三七总皂苷对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成及自噬的影响

目的：探讨三七总皂苷对载脂蛋白E基因敲除ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块形成的影响及其作用机制。方法：8只雄性C57BL/6J小鼠为对照组，32只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、三七总皂苷低剂量组(40 mg·kg^-1)、三七总皂苷中剂量组(80 mg·kg^-1)、三七总皂苷高剂量组(160 mg·kg^-1),每组各8只。对照组给予普通饲料喂养，其余各组采用高脂饲料喂养的同时进行药物干预，对照组、模型组给予等量生理盐水灌胃，每日1次，共干预8周，观察小鼠体质量和精神状态。全自动生化仪检测小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol, TC)、三酰甘油(triacylglycerol, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)的水平；油红O染色...     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的：基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法：本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^-1)脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^-1LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^-1LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^-1)、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^-1)、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^-1)联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测...     

参莲提取物对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的:探讨参莲(SL)提取物在炎症调节中发挥的治疗性作用及其机制。方法:分别以小鼠巨噬细胞Raw264.7和小鼠腹腔巨噬细胞为实验对象,利用脂多糖(LPS)诱导炎症模型,SL提取物低、中、高剂量(5,10,20 mg·L~(-1))药物处理24 h,另设空白组,使用酶联免疫吸附测定(ELISA)法及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)含量及mRNA表达;使用蛋白质免疫印迹法(Western blot)对小鼠Raw264.7核转录因子-κB(NF-κB)信号通路中的p65及磷酸化p65(p-p65)蛋白表达情况进行检测,采用免疫荧光法对小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞NF-κB p65分子进行亚细胞定位观察SL提取物是否能够影响其入核。结果:与空白组比较,模型组小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-1β含量及mRNA表达均显著升高,小鼠Raw264.7 p-p65/p65蛋白表达显著升高(P0.01),免疫荧光观察显示模型组Raw264.7及腹腔巨噬细胞均可见明显入核行为;与模型组比较,SL提取物低、中、高剂量组明显降低小鼠Raw264.7及腹腔巨噬细胞TNF-α,IL-1β含量及mRNA表达(P0.05,P0.01),显著降低小鼠Raw264.7及p-p65蛋白(P0.01),SL提取物中剂量组可明显减弱Raw264.7及腹腔巨噬细胞入核行为。结论:SL提取物能够抑制巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与影响巨噬细胞炎性因子的分泌及NF-κB信号通路有关。     

基于miR-34a/SIRT1/PGC-1α通路探讨化瘀祛痰方对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积的作用机制

目的 以miR-34a/SIRT1/PGC-1α信号通路为切入点探讨化瘀祛痰方对ApoE^-/-AS小鼠肝脏脂质沉积的作用机制。方法 将C57BL/6J野生型小鼠7只作为空白对照组,21只ApoE^-/-AS小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、瑞舒伐他汀组,每组7只。空白对照组小鼠给予正常饮食,模型组、辛伐他汀组和化瘀祛痰方组小鼠给予高脂饲料。8周后,辛伐他汀组和化瘀祛痰方组小鼠灌胃相应药物;空白对照组和模型组小鼠给予等体积生理盐水。全自动生化分析仪测定肝脏TC、TG、 HDL、 LDL水平;试剂盒检测肝脏游离脂肪酸含量;HE染色法,油红O染色观察肝脏组织形态学变化;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定miR-34a、SIRT1、PPAR-α、PGC-1α及CPT1AmRNA表达水平;Western Blot检测各组小鼠肝脏SIRT1、PPAR-α、PGC-1α、CPT1A蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组ApoE^-/-小鼠血清、TG、TC及LDL-C水平升高(P<0.05),HDL-C水平降低(P<...     

紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制研究

目的:探讨紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制。方法:(1)分析紫菀酮对核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)诱导Raw 264.7细胞向破骨细胞分化的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组、紫菀酮1μmol·L^-1干预组、紫菀酮2.5μmol·L^-1干预组、紫菀酮5μmol·L^-1干预组和紫菀酮10μmol·L^-1干预组，空白对照组加入完全培养基，阳性对照组加入含25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，其余各组分别加入含有相应浓度紫菀酮及25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，培养5 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP)染色，统计各组破骨细胞数；(2)分析紫菀酮对Raw 264.7细胞活力的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、紫菀酮1μ...     

