蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用

目的建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法.方法利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A280和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量.结果洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X＝Y/A进行估算,X为待测蛋白含量(mg),Y为洗脱峰面积(mAU×ml),A为1 g/L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU).将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Lowry法测定结果相似.结论该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值.     

天花粉蛋白新有效组分的纯化及相对分子质量测定

目的：研究从新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分的方法,测定新有效组分的相对分子质量,并对野生型及人工培植型植物来源的新有效组分进行对比研究。方法：采用粉碎、盐析、透析和离子交换层析、分子筛层析方法分别从野生型及人工培植型新鲜栝楼块根中分离纯化天花粉蛋白新有效组分,应用LDI-1700激光解吸电离飞行时间质谱仪测定其相对分子质量。结果：从野生型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为33 388.9,产率为1.2 mg•g^-1;从人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量为32 116,产率为0.3 mg•g^-1。两者的相对分子质量高于已应用于临床的天花粉蛋白针剂（相对分子质量为26 000）及从美国产的栝楼中分离纯化出的TAP29（相对分子质量为29 000）,野生型产率高于人工培植型的产率。结论：分别从野生型与人工培植型新鲜栝楼块根中纯化的天花粉蛋白新有效组分的相对分子质量及含量不同,且两者的相对分子质量亦不同于天花粉蛋白针剂及TAP29。     

抗豚鼠IgG血清制备及豚鼠IgG含量测定

取作者单位培育的封闭群DHP/ZMU-1豚鼠血清,经3次盐析、2次层析。层析的第2峰洗脱蛋白,经鉴定证明为IgG,已达电泳纯。用该IgG作抗原免疫新西兰兔,制得抗豚鼠IgG血清,其特异性符合要求,效价1:16,可供实验用。用制备的抗血清,测得体重为200～250g的普通级豚鼠的血清IgG含量为3.88±1.33mg/ml(n=88),正常值范围:2.20～6.83mg/ml。     

人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化

目的:分离纯化人肝癌组织中特异性γ-谷氨酰转移酶(GGT),为进一步制备其抗血清提供抗原材料,以便对肝癌早期诊断进行研究。方法:人肝癌组织经匀浆、离心、溶解、透析、凝胶层析及凝集素亲和层析等步骤进行分离纯化;纯化过程用IFCC推荐方法监测GGT催化活性,紫外法监测蛋白质出峰图谱,Lowry法测定蛋白含量。结果:经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的GGT,其比活为10.58U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论:该方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中特异性GGT。     

芜荑醇提取物的抗疟作用

以中药芜荑的总提取物、水提取物和醇提取物对感染P.vinckei的小白鼠和醇提取物的两个层析组分C_0及C_3对人工培养的恶性疟疟原虫P.falciparum进行了疗效观察。结果总提取物显示一定疗效,给药第5天,其虫血症仅为对照组的1/5;醇提取物的效果十分显著,剂量提高到10mg/25g体重,每天两次腹腔内注射时,能在第5天完全消灭动物红细胞内的疟原虫。醇提取物的两个层析组分C_0及C_3在培养基中浓度达到10μg/ml时,亦能在第5天完全廓清培养基中红细腮内的疟原虫,其余层析组分C_1、C_2及C_4未见抗疟作用。     

小鼠黑色素瘤凝集的分离纯化

目的：制备并纯化小鼠黑色素凝集素（MMA）。方法：利用亲合层析及凝胶过滤层桥从小鼠B16黑色素瘤中分高纯化小鼠黑色素瘤凝集素（MMA）。结果：利用亲和层材制备的凝集素,经SDS-PAGE显示出一条分子量12．4kD的主要蛋白带和两个分子量为35kD和67kD的痕迹蛋白带;经凝胶过滤层析则出现分子量为26kD主峰及分子量为35kD和67kD的两个小峰。26kD的蛋白成分经SDS－PAGE和等电聚焦电泳显示出一条均一的蛋白带。26kD的蛋白成分特异性识别会多聚乙酰氢基乳精的糖链,活性依赖于巯基而非钙离子。结论：26kD的成分为MMA,利用经亲和层析和凝胶过滤层析等可得到成分均一的MMA,MMA为S型凝集素。     

