HIF-1α基因沉默对人肺癌放射敏感性及移植瘤生长的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对A549肺癌细胞放射敏感性及裸鼠移植瘤生长的影响。方法 采用克隆形成实验,评价A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞对X射线的敏感性。将A549/HIF-1α(-)细胞及A549细胞接种于BALB/C雄性裸小鼠,观察肿瘤生长情况。免疫组织化学法检测肿瘤内HIF-1α蛋白的表达及瘤内微血管密度。结果 HIF-1α基因沉默在常氧条件下放射增敏比 (SER) 为1.06,乏氧条件下为1.65。A549/HIF-1α(-)组移植瘤体积明显小于A549组,A549/HIF-1α(-)组肿瘤细胞HIF-1α蛋白表达显著下降, A549组肿瘤微血管密度为19.83±4.09,而A549/HIF-1α(-)组为11.61±3.04(F=15.57,P<0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可以逆转乏氧诱导的A549肺癌细胞对X射线敏感性的降低,并延缓裸鼠移植瘤的生长,使HIF-1α蛋白表达下降和血管生成减少。     

干扰血管内皮生长因子表达联合γ射线对食管癌细胞移植瘤的影响

目的 研究反义cDNA干扰血管内皮生长因子(VEGF)表达联合γ射线对裸鼠移植瘤的影响,并观察各组裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化,为VEGF基因治疗联合放射治疗食管癌提供理论依据。方法 将32只Balb/c/nu裸鼠随机分为4组:对照组、单纯照射组、反义组和反义+照射组,使用已转染和未转染反义VEGFcDNA TE-1食管癌细胞株,分别建立裸鼠爪垫移植瘤模型, 瘤体直径0.8~1.0 cm,⁶⁰Co γ射线18 Gy单次照射单纯照射组与反义+照射组裸鼠移植瘤,对比观察各组移植瘤生长情况,检测移植瘤组织中VEGF mRNA和蛋白的表达,并分析肿瘤组织中细胞凋亡情况。结果 与未转染两组比较,转染两组瘤体生长速度慢,成瘤潜伏期延长(t=13.898, P<0.01)。反义组肿瘤体积为(1207.50±97.07)mm³,反义+照射组为(1057.5±91.50)mm³,两者差异无统计学意义(t=1.124,P>0.05),而此2组与对照组(5442.50±185.08)mm³ 和单纯照射组(2922.50±152.773)mm³ 体积间差异有统计学意义(t=9.475~21.238,P<0.01)。反义组与反义+照射组VEGF mRNA和蛋白表达较对照组和单纯照射组差异有统计学意义(F=387.394、13.519, P<0.01)。结论 抗VEGF治疗可有效地抑制裸鼠移植瘤的生长,但单纯抑制VEGF表达对增加裸鼠移植瘤放射治疗增敏效果有限,需进一步研究。     

沉默食管癌ECA109细胞H2AX基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 研究受照前后沉默H2AX基因对裸鼠移植瘤的影响.方法 将60只裸鼠按随机数字表法分为空白组、照射组、空载体组、空载体照射组、沉默(H2AX)组和沉默(H2AX)照射组,每组10只.于裸鼠皮下接种相应细胞,制备裸鼠模型.接种21 d后,给予6 MV X射线15 Gy单次照射,受照后48 h每组处死5只裸鼠,将肿瘤标本按Western blot、RT-PCR及流式细胞分析要求处理,检测蛋白水平、RNA水平及细胞周期的改变.结果 沉默组肿瘤体积为(42.76±4.40) mm³,明显小于空白组(73.18±8.80) mm³和空载体组(71.27±8.40) mm³(F=67.8,P<0.01).沉默组组织中H2AX蛋白表达(0.12±0.03)明显低于空白组(1.12±0.11)和空载体组(1.16±0.08,F=34.27, P<0.01).沉默组RNA水平(0.85±0.31)明显低于空白组(1.86±0.26)和空载体组(1.82±0.24,F=39.45, P<0.01).组织的免疫共沉淀显示,照射使γ-H2AX与MDC1、53BP1发生明显相互作用.沉默H2AX后,其相互作用减弱.受照后各组肿瘤体积在分组之间总体存在差异(F=13.56,P<0.01).沉默照射组凋亡率为(24.15±2.25)%,较照射组(13.26±1.54)%和空载体照射组(12.78±1.47)%明显增高(F=54.33,P<0.01).照射后引起G₂/M期阻滞,沉默照射组较照射组阻滞减轻(F=10.21,P<0.01).结论 体内研究显示沉默H2AX基因可以提高食管癌放射敏感性.     