常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制研究

目的 研究常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法 (1)体外实验：用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol·L^-1)常春藤皂苷元处理RAW264.7细胞24 h后,采用MTT法检测细胞存活率。将RAW264.7细胞分为：空白组、脂多糖(LPS)组(1μg·L^-1)、LPS+2.5μmol·L^-1常春藤皂苷元组、LPS+5μmol·L^-1常春藤皂苷元组和LPS+10μmol·L^-1常春藤皂苷元组;采用LPS干预24 h建立体外细胞炎症模型,并用常春藤皂苷元共孵育24 h进行干预。采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测细胞中TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。(2)体内实验：将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组(200 mg·kg^-1)及常春藤皂苷元低、中、高剂量组(12.5、2...     

枸杞多糖通过MGL/TLR信号通路调控巨噬细胞RAW264.7的活化

目的：探讨枸杞多糖(LBP)促进巨噬细胞RAW264.7活化的机制。方法：采用不同浓度(50、100、200 mg·L^-1)的LBP刺激巨噬细胞RAW264.7,以100μg·L^-1的脂多糖(LPS)和100 mg·L^-1半乳糖(Gal)作为阳性药。LBP刺激24 h后,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)检测不同给药浓度的LBP(0、50、100、200、400、800 mg·L^-1)对巨噬细胞RAW264.7的毒性影响;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-6、IL-12的水平;分别通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4(TLR4)/Toll样受体2(TLR2)/巨噬细胞半乳糖型凝集素(MGL)通路中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核转录因子-κB(NF-κB) mR...     

补阳还五汤苷类组分介导NF-κB通路抗动脉粥样硬化炎症反应的机制研究

探讨补阳还五汤苷类组分调节核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路对载脂蛋白E^-/-(apolipoprotein E^-/-,ApoE^-/-)小鼠及RAW264.7细胞炎症反应的影响。体内实验，采用高脂饲料连续喂养ApoE^-/-小鼠12周，建立动脉粥样硬化动物模型，75μg·mL^-1氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, Ox-LDL)孵育RAW264.7细胞24 h建立动脉粥样硬化细胞模型，利用全自动生化分析仪、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、Western blot及droplets digital PCR方法，检测血脂水平、主动脉内膜厚度、炎症因子含量及NF-κB通路相关蛋白及mRNA表达水平，评价动脉粥样硬化病变情况、药物抗动脉粥样硬化作用机制。结果表明，...     

桂皮醛对LPS诱导的Raw264.7巨噬细胞迁移和M1极化的抑制作用研究

目的研究桂皮醛对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞迁移和M1极化的抑制作用。方法培养Raw264.7巨噬细胞,随机分为空白对照组(不加LPS及药物)、LPS组(加入终浓度为20μg·L~(-1)的LPS)、桂皮醛(0.1μmol·L~(-1),0.3μmol·L~(-1))组。应用Transwell小室法观察桂皮醛对LPS诱导的巨噬细胞迁移的影响;应用流式细胞术观察桂皮醛对LPS诱导的巨噬细胞M1极化的影响。结果 Transwell小室迁移实验结果与流式细胞术检测结果均显示,LPS(20 ug·L~(-1))可明显促进RAW264.7巨噬细胞的迁移及M1极化(P0.01);与LPS组比较,桂皮醛0.1μmol·L~(-1)组、桂皮醛0.3μmol·L~(-1)组可明显抑制LPS诱导的Raw64.7巨噬细胞的迁移和M1极化(P0.01),且桂皮醛0.3μmol·L~(-1)组作用优于桂皮醛0.1μmol·L~(-1)组(P0.05)。结论桂皮醛对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁移和M1极化有明显抑制作用,且呈浓度依赖性。     

云芝菌丝体胞内外提取物对Raw264.7细胞的双向免疫调节作用

本文研究了云芝菌丝体胞内外多糖提取物PSK和YZLY对小鼠Raw264.7巨噬细胞的体外调节作用.结果发现,5-100μg/mL的PSK和YZLY均可上调Raw264.7细胞的iNOS表达.促进NO和TNF-a产生.而对于脂多糖(LPS)刺激的Raw264.7细胞,PSK和YZLY均可不同程度地下调iNOS、NO和TNF-a的生成.这些结果表明PSK和YZLY对小鼠巨噬细胞的免疫调节具有双向性.     

