干扰素-ε联合阿糖胞苷诱导K62细胞凋亡的研究

目的:研究干扰素(IFN-ε)联合小剂量阿糖胞苷(Am-C)对K562细胞的诱导凋亡作用.方法:IFN-ε、Ara-c单独和联合作用K562细胞72 h后,用流式细胞术观察细胞凋亡水平.RT-PcR检测不同实验组Survivin基因的表达情况.结果:IFN-ε和Am-c单独和联合应用K562细胞72h后.单独用药组和联合用药组均能促进细胞凋亡并下调Survivin基因的表达,且随着浓度的增加细胞凋亡、Surivin表达水平亦降低(P<0.05).两药联合后效果更加明显(P<0.01).结论:IFN-ε与Am-C单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡.且存在剂量依赖性;通过Survivin mRNA的表达下调可能是其诱导凋亡的机制.Ara-C可增强IFN-ε对K562细胞的杀伤作用.     

干扰素和小剂量阿糖胞苷联合作用诱导K562细胞凋亡

目的 研究干扰素（IFN）和小剂量阿糖胞苷（Ara-C）联合应用对K562细胞的诱导凋亡作用，并探讨其机制。方法 以IFN-α 2b和小剂量Ara-C单独和联合作用后，MTT法检测K562细胞的生长抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡水平，RT-PCR检测野生型p53基因的表达，免疫细胞化学法检测野生型P53蛋白的表达。结果 IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用可以有效抑制K562细胞的增殖，联合作用后K562细胞的抑制率可达42．85％，与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比，差异均有显著性意义（均P〈0．05）。IFN-α 2b和小剂量Ara-C联合作用72h后，可以使K562细胞凋亡率提高到39．03％，与对照组及单用IFN-α 2b和单用Ara-C相比，差异均有显著性意义（均P〈0．05）。两药联合作用可以促进野生型p53基因mRNA和蛋白的表达上调。结论 联合使用IFN和小剂量Ara-C可以协同诱导K562白血病细胞的凋亡，促进野生型p53基因和蛋白表达上调可能是其机制之一。     

干扰素-ε联合阿糖胞苷诱导K562细胞凋亡的研究

目的：研究干扰素（IFN-ε）联合小剂量阿糖胞苷（Ara—C）对K562细胞的诱导凋亡作用。方法：IFN-ε、Ara—C单独和联合作用K562细胞72h后,用流式细胞术观察细胞凋亡水平,RT—PCR检测不同实验组Survivin基因的表达情况。结果：IFN-ε和Ara-C单独和联合应用K562细胞72h后,单独用药组和联合用药组均能促进细胞凋亡并下调Survivin基因的表达,且随着浓度的增加细胞凋亡、Survivin表达水平亦降低（P〈0．05）。两药联合后效果更加明显（P〈0．01）。结论：IFN-ε与Ara—C单独及联合应用均可诱导K562细胞凋亡,且存在剂量依赖性;通过SurvivinmRNA的表达下调可能是其诱导凋亡的机制。Ara—C可增强IFN-ε对K562细胞的杀伤作用。     

苦参碱联合5-FU诱导人胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨苦参碱和5-氟尿嘧啶(5-FU)联用诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的机制.方法 1.0 mg/mL苦参碱联合20 mg/L 5-FU作用于SGC-7901细胞48 h, RT-PCR和免疫细胞化学检测bcl-2、bax、Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达;免疫细胞化学、酶联免疫吸附试验和Western blot检测活性caspase-3的表达,并与空白对照组和单独苦参碱或5-FU用药组比较.结果联合用药组bcl-2下调,bax、Fas上调,与空白对照组有显著差异(P<0.05),与单独用药组相比无显著性差异(P>0.05);联合用药组活性caspase-3表达显著增高,与各组比较均有显著差异(P<0.01).结论苦参碱和5-FU联用通过上调bax、下调bcl-2/Fax,显著提高活性caspase-3的表达,从而协同诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡.     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。     

Kupffer细胞Fas配体的表达及其对移植肝内淋巴细胞的杀伤作用

目的 观察移植肝脏中Kupffer细胞(KCs)和T淋巴细胞(T lymphocytes,TLCs)中Fas、FasL基因和蛋白的表达,以及KCs对侵入肝脏内的淋巴细胞的细胞毒性作用.方法 肝移植后0、48 h分离肝移植组、氯化钆(GdCl3 )组动物肝脏的KCs和TLCs,并对TLCs进一步分类;用RT-PCR法测定KCs和TLCs中Fas、FasL基因表达,用免疫组化、激光扫描共聚焦显微镜和Western blot蛋白印迹等方法测定KCs和TLCs中Fas、FasL蛋白质表达;观察不同培养条件下淋巴细胞凋亡与KCs的相互作用.结果 GdCl3 组分离出的KCs显著少于肝移植组,淋巴细胞数量及CD8 T细胞显著多于肝移植组(P<0.05),免疫组化和激光共聚焦显微镜显示GdCl3 组FasL阳性KCs显著少于肝移植组(P<0.05),2组Fas阳性淋巴细胞无显著差异(P>0.05);RT-PCR和Western blot显示KCs中 FasL mRNA及蛋白表达GdCl3 组较弱(P<0.05),2组淋巴细胞中Fas、FasL mRNA无显著差异(P>0.05).GdCl3组中分离出的KCs对TLCs杀伤率明显低于肝移植组(P<0.05),抗FasL抗体对KCs杀伤力有抑制作用.结论 KCs能表达FasL蛋白,并通过Fas、FasL途径杀伤移植肝脏中的淋巴细胞,诱导移植肝脏产生免疫耐受.GdCl3能阻止KCs中FasL基因和蛋白表达,抑制肝移植中免疫耐受的产生.     

