通督醒神针刺法对脑缺血再灌注后学习记忆障碍模型大鼠海马组织AMPA受体及其辅助蛋白表达的影响

目的 探讨通督醒神针刺法治疗脑卒中后认知障碍的可能作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组各12只，通督醒神组13只。模型组和通督醒神组大鼠均接受线栓法建立脑缺血再灌注后学习记忆障碍大鼠模型。造模成功后通督醒神组大鼠选取“神庭”“百会”穴电针干预，每日1次，每次30 min，持续14天，其余各组只抓取不进行其他干预。于干预的第9天开始进行5天的定位航行实验，于干预的第14天进行空间探索实验评价大鼠学习记忆能力。空间探索实验后，每组大鼠取材海马组织，采用TTC染色法观察脑梗死体积变化；高尔基染色法观察大鼠海马CA1区锥体神经元形态及树突棘密度改变；运用蛋白质免疫印迹法检测各组大鼠海马组织α-氨基-3-羧基-5-甲基异恶唑-4-丙酸（AMPA）受体亚基谷氨酸受体1 (GluR1)、谷氨酸受体2 (GluR2)、谷氨酸受体3 (GluR3)及辅助蛋白跨膜AMPA受体调节蛋白γ2(TARPγ2)、跨膜AMPA受体调节蛋白γ8 (TARPγ8)蛋白相对表达量；运用实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织GluR1、GluR2、GluR3 mRNA水平。结果 定位航行实验中，与正常组和...     

穴位埋线对癫痫大鼠认知行为、海马神经元丢失程度、及BDNF蛋白表达的影响

目的:观察穴位埋线疗法对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠认知行为学、镜下海马CAl区神经元丢失程度半定量分析及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响。方法:80只健康SD雄鼠随机分为空白组、模型组、西药组及埋线组,每组20只。癫痫模型建立后分别进行相应的干预共28 d,选择干预前及末次干预2个时间点,分别对各组大鼠进行拒俘反应实验;到达预定存活时间时,处死各组大鼠取海马,尼氏染色法半定量分析各组海马CAl区的神经细胞丢失程度,免疫组化法检测各组海马CA1区BDNF蛋白表达的情况。结果:西药组及埋线组大鼠攻击行为和逃避行为明显减少(P<0.05);西药组、埋线组神经元丢失程度有所减轻(P<0.05);西药及穴位埋线干预后海马中BDNF表达均较模型组增高(P<0.05);各指标西药组与埋线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:癫痫可造成大鼠认知障碍,穴位埋线可以通过间接提高BDNF蛋白表达以减缓海马神经细胞丢失程度,具有明显的改善癫痫后认知障碍的作用,疗效与口服抗癫痫药左乙拉西坦相当。     

腹部推拿对慢性疲劳综合征模型大鼠海马区Ca2+浓度及MAPK、ERK蛋白表达的影响

目的:观察腹部推拿对慢性疲劳综合征(CFS)模型大鼠行为学和海马区Ca~(2+)及细胞外信号调节激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响,探讨腹部推拿干预CFS的中枢分子机制。方法:选用SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、腹推组,每组10只。采用慢性应激方式建立CFS模型。腹推组给予按"关元",摩"中脘"穴两手法治疗20 min,以上治疗均为每天1次,连续14 d。空白组与模型组不施加干预措施,模型组抓取固定。观察大鼠体质量,通过旷场实验评价大鼠的行为学,利用Fura-3/AM荧光探针法测定海马内Ca~(2+)浓度,Western blotting法测定大鼠海马区MAPK、ERK蛋白表达。结果:干预前,与正常组比较,模型组、腹推组大鼠体质量、旷场实验水平运动和垂直运动得分较低,海马区Ca~(2+)浓度、MAPK、ERK蛋白表达较高(均P0.01)。腹推组和模型组各指标间比较差异均无统计学意义(均P0.05)。干预后,腹推组与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。同时,与模型组比较,腹推组上述指标均明显改善,腹推组大鼠体质量、旷场实验水平运动和垂直运动得分升高,海马区Ca~(2+)浓度降低(均P0.01),而MAPK、ERK蛋白表达降低但差异无统计学意义。但与正常组各指标间比较差异仍有明显统计学意义(均P0.05)。结论:腹部推拿干预CFS的机制可能与平衡海马内Ca~(2+)浓度,下调MAPK、ERK等蛋白的表达有关。     