系统性红斑狼疮特异性抗原60KD Ro/SSA的提取和纯化

目的建立从猪脾纯化Ro/SSA自身抗原系统中60KD组分的方法.方法从猪脾提取ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀结合离子交换层析分离ENA蛋白组分,并用对流免疫电泳检测60KD SSA抗原的活性,以得到纯化60KD SSA抗原的具体条件.结果 60KD SSA抗原在Tris-HCl缓冲液(pH8.3)中的硫酸铵沉淀范围是硫酸铵饱和度50%～60%.60KD SSA抗原在50mM Tris-HCl缓冲液(pH8.3) NaCl中的DE52离子交换层析洗脱范围为电导值35～40ms/cm.结论结合硫酸铵沉淀和DE52离子交换层析两种纯化方法所得的60KD SSA抗原相对于其它ENA有较高的纯度,并能有效分离中SSA中60KD、52KD两个组分.     

牛凝血酶的分离纯化

目的:以牛血为原料对凝血酶进行分离纯化.方法:采用DEAE离子交换纤维素柱层析和SephadexG-200分子筛层析从牛血浆中纯化得到牛凝血酶.结果:所得凝血酶制品比活为39.8U/mg蛋白,活性回收率为34.3%,纯化倍数为7.6.结论:与传统方法相比,本实验方法得到的凝血酶保持了较高的活力和回收率,具有方法简便、效果较好的特点.     

河虾中主要过敏原组分鉴定及分离纯化

目的鉴定并分离纯化河虾中引起过敏反应的主要蛋白组分。方法河虾蛋白浸液皮下注射建立小鼠过敏模型,获得高效价特异性IgE血清用于免疫印迹分析。用饱和硫酸铵分段盐析和DEAE离子交换层析纯化目的蛋白。dot-ELISA及竞争ELISA检测纯化目的蛋白的过敏原活性。结果河虾蛋白浸液皮下注射成功建立了虾过敏小鼠模型。免疫印迹分析显示虾中有一分子量36kD的蛋白组分为主要过敏原。用硫酸铵分级沉淀和DEAE离子交换层析的方法成功分离到目的蛋白。dot-ELISA证明目的蛋白能与特异性IgE反应。竞争ELISA检测纯化目的蛋白与河虾蛋白浸液竞争结合特异性IgE的活性,最大竞争抑制率可达60％。结论本实验成功鉴定并分离到河虾中一分子量为36kD的主要过敏原组分,为过敏原的分析研究提供了一套比较完整的方法。     

猪胸腺免疫抑制提取物超滤组分2对细胞免疫的影响

目的　探讨猪胸腺免疫抑制提取物超滤组分 2 (简称U2 组分 )对细胞免疫的影响。方法　用3H TdR掺入DNA法检测了不同剂量的U2 组分注射BALB c小鼠后的淋巴细胞增殖情况和U2 组分对PHA诱导的正常人外周血淋巴细胞增殖的影响。结果　注射 0 .2mgU2 组分的试验组小鼠淋巴细胞增殖能力比对照组降低 (P<0 .0 5 ) ;注射 1mg和 3mg两个试验组小鼠淋巴细胞增殖能力均比对照组显著降低 (P <0 .0 1) ;5 0 μg和 10 0 μg的U2 组分对PHA诱导的正常人外周血淋巴细胞增殖也均具有显著抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　用一定量的U2 组分对体内和体外淋巴细胞增殖均具有显著抑制作用     

日本血吸虫精氨酸编码基因CDNA的分离和序列分析

【目的】分离和鉴定日本血吸虫(Schistosomajaponicum,S.j)新基因。【方法】应用免疫学方法筛选S.jcDNA文库获得阳性克隆;通过PCR直接序列测定技术,表达序列标签（EST）同源性检索对阳性克隆插入片段进行鉴定;采用亚克隆技术及生物信息学等技术,对获得的日本血吸虫精氨酸酶编码基因序列进行结构与功能的分析。【结果】获得了一个含1061bp外源插入片段的阳性克隆,其cDNA序列含有一个840bp的阅读框,编码279个氨基酸,属精氨酸酶家族,与国际蛋白质库中的酵母、蛙、人和大鼠精氨酸酶序列的同源性分别为44%,50%,51%,53%和54%。【结论】获得了编码日本血吸虫精氨酸酶编码基因全长cDNA,为日本血吸虫精氨酸酶基因功能的研究奠定了基础。     