消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈动脉粥样硬化的干预作用

目的探讨消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠血脂、颈动脉粥样硬化程度及斑块的影响。方法ApoE^-/-小鼠采用高脂饲料饲养,建立颈动脉粥样硬化模型。将ApoE^-/-小鼠按体重分为模型组、阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊低、高剂量组,每组22只。以12只C57BL/6Cnc小鼠为对照组,采用普通饲料喂养。阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀混悬液1.3 mg/kg,消瘀降脂胶囊低、高剂量组灌胃消瘀降脂胶囊混悬液325、975 mg/kg,对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水。按0.1 ml/10 g小鼠体重灌胃,1次/d,每周记录小鼠体重。连续灌胃12周后,检测小鼠血脂水平、肝脏指数。采用油红O染色和Van Gieson胶原纤维染色观察颈动脉病理学改变。结果与模型组比较,消瘀降脂胶囊高剂量组小鼠体重降低(P<0.05),血清TC[(25.92±4.21)mmol/L比(30.39±4.67)mmol/L]、LDL-C[(7.97±2.14)mmol/L比(10.26±1.97)mmol/L]水平降低(P<0.05),消瘀降脂胶囊低、高剂量组HDL-C[(0.31±0.07)mmol/L、(0.34±0.13)mmol/L比(0.26±0.09)mmol/L]水平升高(P<0.05)。病理结果显示,阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊高剂量组颈动脉脂质沉积阻塞比例低于模型组(P<0.05),且尚未形成血管斑块。结论消瘀降脂胶囊可降低ApoE^-/-小鼠血清LDL-C、TC水平,升高HDL-C水平,改善高血脂症状,减轻颈动脉狭窄程度,减缓颈动脉斑块生成。     

恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎疗效观察

目的探究恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎患者的临床效果。方法选取2017年2月—2018年10月医院门诊接受治疗的120例晚期肝癌伴乙型肝炎患者,按随机数字表法将其分成两组,对照组60例患者采用恩替卡韦治疗;观察组60例患者采用恩替卡韦联合康艾注射液治疗。对比两组患者治疗后总有效率;治疗前后APTT、TT、PT、FIB以及TBil、AST、ALT水平。结果观察组治疗后临床总有效率较对照组升高(P<0.05);观察组患者治疗后凝血功能APTT(47.30±3.80)·s^-1、TT(17.92±1.28)·s^-1、PT(14.91±1.94)·s^-1、FIB(3.91±0.82)g·L^-1明显低于对照组APTT(52.05±3.92)·s^-1、TT(19.94±1.42)·s^-1、PT(18.82±2.20)·s^-1、FIB(5.10±0.87)g·L^-1(P<0.05);观察组患者治疗后肾功能指标TBil(20.14±10.16)μmol·L^-1、AST(30.18±18.92)IU·L^-1、ALT(29.36±7.73)IU·L^-1明显低于对照组TBil(30.01±11.22)μmol·L^-1、AST(46.32±19.61)IU·L^-1、ALT(40.04±7.54)IU·L^-1(P<0.05)。结论恩替卡韦联合康艾注射液治疗晚期肝癌伴乙型肝炎患者的效果较明显,不仅可修复肝功能,还能改善患者凝血功能,具有重要的临床价值。     

