芳香新塔花总黄酮调控PI3K/Akt/mTOR通路改善动脉粥样硬化的作用机制研究

观察芳香新塔花总黄酮对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠自噬和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控，探讨芳香新塔花总黄酮抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的作用机制。ApoE^-/-小鼠喂食高脂饲料8周，建立体内AS实验模型，随机分为5组(模型组、阳性对照组及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组),普通饲料喂食C57BL/6J小鼠设为空白组。灌胃给药12周后取出血清和主动脉，全自动生化分析仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平；酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠血清中细胞间黏附因子-1(ICAM-1)、血管间黏附因子-1(VCAM-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平；油红O染色法观察小鼠主动脉斑块面积；苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠主动脉斑块及病理变化；免疫荧光法检测主动脉中P62、LC3的表达；蛋白免疫印迹法(Wes...     

解毒活血方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠斑块稳定性的影响

目的 研究解毒活血方是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路诱导巨噬细胞自噬抑制炎症反应稳定AS易损斑块。方法 30只高脂饲料喂养ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、解毒活血方（中药）低、中、高剂量组、雷帕霉素组,6只普通饲料喂养的ApoE^-/-小鼠为正常组,6只普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为空白组,造模7周后开始灌胃给药,中药组予解毒活血方溶液（5.35、10.7、21.4 g·kg^-1·d^-1）,雷帕霉素组予自噬诱导剂雷帕霉素（2 mg·kg^-1·d^-1）,连续给药4周,余各组予等容积生理盐水。检测血清血脂及炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉根部血管壁病理变化,免疫组化法测定巨噬细胞/单核细胞单克隆抗体（MOMA-2）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平,透射电镜观测主动脉自噬体数量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬效应蛋白（Beclin-1）、自噬相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白水平。结果 与正常组比较,模型组血清血脂和炎症因子MCP-1、IL-6水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,自噬蛋白Beclin-1表达增加（P<0.05）,通路蛋白PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见明显粥样斑块,斑块内可见炎性细胞浸润,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱;自噬体和线粒体数量更少,且线粒体结构不完整。与模型组比较,中药组及雷帕霉素组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平和MCP-1、IL-6水平降低（P<0.05）,高密度脂蛋白（HDL）水平升高（P<0.05）,MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少（P<0.05,P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR表达减少（P<0.05,P<0.01）;主动脉内壁可见少量粥样斑块,炎性细胞浸润程度及血管壁厚度减轻;自噬体和自噬溶酶体数量增多。结论 解毒活血方改善AS小鼠脂质代谢,增强巨噬细胞自噬活性,减轻AS炎症反应,提高易损斑块稳定性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。     

银蓝调脂胶囊抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用

目的通过给予ApoE基因敲除小鼠高脂饮食建立动脉粥样硬化模型,探讨银蓝调脂胶囊抗动脉粥样硬化的作用及其机制。方法选取10只C57BL/6小鼠作为正常组,50只ApoE^-/-小鼠随机分成模型组,辛伐他汀片组,银蓝调脂胶囊高、中、低剂量组,每组10只。使用高胆固醇鼠饲料喂养ApoE^-/-小鼠12周,建立动脉粥样硬化模型。造模12周后连续灌胃给药12周,每天1次。检测血清ox-LDL水平,检测肝脏TC、TG、LDL-C水平,检测胸主动脉斑块面积及肝脏脂质面积,RT-qPCR法和Western blot法检测银蓝调脂胶囊对小鼠LXR信号通路相关基因和蛋白表达的影响。结果银蓝调脂胶囊能降低ApoE^-/-小鼠血清中ox-LDL水平(P<0.01)以及胸主动脉脂质斑块面积(P<0.01),减少肝脏中TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01)和脂质面积(P<0.01)。机制研究表明,银蓝调脂胶囊能上调肝脏中ABCG5、SR-B1 mRNA表达(P<0.01)和降低iNOS mRNA表达(P<0.01),上调LXRα、ABCG5、CYP7A1、SREBP-1c蛋白表达(P<0.05)并降低iNOS、COX2蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论银蓝调脂胶囊有较好的抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与激活LXR信号通路,促进胆固醇逆向转运并抑制炎症有关。     