Biochemical analysis of arginase and ornithine carbamoyltransferase in human vitreous humor

BACKGROUND: The presence of arginase and ornithine carbamoyltransferase (OTC'ase) enzymes in human vitreous humor after death was investigated in this study. To the best of our knowledge, there is no prior report on the activity of arginase or ornithine carbamoyltransferase in human vitreous humor. METHODS: The presence of arginase and OTC'ase activities were examined in the human vitreous humor of 19 samples. Spectrophotometric methods were used to determine activities of arginase and OTC'ase. RESULTS: Arginase activity was detected in human vitreous humor, whereas OTC'ase activity was below the detection limit. Therefore, we focused on biochemical analysis of arginase in human vitreous humor. Kinetic properties of arginase activity in vitreous humor were optimized. In contrast to other arginases, optimal preincubation temperature and pH were 40 degrees C and 8.8, respectively. Km of vitreous arginase for L-arginine was 6 mM. Preincubation of the enzyme with Mn(2)+ ions caused a significant increase (33%) in arginase activity. CONCLUSIONS: The activity and presence of arginase as well as its kinetics in human vitreous are documented in this study. Biochemical functions and the importance of arginase in vitreous humor are not well understood. However, its presence may be explained by means of its involvement in polyamine biosynthesis as observed in the other extrahepatic tissues.     

RETINOBLASTOMALACTIC DEHYDROGENASE OF AQUEOUS HUMOUR AND ITS ISOENZYMES

Lactic dehydrogenase (LDH) activity in aqueoushumour and serum was measured of 24 patients withretinoblastoma, senile cataract, glaucoma, and cho-roid melanoma in addition to LDH isoenzyme fractions. The results were compared with those of the20 normal children. The ratio of aqueous humourLDH to serum LDH was 4.32+2.80, and that ofisoenzymes LDH4 to LDHl was greater than l. Theresults of our study suggested that the total LDHactivity and isoenzyme fractions in the aqueoushumour is of value in the diagnosis of retinobla&toma.     

左卡尼汀对心肺复苏后大鼠心脏保护作用的实验研究

目的研究心肺复苏后心功能不全的发生情况,探讨左卡尼汀心脏保护作用的机制。方法建立心肺复苏大鼠模型,30只Wistar大鼠随机分为手术对照组（S组）、常规复苏组（C组）和左卡尼汀组（L组）,每组10只,S组只行手术操作,不致颤;C组造成心搏骤停并行常规复苏;L组在心搏骤停并复苏成功后静脉注射左卡尼汀,按100 mg/kg。动态观察左室舒张末压（LVEDP）、左室内压上升和下降速率（±dp/dt）、血清心肌酶学（CK,CK-MB）及TNFa的变化。取左心室肌行光、电镜检查。结果与S组比较,C组和L组复苏成功后LVEDP和CK、CK-MB、TNFa有不同程度升高（P〈0.01）,±dp/dt不同程度下降（P〈0.01）,光、电镜下可见不同程度的心肌损害。L组与同时相C组比较,LVEDP和CK、CK-MB、TNFa（P〈0.01）,±dp/dt下降程度减轻（P〈0.05）,光、电镜下心肌损害减轻。结论左卡尼汀可以改善心肺复苏后心功能不全,减轻心肌损伤,对复苏后心脏有保护作用。     

非洲钝缘蜱和波斯锐缘蜱同功酶的研究

本文首次报导了二种软蜱不同发育期的同功酶酶谱研究。     

心导纳图和心阻抗图测量心脏泵血功能的比较

对12只开胸狗做心导纳图、阻抗图,测量(dy/dt)_(max),(dy/dt)_(max)/T_(R-y),(dz/dt)_(max)和(dz/dt)_(max)/T_(R_z)。然后改变测量电极间距L和基础阻抗Z,发现前者可引起(dy/dt)_(max)、(dy/dt)_(max)/T_(R-y)的显著变化;后者可引起(dz/dt)_(max)、(dz/dt)_(max)/T_(R-z)非常显著的变化。由心导纳图、阻抗图所得心脏每搏量(SV)与电磁流量计所测SV的相关系数分别为0.691和0.678。提示两法测量心脏泵血功能有相同的可靠性,但前者受L影响较大,后者对Z_0的变化敏感。     