重组人血管内皮抑素对食管癌细胞的放射增敏作用及其机制

目的 观察重组人血管内皮抑素(rhES)对食管鳞癌KYSE-150细胞的放射敏感性的影响及其机制的初步探讨。方法 将食管鳞癌KYSE-150细胞分为空白对照组、rhES组、X射线照射组和rhES联合X射线照射组。细胞克隆形成法测定细胞存活分数;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比(SER);流式细胞术检测rhES联合X射线照射对细胞周期及凋亡的影响;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin B₁、Cyclin D₁、Bcl-2、Bax mRNA表达水平,Western blot检测HIF-1α、VEGF、VEGFR蛋白的表达水平。结果 KYSE-150细胞的D₀、D_q、SF₂值随着rhES浓度的增加逐渐减小,当达到D₀照射剂量时,100和200 μg/ml rhES的放射增敏比分别为1.14、1.27;rhES联合X射线照射组与X射线照射组比较,细胞凋亡率增加、凋亡相关基因bax的表达增加、细胞VEGF蛋白及HIF-1α蛋白的表达水平降低(t=7.97、3.02、117.55、7.22,P<0.05)。结论 rhES对体外食管癌细胞具有明显的辐射增敏作用,其机制与其抑制细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达以及对细胞凋亡相关基因bax的表达调控、诱导细胞凋亡密切相关。     

慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因对大肠癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 探讨慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达,对大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长及放射敏感性的影响。 方法 选取36只BALB/c(nu/nu)裸鼠,按随机区组法分为空白对照组、阴性对照组及实验组,将HT-29细胞接种于裸鼠,建立皮下移植瘤裸鼠模型,观察裸鼠体重及瘤体积的变化。RT-PCR、免疫组织化学分析Livin mRNA及蛋白表达的变化,原位末端标记法(TUNEL)法检测细胞凋亡的变化;瘤内注射生理盐水、空载慢病毒和干扰慢病毒,同时均给予10 Gy 6 MV X射线照射,绘制裸鼠体重和移植瘤生长曲线。结果 实验组体积抑瘤率为(50.04±0.07)%,瘤体重量明显减轻(F=4.85,P<0.05), 瘤重抑瘤率为(50.27±0.17)%。实验组Livin mRNA表达水平为(17.75±0.08)%,明显低于空白对照组的(67.60±0.05)%和阴性对照组的(68.54±0.03)% (F=89.97, P<0.01)。实验组Livin蛋白表达水平为(36.00±3.40)%,明显低于空白对照组的(85.00±3.15)%和阴性对照组的(80.33±3.08)%(F=107.32,P<0.01)。实验组凋亡率为(23.67±2.25)%,明显高于空白对照组的(5.00±1.50)%和阴性对照组的(8.33±1.82)%(F=56.94,P<0.01)。与射线联合时,裸鼠移植瘤体积在分组之间总体存在差异(F=10.70,P<0.01),实验组肿瘤体积变化小于阴性对照组和空白对照组(F=7.01~9.32,P<0.01)。结论 慢病毒载体介导RNA干扰沉默Livin基因表达能抑制大肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长,并增加移植瘤对放疗的敏感性。     