补阳还五汤稳定ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块的作用机制

目的:探究补阳还五汤(BYHWT)对高脂饮食的载脂蛋白E敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)易损斑块的影响及其相关的作用机制。方法:8周龄ApoE~(-/-)小鼠高脂饮食喂养12周复制AS易损斑块模型,以C57/BL-6J小鼠作为正常组给于正常饮食饮水。随机取4只小鼠中头臂动脉与主动脉弓制作病理切片,通过计算斑块面积及其易损指数判定模型复制成功。72只ApoE~(-/-)小鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、自噬诱导剂组及BYHWT低、中、高剂量组,BYHWT低、中、高剂量组分别给予5,10,20 g·kg~(-1)BYHWT灌胃8周,自噬诱导剂组给予雷帕霉素4 mg·kg~(-1)灌胃8周,正常组继续给于正常饮食饮水。8周后,小鼠处死,游离胸主动脉到腹主动脉末端,制备血管组织标本用于斑块的易损指数测定,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析血管组织中自噬体形成。结果:ApoE~(-/-)小鼠成功诱导AS易损斑块模型,模型组AS斑块形成明显,斑块易损指数显著大于正常组(P0.01);补阳还五汤各剂量组明显缩小斑块面积,易损指数与模型组比较有不同程度的降低(P0.05)。模型组斑块血管组织中基质金属蛋白酶(MMP)-1,2,3mRNA水平明显高于正常组;与模型组比较,补阳还五汤、雷帕霉素组的MMP-1,2,3 mRNA的水平明显降低(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组的微管轻链蛋白3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)含量显著降低,高、中、低剂量的补阳还五汤及其雷帕霉素组可以明显升高LC3-Ⅱ/LC-Ⅰ含量(P0.05)。结论:补阳还五汤具有缩小AS斑块面积、降低血管中的基质金属蛋白酶的表达,调节斑块内巨噬细胞自噬从而降低斑块的易损指数,提高AS斑块的稳定性的作用。     

半夏白术天麻汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制

目的:研究半夏白术天麻汤对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预作用。方法:高脂饮食建立ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型,给予半夏白术天麻汤进行干预。通过苏木素-伊红(HE),油红O染色和马松(Masson)染色观察动脉粥样硬化病变后主动脉病理形态变化;全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)表达水平的变化;提取组织总蛋白、用蛋白定量法(BCA)对蛋白进行定量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平;硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量的变化;2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果:与正常组比较,模型组血管中有大量的脂质积累,血清中TG,TC,HDL-C和LDL-C水平均明显升高(P<0.05),血管中MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),血清中IL-6和TNF-α的表达水平有所升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),MDA含量及ox-LDL表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,半夏白术天麻汤处理后能抑制血管中脂质的累积;半夏白术天麻汤高剂量组和中剂量组的TG水平降低(P<0.05),且半夏白术天麻汤高、中、低剂量组均能明显降低血清中LDL-C的含量(P<0.01),降低血管中MMP-9蛋白的表达(P<0.05)以及血清中IL-6的表达(P<0.01),高剂量组能下调血清中TNF-α的表达(P<0.01),下调ox-LDL的表达(P<0.01);半夏白术天麻汤高、中剂量组均能提高MDA含量(P<0.05,P<0.01)及SOD活性(P<0.05);结论:半夏白术天麻汤对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉斑块形成有一定的干预作用,其机制可能与降低血清TG和LDL-C水平发挥降血脂作用、下调MMP-9蛋白,TNF-α,IL-6等保护血管免受炎症损伤、降低ox-LDL,MDA水平及提高SOD活性发挥抗氧化有关。     

基于肝脏代谢组学研究“瓜蒌-薤白”对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响

采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术,研究"瓜蒌-薤白"药对对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)肝脏内源性代谢物代谢紊乱的调控机制。利用高脂饮食建立小鼠AS模型,观察小鼠组织病理学变化,检测小鼠体质量、肝重以及肝脏中血脂水平和炎性因子等病理生化指标的含量,采用UPLC-Q-TOF-MS技术对小鼠肝脏样品进行代谢轮廓分析,结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA)与正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法,筛选差异代谢物并进行鉴别,检测代谢通路上相关代谢酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1的水平进行验证。结果显示,"瓜蒌-薤白"药对显著减少AS小鼠主动脉斑块及肝脏脂肪空泡面积,减轻肝脏脂滴积累;可降低AS小鼠肝脏系数,调控肝脏血脂水平并改善肝脏的炎性损伤;空白组、模型组以及给药组的代谢物能够显著区分,发现并初步鉴定了15种与AS相关的潜在生物标志物,"瓜蒌-薤白"药对能显著回调其中的7种,代谢通路分析筛选出2条与"瓜蒌-薤白"药对调节AS小鼠肝脏代谢紊乱相关的代谢途径,"瓜蒌-薤白"药对调控代谢途径中关键酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1水平,推测"瓜蒌-薤白"药对可干预AS小鼠肝脏甘油磷脂及鞘脂代谢紊乱从而抑制AS疾病,其调控机制可能与其干预肝脏代谢途径关键酶LCAT、sPLA2、EPT1、ACER1的表达有关。     