半夏白术天麻汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制

目的:研究半夏白术天麻汤对高脂饮食诱导的载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预作用。方法:高脂饮食建立ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化模型,给予半夏白术天麻汤进行干预。通过苏木素-伊红(HE),油红O染色和马松(Masson)染色观察动脉粥样硬化病变后主动脉病理形态变化;全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)表达水平的变化;提取组织总蛋白、用蛋白定量法(BCA)对蛋白进行定量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达水平;硫代巴比妥酸(TBA)法检测丙二醛(MDA)含量的变化;2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化。结果:与正常组比较,模型组血管中有大量的脂质积累,血清中TG,TC,HDL-C和LDL-C水平均明显升高(P<0.05),血管中MMP-9蛋白表达显著升高(P<0.01),血清中IL-6和TNF-α的表达水平有所升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),MDA含量及ox-LDL表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,半夏白术天麻汤处理后能抑制血管中脂质的累积;半夏白术天麻汤高剂量组和中剂量组的TG水平降低(P<0.05),且半夏白术天麻汤高、中、低剂量组均能明显降低血清中LDL-C的含量(P<0.01),降低血管中MMP-9蛋白的表达(P<0.05)以及血清中IL-6的表达(P<0.01),高剂量组能下调血清中TNF-α的表达(P<0.01),下调ox-LDL的表达(P<0.01);半夏白术天麻汤高、中剂量组均能提高MDA含量(P<0.05,P<0.01)及SOD活性(P<0.05);结论:半夏白术天麻汤对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉斑块形成有一定的干预作用,其机制可能与降低血清TG和LDL-C水平发挥降血脂作用、下调MMP-9蛋白,TNF-α,IL-6等保护血管免受炎症损伤、降低ox-LDL,MDA水平及提高SOD活性发挥抗氧化有关。     

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??OBJECTIVE To observe the effect of chlorogenic acid on the secretion of inflammatory cytokines and regulation mechanism of P38MAPK, NF-??B signaling pathway in human hepatic stellate cells induced by TGF-??1. METHODS Different concentrations of CGA worked in normal and activated hepatic stellate cells to make sure the appropriate drug concentration.The exponential growth phase cells were randomly divided into normal HSC group, normal HSC+CGA group, after cultured 48 h, the cells were cultured with 0??50??100 mg??L^-1 CGA for 24 h; HSC(TGF-??1) group?? HSC(TGF-??1 + CGA) group: after 24 h, the cells were induced by 10 ??g??L^-1 TGF-??1 for 24 h, and then cultured with 0, 50, 100 mg??L^-1 CGA for 24 h. The expression of ??-SMA protein was detected by immunocytochemistry, the expression of p-P38, P65 protein was detected by Western-blot, the expression of TNF-??, IL-6 mRNA was detected by real time quantitative PCR, and the content of TNF-??, IL-6 in the supernatant was detected by ELISA method. RESULTS The appropriate concentrations of CGA were 50 and 100 mg??L^-1, these concentration has no effect on normal HSC(P>0.05); after stimulation by TGF-??1, the expression of ??-SMA, p-P38, P65, TNF-??, IL-6 was increased(P<0.01), when activated HSC cells were treated with 50 and 100 mg??L^-1 CGA, the expression of ??-SMA, p-P38, P65, TNF-??, IL-6 was decreased(P<0.05, P<0.01). CONCLUSION CGA can inhibit the proliferation of activated HSC, regulate the secretion of inflammatory factors such as TNF-??, IL-6 by P38MAPK and NF-??B signaling pathway, inhibit the occurrence of liver fibrosis.     

基于血管平滑肌自噬探讨瓜蒌-薤白对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响

目的:探究瓜蒌-薤白药对ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)主动脉斑块血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及自噬水平的影响。方法:高脂饲料饲养ApoE^-/-小鼠40只复制AS动物模型,随机分为模型组、瓜蒌-薤白组、雷帕霉素组、阿伐托他汀组,以普通饮食C57BL/6J小鼠10只为正常组。正常组及模型组给予生理盐水灌胃,瓜蒌-薤白组、雷帕霉素组及阿伐托他汀组每日给予相应药物灌胃,共8周。实验结束后处死小鼠,酶标仪检测小鼠血清,总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平;主动脉油红O染色观察并测量主动脉斑块面积占总面积之比。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉中膜VSMCs增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平。透射电镜观察VSMCs自噬小体并检测VSMCs自噬相关蛋白酵母ATG6同源物(Beclin-1),酶联相关轻链蛋白Ⅱ(LC3Ⅱ),p62蛋白表达。结果:与模型组比较,瓜蒌-薤白组可显著减少AS小鼠主动脉脂质积累及斑块面积,降低TC,TG,LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C(P<0.05)。瓜蒌-薤白显著降低主动脉VSMCs内增殖相关抗原PCNA及α-SMA水平(P<0.01),抑制VSMCs过度增殖;瓜蒌-薤白显著上调主动脉VSMCs内Beclin-1及LC3Ⅱ蛋白表达,降低p62积累(P<0.01),增加VSMCs自噬小体的表达,上调VSMCs自噬水平。结论:瓜蒌-薤白调节AS小鼠体内血脂水平,抑制主动脉VSMCs过度增殖抑制AS小鼠主动脉的斑块形成,其机制可能与其上调VSMCs自噬活性有关。     