逍遥散调节肝郁脾虚大鼠中枢AMPA受体及相关蛋白的机制研究

目的:观察逍遥散和6-氰基-7-硝喹啉-2,3-双酮(CNQX)对慢性束缚应激所致肝郁脾虚证大鼠中枢AMPA受体及其相关蛋白表达的影响,探讨逍遥散的作用机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、逍遥散组(D组)、CNQX组(E组)和逍遥散+CNQX组(F组)。C、D、E、F组大鼠通过连续21d慢性束缚应激建立肝郁脾虚证候模型,D、F组大鼠每天束缚前灌服逍遥散5.32g/kg,E、F组大鼠隔天右侧杏仁核区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体拮抗剂CNQX 0.5μL。各组动物第22d处死,免疫组化方法检测海马CA1区、CA3区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)水平。结果:模型大鼠GluR2/3在海马CA1、CA3区明显减少,BLA区明显增加;NSF在海马CA1、CA3区有减少趋势;PICK1在海马CA3区明显增加。CNQX和逍遥散对模型大鼠GluR2/3 PICK1在海马的变化均有调节作用。逍遥散联合CNQX作用于慢性束缚应激大鼠与单独使用逍遥散或CNQX后呈现一致性。结论:调节AMPA受体及其相关蛋白在海马各区和杏仁核的兴奋性至少是逍遥散调节突触可塑性、进一步治疗应激和抑郁的作用途径之一。     

束缚应激大鼠中枢AMPA受体和相关蛋白mRNA表达的变化及逍遥散对其调节作用

目的观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体各亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下的mRNA表达变化及逍遥散的作用。方法使用捆绑的方法制作束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7天后和21天后检测模型大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回（DG）、杏仁核AMPA受体亚基GluR1-4、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性融合蛋白（NSF）、PKC作用蛋白1（PICKl）mRNA表达的情况。结果7天束缚应激状态下,GIuRlmRNA在海马CA1区表达显著下降（P〈0．05）,在CA3区和杏仁核表达显著上升（均P〈0．05）,GluR2、GluR3mRNA在杏仁核（均P〈0．05）,GluR4mRNA在CA1区（P〈0．01）表达显著增高,NSF、PICK1mRNA表达在杏仁核有明显增高趋势;逍遥散对CA1区GluR4及杏仁核GluRl、GluR2、GluR3mRNA表达变化有显著调节作用（P〈0．05,P〈0．01）。21天束缚应激状态下,CA1区GluR4、DG的GluR2mRNA表达显著下降（均P〈0．05）,杏仁核GluRlmRNA表达显著增强（P〈0．01）;逍遥散对CA1区GIuRl、GluR4mRNA表达变化有显著调节作用（均P〈0．05）。结论短期重复应激对于AMPA受体各亚基mRNA表达的影响较强,逍遥散对AMPA受体各亚基mRNA表达的调节在海马CA1区和杏仁核较明显。     

激动肝郁脾虚证大鼠海马CA1区AMPA受体对杏仁核区AMPA受体亚基基因表达的影响及逍遥散的调节作用

目的:探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的基因调节机制。方法:25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)组和逍遥散组。以21d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型组。假手术组、AMPA组和逍遥散组均采用21d慢性束缚联合脑部埋管微量注射方法造模,AMPA组在双侧海马CA1区埋管微量注射AMPA,逍遥散组灌服逍遥散溶液。运用RT-PCR一步法检测海马CA1区和杏仁核区AMPA受体的重要亚基GluR1 mRNA和GluR2 mRNA的表达变化。结果:在杏仁核区,与AMPA组比较,逍遥散组GluR1mRNA和GluR2 mRNA表达差异无统计学意义;在海马CA1区,与正常组比较,AMPA组GluR1 mRNA和GluR2mRNA表达差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与AMPA组比较,逍遥散组GluR1 mRNA和GluR2 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:结合前期实验,从基因表达角度,进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。     

