和心脏重构中起重要作用。     

钩藤生物碱调节肠系膜动脉细胞增殖凋亡相关蛋白的研究

目的:研究钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉平滑肌细胞凋亡和增殖的影响。方法:将SHR分组,分别给予钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱,并以Wistar大鼠作为正常对照。采用HE染色法观测肠系膜动脉的病理形态,采用Masson染色法观察肠系膜动脉胶原含量,采用免疫组化法检测肠系膜动脉Bcl-2、Bax、c-myc、c-fos、MMP-9和TIMP-2的蛋白表达。结果:钩藤碱、异钩藤碱和钩藤总生物碱能减轻SHR肠系膜动脉的病理损害,降低动脉壁的胶原沉积,下调肠系膜动脉平滑肌Bcl-2、c-fos和TIMP-2蛋白表达,钩藤碱上调肠系膜动脉MMP-9蛋白表达。结论:钩藤碱和异钩藤碱可能通过下调原癌基因Bcl-2蛋白表达,促进SHR肠系膜动脉细胞凋亡,通过下调c-fos蛋白表达途径抑制SHR肠系膜动脉细胞异常增殖,并通过调节MMP-9和TIMP-2蛋白表达抑制SHR肠系膜动脉的胶原沉积,从而改善肠系膜动脉壁重塑。     

西红花苷对3β,5α,6β-三羟胆甾烷致内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的:研究西红花苷(crocin)对3β,5α,6β-三羟胆甾烷(cholestane-3β,5α,6β-triol,Triol)致血管内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:将内皮细胞分成正常对照组、模型组(25 μmol/L Triol)、西红花苷 (10-6 mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L) 25 μmol/L Triol组.采用诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量.光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,电泳法检测DNA 梯形条带、流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:用Triol处理后,培养液中MDA含量增加(P<0.01 vs control),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体、DNA 梯形条带和亚二倍体峰,细胞凋亡率为30.62%,Bax mRNA、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常对照组(P<0.01);西红花苷(10-7mol/L、10-6mol/L) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构完整,细胞凋亡率分别为24.4%、6.3%,细胞Bax和Caspase-3基因表达明显下调,Bcl-2基因表达上调(P<0.05 or P<0.01 vs Triol).结论:西红花苷可能是通过调节Bcl-2,Bax 和Caspase-3基因表达抑制Triol诱导的内皮细胞凋亡.     

辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡及对凋亡相关基因表达的影响

目的 :观察辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)凋亡及可能参与其中的凋亡相关基因。方法 :贴块法体外培养 VSMC,以透射电子显微镜技术、流式细仪 PI/Annexin 双重染色等鉴定细胞凋亡 ;Western印迹杂交法检测 Bax、Bcl- 2蛋白表达及 caspase- 3的激活情况。结果 :加入 30μmol/L辛伐他汀 2 4 h后电镜显示细胞呈典型的凋亡形态 ,PI/Annexin 染色流式细胞仪检测凋亡细胞占 (35 .5± 5 .8) %显著多于对照组 (15 .1± 5 .0 ) %(P<0 .0 5 ) ;辛伐他汀不改变 Bcl- 2蛋白的表达 ,而使 Bax蛋白表达增高并激活 caspase- 3。结论 :辛伐他汀能诱导VSMC产生凋亡 ,并与 Bax表达增高及 caspase- 3的激活有关