RNA干扰HIF-1α对小鼠移植瘤放射增敏的研究

目的 研究以多聚乙烯基亚胺(polyethylenimine, PEI)为载体行RNA干扰HIF-1α 对移植瘤的放射增敏作用。方法 采用人肺腺癌细胞SPCA-1 裸鼠移植瘤模型,160只荷瘤鼠随机分为5组,每组32只。对照组,不做任何处理;单纯注射PEI 组,尾静脉注射以PEI (15μg),每周1次连用4周;单纯照射组,每次5Gy/次/每周,连续4周;单纯转染组,尾静脉注射以PEI (15μg)和pSUPER-HIF-1α质粒(40μg)混合物,每周1次,连用4周;照射联合转染组,尾静脉注射PEI和pSUPER-HIF-1α质粒混合物(PEI 15μg,pSUPER-HIF-1α质粒 40μg )24h后放疗,1次/周,5Gy/次,连续4周。每组内有16只小鼠于末次放疗后第3天处死,采用免疫组织化学法检测RNA干扰HIF-1α后HIF-1α的表达情况,另外16只用于观察生存时间,并每周称裸鼠的重量。结果 RNA干扰HIF-1α后,HIF-1α的表达下降,RNA干扰HIF-1α合并放疗,移植瘤的体积重量较单纯放疗、RNA干扰HIF-1α和空白对照组比较,下降明显,荷瘤鼠的生存期延长。结论 体内试验显示,以PEI为载体行 RNA干扰HIF-1α有放疗增敏作用。     

沙利度胺联合照射对人食管癌裸鼠移植瘤生长和肿瘤血管生成的影响

目的 观察沙利度胺（thalidomide,TLD）联合照射对人食管癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的影响。方法 建立人食管鳞癌裸鼠移植瘤模型,将24只荷瘤裸鼠标号,按随机数字表随机分为健康对照组、TLD组、20 Gy组、20 Gy+TLD组,每组6只。计算肿瘤抑制率,并用免疫组织化学法检测移植瘤瘤组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）、乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）、微血管密度（MVD）的表达水平。结果 20 Gy+TLD组荷瘤鼠瘤体积及瘤重均小于20 Gy组,差异具有统计学意义（t=3.68、4.60,P<0.05）。20 Gy+TLD组的抑瘤率高于其他各实验组,达到60.61%。与20 Gy组相比较,20 Gy+TLD组中裸鼠移植瘤组织中VEGF、HIF-1α蛋白表达均有所降低（t=11.82、6.63,P<0.01）;20 Gy组MVD值高于20 Gy+TLD组（t=5.92,P<0.01）。结论 沙利度胺联合照射对移植瘤的抑瘤作用较单独照射增强,可能是沙利度胺通过调控VEGF的表达,从而影响了食管癌组织的放疗敏感性。     

Stattic抑制STAT3和HIF-1α途径对食管癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 探讨Stattic对食管癌ECA109细胞裸鼠移植瘤的放射增敏效果及其可能的作用机制。方法 建立食管癌ECA109细胞裸鼠移植瘤模型;移植瘤平均体积增至约150 mm³时,采用随机数表法将24只裸鼠分为4组,药物+照射组（25 mg/kg Stattic+6 Gy）、单纯药物组（25 mg/kg Stattic）、单纯照射组（6 Gy）、对照组,每组6只。25 d后测量移植瘤体积,计算肿瘤体积抑制率,Western blot法检测移植瘤组织中STAT3、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。结果 药物+照射组裸鼠移植瘤体积为（705.1±75.5）mm³,显著低于单纯照射组（1 113.5±101.4） mm³和单纯药物组（1 696.5±100.6）mm³（t=4.35、14.14,P<0.05）,其抑制率达（66.1±3.2）%。Western blot检测发现,药物+照射组移植瘤组织中pSTAT3、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平较单纯照射组明显降低（t=17.07、5.05、3.54,P<0.05）。结论 Stattic对食管癌ECA109细胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,可能与其抑制pSTAT3、HIF-1α、VEGF途径有关。     