葆宮止血颗粒对围绝经期无排卵性异常子宫出血性激素、新血管生成因子的改善研究

目的研究葆宮止血颗粒对围绝经期无排卵性异常子宫出血患者性激素、新血管生成因子的改善情况。方法选取医院2018年2月—2019年2月收治的围绝经期无排卵性异常子宫出血患者100例,根据治疗方法不同分为两组。对照组给予常规西医治疗,观察组加用葆宮止血颗粒治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效。结果观察组完全止血时间(35.66±4.52)h短于对照组(48.79±5.26)h,总有效率(92.00%,46/50)高于对照组(76.00%,38/50),差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前性激素、一氧化氮(NO)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后VEGF(42.36±5.55)pg·mL^-1、bFGF(21.79±2.68)pg·mL^-1水平高于对照组,黄体生成素(LH)(27.05±4.12)IU·L^-1、孕激素(P)(1.89±0.52)nmol·L^-1、促卵泡生成素(FSH)(32.10±4.25)U·L^-1、NO(4.14±1.01)μmol·L-1水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗前子宫内膜厚度组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后子宫内膜厚度(0.58±0.17)cm低于对照组(P<0.05)。结论葆宮止血颗粒可调节围绝经期无排卵性异常子宫出血患者内分泌水平,改善NO、VEGF、bFGF的表达,降低子宫内膜厚度,提高治疗效果。     

UPLC同时测定通宣理肺胶囊中9个成分含量

目的:建立超高效液相色谱法(UPLC)同时测定通宣理肺胶囊中9个有效成分含量的方法。方法:采用Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,流速为0.3 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为210 nm(盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷)和278 nm(柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷、甘草酸铵)。结果:盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷、甘草苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、黄芩苷和甘草酸铵质量浓度的线性范围分别为0.005~0.037μg·mL^-1(r=0.9997)、0.002~0.017μg·mL^-1(r=0.9993)、0.005~0.039μg·mL^-1(r=0.9995)、0.010~0.084μg·mL^-1(r=0.9993)、0.010~0.082μg·mL^-1(r=0.9989)、0.007~0.052μg·mL^-1(r=0.9995)、0.007~0.057μg·mL^-1(r=0.9991)、0.038~0.301μg·mL^-1(r=0.9993)、0.002~0.020μg·mL^-1(r=0.9998);平均加样回收率均在98.2%~102.7%,RSD均小于1.5%。测定的样品中上述9个成分质量分数分别为1.12~1.23、0.39~0.54、1.19~1.31、2.54~2.67、2.49~2.66、1.54~1.66、1.66~1.79、9.19~9.54、0.53~0.69 mg·g^-1。结论:UPLC可用于宣理肺胶囊9个有效成分的含量测定,且方法简单、有效、结果准确。     