穴位埋线对慢性应激复合衰老模型大鼠海马自噬的影响

目的:通过观察穴位埋线对慢性应激复合衰老大鼠神经元组织形态及海马自噬影响,探讨慢性应激的促衰老作用及穴位埋线的抗衰机制。方法:将3月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型一组、模型二组、穴位埋线组、假埋线组,每组9只。模型一组予D-半乳糖[120 mg/(kg·d)]腹腔注射;模型二组、穴位埋线组、假埋线组予慢性应激复合D-半乳糖[120 mg/(kg·d)]腹腔注射;穴位埋线组每周埋线一次,假埋线组每周假埋线一次。实验结束后对海马进行HE及尼氏染色,观察海马的组织形态结构;q PCR检测海马ULK1、Beclin1、LC3-II、P62 mRNA的表达。结果:(1)与空白对照组相比,模型一组大鼠海马神经元组织结构疏松,排列紊乱,细胞层次减少,部分神经元萎缩,尼氏体减少,模型二组的大鼠海马神经元组织更加疏松,细胞间隙显著增大,大量神经元萎缩深染,神经元数量进一步减少,尼氏体减少甚至消失。穴位埋线组大鼠海马神经元排列较整齐致密,细胞间隙稍增大,尼氏体清晰;而假埋线组海马神经元结构较模型二组大鼠并无明显差异。(2)与空白对照组相比,模型一组大鼠海马神经元ULK1、Beclin1 mRNA的表达有升高趋势,LC3-II、P62 mRNA表达升高;与模型一组相比,模型二组的大鼠海马神经元LC3-II、P62 mRNA表达进一步升高,ULK1、Beclin1 mRNA表达有升高趋势;与模型二组相比,穴位埋线组大鼠海马神经元ULK1、Beclin1、LC3-II、P62 mRNA表达均降低,假埋线组大鼠海马神经元ULK1、Beclin1、LC3-II、P62 mRNA表达则无明显差异。结论:慢性应激确实会通过影响衰老大鼠海马神经元的自噬功能从而加速海马的老化,穴位埋线可以拮抗应激性衰老机体海马神经元的自噬流损伤,从而保护海马神经元,延缓衰老。     

益肾化浊方对阿尔茨海默病模型大鼠海马区Ca~(2+)浓度及钙相关记忆蛋白表达的影响

目的观察益肾化浊方对AD模型大鼠海马区Ca~(2+)浓度及钙相关记忆蛋白表达的影响,初步探讨益肾化浊方治疗AD的部分作用机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组和益肾化浊方组。采用右侧侧脑室注射Aβ25-35建立AD模型,造模成功后益肾化浊方组大鼠按照4.32g·kg~(-1)·d~(-1)剂量给予药液灌胃,假手术组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃,持续4周。采用Rhod 2-AM荧光探针法和Western blot检测各组大鼠海马区突触Ca~(2+)浓度及Ca MKⅡ、NR2B、CREB、BDNF和Trk B蛋白的表达。结果 (1)Rhod 2-AM荧光探针法检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠钙离子浓度显著升高(P0.01);与模型组相比,益肾化浊方组钙离子浓度显著减低(P0.01),差异具有统计学意义。(2)Western blot检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠海马区NR2B、Ca MKⅡ、CREB、BDNF和Trk B蛋白的表达显著降低(P0.01);与模型组比较,益肾化浊方组NR2B、Ca MKⅡ、CREB、BDNF和Trk B蛋白显著升高(P0.01),差异具有统计学意义。结论益肾化浊方治疗AD的作用机制可能与调节海马突触体内Ca~(2+)浓度,减轻Aβ诱发的神经毒性;同时增加钙相关记忆蛋白的表达有关。     