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化及PI3K/Akt/mTORC1信号通路的影响

目的观察丹红注射液对动脉粥样硬化(AS)小鼠自噬基因Atg13启动子区甲基化及自噬信号通路PI3K/Akt/mTORC1的影响,探讨其可能的作用机制。方法 40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、阳性对照组和丹红注射液低、高剂量组,每组10只,各给药组给予相应药物干预。6周后RT-PCR检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13、Atg3和Atg4a的mRNA表达;Westernblot检测AS小鼠主动脉Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、PI3K、Akt、p-Akt、mTORC1和p-mTORC1的蛋白表达;采用亚硫酸氢盐测序法检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平。结果与模型组比较,丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Beclin1蛋白表达明显升高,丹红注射液低剂量组小鼠主动脉LC3Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Atg13、Atg3和Atg4a mRNA表达显著升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平明显降低(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉p-Akt蛋白表达明显降低(P0.01),丹红注射液高剂量组小鼠主动脉p-mTORC1蛋白表达明显降低(P0.01)。结论丹红注射液防治AS的机制可能与降低模型小鼠主动脉Atg13启动子区甲基化水平、抑制PI3K/Akt/mTORC1信号通路和促进细胞自噬有关。     

消癥通络法调节PPARγ相关通路干预动脉粥样硬化的实验研究

目的：通过动脉硬化ApoE^-/-小鼠实验，探讨消癥通络法调节PPARγ相关通路干预动脉粥样硬化的作用机制。方法：选取25只C57BL/6小鼠作为空白组，68只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只),12周后观察小鼠状态，主动脉HE染色、油红O染色观察血管病理变化、斑块面积，并通过免疫组化、Western blot观察血管ox-LDL、PPARγ、CD36、ABCA1蛋白表达情况。结果：(1)一般情况：空白组小鼠状态良好，皮色光亮，活跃，饮食饮水正常；模型组大鼠状态较差，皮毛油腻、晦暗，神情萎靡，饮食稍差，饮水正常；与模型组相比较，中药组及对照组给药后均有不同程度改善。(2)HE染色及油红O病理图片显示：空白组主动脉未见AS斑块；与空白组相比，模型组AS斑块面积显著增大；与模型组相比，对照组、中药组AS斑块面积明显减小。(3)免疫组化法及Western blot检测小鼠主动脉ox-LDL、PPARγ、CD36、ABCA1蛋白表达：与空白组比较，模型组小鼠主动脉PPARγ、ABCA1蛋白表达显著降低，ox-...     

瓜蒌薤白半夏汤调节Apoe~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的疗效与机制研究

目的:研究瓜蒌薤白半夏汤(GXBD)对载脂蛋白e基因敲除小鼠(Apoe~(-/-)小鼠)动脉粥样硬化(AS)模型的血脂及血清一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响,并探讨瓜蒌薤白半夏汤防治动脉粥样硬化(AS)可能的机制。方法:健康雄性Apoe~(-/-)小鼠,高脂饲料12周,建立AS模型,随机分为模型对照组(0.3 mL/10 g蒸馏水)、GXBD组(19.2 g·kg~(-1)·d~(-1))、辛伐他汀组(3.03 mg·kg~(-1)·d~(-1));同遗传背景C57BL/6J小鼠作为正常对照组(0.3 mL/10 g蒸馏水),每组10只,持续干预10周,末次给药24 h后检测血清低密度脂蛋白(LDLC)、高密度脂蛋白(HDLC)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),血清一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的浓度;分离主动脉进行油红O染色,测量斑块面积与血管腔面积比(PA/LA);主动脉根部石蜡包埋切片,HE染色,观察主动脉组织结构的病理变化。结果:与空白对照组相比模型对照组TC、TG、LDL-C明显升高(P0.01),HDLC明显降低(P0.01),GXBD组TC、LDL-C水平较模型组显著降低(P0.01),TG有降低趋势(P0.05),HDL-C水平较模型组升高,差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,GXBD组PA/LA显著降低(P0.01),且血清NO显著升高(P0.01),AngⅡ、ET-1、ox-LDL显著降低(P0.01)。结论:瓜蒌薤白半夏汤能够有效改善高脂饲料喂养的Apoe~(-/-)小鼠血脂水平,并减少主动脉斑块的面积,其机制可能与改善血脂水平,升高NO的表达,抑制AngⅡ、ET-1、ox-LDL的表达有关。     