靶向生存素基因的RNAi对肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 构建靶向生存素(survivin)基因的RNA干扰(RNAi)载体,观察对肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响,并探讨其机制。方法 根据survivin的cDNA序列设计干扰序列,构建干扰survivin的重组干扰质粒pGenesil2-survivin。酶切、测序鉴定正确后,经脂质体介导转染肺腺癌A549细胞;应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测survivin的表达;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;克隆形成实验检测细胞的放射敏感性。结果 酶切和测序结果显示,载体构建正确;将质粒pGenesil2-survivin转染肺腺癌A549细胞48 h,survivin 蛋白水平及mRNA水平在正常组与pGenesil2组中无明显变化,5 Gy照射组增强,而转染pGenesil2-survivin后明显抑制;pGenesil2-survivin与5 Gy X射线照射都能诱导细胞凋亡增加(t₁=10.63,P<0.001;t₂=3.75 ,P<0.05),两者共同作用,凋亡增加更明显(t=4.83,P<0.05);克隆形成实验显示,pGenesil2与正常组D₀、D_q无明显变化,而pGenesil2-survivin则明显降低,说明其可以提高A549细胞的放射敏感性。结论 靶向生存素基因的RNAi能够明显抑制survivin mRNA与蛋白的表达,促进凋亡,增强A549细胞的放射敏感性。     

X射线对肺癌细胞株A549的P57kip2和TGF-β1蛋白表达的影响

目的 观察不同剂量X射线照射后不同时间A549肺癌细胞株中P57^kip2和TGF-β1蛋白表达水平,探讨X射线对p57^kip2和TGF-β1的影响及临床意义。方法 按常规方法培养肺癌细胞株A549,实验分5组,照射组分别给予不同剂量X射线(2、4、8和12 Gy)照射,于不同时间(6、12、24、36和48 h)提取蛋白,采用Western blot 检测p57^kip2和TGF-β1蛋白的表达水平。结果 X射线可导致肺癌细胞P57^kip2蛋白的表达增加,照后12 h达峰值,在2～8 Gy之间,p57随着照射剂量的增加而升高,12 Gy时,其含量较4～8 Gy减少。不同剂量和不同时间P57^kip2蛋白的表达,差异有统计学意义(P＜0.05),TGF-β1在照后6h达峰值,之后迅速下降,各不同剂量和不同时间水平之间差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 X射线照射可以上调肺癌细胞株A549的p57^kip2和TGF-β1蛋白表达,两者有一定的相关性,且在一定剂量范围内呈剂量依赖性,可以反映肺癌细胞损伤的程度。     

蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌细胞生长迁移和周期的影响及作用机制

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对人肺腺癌A549细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期分布的影响及机制。方法 MTT法检测不同MG132浓度处理后不同时间肺腺癌A549细胞的增殖;克隆形成实验检测A549细胞的存活能力;划痕实验测定A549细胞的迁移能力;Transwell小室测定其侵袭能力;流式细胞术测定细胞周期分布的改变;Western blot法测定蛋白表达水平。结果 MG132明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长,并呈现剂量-效应和时间-效应关系。MG132联合X射线对A549细胞克隆存活能力有显著抑制作用（F=554.78、954.64,P<0.01）,且加MG132组克隆存活率均低于照射组（t=4.44、12.41、3.52、6.72,P<0.05）。MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制A549细胞的迁移及侵袭能力（t=12.79,P<0.01）,并明显增加G₁期细胞阻滞（t=4.29,P<0.05）;MG132联合X射线明显降低A549细胞中基质金属蛋白酶-2,-9和G₁期相关蛋白Cyclin D1的表达水平,同时增加细胞中P53的表达。结论 MG132可以显著抑制人肺腺癌A549细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低其转移和侵袭能力,显著增加肿瘤细胞的G₁期阻滞。     