心痛方对急性心肌梗死大鼠CaMK Ⅱ mRNA表达及钙离子浓度的影响

目的:探究心痛方对心肌梗死大鼠钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)mRNA表达及钙离子(Ca~(2+))浓度的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组、模型组、心痛方高剂量组、心痛方低剂量组、硫氮卓酮组,采用结扎冠状动脉的方法建立急性心肌梗死大鼠模型,运用RT-PCR法测定各组大鼠心肌组织Ca MKⅡmRNA的表达,激光扫描共聚显微镜法检测心肌组织内Ca~(2+)浓度,HE染色法测定心肌梗死面积。结果:与模型组比较,心痛方高、低剂量组与硫氮卓酮组Ca MKⅡmRNA表达及Ca~(2+)浓度均降低、心肌梗死面积缩小(P0.01或P0.05);与心痛方低剂量组比较,心痛方高剂量组、硫氮卓酮组Ca MKⅡmRNA表达、Ca~(2+)浓度均降低(P0.01),心痛方高剂量组心肌梗死面积缩小(P0.05);与硫氮卓酮组比较,心痛方高剂量组Ca MKⅡmRNA表达、Ca~(2+)浓度均降低(P0.01),心痛方高、低剂量组心肌梗死面积均缩小(P0.01或P0.05)。结论:心痛方能下调急性心肌梗死大鼠Ca MKⅡmRNA的表达,降低胞内Ca~(2+)浓度,从而拮抗钙超载对心肌细胞的损害,缩小心肌梗死面积。     

电针对血管性痴呆大鼠海马谷氨酸、钙离子含量及N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的:观察电针对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织谷氨酸(Glu)、钙离子(Ca~(2+))含量和N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)表达及其学习记忆能力的影响,探讨电针治疗VD的作用机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组。采用反复阻断双侧颈总动脉加腹腔注射硝普钠的方法制备缺血再灌注VD模型大鼠。电针组电针"大椎""百会"和双侧"后三里""膈俞",每次10min,每日1次,连续15d。观察各组大鼠跳台学习记忆成绩,分光光度计法检测海马组织Glu及Ca~(2+)含量,免疫蛋白印迹法检测NMDAR表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠卒中指数及神经功能评分显著升高(P0.05),学习和记忆成绩均显著降低(P0.01),海马组织Glu、Ca~(2+)含量及NMDAR表达均显著增高(P0.01)。与模型组比较,电针组大鼠学习记忆成绩显著提高(P0.01),Glu、Ca~(2+)含量及NMDAR表达明显降低(P0.01)。结论:电针可明显改善VD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与其抑制Glu-NMDAR的神经兴奋毒性,减轻细胞内Ca~(2+)负荷,对抗神经细胞损伤有关。     

胡雪梅,朱正耀,唐中生*,朱世杰,范瑞娟,谢高宇

目的:探讨穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠海马COX-2、PGE2表达的影响。方法:将大鼠随机分为4组,每组20只,分别为假手术组、VD模型组、VD穴位埋线组、VD尼莫地平组。两个治疗组分别运用穴位埋线和尼莫地平灌胃进行治疗,共治疗15天。治疗结束后,进行水迷宫行为学测试,采集血清后断头取脑海马CA1区组织,检测各组大鼠海马CA1区COX-2以及血清PGE2表达。结果:VD模型组大鼠出现了明显的学习记忆障碍,海马CA1区COX-2以及血清PGE2含量均明显增高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P0.05);穴位埋线组大鼠水迷宫学习记忆成绩显著提高,海马CA1区COX-2以及血清PGE2含量均明显降低,与VD模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:穴位埋线可能是通过降低海马CA1区COX-2和血清PGE2蛋白表达,抑制炎症发展,从而改善VD大鼠的学习记忆能力。     