siRNA沉默c-FLIP对K562/ADR耐药性的影响

目的：探讨c-FLIP siRNA干扰c-FLIP mRNA水平对阿霉素耐药细胞K562/ADR的耐药性的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰的方法抑制K562及K562/ADR细胞c-FLIP的表达,通过荧光定量PCR的方法检测c-FLIP mRNA表达及对多药耐药基因MDR1 mRNA水平的影响。MTT法检测c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞增殖的影响,Annexin V/7-ADD双染研究c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞凋亡的影响。结果与阴性siRNA转染组相比较,c-FLIP siRNA转染下调K562细胞中c-FLIP的mRNA后,K562细胞增殖受到一定程度的抑制(P<0.05),但是并未显著诱导细胞凋亡,c-FLIP干扰与否K562细胞48 h增殖率分别为(69.14±1.82)%和(60.69±2.23)%,凋亡率分别为(1.7±0.3)%和(1.8±0.2)%。与阴性siRNA转染组相比较, c-FLIP siRNA转染抑制K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA后,K562/ADR细胞增殖显著被抑制(P<0.05),并显著诱导了细胞凋亡增加(P<0.05),c-FLIP干扰与否K562/ADR细胞48 h增殖率分别为(-6.07±0.71)%和(-37.45±3.53)%,凋亡率分别为(5.2±0.4)%和(9.2±0.4)%。并且c-FLIP siRNA下调c-FLIP mRNA水平后,K562/ADR细胞中的多药耐药基因MDR1的mRNA表达水平也被显著下调(P<0.05)。结论 c-FLIP siRNA下调K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA水平抑制了多药耐药基因MDR1的表达,从而抑制了K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性。     

维生素E琥珀酸酯联合三苯氧胺对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合三苯氧胺(TAM)对荷乳腺癌裸鼠的体内肿瘤的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法:40只裸鼠皮下接种MCF-7乳腺癌细胞建立荷瘤裸鼠模型,分为空白对照组(不予治疗)、TAM治疗组(予5 mg/kg TAM治疗)、VES治疗组(予150 mg/kg VES治疗)、联合治疗组(5 mg/kg TAM 150 mg/kg VES),每组10只,治疗4周后测量各组肿瘤大小,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞表面Fas和FasL表达,免疫组化法检测肿瘤组织Fas和FasL表达,TUNEL法检测细胞凋亡指数的变化.结果:VES联合TAM对荷乳腺癌裸鼠体内肿瘤具有明显的增殖抑制作用,较单用VES或TAM抑制作用增强(P<0.05).细胞周期分析显示,联合药物治疗后肿瘤细胞表现为明显的G0/G1期阻滞,肿瘤组织和细胞表面的Fas和FasL表达上调,同时细胞的凋亡率升高.结论:VES联合TAM对荷乳腺癌裸鼠体内肿瘤具有协同抑制作用,其机制可能与上调肿瘤细胞Fas/FasL表达,促进细胞凋亡有关.     

Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的影响

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxg nucleotide,ASODN)与传统化疗药物对白血病K562细胞耐药性的影响.方法 实验分为反义核苷酸组(ASODN)、无义核苷酸组(SODN)、脂质体组(Lip)、空白对照组,以脂质体转染Survivin ASODN,用RT-PCR检验SurvivinmRNA表达;用MTT法检测K562细胞对阿霉素(driacin,ADM)、柔红霉索(daunorubicin.DAM)及联合用ASODN耐药性;用流式细胞仪检测单独用ADM、DAM和联合用ASODN时K562细胞内ADM和DAM的浓度.结果 ASODN组Survivin mRNA表达较对照组降低(P<0.05);ADM和ASODN ADM对K562细胞的半数抑制细胞(IC50)分别为0.5457 mg/L和0.1933 mg/L,DAM和ASODN DAM对K562细胞的IC5.分别为0.5408 mg/L和0.2027 mg/L,联合用药组ICso低于单用药组(P<0.05);用ADM和ASODN ADM时K562细胞内药物的荧光强度分别为51.64、89.92,DAM和ASODN DAM时K562细胞内药物的荧光强度分别为63.71、88.47,联合用药组细胞内药物浓度高于单用药组(P<0.05).结论 Survivin反义寡核苷酸可下调K562细胞Survivin mRNA的表达;Survivin反义寡核苷酸与阿霉素和柔红霉索联合作用可提高K562细胞内药物浓度,降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

辛伐他汀抑制K562细胞MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA的表达

目的 探讨辛伐他汀抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的分子机制. 方法 不同浓度辛伐他汀作用K562细胞后,MTT法检测细胞增殖情况,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,RT-PCR测定MAPK1、cyclin D1、E2F1、c-myc mRNA表达.结果辛伐他汀能抑制K562细胞增殖,增殖抑制效应随药物浓度增加和作用时间延长而增大(P<0.05).与对照组比较,5、10、20 μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48 h和72 h后能明显增加细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P<0.05),表明辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡.10、20 μmol/L辛伐他汀处理K562细胞72 h后,MAPK1、cyclin D1、E2F1 c-myc mRNA表达水平明显降低. 结论 辛伐他汀可能通过调节Ras-MAPK途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡.