间日疟原虫MSP1 C重组蛋白的制备及其在血清学诊断中的应用

目的在大肠埃希菌（E，coli）中表达、纯化间日疟原虫裂殖子表面蛋1C端重组蛋白（rGST—PvMSP1C）作为诊断抗原，评价其在间日疟血清学诊断中的应用价值。方法将含有重组质粒pGEX-4T-2／PvMSP1C的工程菌E．coil BL21（DE3）以IPTG进行诱导表达，表达产物以SDS—PAGE与Western—blot免疫印迹进行鉴定；采用GST融合蛋白层析柱进行分离纯化；以纯化重组蛋白包被酶标板，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测间日疟患者血清中的特异性IgG抗体。结果含有重组质粒pGEX-4T-2／PvMSP1C工程菌经IPTG诱导表达的rGST—PvMSP1C重组蛋白大小约63ku，能够被间日疟患者的血清所识别。纯化的重组蛋白SDS—PAGE电泳显示一条预期大小的蛋白条带；以重组蛋白作诊断抗原，67份镜检阳性的间日患者血清标本ELISA均为阳性。55份健康人血清ELISA均为阴性．5份恶性疟患者血清及7份血吸虫患者血清检测结果亦为阴性。结论在大肠埃希菌中表达纯化的间日疟原虫rGST—PvMSP1C蛋白具有免疫反应性，以其作为诊断抗原建立的血清中特异性IgG抗体ELISA检测方法具有良好敏感性和特异性，在间日疟的免疫学诊断中具有一定的推广使用价值。     

卫氏肺吸虫重组抗原的制备及初步应用研究

目的：纯化重组细菌Pw-1／pRSET B／BL21的表达产物肺吸虫重组抗原，复性后以ELISA法检测肺吸虫病患者、其他寄生虫病患者和正常人血清，评价其敏感性、特异性和应用前景。方法：通过分步洗涤及透析对细菌重组蛋白进行初步纯化．进一步做快速液相层析纯化，比较前后两法的纯化效果。初步纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白抗原(以下简称重组抗原)。用该重组抗原，以ELISA法检测肺吸虫、血吸虫、肝吸虫、囊虫和包虫病患者以及正常人血清中相应抗体，并与卫氏肺吸虫粗抗原做比较。结果：经分步洗涤及透析纯化后的重组抗原纯度已较高，快速液相层析进一步纯化效果不明显。以初步纯化后经复性的重组抗原进行ELISA法检测肺吸虫病患者血清，敏感性为91．07％，与其他寄生虫病患者和正常人血清均无交叉反应；粗抗原检测肺吸虫病患者血清敏感性虽为100％，但与其他寄生虫病患者和正常人血清交叉反应率分别为：血吸虫病11．43％，肝吸虫病4．84％，囊虫病3．22％，包虫病5．88％，正常人为2．5％。结论：研究制备的重组抗原应用于肺吸虫病的免疫诊断特异性较高。     

结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值

目的 对结核分枝杆菌( MTB) PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637~731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测.     

重组SARS-CoV刺突蛋白基因片段的原核表达及纯化

目的:冠状病毒(SARS-CoV)的刺突蛋白(spike glycoprotein,S蛋白)是病毒的主要结构蛋白之一,也是重要的病毒抗原,重组S蛋白的表达可用于检测病毒感染后血清抗体.方法:根据抗原性预测分析结果,将S蛋白中抗原决定簇的编码基因重新拼接成两个新的基因,通过全基因合成方式直接合成至原核表达载体pET32a( ),转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Ni-NTA试剂盒纯化目的蛋白.结果:SDS-PAGE证实重组S蛋白的表达,并被纯化.结论:重组刺突蛋白的表达及纯化,可做为检测SARS-CoV抗体的抗原,有助于进一步开展SARS-CoV相关研究.     

重组日本血吸虫极低密度脂结合蛋白的抗原性及诊断价值的研究

目的探讨重组日本血吸虫特异性极低密度脂结合蛋白(SVLBP)的抗原性及其诊断价值。方法SVLBP基因亚克隆人pQE-30表达载体，克隆菌在IPTG诱导下表达重组蛋白；非变性条件下制备克隆菌裂解液，用亲和层析法纯化重组蛋白；用Westem blot鉴定其抗原性；纯化SVLBP重组蛋白免疫家兔获得抗血清；以SVLBP重组蛋白为抗原，ELISA法检测血吸虫感染者血清及健康人血清。结果克隆菌在IPTG诱导下高表达SVLBP重组蛋白；该重组蛋白诱导家兔产生单特异抗体，抗体滴度为1：6400；SVLBP重组蛋白与血吸虫病人血清有较强的反应；以该蛋白为抗原检测36人份血吸虫感染者血清，阳性率为8313％，50人份健康人血清，假阳性率为2％(I/50)，10人份肺吸虫病人血清，1例阳性，交叉反应率为10％0／10)。结论SVLBP重组蛋白有较好的抗原性。以该重组蛋白为抗原检测日本血吸虫病患者血清中特异性抗体，敏感性和特异性均较高，具有一定的诊断价值。     

乙型肝炎病毒S基因片段的克隆及其原核表达的实验研究

目的：获得adw亚型乙肝病毒表面抗原S基因在原核中的克隆和表达，经家兔免疫后产生抗-HBs抗体。方法：从乙型肝炎病人血清中提取HBV DNA后扩增出501bp的核苷酸片段，经纯化限制性内切酶(BamH Ⅰ和HindⅢ)切后，分别与PUC19和pGEME^XM—1载体连接后转化入宿主菌JM109中和BL21，重组质粒经蓝／白斑，筛选、PCR鉴定、酶切鉴定，序列分析得到阳性重组质粒pGE-S。通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21中表达出重组抗原，重组抗原免疫家兔后，用ELISA法在血清中检测到抗-HBs的存在。结果：HBV DNA经扩增得到501bp的核苷酸片段，与质粒重组后形成的重组质粒，在IPTG诱导形成重组抗原，重组抗原两次免疫家兔后的血清抗体阳性率比较，差别有显著性(X^2=0．25，P≤0．05)。     

SARS病毒S蛋白的原核表达与DNA疫苗的构建

目的探讨SARS冠状病毒的刺突(spike，S)蛋白的免疫学特性，以及S蛋白作为SARS—CoV病毒疫苗组分的可行性。方法将S蛋白基因分段克隆入原核表达载体pET—15b，并在大肠杆菌中表达，经过亲和层析得到纯化的重组蛋白rSa和rSb；将全长S基因克隆入真核分泌表达载体pSecTagB，得到重组DNA疫苗pSecS，免疫小鼠，得到SAS—CoV S蛋白抗血清。然后用纯化的重组蛋白rSa和rSb建立的SARS—CoV S抗体ELISA检测技术研究所构建的S-DNA疫苗的免疫效果。结果分段的重组蛋白rSa和rSb在大肠杆菌中均以可溶性形式得到高效表达，并能与SARS确诊病人血清以及pSecS免疫鼠血清发生特异性抗原抗体反应，原核表达的重组分段S蛋白具有SARS—CoV S蛋白相似的抗原性。结论原核表达的两段重组S蛋白有可能作为抗原组分用于临床SARS—CoV检测中；所构建的SARS—CoV的S基因核酸疫苗能在小鼠体内产生特异性抗体，这为进一步SARS DNA疫苗的研制提供一定的借鉴作用。     

含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10。在大肠杆菌中诱导表达HisZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签。用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果成功构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达。利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验。结论本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。     

ΦC31整合酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的：提供ΦC31整合酶研究所需的大量纯化蛋白质及特异性抗体。方法：将编码ΦC31整合酶的ORF插入到pET22b载体构建表达质粒并转化E．coliBL21（DE3），用IPTG诱导表达His-C31整合酶融合蛋白，His-BindQuick Cartridge纯化表达产物。重组蛋白作为抗原常规免疫家兔制备相应的多克隆抗体，Westernblotting确定抗体的特异性，体外线性底物分子内重组检测系统检测抗体的活性。最后用该抗体检测了ΦC31整合酶在真核细胞HEK293中的定位和分布。结果：16℃条件下O．2mmol／LIPTG诱导培养30h，携带pETa2b—ΦC31质粒的E-coliBL21（DE3）在YTG培养基中，可表达出大量的融合蛋白，该蛋白经体外线性底物分子内重组检测系统检验具有较高的活性。使用该融合蛋白免疫新西兰大白兔后，分离兔血清可得到ΦC31整合酶多克隆抗体，Westernblotting和荧光免疫细胞组织化学方法证实，该抗体可特异性地识别细菌及细胞表达的ΦC31整合酶蛋白抗原。结论：本实验建立了表达ΦC31整合酶的方法，并成功制备了ΦC31整合酶特异性抗体。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的：在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶（GDH）与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白，测定重组蛋白的免疫活性。方法：采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫（海南株）GDH基因，双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达，重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清，并用琼脂双向扩散法检测效价，ELISA、Westernblotting检测重组抗原的免疫活性。结果：获到了重组表达的抗原蛋白，表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应，并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答，免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1：16。结论：恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

巨噬细胞功能M1/M2极性化在心血管疾病中的研究进展

巨噬细胞是先天免疫系统的主要细胞,具有可塑性和异质性,在机体的免疫应答、组织稳态、重塑等多方面发挥重要功能。根据功能极性可分为M1(促炎)和M2(抗炎)2个亚型。M1/M2巨噬细胞在响应局部微环境的刺激反应过程中,通过改变其功能极化,获得特定的功能表型并分泌不同的细胞因子。巨噬细胞通过改变代谢重编程以适应其功能变化。M2巨噬细胞以氧化磷酸化和脂肪酸为能量代谢的主要方式,而M1巨噬细胞为无氧糖酵解。目前研究发现在心血管疾病中,巨噬细胞可能通过其功能极性变化引起巨噬细胞激活、组织浸润、释放促炎性细胞因子而参与心血管疾病的发生。本文对巨噬细胞功能极化、代谢重编程在心血管疾病中的作用进行综述。     

笑肌、颧大肌、颧小肌的测量

目的探讨与笑相关的笑肌、颧大肌、颧小肌的解剖学规律 ,为颜面部整形美容提供解剖学依据。方法选取正常成年尸体 3 0例 ,解剖观察笑肌、颧大肌、颧小肌的形态 ,并测量其长度与夹角。结果颧大肌起自颧骨前面 ,止于口角皮肤 ,颧小肌起自颧骨 ,止于鼻唇沟下部附近皮肤 ,笑肌起自腮腺咬肌筋膜 ,止于口角皮肤 ;颧大肌、颧小肌、笑肌长依次为 5 5 .2± 2 .3mm、5 2 .3± 1 .8mm、5 0 .1± 1 .6mm ;笑肌、颧大肌、颧小肌长径与口裂间以及笑肌与颧大肌间的夹角依次为 8.9± 1 .1、3 2 .6± 1 .8、40 .1± 2 .5、2 4.6±2 .7度。结论为临床颜面部整形美容提供了解剖学依据     

拉米夫定治疗中HBV多聚酶M204V/M204I和L180M变异的检测及意义

目的：建立以PCR—RFLP检测HBV多聚酶M204V／M2041和L180M变异的方法,探寻上述位点变异之间的关系。方法：构建质粒pUCm—V M／I L,采用基因序列测定技术以确证PCR—RFLP检测HBV多聚酶M204V／M204I和L180M变异的方法。采用建立的方法对拉米夫定治疗过程中发生耐药变异的41例慢性HBV感染患者进行YMDD变异类型的检测。结果：①建立了检测HBV多聚酶M204V／M204I和L180M变异的PCR—RFLP方法,且与基因序列测定的结果一致;②HBV多聚酶M204V变异,占YMDD变异的31．7％(13／41),均伴有L180M变异;M204I变异占YMDD变异的68．3％(28／41),其中46．4％(13／28)伴有L180M变异。结论：①HBV多聚酶M204V／M2041和L180M变异的PCR—RFLP检测方法可靠;②M204V变异均伴有L180M变异,46．4％的M204I变异也伴有L180M变异。     

抑瘤素M在膝关节骨关节炎中的表达

目的检测抑瘤素M(OSM)在骨关节炎(OA)和正常滑膜组织中的表达差异,探讨OSM在骨关节炎发病中的作用。方法术中留取33例OA严重病变组、10例OA轻微病变组、8例正常对照组的滑膜组织。采用实时定量PCR技术检测各组膝关节滑膜组织中OSM的表达,免疫组织化学法检测各组滑膜组织中OSM的分布与表达。结果在膝关节滑膜组织中,OA严重病变组、OA轻微病变组和正常对照组均能检测出OSM阳性表达且与病情严重程度呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。OA轻微病变组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OA患者滑膜细胞高表达OSM与病情相关。OSM在骨关节炎的发病过程中起到重要作用。     

海马内M1和M2受体与学习记忆关系的研究

目的 研究海马内M1和M2受体亚型对学习记忆的调节。方法 SD大鼠分为3组，海马内分别微重注射M1、M2反义寡核苷酸(MASODN)，以海马内注射生理盐水作为对照组，观察药物对大鼠被动逃避反应步入潜伏期的影响。结果 海马内注射M2ASODN大鼠的步入潜伏期显著缩短，较对照组减少75％，海马内注射M2ASODN大鼠的步入潜伏期显著延长。结论 海马内M1受体可正向调节学习记忆，而M2受体负向调节学习记忆。     

利用实验小鼠建立Chandipura病毒动物模型

[目的]摸清STLV-1感染现状,从而有效地降低STLV-1在猕猴、食蟹猴群中的的感染率。[方法]采用STLV-1ELISA法对猕猴、食蟹猴血清进行抗体检测。结果本中心送美国BioReliance公司的2455只出口猴血清,103份血清呈STLV-1抗体阳性,19份血清呈STLV-1抗体可疑,其余血清均为STLV-1抗体阴性。[结论]猕猴、食蟹猴群中STLV-1的平均感染率为4.97%,其中猕猴STLV-1感染率为2.7%,食蟹猴STLV-1感染率为5.4%,是猕猴STLV-1感染率的2倍;随着年龄的增长,猕猴(食蟹猴)STLV-1的感染率也随之升高。     

结核性胸膜炎患者胸腔积液M1/M2巨噬细胞比例与预后

目的 分析结核性胸膜炎（tuberculous pleurisy,TP）患者单核细胞中M1/M2巨噬细胞比例与TP预后的关系。方法选取2019年6月至2022年12月浙江大学医学院附属第二医院临平院区诊治的TP患者206例,以单因素与多因素Logistic回归分析影响TP预后的危险因素,采用受试者操作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线评估M1/M2单核–吞噬细胞比例对TP预后不良的预测价值。结果 Logistic分析显示,发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素（P<0.05）;M1及M2巨噬细胞表达水平预测TP患者预后不良的曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.783、0.829,敏感度分别为70.45%、81.47%,特异性分别为79.62%、73.44%,M1/M2巨噬细胞比例预测TP患者预后不良的AUC为0.921、敏感度为92.59%、特异性为84.96%,均明显大于二者单独预测（P<0.05）。结论 ...     

以CB-HRP标记支配大鼠坐骨海绵体肌、球海绵体肌和胸乳突肌的神经元及其树突

给成年雄鼠的坐骨海绵体肌,球海绵体肌注射酶标类霍乱原,在腰骶段脊髓灰质可标出三组神经元:背内侧组(DM)、腹组(V)及腹外侧组(VL)。各组神经元树突通过不同途径抵达软脊膜下,DM组神经元树突可达室管膜下。给雄鼠胸乳突肌注射CB-HRP,在颈髓标出:背内侧组(DM)、腹组(V)及位于Rexed第X板层(或Rexed第Ⅶ板层最内侧)的背内侧背组(RDM)三组神经元。RDM组的发现为胸乳突肌的特殊内脏运动的本质提供了新证据.DM组神经元树突可达软膜下和室管膜下,RDM神经元树突可达室管膜下。上述软膜下及室管膜下树突的存在,反映了中枢运动神经元“旁侧回路”存在的普遍性。     

The M of MCH

The ways in which better prenatal, intrapartum and postpartum care of mothers in Papua New Guinea could decrease perinatal mortality are discussed. Papua New Guinea has a fairly well developed system of rural health care, with teams visiting villages monthly. Emphasis on immunization and acute treatment of children, however, often consumes workers' time so that pregnant women are neglected. Tabulations of perinatal mortality in the Port Moresby General Hospital suggest that 14 to 49% of these deaths could have been prevented. 90% of babies born in the Central Province and National Capital District were delivered in this hospital. There were 132 stillbirths at the hospital in 1985, of which 10 were considered preventable. Prematurity is a common cause of neonatal mortality at the hospital, while infection, often associated with difficult labor, is more common in the rural highlands. There are 3 essential components of good antenatal care: selection of high-risk women for institutional delivery, prophylaxis for anemia, malaria and tetanus, and management of obstetric problems. Often good nutrition, rest from hard physical labor and cleanliness will make a significant impact. Cephalopelvic disproportion frequently complicates delivery, therefore sending all small primigravidae for institutional delivery would be ideal. The most important element of postpartum care is establishment of lactation. In Papua New Guinea, cultural mores regarding sexual abstinence after pregnancy are breaking down, necessitating the introduction of modern family planning.     

上海产10兆加速器维修几例

故障现象1主控柜上连锁保护指示灯XD1-XD12全部熄灭,无法开机.