穴位埋线对复合衰老过程大鼠海马ATP、ROS及自噬蛋白的影响

目的观察慢性应激促衰作用,探讨穴位埋线的抗衰老和神经保护机制。方法将8周龄SD雄性大鼠按体重随机分为对照组、模型一组、模型二组、穴位埋线组、假埋线组,每组6只。对照组腹腔注射生理盐水[5mL/(kg·d)],模型一组腹腔注射D-半乳糖[150 mg/(kg·d)],模型二组、穴位埋线组、假埋线组在腹腔注射D-半乳糖的基础上加慢性应激,穴位埋线组给予百会、足三里、合谷、太冲穴位埋线,假埋线组给予假埋线,共处理8周。观察大鼠日常饮食活动等一般状态,采用β-半乳糖苷酶染色法观察海马神经元老化情况,Nissl染色观察海马组织病理结构,三磷酸腺苷(ATP)染色检测海马ATP产生量,活性氧物质(ROS)染色测定海马ROS含量,Western Blot检测海马组织蛋白p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达。结果与对照组比较,模型组海马区神经元衰老严重,细胞萎缩明显,尤以齿状核海马齿状核(DG)区显著,ATP、ROS表达降低(P0.01,P0.05),p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P0.01),其中模型二组较模型一组细胞萎缩更严重。与模型二组比较,穴位埋线组海马老化改善,DG区细胞形态规则,核质分离,尚可辨认胞膜结构。与两个模型组比较,穴位埋线组ROS表达升高(P0.01),p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达降低(P0.01)。与穴位埋线组比较,假埋线组ROS蛋白表达降低(P0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高(P0.01)。结论慢性应激可促进衰老进程,穴位埋线可通过增加ATP生成,轻度提升ROS,促进自噬小体降解等机制来延缓衰老,发挥神经保护作用。     

电针对坐骨神经慢性缩窄损伤大鼠脊髓α-氨基-3-羧基-5-甲基异恶唑-4-丙酸受体表达的影响

目的:观察电针对坐骨神经慢性缩窄损伤大鼠脊髓相应节段α-氨基-3-羧基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(α-amino-3-ydroxy-5-methylisoxazole-4-propionate,AMPA)受体表达的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:SD大鼠分为假手术组、模型组和电针组,各20只,采用坐骨神经慢性缩窄损伤法制备神经病理性痛模型。电针组电针大鼠损伤侧"委中"与"环跳"穴,每次30min,每日1次,治疗7d。采用免疫组化法和蛋白印迹法测定脊髓AMPA受体亚基1(GluR 1)的表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定脊髓GluR 1mRNA的表达。结果:与假手术组比较,模型组脊髓GluR 1免疫组化与蛋白印迹表达量均升高(P0.05,P0.01),GluR 1mRNA的表达升高(P0.05);与模型组比较,电针组脊髓GluR 1免疫组化与蛋白印迹及其mRNA表达均被逆转(P0.05)。结论:电针能够减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与有效地下调脊髓AMPA受体GluR 1的表达有关。     

埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎活动期大鼠结肠黏膜Notch信号通路的调控作用

目的:观察穴位埋线联合艾灸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜组织Notch受体1及靶基因Hes 1、Math 1表达的影响,从Notch信号通路角度探讨其治疗UC的机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、埋线+艾灸组、埋线组、艾灸组,每组6只。采用5%三硝基苯磺酸+50%乙醇混合溶液灌肠法复制UC模型。模型成功次日开始治疗,穴位取"上巨虚""天枢""大肠俞"。艾灸组艾条温和灸10 min, 1次/d,共14次。埋线组用简易埋线针进行穴位埋线,1次/周,共2次。埋线+艾灸组于艾灸后6 h埋线。HE染色法观察结肠黏膜组织形态变化;q-PCR法和Western blot法检测结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1和Math 1 mRNA及蛋白表达。结果:正常组大鼠结肠上皮完整、结构清晰,杯状细胞丰富,腺管结构正常。模型组大鼠结肠黏膜结构模糊,上皮大量破损、脱落,杯状细胞缺失,腺管破坏,大量炎性细胞浸润,各治疗组较模型组结肠损伤有不同程度改善,埋线+艾灸组最为明显。与正常组比较,模型组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平升高(P0.01),Math 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P0.01);与模型组比较,各治疗组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05),埋线+艾灸组、埋线组Math 1 mRNA表达水平升高(P0.01),各治疗组结肠黏膜组织Math 1蛋白表达水平升高(P0.01)。埋线+艾灸组结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1 mRNA及蛋白表达水平低于埋线组、艾灸组(P0.01,P0.05),Math 1 mRNA表达水平高于艾灸组(P0.01),Math 1蛋白表达水平高于埋线组、艾灸组(P0.01)。结论:穴位埋线+艾灸对UC大鼠结肠损伤修复具有促进作用,其可能通过降低结肠黏膜组织Notch 1、Hes 1表达水平,上调Math 1表达水平,抑制Notch信号通路的过度活化,从而调节结肠上皮分泌细胞系和吸收细胞系间分化的平衡而起效。     

阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达变化及电针的调控作用

目的观察电针对大鼠海马自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组。电针组取"百会"和"涌泉"进行电针治疗,每日1次,7 d为1个疗程,共治疗4个疗程。疗程结束后尼氏染色观察各组海马CA1区组织形态的变化并计数尼氏体阳性细胞,Western blot检测Beclin-1和p53蛋白的表达。结果模型组CA1区尼氏体阳性的细胞数目较正常组显著减少(P0.01),电针组锥体细胞和尼氏体表达较模型组明显增多(P0.05)。与正常组比较,模型组海马组织中Beclin-1蛋白表达降低、p53蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,电针组Beclin-1蛋白表达明显升高(P0.01),p53蛋白表达降低(P0.05)。结论电针治疗可对抗β-淀粉样蛋白诱导的神经元凋亡,改善AD海马组织形态变化。     

脑络欣通对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及海马神经元内钙离子浓度的影响

目的观察脑络欣通对血管性痴呆(VD)模型大鼠学习记忆功能的作用及对大鼠海马神经元胞内钙离子水平的影响。方法采取改良双侧颈总动脉结扎方法 (2-VO)造模血管性痴呆大鼠;随机分为模型组、脑络欣通组(8.54 g/kg)、石杉碱甲组(0.06 mg/kg)及假手术组;大鼠灌胃给药1月后,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;流式细胞仪检测海马神经元胞内钙离子荧光强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体的表达。结果与模型组比较,脑络欣通可明显缩短血管性痴呆模型大鼠的逃避潜伏期(P0.01);可显著增加血管性痴呆模型大鼠停留在站台所在象限时间及穿越平台的次数(P0.01);与模型组比较,脑络欣通可显著减低血管性痴呆模型大鼠海马神经元胞内Ca~(2+)水平(P0.01);与模型组比较,脑络欣通可增强血管性痴呆模型大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体的表达(P0.05)。结论脑络欣通可显著改善血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力,可能与通过增强大鼠海马组织降钙素基因相关肽及其受体表达进而降低海马神经元内Ca~(2+)水平有关。     

小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸转运体EAATs，VGLUTs表达的影响

目的:观察小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸膜转运体(EAATs)及囊泡转运体(VGLUTs)表达的影响,探讨小柴胡汤加味基于谷氨酸转运的抗抑郁机制。方法:120只SD大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤加味组低、中、高剂量组、利鲁唑组,每组20只。除正常组外,其余各组采用束缚应激制备大鼠抑郁模型,小柴胡汤加味低、中、高剂量组分别灌胃(ig)小柴胡汤加味6.5,13,26 g·kg~(-1);利鲁唑组腹腔注射利鲁唑20 mg·kg~(-1);正常组和模型组ig等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。采用强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)评价大鼠的抑郁行为;采用高效液相色谱法(HPLC)检测海马组织中谷氨酸含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马中EAAT1,EAAT2和EAAT3 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织EAAT1,EAAT2,EAAT3,VGLUT1,VGLUT2蛋白表达;用尼氏染色法观察大鼠海马神经元形态,免疫组化(IHC)检测海马CA1区EAAT1,EAAT2和NeuN蛋白在神经细胞中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间均显著延长(P0.01),海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3 mRNA和蛋白表达均显著下降(P0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著降低(P0.01);而谷氨酸水平和VGLUT2表达均显著增高(P0.01)。与模型组比较,小柴胡汤加味中、高剂量组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间明显缩短(P0.05,P0.01),海马内EAAT1,EAAT2和EAAT3mRNA和蛋白表达量均显著增加(P0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著增强(P0.01),谷氨酸水平和VGLUT2表达显著回降(P0.01),海马神经元结构明显复原。结论:小柴胡汤加味有明显的抗抑郁作用,其机制可能与其上调大鼠海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3基因和VGLUT1蛋白表达。     

