MR评价血管生长素转染自体骨髓基质细胞移植治疗缺血性心脏病的实验研究

目的应用MR评价转染血管生长素(ANG)的自体骨髓基质细胞(MSCs)移植于慢性缺血性心脏病动物模型猪后对心功能的保护和促血管新生作用。材料与方法将30只猪随机分3组,共有8只猪在建立动物模型的过程中死亡。剩余22只随机分为:注射转染ANG的自体MSCs组(组Ⅰ,n=8)、注射单纯转染ANG组(组Ⅱ,n=7)和注射空腺病毒载体的对照组(组Ⅲ,n=7)。处理后4周应用MR扫描检测各实验组射血分数,缺血、坏死及运动异常节段,荧光显微镜下标记细胞、血管数量。结果组Ⅰ、组Ⅱ治疗后射血分数明显提高,缺血节段明显减少(P<0.05),3组处理前后坏死、运动异常节段均无明显差异(P>0.05)。荧光显微镜下组Ⅰ缺血区内可见大量CM-DiI标记的移植存活细胞。组Ⅰ、组Ⅱ缺血区血管计数高于组Ⅲ并有统计学差异(P<0.05)。结论携带ANG的自体MSCs移植治疗缺血性心脏病具有明显的优越性,移植细胞成活率高,心功能和局部血运改善明显。     

重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况. 方法 将PCR获取的VEGF165目的 基因插入到pAATrackCMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经Pme I酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落.提取质粒并用Pac I酶切鉴定.线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒.并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度.体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察.转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VFGF165的表达水平. 结果 经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒.Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达.ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P＜0.01). 结论 pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VFGF165为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础.     

血管内皮生长因子基因转染自体骨髓血管内皮祖细胞治疗下肢缺血的实验研究

目的:利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF165)基因转染体外诱导的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),并移植到下肢缺血的高脂血日本大耳兔体内,观测其促进血管新生、改善肢体缺血的效果。方法:①制作高脂血兔,梯度离心法分离兔骨髓单个核细胞(MNCs),用内皮细胞专业培养基(EGM-2)诱导培养EPCs,并用双荧光染色法及免疫组化等方法进行鉴定。②脂质体介导携带EGFP标记的VEGF165质粒转染EPCs,用激光共聚焦显微镜检测VEGF蛋白的表达,用流式细胞仪检测转染率。③制作兔单侧下肢缺血模型,并将其随机分为A、B、C 3组,分别移植EPCs、VEGF165基因转染后的EPCs及EGM-2培养基,多种方法检测移植效果。结果:①诱导出的梭形细胞,经FITC-UEA-I和DiI-acLDL荧光双染证实为正在分化的EPCs,同时经免疫组化法证实其Flk-1和Ⅷ因子的表达。②激光共聚焦显微镜下见绿色荧光蛋白表达,证实VEGF165转染成功,经流式细胞仪检测得到转染率约22.5%。③DSA及免疫组化检查显示VEGF165基因转染后的EPCs移植后改善肢体缺血的效果优于其他2组。结论:VEGF基因转染EPCs后能改进EPCs质量,移植后促血管新生能力增强,其效果优于未转染组。     

血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的MRI实验研究

目的通过动物实验，探讨血管内皮祖细胞移植防治动脉粥样硬化形成的可行性。方法分离、鉴定并培养新西兰大白兔外周磁粒子标记血管内皮祖细胞（EPCs），制备氧化铁（Fe2O3）-多聚左旋赖氨酸（PLL）并体外标记EPCs。用2．5F球囊扩张并损伤兔右侧颈动脉血管内皮，对损伤血管进行局部EPCs移植，A组8只，移植Fe：O，-PLL标记的EPCs；B组3只，移植荧光标记的EPCs；C组5只为空白对照，局部注射生理盐水。细胞移植后4d，所有实验兔用1．5TMR仪进行活体颈动脉扫描，并任意选A、B、C组各1只，取受损伤血管做病理组织学检查，并与MRI信号变化进行对比分析，其余所有实验兔继续高脂饲料喂养，15周后对损伤血管做MR及病理组织学检查。结果EPCs的Fe2O3-PLL标记率〉95％，A组标记细胞移植后4d，MR T2·WI显示损伤血管壁呈明显低信号区，而B组和C组无明显异常信号改变；病理学检测显示A组损伤血管内膜有普鲁士蓝染色阳性细胞黏附，B组损伤血管内皮有强荧光表达，C组损伤血管内皮无表达。15周后，A、B组动脉粥样硬化形成（3／9）明显低于C组（4／4）。结论活体MR技术可示踪并检测EPCs在损伤血管内皮的黏附及分布；血管内皮祖细胞局部移植可预防动脉粥样硬化的形成。     