普鲁泊福对原代培养人肝细胞CYP3A4同工酶的影响

目的：观察不同浓度普鲁泊福对原代培养肝细胞中CYP3SA4同工酶活性及蛋白表达的影响，并进一步探讨其临床药理学意义。方法：取肝血管瘤患者的瘤旁正常肝组织标本，胶原酶消化制备原代培养肝细胞，不同浓度普鲁泊福孵育24h后，Nash法测定CYP3A4同工酶比活性，Western印迹法测定CYP3A4蛋白表达，结果：临床剂量（0．01mmol/L)的普鲁泊福即可抑制CYP3A4同工酶的活性，且酶的活性与普鲁泊福的浓度呈负相关，临床剂量的普鲁泊福对该同工酶蛋白的表达并无显著影响，直至浓度为0．5mmol/L时才轻度抑制CYP3A4蛋白表达，结论：麻醉药普鲁泊福对CYP3A4产生明显的抑制作用，可能是一种潜在的P450抑制剂，会导致CYP3A4底物的生物转化速率的下降，其作用主要在表达后水平。     

不同地区周期型马来丝虫感染蚴的同工酶电泳比较分析

本文应用圆盘电泳对我国七个不同地区——贵州独山、贵州荔波、四川乐山、安徽泾县、浙江安吉、湖北谷城和福建建阳的周期型马来丝虫感染蚴的七种酶进行了区带分析和此较。结果显示,七个地区马来丝虫感染蚴的GPI、G6PD、LDH、PO、EST这五种酶的同工酶型没有差异。但是,MDH和PGM各出现两种同工酶型,位于贵州省内的两个地区的结果完全相同,而与另外五个省(地区)的结果不同。     

MAX (dk/dt)──A NEW DOPPLER-DERIVED INDEX OF VENTRICULAR SYSTOLIC FUNCTION

ResumeObjectifEssayerdetrouverunnouvelindicederived'examendchocardiographiqueDOPPlerpour4valuerlaIOnctionSystoliqueventriculaire.MethodeSGrsceanIOgicielspacial,iesprofilsdesfluxaortiqueetpulmonairescutnumdrisdsetconvertisencourbes4P,leurvaleurmaximaleetleurderivedupremierordre,max(dk/dt),outdidobtenussdpardmentcheZ23et25patientSavecmaladiescardiaquescongenitales(agemoyen:4.5ans).Lesmax(dk/dt)aortiqueetpulmonairemesurdsparl'examenDOPPlerout,tecomparesaveciesmax(dp/dt)ventriculairesdroit…     

肝素钠抗凝血浆的心肌酶活力分析

目的分析肝素钠抗凝的血浆肌酸激酶、肌酸激酶同工酶MB、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶的活性,探讨肝素钠对心肌酶活力的影响。方法收集经体检证实健康个体113例,其中男性61例,女性52例,同时采集他们的肝素钠抗凝血浆和血清。通过连续监测法测定血浆和血清肌酸激酶、肌酸激酶同工酶MB、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶的活性。结果肝素钠抗凝血浆的肌酸激酶、肌酸激酶同工酶MB、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶的活性均值分别为95．4±50．3u／L、13．1±8．1u／L、184．0±41．9u／L、122．7±32．9u／L、26．3±17．9u／L,而血清对照组的肌酸激酶、肌酸激酶同工酶MB、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶的活性均值分别为95．9±51．4u／L、12．7±7．5u／L、187．1±36．3u／L、119．6±29．2u／L、26．5±18．5u／L,两种标本的心肌酶活性无显著性差异（所有P值均大于0．05）。结论肝素钠对心肌酶活性无显著影响,肝素钠抗凝血浆可作为心肌酶活性测定的标本,可为临床抢救急性心肌梗死赢得宝贵时间。