黄连素降低ApoE-/-小鼠内脏脂肪素表达

目的:观察黄连素(Ber)对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠主动脉粥样硬化(AS)病变、内脏脂肪素(visfatin)及炎症因子表达的影响。方法:50只SPF级8周龄雄性Apo E-/-小鼠予高脂饲料喂养随机分为5组:Ber低、中、高剂量组分别ip给予Ber 2.5,5,7.5 mg·kg-1·d-1;辛伐他汀组ig辛伐他汀5 mg·kg-1·d-1;模型组ig等量生理盐水。另设10只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。16周后测小鼠体重、血清脂质及visfatin,血浆白介素(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察小鼠主动脉组织AS斑块面积;免疫组化法测AS斑块内visfatin的表达;Western blotting测小鼠主动脉visfatin蛋白的表达。结果:小鼠体重增加值,血清visfatin,总胆固醇(TG),三酰甘油(TC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血浆IL-6及TNF-α含量,主动脉visfatin蛋白表达方面,模型组均显著高于对照组(P0.05),各给药组均显著低于模型组(P0.05);辛伐他汀组,Ber中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积比显著低于模型组(P0.05)。结论:Ber可通过降血脂、减小AS斑块面积、降低IL-6及TNF-α含量等发挥抗AS效应,其机制可能与降低visfatin表达有关。     

消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈动脉粥样硬化的干预作用

目的探讨消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠血脂、颈动脉粥样硬化程度及斑块的影响。方法ApoE^-/-小鼠采用高脂饲料饲养,建立颈动脉粥样硬化模型。将ApoE^-/-小鼠按体重分为模型组、阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊低、高剂量组,每组22只。以12只C57BL/6Cnc小鼠为对照组,采用普通饲料喂养。阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀混悬液1.3 mg/kg,消瘀降脂胶囊低、高剂量组灌胃消瘀降脂胶囊混悬液325、975 mg/kg,对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水。按0.1 ml/10 g小鼠体重灌胃,1次/d,每周记录小鼠体重。连续灌胃12周后,检测小鼠血脂水平、肝脏指数。采用油红O染色和Van Gieson胶原纤维染色观察颈动脉病理学改变。结果与模型组比较,消瘀降脂胶囊高剂量组小鼠体重降低(P<0.05),血清TC[(25.92±4.21)mmol/L比(30.39±4.67)mmol/L]、LDL-C[(7.97±2.14)mmol/L比(10.26±1.97)mmol/L]水平降低(P<0.05),消瘀降脂胶囊低、高剂量组HDL-C[(0.31±0.07)mmol/L、(0.34±0.13)mmol/L比(0.26±0.09)mmol/L]水平升高(P<0.05)。病理结果显示,阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊高剂量组颈动脉脂质沉积阻塞比例低于模型组(P<0.05),且尚未形成血管斑块。结论消瘀降脂胶囊可降低ApoE^-/-小鼠血清LDL-C、TC水平,升高HDL-C水平,改善高血脂症状,减轻颈动脉狭窄程度,减缓颈动脉斑块生成。     

橙皮苷改善ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用机制研究

目的:研究橙皮苷对动脉粥样硬化的ApoE^-/-小鼠和LPS诱导的Raw 264.7巨噬细胞的保护作用及可能机制。方法:将60只ApoE^-/-小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组及橙皮苷低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各10只。采用高脂饲料饲养16周造模,检测各组小鼠血清三酰甘油(triglycerides,TG)、总胆固醇(cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、重组人精氨酸酶1(Arginase-1,ARG1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10水平。使用分子对接程序AutoDock vina对橙皮苷与AMPK结合能力进行预测。将Raw 264.7巨噬细胞分为空白组、模型组和橙皮苷低浓度组、中浓度组、高浓度组(5μmol·L^-1、10μmol·L^-1、20μmol·L^-1),采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)进行造模。Western Blot法检测P-AMPK、PPAR-γ、P-P65、P65蛋白表达。结果:与模型组比较,橙皮苷中、高剂量组大鼠血清TG,TC和LDL-C水平降低HDL-C水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。油红O染色结果显示:橙皮苷高剂量组能抑制血管中脂质的累积,较模型组脂质区域明显减小。AutoDock vina预测结果提示,橙皮苷可与AMPK的ILE-46、GLN-109、ASN-111、ASN-110等残基形成氢键而结合,结合力为-10.158 kcal·mol^-1。橙皮苷上调LPS诱导的Raw 264.7巨噬细胞P-AMPK、PPAR-γ蛋白表达,下调P-P65表达(P<0.01)。结论:橙皮苷能够有效改善ApoE^-/-小鼠的动脉粥样硬化,其机制可能与调控巨噬细胞极化相关。     

瓜蒌-薤白对异丙肾上腺素诱导心肌缺血大鼠MAPKs信号通路的影响

目的: 探讨瓜蒌-薤白对心肌缺血损伤的保护作用机制。 方法: SD大鼠分为6组:正常组,模型组,瓜蒌25 g·kg^-1组,薤白12.5 g·kg^-1组,瓜蒌-薤白37.5 g·kg^-1组,阳性对照(普萘洛尔)0.02 g·kg^-1组,每组9只,连续给药14 d。心肌缺血模型完成后,开始给药,采用连续6 d腹腔注射异丙肾上腺素0.04 mg·kg^-1制造大鼠心肌缺血模型,给药14 d后,分离血清检测超氧化物歧化酶(SOD) 活性、丙二醛(MDA) 以及血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。采用Western blotting 法观测瓜蒌-薤白对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子C-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38磷酸化水平的影响。 结果: 与正常组相比,模型组大鼠血清中LDH,CK和MDA水平明显升高,SOD活性显著下降(P<0.05, P<0.01),与正常组相比,模型组P-p38 P-JNK P-ERK明显上调(P<0.05, P<0.01)。 与模型组比较瓜蒌,薤白,瓜蒌-薤白能显著降低血清中MDA,CK,LDH含量,瓜蒌-薤白降幅最大,与瓜蒌,薤白组比较有显著性差异(P<0.01)。瓜蒌-薤白组P-p38, P-JNK,P-ERK水平显著降低。 结论: 瓜蒌-薤白对心肌缺血损伤有保护作用,其机制可能是通过清除氧自由基、减轻氧化反应而抑制p38,JNK,ERK蛋白磷酸化以减轻缺血损伤,对心肌具保护作用。     

清脂化瘀颗粒调控Keap-1/Nrf2/ARE介导的氧化损伤抗动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的:基于对动脉粥样硬化(AS)防治,观察清脂化瘀颗粒对动脉粥样硬化的防治作用及机制.方法:将30只载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、清脂化瘀颗粒组.10只C57BL/6J雄性小鼠作为对照组.除对照组外,各组给予高脂饲料喂养8周复制AS模型,后各组小鼠分别给予对应药物干预4周.分离各...     

黄芪甲苷调控miR-17-5p与PCSK9/VLDLR信号通路抗动脉粥样硬化的分子机制研究

为了研究黄芪甲苷对miR-17-5p及其下游前蛋白转化酶枯草溶菌素(proprotein convertase subtillisin/kexin type 9,PCSK9)/极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)信号通路的调控作用,探索黄芪甲苷抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的可能作用机制。在细胞实验中通过加入氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)构建血管内皮细胞损伤模型,根据干预方法不同将细胞分为模型组、miR-17-5p抑制剂组、空白血清组、黄芪甲苷含药血清组;干预后检测各组细胞活性,细胞miR-17-5p、VLDLR和PCSK9 mRNA及蛋白表达。在动物实验中将15只C57BL/6小鼠作为对照组,将45只ApoE^-/-小鼠分为模型组、miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷组,每组15只;干预8周后检测小鼠外周血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,检测小鼠主动脉miR-17-5p、VLDLR和PCSK9 mRNA表达水平,观察各组小鼠病理学改变。细胞实验结果显示,与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组VSMC细胞活性均明显较高(P<0.05);与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组VSMC细胞的miR-17-5p和VLDLR mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),VSMC细胞的PCSK9 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。动物实验结果显示,与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组和黄芪甲苷组外周血清中IL-6和TNF-α水平均明显降低(P<0.05),血清中IL-10水平均明显升高(P<0.05);与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷组主动脉miR-17-5p和VLDLR mRNA水平均明显降低(P<0.05),PCSK9 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);病理学观察发现miR-17-5p抑制剂组和黄芪甲苷组AS程度降轻。综上所述,黄芪甲苷能够防治AS的发生发展,其作用机制可能与靶向调控miR-17-5p影响PCSK9/VLDLR信号通路,抑制血管炎性反应,减轻内皮细胞损伤有关。     