骨髓基质细胞移植治疗股骨头缺血性坏死的实验研究

目的:探讨骨髓基质细胞移植治疗股骨头坏死的疗效和治疗机制。方法:选用日本大耳白兔60只,随机分为A、B、C和D四组,各组制成激素性股骨头坏死模型。A组为对照组;B组为髓心减压组;C组为直接干细胞移植组;D组为倍增干细胞移植组。B组仅钻孔髓心减压;C组抽取骨髓分离后直接植入坏死的股骨头内;D组抽取骨髓分离、培养倍增后植入股骨头内。各组动物于治疗后8周处死,处死前后分别进行各种指标检测,包括钼靶X线摄影、CT扫描、MR扫描、骨密度测量、常规HE染色切片。结果:股骨头骨髓干细胞移植后8周,骨质密度X线改变不明显,CT和MR明显好转,骨密度增加。病理组织学表现空骨陷窝减少,成骨细胞增多,新骨形成。骨髓基质细胞移植治疗后显示股骨头修复效果明显,而倍增基质细胞移植效果更佳。结论:骨髓基质细胞移植治疗股骨头坏死能加速兔股骨头的修复进程,对股骨头坏死具有较高的治疗价值。     

细胞移植术治疗兔下肢缺血模型的影像学评价

目的:利用血管内皮生长因子(VEGF_(165))基因转染体外诱导的血管内皮祖细胞(EPCs)治疗慢性下肢缺血兔模型,探讨CTA、DSA及多普勒超声检查对缺血下肢侧支循环形成评价的敏感性,并比较各种检查方法的差异性。方法:①制作高脂血兔,梯度离心法分离兔骨髓单个核细胞(MNCs),用内皮细胞专业培养基(EGM-2)诱导培养EPCs,脂质体介导转染携带增强型绿色荧光蛋白EGFP标记的VEGF_(165)质粒转染EPCs,流式细胞仪检测整体转染率。②制作兔单侧下肢缺血模型,随机分为A、B、C组,分别移植注射未转染EPCs(EPCs组)、VEGF_(165)转染的EPCs(EPC/VEGF组)、EGM-2培养基(EGM-2组),多种方法检测移植效果。结果:①自兔骨髓诱导出的梭形贴壁细胞为EPCs。②流式细胞仪检测其总体转染率约22.5%。③DSA、CTA、多普勒超声及免疫组化显示移植基因修饰后的EPCs组比未转染EPCs组能更好地促进缺血肢体新生血管形成,改善缺血肢体血运。DSA较CTA对新生血管显示更清晰,各处理组内对2种检查结果进行比较,结果均具有统计学意义(P0.05)。结论:CTA、DSA及多普勒超声均能客观评价缺血下肢侧支循环建立情况,DSA对新生血管的显示上优于CTA,但DSA为有创检查,技术要求高,CTA为无创性检查,对缺血下肢评价时宜首选CTA检查,超声多普勒用于对治疗效果的长期随访。     

血管内皮祖细胞局部移植防治血管内皮损伤后再狭窄形成的实验研究

目的 探讨血管内皮祖细胞(EPC)局部移植防治血管成形术后再狭窄形成的可行性.方法 分离、鉴定并培养新西兰大白兔外周血(EPC),用2.5 F球囊扩张并损伤兔右侧颈动脉血管内皮,对损伤血管进行局部EPC移植.共作细胞移植兔13只,其中3只移植荧光标记EPC;对照组8只,局部灌注生理盐水.细胞移植后4 d,对2只荧光标记细胞移植兔取移植细胞后受损伤血管行病理组织学检查,其余实验兔4周后对损伤血管行病理组织学检查.结果 荧光标记细胞移植后4 d,病理学检测显示损伤血管内皮有强荧光表达;4周后,细胞移植组血管壁轻度增厚,对照组血管壁增厚明显,血管腔明显狭窄.两组间血管壁厚度差异有统计学意义(P＜0.01).结论 介入法局部移植同种异体血管内皮祖细胞可防治血管成形术后再狭窄的形成.     

心脏细胞移植的最新进展

骨髓单个核细胞可以升高内皮源细胞的水平,在缺血心肌内移植可以增加新生血管,分化为新生的心肌细胞,改善因缺血坏死引起心力衰竭的心脏。这些在动物实验及临床上已取得初步进展。本文综述了美国心脏大学年会会议期间关于细胞移植与新生血管、改善心脏功能、心律失常、二尖瓣返流等方面的内容。     

心脏细胞移植的最新进展

骨髓单个核细胞可以升高内皮源细胞的水平，在缺血心肌内移植可以增加新生血管，分化为新生的心肌细胞，改善因缺血坏死引起心力衰竭的心脏。这些在动物实验及临床上已取得初步进展。本文综述了美国心脏大学年会会议期间关于细胞移植与新生血管、改善心脏功能、心律失常、二尖瓣返流等方面的内容。     

pDsRed1-N1基因核转染兔原代骨髓基质细胞的实验研究

目的探讨以最近发展起米的核转染技术直接将编码红色荧光蛋白DNA质粒转染到兔原代骨髓基质细胞细胞核内进行基因修饰的可行性。方法从兔股骨抽取骨髓，密度梯度离心法获取原代骨髓基质细胞。以Nucleofectorw^TM技术转染pDsRed1—N1（DsRed组），以同期培养未转染的细胞作为对照组。测定细胞的活力、贴壁率、生长曲线以及转染的效率。结果在转染后48h成功发现DsRed的表达。两组细胞具有相似的形态学变化、贴壁率以及生长曲线。DsRed的表达逐渐增强，至第10天达到最高峰（54．2％），观察1个月未发现表达减弱。结论pDsRed1-N1基因核转染对兔原代骨髓基质细胞的体外增殖无明显影响；DsRed可以作为兔骨髓基质细胞有效的基因表达标记；Nucleofector^TM技术是一种简易而高效的转染兔原代骨髓基质细胞的方法。     

游离NgR促进新生大鼠背根神经节突起体外生长

目的 观察生物合成的游离NgR对新生大鼠原代背根神经节(DRG)神经元突起生长的影响.方法 以ViraPowerTM慢病毒将NgR(310)ecto基因转染人培养的骨髓基质细胞,收集培养上清获得游离NgR.分离新生大鼠DRG神经元并分为两组,对照组直接将神经元种植到经含中枢神经系统(CNS)髓鞘蛋白包被的培养皿中培养;实验组先将骨髓基质细胞培养上清加入含CNS髓鞘蛋白的培养皿中,孵育4 h后再植入DRG神经元.两组细胞均在培养24 h后固定,进行βⅢ-tubulin免疫组织化学染色,图像观察神经元及其突起生长情况.结果 基因修饰的骨髓基质细胞,转染后48 h间接免疫荧光的方法检测可见胞浆内荧光表达.种植24 h后对照组DRG细胞很少有突起长出;而实验组DRG细胞中60%的神经元长出突起,且突起较长.结论 游离NgR能够竞争性结合脊髓损伤后局部分泌的轴突生长抑制因子,从而保护生理性NgR,可能是促轴突再生和脊髓功能恢复的一种新策略.     

新疆哈密市2019年家畜包虫病的监测与分析

目的:为全面掌握新疆哈密市2019年牛羊包虫病感染情况,科学评估包虫病流行趋势以及高风险区域的发病情况。方法:采用剖检和ELISA方法对哈密市牛羊感染包虫病情况进行检查分析。结果:2019年哈密市共剖检牛470头,阳性率3.62%,羊920只,阳性率5.22%;检测羊血清311份,阳性率为3.11%;检测犬粪342份,阳性率为1.46%。按区县统计,巴里坤县牛包虫病感染率最高,伊州区羊包虫病感染率最高。按地理环境统计,山北牧区比山南农区家畜感染率高。结论:与2018年相比,2019年哈密市包虫病感染率有所增加,说明哈密市在包虫病防控方面还需进一步加大力度,采取切实有效的方法控制家畜包虫病感染率增高的趋势,保障公共卫生安全和畜牧业健康发展。     

多层螺旋CT在儿童颈部囊状淋巴管瘤的应用

目的:探讨MSCT对儿童颈部囊状淋巴管瘤的诊断价值.方法:回顾性分析15例经病理证实的儿童颈部囊状淋巴管瘤MSCT表现并与手术病理所见对照.结果:儿童颈部囊状淋巴管瘤MSCT的特点:①多囊性;②可出现"液-液平面"征象;③沿疏松结缔组织生长;④增强扫描囊壁不强化或轻度强化,囊内容物不强化;⑤肿瘤包绕血管、神经及脂肪;⑥MSCT可以水平横断面、冠状面、矢状面结合显示病灶.结论:MSCT检查对儿童颈部囊状淋巴管瘤的诊断具有重要价值,有利于手术方案的制订,在评价肿瘤侵犯方面优于超声和普通CT.     