黄连素对乏氧环境中鼻咽癌放射增敏作用机制的研究

目的 探究黄连素对乏氧环境中鼻咽癌细胞系CNE-2及裸鼠移植瘤的增敏效应及其分子机制。方法 四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测黄连素对CNE-2细胞的增殖抑制作用,克隆形成实验观察5 μmol/L黄连素对常氧和乏氧环境中CNE-2细胞放射敏感性的影响。黄连素乏氧下作用24 h后给予8 Gy X射线照射,流式细胞技术检测CNE-2细胞凋亡率。建立鼻咽癌CNE-2细胞裸鼠移植瘤模型,观察黄连素及单次8 Gy照射对移植瘤的抑制作用。Western blot检测乏氧条件下黄连素对HIF-1α及VEGF蛋白表达的抑制作用。 结果 黄连素显著抑制CNE-2细胞增殖,且存在时间、浓度依赖效应,24 h药物作用后半数抑制剂量IC₅₀为（14.9±2.2）μmol/L。乏氧环境下,5 μmol/L黄连素处理后的克隆形成率较单纯乏氧组下降,其增敏比（SER_D0）为1.27。在常氧环境中克隆形成率较乏氧组显著增加,常氧组和常氧加药组的SER_D0分别为1.45和1.74。5和15 μmol/L黄连素能在乏氧环境中单独发挥促凋亡作用,与对照组比较差异有统计学意义（t=5.01、9.02,P<0.05）,黄连素联合照射后,凋亡率较单纯照射组增加（t=5.31、9.91,P<0.05）。 体内实验显示,照射给药组肿瘤体积的增长显著延迟于对照组及单纯给药组,肿瘤倍增时间联合组较单纯照射组及对照组差异有统计学意义（t=2.96、14.52,P<0.05）。Western blot显示乏氧条件下HIF-1α、VEGF表达升高,黄连素作用24 h后表达显著下调。结论 黄连素对乏氧环境中的CNE-2细胞及裸鼠移植瘤有放射增敏作用,其与下调乏氧环境中HIF-1α及下游因子VEGF的表达有关。     

电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响

目的 研究电离辐射对肺腺癌细胞A549线粒体的影响。方法 0、0.5、3和8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射A549细胞后,利用JC-1探针检测照射后肺腺癌细胞A549线粒体膜电位的变化;使用ATP试剂盒检测辐射对A549细胞ATP生成的影响;利用实时定量PCR方法检测线粒体拷贝数。结果 在照射后24 h,各剂量组A549细胞膜电位出现明显改变（F=243.44,P<0.05）,与0 Gy照射组相比,0.5和3 Gy照射的A549细胞线粒体膜电位显著升高（t=-10.12、-5.59,P<0.05）,而8 Gy照射的线粒体膜电位显著降低（t=15.22,P<0.05）,照后48 h各照射组线粒体膜电位基本恢复正常（F=10.36,P<0.05）;照射后24 h ATP水平与膜电位变化趋势一致（F=97.08,P<0.05）,其中0.5和3 Gy A549细胞中ATP水平升高（t=1.66、7.27,P<0.05）,8 Gy照射组降低（t=-8.24,P<0.05）;照射后48 h,ATP水平也发生变化（F=39.49,P<0.05）,0.5和3 Gy照射后A549细胞中ATP水平显著高于0 Gy组（t=4.60、8.53,P<0.05）。照射后24 h线粒体拷贝数显著增加,其中0.5 Gy mtDNA拷贝数增加至对照组的12倍（t=0.02,P<0.05）,3和8 Gy组mtDNA拷贝数分别增加至对照组的7和10倍（t=9.68、15.10,P<0.05）。结论 大剂量电离辐射会导致A549细胞线粒体膜电位降低,从而影响ATP的生成,中等剂量以下的照射会导致A549细胞线粒体膜电位代偿性增高,从而使ATP的生成增多,8 Gy以内的电离辐射可使mtDNA拷贝数代偿性升高。     