酸枣仁汤加味对抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响

目的:观察酸枣仁汤加味对慢性束缚应激抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响,探讨其基于谷氨酸受体的抗抑郁机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、酸枣仁汤加味低、中、高剂量组、氯胺酮组,每组10只。除正常组外,其余各组采用慢性束缚应激(CRS)制备大鼠抑郁模型,酸枣仁汤加味低、中、高剂量组分别灌胃酸枣仁汤加味6,12,24 g·kg~(-1),氯胺酮组腹腔注射氯胺酮15 mg·kg~(-1),正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,给药干预21 d。采用Morris水迷宫和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,GluR1,mGluR1,CaMKⅡα和CaMKⅡβ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组新奇摄食时间及逃避潜伏期显著延长(P0.01),空间探索时间显著缩短(P0.01);模型组大鼠海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平均显著升高(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα水平均显著降低(P0.01)。与模型组比较,酸枣仁汤加味中、高剂量组新奇摄食时间、逃避潜伏期显著缩短(P0.01),空间探索时间显著延长(P0.01);酸枣仁汤加味中、高剂量组NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ蛋白表达水平均显著降低(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα蛋白表达显著增高(P0.01)。结论:酸枣仁汤加味可显著改善慢性抑郁大鼠行为学,其机制可能与下调NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平,上调GluR1和CaMKⅡα表达有关。     

肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca2+变化及TRPA1和TRPM8 mRNA表达的影响

目的:观察肉桂醛对0℃冷应激大鼠背根神经节神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度变化,并探讨其对瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和M8(TRPM8)mRNA表达的影响。方法:取大鼠原代背根节神经细胞置于0℃冷应激状态,噻唑蓝(MTT)法检测不同时长冷应激状态下细胞的活性;加入肉桂醛,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内外Ca~(2+)分布的变化;另以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测其TRPA1,TRPM8 mRNA的表达。结果:不同时长的冷应激状态下,细胞存活度无明显差异;冷应激可降低背根神经节(DRG)神经细胞胞浆内Ca~(2+)浓度(P0.05),一定量的肉桂醛则能使Ca~(2+)浓度显著升高(P0.01)。Real-time PCR检测显示,长时间冷应激TRPA1 mRNA表达上调(P0.05);长时间冷应激TRPM8 mRNA表达明显要高于短时冷应激(P0.05);适当浓度的肉桂醛使冷应激大鼠DRG神经细胞TRPA1 mRNA表达升高(P0.05,P0.01),对TRPM8 mRNA的影响尚不明显。结论:冷应激能影响TRPA1,TRPM8 mRNA的表达,降低胞浆内Ca~(2+)浓度,作用机制可能为肉桂醛通过活化TRPA1通道,升高细胞浆内Ca~(2+)浓度。     

当归芍药散对慢性束缚应激模型大鼠海马NMDAR1、GluR2及BDNF表达和抑郁样行为的影响

目的：观察当归芍药散对慢性束缚应激模型大鼠海马谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)、谷氨酸受体2(GluR2)以及脑源性神经营养因子(BDNF)表达和抑郁样行为的影响。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、当归芍药散组,每组15只。除空白组外,其余各组采用束缚方式制备慢性应激模型,当归芍药散组大鼠应激同时灌胃当归芍药散混悬液13.44 g·kg^-1·d^-1,氟西汀组应激同时灌胃氟西汀水溶液2 mg·kg^-1·d^-1,空白组与模型组灌胃等体积0.9%氯化钠溶液,1次/d,实验21 d。采用糖水消耗实验、高架十字迷宫实验评价大鼠行为学变化,尼氏染色法观察大鼠海马神经元病理变化,免疫组化法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马CA1区NMDAR1、GluR2、BDNF蛋白及mRNA的表达。结果：与空白组比较,模型组大鼠体质量降低,糖水消耗率、高架十字迷宫实验开放臂停留时间及进入次数显著减少(P<0.05),海马CA1区尼氏小体数量、GluR2与BDNF蛋白及mRNA表达...