博利康尼协同普米克治疗小儿毛细支气管炎临床疗效分析

目的探讨分析博利康尼协同普米克治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效。方法选取2016年1月1日~2017年12月31日住院的小儿毛细支气管炎患者92例,将其随机分为对照组与研究组各46例,两组均进行综合性治疗,包括抗病毒、止咳等,对照组给予地塞米松磷酸钠静脉滴注,研究组采用博利康尼协同普米克雾化吸入,7 d后比较两组患者治疗效果。结果对照组治愈30例,好转16例,治愈率65.2%;研究组治愈42例,好转4例,治愈率91.3%。两组治愈率比较差异具有统计学意义(χ^2=5.800,P<0.05)。结论博利康尼协同普米克治疗小儿毛细支气管炎治愈率高,临床疗效肯定。     

小儿卵巢肿瘤的CT诊断价值

目的：利用多层螺旋CT分析小儿卵巢肿瘤的影像特点。方法：经手术病理确诊的27例女性患儿共34个卵巢肿瘤病例资料,年龄1.1-18.0岁,平均（11.7±5.1）岁;使用Philips Brilliance 6层螺旋CT进行平扫和增强扫描;1例肿瘤扭转的急腹症患儿仅行平扫。结果：CT表现为单纯囊性肿瘤11个（11/34,占32.35%）,实性肿瘤有9个（9/34,占26.47%）,囊实性肿块14个（14/34,占41.18%）。增强扫描后有29个卵巢肿瘤可见卵巢血管蒂征,占87.88%。12例可见腹水,4例有腹膜种植。9例淋巴结肿大,5例出现肝肺等远处转移。钙化15个,13个畸胎瘤均见钙化,同时可见钙化及脂肪成分者11个,2个畸胎瘤未见确切脂肪成分。结论：CT扫描易于显示肿瘤囊实性、钙化及脂肪成分以及卵巢静脉的走行等征象,对于小儿卵巢肿瘤的定位、定性及协助分期等有重要价值。     

某部官兵近10年来胃镜检查结果分析

 目的 分析某部官兵胃镜检查结果情况,为本地区官兵上消化道疾病的防治提供策略和依据。方法 回顾性分析2011-07至2021-06共10年间在武警浙江总队医院接受电子胃镜检查的1768例部队官兵的临床资料,分析各种上消化道疾病的检出率及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染率,并比较不同年龄、性别、职别、季节各主要疾病的发病情况。结果 近10年来该地区官兵常见上消化道疾病依次为: 慢性非萎缩性胃炎、胃炎伴糜烂、十二指肠球部溃疡、反流性食管炎、胃炎伴胆汁反流、慢性萎缩性胃炎、胃溃疡、贲门炎、十二指肠球炎,其检出率分别为97.00%、21.72%、9.95%、5.60%、3.11%、3.00%、1.70%、1.53%、1.41%;除贲门炎外,上述其余疾病的患病情况在不同年龄组之间有统计学差异(P<0.05);慢性非萎缩性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃炎伴糜烂、胃炎伴胆汁反流、反流性食管炎、胃息肉、胃癌的患病情况在不同职别人群之间有统计学差异(P<0.05);不同性别、不同季节之间比较各疾病发病情况无统计学差异(P>0.05)。总的Hp感染率为44.57%,干部Hp感染率明显高于战士(P<0.05);不同性别、不同年龄之间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论 慢性非萎缩性胃炎、胃炎伴糜烂、十二指肠球部溃疡、反流性食管炎、胃炎伴胆汁反流是本地区官兵最常见的上消化道疾病,慢性萎缩性胃炎、胃溃疡、胃息肉、上消化道肿瘤等疾病发病率较低;随着年龄的增长患病严重程度逐渐增加。     