IFN-γ和内皮抑素双基因联合X射线对小鼠乳腺癌及肺转移的抑瘤作用

目的 评价IFN-γ和内皮抑素(endostatin)双基因-放射治疗在小鼠转移性乳腺癌中的抑瘤效应,并探讨其可能的作用机制。方法 用脂质体包裹pEgr-IFN-γ和 pEgr-endostatin质粒转染小鼠乳腺腺癌4T1 细胞,并用X射线照射,吸收剂量为2~20 Gy。用ELISA检测细胞培养液上清中IFN-γ和内皮抑素的浓度。小鼠下肢注4T1肿瘤细胞1×10⁵个,荷瘤小鼠随机分组为对照组、空质粒组,基因治疗组、放射治疗组及基因-放射治疗组,观察小鼠肿瘤生长及肺转移情况,计算肿瘤生长率、肿瘤/体重比及荷瘤小鼠生存率, 并用流式细胞仪检测脾脏 CTL 和 NK细胞的细胞毒活性,用免疫组织化学法检测肿瘤内部的微血管密度。结果 辐射显著增强了4T1 细胞分泌IFN-γ和内皮抑素的浓度。小鼠接受基因-放射治疗与单独接受基因治疗或者接受放射治疗相比,肿瘤生长率明显降低,同时生存率明显提高(t＝8.724,P<0.05)。双基因联合放射治疗组小鼠脾中CTL 和 NK 细胞的细胞毒活性及腹腔巨噬细胞的TNF-α水平较对照组明显升高(t=2.120、22.140和5.289,P<0.05),微血管密度明显降低(t=13.294,P<0.05)。结论 IFN-γ和内皮抑素的基因-放射治疗增强了小鼠转移性乳腺癌的抑瘤效应,其机制可能与IFN-γ激活 CTL 和 NK 细胞活性及内皮抑素引起肿瘤血管生成抑制有关。     

辐射诱导双基因质粒pEgr-1-endostatin-TNF-α的抗肿瘤作用研究

目的 探讨放射线诱导重组质粒pEgr-1-endostatin-TNF-α在小鼠体内的表达及其与射线协同抗肿瘤效应。方法 Lewis肺癌荷瘤鼠240只,随机分为4组:对照组、照射组、质粒组、质粒+照射组。将重组质粒pEgr-1-endostatin-TNF-α注射到荷瘤鼠肿瘤内,24 h后对质粒+照射组采用γ射线肿瘤局部照射10 Gy,诱导目的基因表达,ELISA法测定小鼠不同时间血清中的内皮抑素及TNF-α浓度,免疫组织化学染色检测肿瘤组织中血管内皮细胞CD31的表达,与HE染色分别计算肿瘤血管密度,测量肿瘤大小,观察肿瘤生长情况。结果 质粒+照射组内皮抑素及TNF-α表达量明显增加,第2周表达量达到高峰,分别为(52.64±4.19)和(12.01±0.87)ng/ml,持续到第4周仍有较高浓度表达,与其他3组比较差异有统计学意义(F=29.726,P<0.05)。质粒+对照组HE染色肿瘤组织血管密度较对照组明显减少[(4.7±0.8)与(10.0±1.2)个/视野, t=14.063, P<0.05],肿瘤生长较对照组和照射组受到明显抑制[(5907.2±78.6)、(4653.4±32.8)和(763.5±12.3) mm³, F=16.415,P <0.05)]。结论 重组质粒pEgr-1-endostatin-TNF-α可以通过射线的诱导在小鼠体内表达,与单纯放疗相比较表现出明显的抑制肿瘤血管形成和控制肿瘤生长的作用。     