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??OBJECTIVE To observe whether low concentration (1??10^-8 mol??L^-1) of ouabain (OUA)can increase the contractility in rat cardiocytes and investigate the Na/K pump signal transduction pathways related to positive inotropic action following the low concentration of OUA. METHODS On enzymatic isolation of rats ventricular myocytes, the Na⁺/K⁺ pump current (Ip) was by whole-cell patch-clamp, in order to observe the low concentration of OUA on Ip. The contraction of a single myocyte was assessed by a video-based motion edge-detection system. ??To detect and compare the potentiations of 1??10^-8-1??10^-3 mol??L^-1 OUA on the contractility in rat cardiocytes. ??The cardiocytes were pre-treated with PP2(1 ??mol??L^-1), NAC(100 ??mol??L^-1), PD98059(50 ??mol??L^-1)for 5 min, and the effects of the signals transduction inhibitors on the positive inotropic effect of 1??10^-8 mol??L^-1 OUA was recorded. RESULTS The 1??10^-8-1??10^-3 mol??L^-1 OUA increased the contractility of rat cardiocytes (P<0.01). Compared 1 ??mol??L^-1 PP2 +1??10^-8 mol??L^-1 OUA group with 1??10^-8 mol??L^-1 OUA group, the contraction amplitude decreased (P<0.05), and compared 100 ??mol??L^-1 NAC +1??10^-8 mol??L^-1 OUA group with 1??10^-8 mol??L^-1 OUA group, the contraction amplitude also decreased (P<0.01), no significant difference in contraction amplitudes between 50 ??mol??L^-1 PD98059+1??10^-8 mol??L^-1 OUA group and 1??10^-8 mol??L^-1 OUA group (P>0.05). CONCLUSION The 1??10^-8-1??10^-3 mol??L^-1 OUA could increase the contraction amplitude of cardiocytes in rats in concentration-dependent manner. Positive inotropic effect of OUA in low concentration is related to Na/K pump signal transduction. Multiple signal pathways regulate the positive inotropic effect of 1??10^-8 mol??L^-1 of OUA, including the Src/ROS signal pathway.     

左卡尼汀注射液中三甲胺分离提取及其离子色谱测定法研究

目的 建立分离提取左卡尼汀注射液中三甲胺含量的方法,及采用离子色谱法对三甲胺进行检测研究。方法 以L₉(3⁴)正交试验优化提取条件,采用0.25 mol·L^-1NaOH溶液创造碱性环境,40 ℃加热20 min,连接N₂流量为0.4 L·min^-1,用0.1 mol·L^-1甲磺酸溶液吸收气体,有效实现左卡尼汀注射液中三甲胺的分离提取;采用DionexIonPac^TM CS12A(4.0 mm×250 mm)色谱柱,DionexIonPac^TM CG12A(4.0 mm×50 mm)保护柱,以17 mmol·L^-1甲磺酸溶液为淋洗液,流速0.5 mL·min^-1,柱温30 ℃,电导检测。结果 三甲胺在0.30~48.64 μg·mL^-1内线性关系良好,相关系数为0.999 3,检出限为0.012 μg·mL^-1(S/N=3),定量限为0.3 μg·mL^-1(S/N=10),精密度良好,溶液置于室温24 h或2~8 ℃48 h内稳定。平均加样回收率在97.33~100.82%内,相对标准偏差(RSD)为1.07%(n=9)。结论 该方法能够有效提取分离左卡尼汀注射液中的三甲胺,离子色谱检测方法灵敏度高,回收率和重现性良好。     

白皮杉醇对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-468抗肿瘤作用及机制

目的:考察白皮杉醇(PIC)对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468增殖、凋亡及细胞周期的作用,并对其作用机制进行探讨。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法考察PIC(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞成活率的影响,并计算半抑制率(IC50);采用碘化丙啶(PI)染色观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞周期的影响;采用细胞凋亡检测(Annexin V-FITC/PI)双染法观察PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的诱导凋亡作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察不同浓度PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡蛋白的影响,并用Western blot对分泌型糖蛋白Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路相关蛋白进行检测。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,PIC(5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0μmol·L^-1)可呈浓度依赖性地抑制MDA-MB-468细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),IC50为(39.4±4.6)μmol·L^-1;作用48 h,PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)呈浓度依赖性地升高MDA-MB-468细胞处于细胞周期G0/G1期细胞(P<0.01);呈浓度依赖性地诱导MDA-MB-468细胞凋亡(P<0.01),其中,PIC(20.0μmol·L^-1)诱导细胞凋亡率为49.87%;PIC(10.0,20.0μmol·L^-1)可明显降低MDA-MB-468细胞中β-catenin及原癌基因(C-myc),黏附因子(CD44)蛋白的表达水平(P<0.05,P<0.01);PIC(5.0,10.0,20.0μmol·L^-1)可显著抑制蛋白激酶B(Akt)磷酸化,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)蛋白的磷酸化,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达水平(P<0.01);增强半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和磷酸化β-catenin的蛋白表达(P<0.01)。结论:PIC可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制MDA-MB-468细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而诱导其凋亡。