99Tcm-DTPA所测GFR评价肾功能估算公式的价值

目的以肾小球滤过率（GFR）为标准，评价Cockcroft-Gault、肾脏病膳食改良研究（MDRD）、简化MDRD及Martin公式在评估肾功能损伤中的价值。方法选择120例行GFR测定的非透析患者，以MDRD、简化MDRD及Martin公式推算GFR，以Cockcroft-Gauh公式推算肌酐清除率，比较各推算值与GFR的差异及相关性。结果Cockcroft—Gauh公式推算值与GFR值差异有显著性。MDRD、简化MDRD和Martin公式推算值仅在GFR〈80ml·min^-1·（1．73m^2）^-1时与GFR差异无显著性，但只有在GFR〈50ml·min^-1·（1．73m^2）^-1时与GFR有相关性。结论Cockcroft-Gault公式不适用于评价中国人肾功能受损的情况。MDRD、简化MDRD及Martin公式仅在GFR〈50ml·min^-1·（1．73m^2）^-1时可用于粗略评价中国人肾小球滤过功能受损情况。     

雌二醇对早产儿视网膜病变的预防作用研究

 目的 探讨雌二醇对早产儿视网膜病变的预防作用及其可能的机制.方法 将新生鼠分为正常对照组、空白对照组、阴性对照组和试验组,后3组建立早产儿视网膜病变动物模型.试验组新生鼠从出生当天至出生后第10天给予17β-雌二醇皮下注射,阴性对照组每天皮下注射等量磷酸盐缓冲液(PBS液).以免疫组化方法检测视网膜中TNF-α表达的光密度值;通过HE染色测定各组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.结果 免疫组化测定正常对照组、空白对照组、阴性对照组及试验组TNF-α平均光密度值分别为0.0559±0.0332、0.2538±0.0792、0.2672±0.0884、0.0496±0.0232,空白对照组与正常对照组比较,差异有统计学意义(P﹤0.01),试验组与正常对照组比较无统计学意义(P＞0.05).视网膜突破内界膜的内皮细胞核数分别为0.310±0.465、17.250±4.573、16.36±3.773、0.450±0.500,空白对照组与正常对照组比较有统计学意义(P﹤0.01),试验组与正常对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 雌二醇可抑制视网膜新生血管的形成,对早产儿视网膜病变有一定的预防作用,其机制之一可能是雌二醇可抑制视网膜TNF-α的表达.     

Sensitivity of transabdominal ultrasonography in detection of intraperitoneal fluid in humans

The sensitivity and specificity of ultrasonography in detection of free intraperitoneal fluid is over 90 %. The lowest detectable volume of free fluid in humans is unknown. The distribution of intraperitoneal fluid was studied in 86 patients by transabdominal US in group A (n = 21, 10 ml of fluid), in group B (n = 15, 50 ml of fluid) and group C (n = 50, splenic trauma). Ultrasound detected fluid in 15 of 21 patients in group A, and in all patients in groups B and C. In group A 10 ml of fluid was found in 71 % of cases behind the bladder, and in only 5–14 % of cases in the upper abdomen. In group B 50 ml of fluid was found in all patients in the lower pelvis, but in only 20 % in Morison's pouch and in 7 % around the spleen. In group C 200–4500 ml of fluid was detected by US in 72 % of patients in the perisplenic space, in 60 % in Morison's pouch and in 42 % in the retrovesical space. Small volumes of free intraperitoneal fluid (10–50 ml) can be detected with current US scanners, but only near the site of injury. These results support the role of US as a primary imaging modality in abdominal trauma. Received: 26 June 1998; Revision received: 6 November 1998; Accepted: 10 November 1998     

西藏林芝地区吸血蚂蟥的生态学调查

目的调查西藏林芝、墨脱一线山地蚂蟥生态习性及危害状况，为研究和制定防治方法提供数据。方法沿G318国道，采取“线路法”、“点线结合法“及“访问法”，同时记录调查时的地理经纬度和实时环境温度和湿度。结果与结论西藏林芝、墨脱的山地蚂蟥的种类优势种为斯里兰卡山蛭，模式亚种Haemadipsa zeylanica zeylanica（Moquin—Tandon，1826），又名斑纹山蛭，该山蛭每年的季节高峰在3—8月，尤其是6—7月。蚂蟥分布范围在通麦、墨脱一带，地理位置位于北纬29°～34°，东经95°左右，海拔高度在2000m以下的地区。活动地区环境中平均温度’22．3°C，最高温度43．9℃，最低温度13℃；平均相对湿度55．3％，最高湿度78％，最低湿度22．9％。调查地段从林芝到通麦，沿路调查点，海拔高度2052～3181m，蚂蟥在2052m的调查点通麦发现。人体诱捕蚂蟥平均指数为7．1条/15rain。