心阳片通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片调节心肌细胞自噬改善心力衰竭(Heart failure,HF)小鼠心功能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,心阳片低、中、高剂量组(455、910、1820 mg·kg^-1)及3-甲基腺嘌呤组(15 mg·kg^-1,腹腔注射给药),每组8只;采用主动脉弓缩窄术复制HF小鼠模型;按上述剂量灌胃给药,灌胃体积为8 mL·kg^-1,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能:小鼠左心室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);采用q PCR法检测小鼠心脏组织HF生物标记物B型钠尿肽(BNP)mRNA的表达;采用Western Blot法检测小鼠心肌细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BⅡ/Ⅰ的表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF、LVFS显著降低(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较,心阳片低、中、高剂量组及3-甲基腺嘌呤组小鼠的LVEF、LVFS显著升高(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过抑制心肌细胞过度自噬改善HF小鼠的心功能。     

基于NLRP3炎症小体调控细胞焦亡探讨瘀血痹抗动脉粥样硬化的作用机制

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)以慢性炎症和增殖过程为特征,而细胞焦亡与AS的发生发展密切相关。核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的激活可以诱导白介素-1β前体(pro-IL-1β)、白介素-18前体(pro-IL-18)和增加核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体的合成,从而触发半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1前体(pro-Caspase-1)蛋白水解为有活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1),Caspase-1将细胞因子前体pro-IL-1β和pro-IL-18分别转化为成熟的和具有生物活性的白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18),参与AS形成过程,同时活性Caspase-1可以诱发细胞焦亡,前期研究发现瘀血痹能够减少ApoE^-/-小鼠主动脉斑块面积,但机制尚不清楚,同时瘀血痹药物成分可以调节NF-κB、NLRP3、IL-1β等相关因子。因此,拟从NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路介导的细胞焦亡探究瘀血痹抗AS的作用机制,为AS防治提供新的治疗策略。     

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。     

血管软化丸调控PI3K/Akt/mTOR通路影响细胞自噬及抗动脉粥样硬化的作用机制研究

目的通过观察血管软化丸对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的调控,研究血管软化丸抗动脉粥样硬化的作用机制。方法动物实验,观察各组小鼠主动脉横截面病理损伤程度,观察血管软化丸对小鼠主动脉组织Akt、mTOR mRNA和蛋白质表达。体外实验,观察血管软化丸含药血清、Akt抑制剂康士得、mTOR抑制剂雷帕霉素及mTOR-siRNA对小鼠RAW264.7巨噬细胞的影响,观察巨噬细胞自噬体的变化,观察含药血清对巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞Akt、mTOR、微管相关蛋白LC3-II及自噬相关蛋白Beclin 1的表达的影响,观察含药血清对巨噬细胞分泌炎症因子水平的影响。结果动物实验显示:血管软化丸组动脉粥样硬化病变程度明显较轻。与对照组比较,血管软化丸组小鼠主动脉组织Akt和mTOR表达水平明显较低(均P<0.05)。体外实验发现,与对照组相比,血管软化丸含药血清组和各抑制剂组透射电镜下观察到自噬体数量明显较大(均P<0.05),巨噬细胞微管相关蛋白LC3-II和Beclin1表达明显升高(均P<0.05),而Akt及mTOR的mRNA及蛋白表达水平明显较低(均P<0.05),巨噬细胞分泌的炎症因子IL-10水平明显高低(P<0.05),而炎症因子IFN-γ水平明显较高(P<0.05)。结论血管软化丸通过抑制炎症反应治疗动脉粥样硬化的分子机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,调节巨噬细胞自噬,减少斑块巨噬细胞浸润有关。