A549细胞线粒体DNA缺失模型建立及其放射敏感性变化

目的 建立肺癌A549细胞线粒体DNA（mtDNA）缺失模型（ρ⁰细胞）,观察其放射敏感性变化。 方法 用含微量溴化乙锭（EB）的特殊培养液持续培养正常的A549细胞（ρ⁺细胞）以获得mtDNA完全缺失的ρ⁰细胞,利用生长缺陷及PCR鉴定该细胞模型。利用克隆形成实验分别检测两种细胞的放射敏感性,利用碘化丙啶（PI）染色法及二氯荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）染色法,分析两种细胞在6 MV X射线照射后的细胞周期及活性氧簇（ROS）变化情况。 结果 成功建立A549 ρ⁰细胞。ρ⁰细胞较ρ⁺细胞放射敏感性降低（t=12.57,P<0.01）。放射照射8 Gy后,ρ⁰细胞较ρ⁺细胞G₂期阻滞时间延长,G₂期细胞比例降低（t=6.82,P<0.01）,ρ⁰细胞ROS升高水平明显低于ρ⁺细胞（t=14.51,P<0.01）。 结论 ρ⁰细胞较ρ⁺细胞放射敏感性降低,其机制可能与放射照射后ROS产量降低及G₂期阻滞延长有关。     

Ku80基因沉默联合γ射线对人食管癌细胞移植瘤生长的影响

目的 探讨shRNA抑制Ku80蛋白表达联合照射对裸鼠移植瘤食管癌生长的抑制作用。 方法 构建干扰Ku80载体shRNA-Ku80,采用Western blotting方法观察shRNA干扰Ku80蛋白的表达。将20只裸鼠随机分为对照组、单纯照射组、shRNA-H₂组和联合治疗组,观察裸鼠移植瘤的生长情况。免疫组织化学法检测移植瘤内Ku80表达。结果 成功构建了shRNA-Ku80载体,并挑选出有效的靶序列。Ku80干扰载体和放射对移植瘤生长均有抑制作用,抑瘤率分别为32.0%和39.9%。二者联合作用抑制更显著,抑瘤率为68.9%。shRNA-H2降低移植瘤内Ku80表达58%(t=3.77,P<0.05)。结论 shRNA干扰Ku80联合照射能显著提高食管癌细胞移植瘤的放射效应。     

胰岛素样生长因子1受体抑制剂对人食管癌移植瘤放射增敏研究

目的 观察胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂AG1024对裸鼠EC9706食管癌模型的放射增敏作用及机制。方法 裸鼠皮下接种人食管癌EC9706细胞建立模型,待肿瘤长至100 mm³时按随机表将小鼠分成4组,对照组、单纯照射组、AG1024组、联合组。对照组:不处理;单纯照射组:第1、8天分别给予6 MV X射线,照射剂量单次8 Gy;AG1024组:AG1024腹腔注射30 μｇ/(kg·d),每周5次,共2周;联合组:给予AG1024腹腔注射和照射。每隔2天测肿瘤直径,第15天断颈处死小鼠计算抑瘤率。流式细胞仪检测各组肿瘤组织细胞周期改变;免疫组织化学法检测肿瘤组织细胞周期蛋白CyclinD1表达;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果 各组瘤重较对照组减小,抑瘤率分别为39.16%、18.73%和57.04%(F=13.566,P<0.05)。流式细胞仪检测联合组肿瘤细胞G₀/G₁及G₂/M期增多,S期减少,较单纯照射组差异有统计学意义(t=-6.654、-16.738、12.871, P<0.05)。免疫组织化学法检测联合组肿瘤组织细胞周期蛋白CyclinD1表达下降;TUNEL法检测联合组肿瘤组织出现凋亡细胞。结论 IGF-1R抑制剂AG1024能增加食管癌移植瘤的放射敏感性,改变细胞周期、诱导凋亡可能是其机制之一。     

肺癌A549放射抗拒细胞亚系的建立及抗拒机制的研究

目的 建立肺癌细胞系A549的放射抗拒模型并探讨放射抗拒的机制。方法 应用两种方案对非小细胞肺癌A549细胞系进行X射线照射:一组照射5次,每次剂量600 cGy;另一组照射15次,每次剂量200 cGy。照射完成后对存活细胞单克隆化分别命名为A549-S1和A549-S2,采用克隆形成实验测定两种细胞亚系及亲本A549细胞的放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期特征,RT-PCR和Western blot分别测定3种细胞Notch1的表达。结果 与亲本A549细胞相比,A549-S1细胞显示出明显放射抗性,D₀、D_q及N值增大,细胞存活曲线肩区增宽,在SF₂水平上,放射抗性是A549的1.38倍,细胞的S期比例较A549细胞明显增高, G₀/G₁期比例下降(P<0.05),Notch1的表达较A549细胞明显增强。而A549-S2的放射敏感性与亲本细胞相比稍增强,D₀、D_q及N值均减小,细胞存活曲线肩区变窄,在SF₂水平上,放射抗性是A549细胞的0.84倍,细胞S期、G₀/G₁期比例较A549细胞减少,而G₂/M期比例明显增加(P<0.05),Notch1表达与亲本A549细胞相比无明显变化。结论 A549细胞亚系放射抗拒的形成与不同照射方案有一定关系,得出的放射抗拒细胞亚系显示出与亲本不同的细胞周期特征,而细胞特征的变化可能与Notch1的表达增强有关。     

乏氧诱导因子1α在电离辐射诱导人乳腺癌细胞自噬性死亡中的作用

目的 探讨乏氧诱导因子1α(HIF-1α)在辐射诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬性死亡中的作用。方法 将人乳腺癌MCF-7细胞分为对照组(常氧组,21%氧气)、照射组(8 Gy X射线)、乏氧组 (150 μmol/L CoCl₂)、乏氧加照射组 (150 μmol/L CoCl₂+8 Gy)。150 μmol/L CoCl₂处理细胞模拟乏氧条件。Western blot法检测HIF-1α及MAPLC3蛋白表达;MDC及Hoechst染色方法分别用于检测细胞自噬和凋亡变化情况;克隆形成方法检测细胞辐射敏感性。构建携带人靶向HIF-1α-siRNA的反转录病毒载体,建立MCF-7 HIF-1α Ri沉默细胞模型,将细胞分为对照组(常氧组)、照射组(8 Gy)、乏氧组(CoCl₂处理)、乏氧加照射组(CoCl₂+8 Gy),检测细胞辐射敏感性、自噬及凋亡情况。结果 与对照组和照射组相比,HIF-1蛋白在乏氧组和乏氧加照射组表达明显增加,分别为0、0、1.00和1.89。与对照组相比,MAPLC3蛋白在照射组、乏氧组、乏氧加照射组的表达均明显上调,LC3II/LC3I比值分别为1.15、1.73、2.38和3.60。细胞辐射敏感性顺次降低,常氧+三甲基腺嘌呤(3MA)组>常氧组>乏氧+3MA组>乏氧组。成功构建HIF-1α沉默模型(pSUPER-HIF-1α Ri)与空载体对照模型(pSUPER),并检测了2种细胞的辐射敏感性。与常氧组相比,乏氧组MCF-7-pSUPER细胞存活分数显著增加(t=3.080、6.946、6.658、6.380,P<0.05),辐射敏感性降低。而MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞,常氧与乏氧条件下细胞存活分数无明显改变。不同处理组(照射组、乏氧组和乏氧加照射组)的MCF-7-pSUPER-HIF-1α Ri细胞与MCF-7-pSUPER细胞相比较,自噬百分率分别降低21.1%、25.5%和15.5%(t=-4.635、-4.738、-6.354,P<0.05),但凋亡百分率差异无统计学意义。结论 在人乳腺癌MCF-7细胞中HIF-1α可增加辐射诱导的自噬,同时降低辐射敏感性,对细胞凋亡无影响。