肺癌微环境脾气虚证肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达及加味黄芪建中汤干预机制研究

目的〓研究肺癌微环境脾气虚证肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达及加味黄芪建中汤的影响。方法〓50只小鼠采用苦寒泻下,劳倦,节食的方法造模,在建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型后,加味黄芪建中汤灌胃治疗10d,脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织。采用microRNA基因芯片检测正常小鼠巨噬细胞与3组肿瘤组织相关巨噬细胞MicroRNA基因表达的变化。结果〓“脾气虚”组肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达谱表达异常（与正常组比较）,不同于肿瘤组,具有独特的microRNA变化,而加味黄芪建中汤可明显双向调节“脾气虚”组肿瘤组织相关巨噬细胞microRNA的表达谱的异常变化,使其恢复正常。结论〓加味黄芪建中汤可使“脾气虚”组microRNA的表达谱接近恢复正常。     

脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12，IL-10的表达及加味黄芪建中汤的影响

目的 研究脾气虚证肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达及加味黄芪建中汤影响。方法 采用苦寒泻下，劳倦，节食的方法造模，在建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型后，按实验设计方案处理各组小鼠。造模后加味黄芪建中汤灌胃，脱颈椎处死小鼠，取血清。分别称取每只小鼠瘤重，ELISA方法检测肺癌小鼠血清IL-12，IL-10。结果 “脾气虚”可明显影响肺癌小鼠血清IL-12、IL-10的表达；加味黄芪建中汤可下调肺癌小鼠血清IL-10（P<0.05）的表达，上调肺癌小鼠血清IL-12（P<0.05）的表达。结论 “脾气虚”可导致肺癌小鼠Th细胞的异常漂移，可能是肺癌小鼠免疫调节紊乱的一种表现失调；加味黄芪建中汤有助于恢复肺癌小鼠免疫调节。     

肺岩宁方对Lewis肺癌小鼠趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达的影响

目的：观察肺岩宁（Feiyanning,FYN）方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中趋化因子CXCL12及其受体（CXC chemokine receptor 4,CXCR4）mRNA及蛋白表达的影响。 方法：建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、化疗组、肺岩宁组和综合组（肺岩宁加化疗组）。给予相应干预21d后观察肺转移情况,采用逆转录聚合酶链反应法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中CXCL12和CXCR4 mRNA及蛋白表达水平。 结果：肺岩宁组与综合组小鼠的肺转移率低于模型组。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达CXCL12和CXCR4,肺岩宁组与综合组小鼠肺癌中CXCR4 mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组与化疗组（P〈0．05）,而4组小鼠Lewis肺癌组织中CXCL12 mRNA及蛋白的表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）． 结论：肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调趋化因子受体CXCR4的表达,影响CXCL12-CXCR4生物轴的作用有关。     

加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响

目的:探讨加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠肿瘤转移及HIF-1α、V-ATPase c mRNA表达的影响。方法:复因素法建立脾虚证小鼠模型,进行分组并接种Lewis肺癌瘤株后的第10天,取肺及肿瘤组织,压片法计肺转移结节数,RTPCR法检测V-ATPase c mRNA的表达,Power Vision法检测HIF-1α的表达。结果:与肺癌对照组比较,肺癌脾虚组小鼠肺转移结节数增多(P<0.05),与脾虚肺癌组比较,脾虚肺癌治疗组肺转移结节数减少,HIF-1α表达下调(P<0.01)。结论:加味黄芪建中汤对小鼠肿瘤转移有抑制作用,其机制可能与肿瘤微环境的HIF-1α表达下调有关。     

胆囊癌患者癌组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4、CXCR7表达及意义

目的研究胆囊癌患者癌组织中趋化因子CXCL12以及其受体CXCR4/CXCR7的表达与意义。方法选取2012年4月至2016年6月在我院行手术切除治疗的67例证实为胆囊癌的标本作为观察组,同时另选取67例正常胆囊组织标本作为对照组。采用免疫组织化学法(SP)检测癌组织中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4、CXCR7表 达水平及意义。结果观察组患者CXCL12、CXCR4与CXCR7的表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);趋化因子CXCL12及其受体CXCR4、CXCR7在性别、年龄中比较差异无统计学意义(P>0.05),在中低分化中阳性表达率明显高于在高分化的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05),在有淋巴结转移中的阳性表达率明显高于无淋巴结转移中的阳性表达率,在TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期的阳性表达率(P<0.05);经Pearson相关性分析显示,CXCL12与CXCR4蛋白在胆囊癌中成正相关(r=0.424,P<0.05),CXCL12与CXCR7蛋白在胆囊癌中成正相关(r=0.624,P<0.05),CXCL4与CXCR7蛋白在胆囊癌中无相关 (r=0.164,P>0.05)。结论趋化因子CXCL12及其受体CXCR4、CXCR7在胆囊癌组织中高度表达,而且与TNM分期、淋巴结转移、组织学分级有着密切的相关性,对胆囊癌诊断与预后具有一定的临床价值。     

扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响

目的研究扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响。方法将50只清洁级C57BL/6小鼠建立肺癌荷瘤小鼠模型,50只小鼠造模成功48只,其中模型组9只,顺铂组9只,扶正抑瘤汤高、中、低剂量组均10只。扶正抑瘤汤高、中、低剂量组小鼠分别灌胃24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg扶正抑瘤汤;顺铂组腹腔注射4 mg/kg顺铂;模型组灌胃等体积生理盐水。比较各组小鼠肿瘤生长抑制率,各组小鼠血清TGF-β、白细胞介素2(IL-2)、干扰素(IFN-γ)浓度,比较各组小鼠肿瘤组织中及程序性死亡受体1(PD-L1)、CD4CD25+Treg细胞表达情况,Bax、Bcl-2蛋白表达水平及Bax、Bcl-2 mRNA相对表达量。结果各组小鼠肿瘤生长抑制率、IL-2、IFN-γ浓度及肿瘤组织中Bax mRNA、Bax蛋白相对表达水平均高于模型组,差异有统计学意义(P 0.05);各组小鼠血清TGF-β浓度及PD-L1表达、CD4+CD25+Treg细胞占比、Bcl-2 mRNA、Bcl-2蛋白相对表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P 0.05);扶正抑瘤汤的作用呈剂量依赖性,且扶正抑瘤汤高剂量组优于顺铂组。结论扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有抑制作用,可改善肿瘤免疫微环境。     

加味四君子汤对lewis肺癌小鼠缺氧诱导因子-1α基因、CXC型趋化因子受体4基因及D-木糖的影响

目的探讨加味四君子汤对肺癌小鼠可能作用机制及肺癌对小鼠消化系统的影响。方法建立小鼠Lewis肺癌模型,模型成功建立后,加味四君子汤灌胃14d,第15天脱颈椎处死小鼠,取肿瘤组织采用Real-timePCR方法检测缺氧诱导因子-1a基因（HIF-ls）、CXC型趋化因子受体4基因（CXCR4）的表达;取血清采用间苯三酚法检测D-木糖。结果加味四君子汤干预lewis肺癌小鼠后,肺癌健脾组与肺癌组的HIF．Is、CX。CR4mRNA有统计学意义（P〈0．01）;肺癌组和肺癌健脾组与正常组相比均有统计学意义（P〈0．01）。结论加味四君子汤对肺癌有抑制作用,肺癌能降低小鼠消化吸收功能。     

三阴乳癌组织CXCL12与CXCR4表达及其意义

目的探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在三阴乳癌(TNBC)组织表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组化SP法检测CXCL12和CXCR4蛋白在55例TNBC组织中的表达,观察相应的临床病理指标(病人年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、临床分期),并进行相关性分析。结果 TNBC组织CXCL12、CXCR4表达与病人年龄、肿瘤大小和临床分期无明显相关性(P>0.05),而与腋窝淋巴结转移状态呈正相关(r=0.413、0.325,P<0.05),淋巴结有转移组CXCL12、CXCR4的表达明显强于淋巴结无转移组(uc=3.02、2.38,P<0.05)。结论推测CXCL12及CXCR4可作为预测TNBC腋窝淋巴结转移及预后的一个重要分子标志物。     

加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠VEGF的表达及MVD的影响

目的探讨加味黄芪建中汤对脾虚证肺癌小鼠血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的影响。方法多因素法建立脾虚证小鼠模型后,进行分组并接种Lewis肺癌。第10天后,取肿瘤组织,采用免疫组化法检测肿瘤组织内VEGF表达及MVD计数水平。结果脾虚证小鼠造模成功;脾虚病机使VEGF表达与MVD计数水平增加(P0.01);加味黄芪建中汤使VEGF表达MVD计数水平降低(P0.01)。结论加味黄芪建中汤可能通过降低VEGF的表达及MVD,进而发挥对脾虚小鼠肿瘤转移的抑制作用。     

趋化因子配体10及趋化因子受体3在膀胱癌中的表达及意义

目的：检测趋化因子配体10(CXCL10)及趋化因子受体3(CXCR3)在膀胱癌中的表达并探讨其临床意义。方法80例膀胱癌患者和33例健康体检者分别纳入试验组和对照组。采用 ELISA 检测血清中 CXCL10的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血单一核细胞中 CXCR3 mRNA 的表达,并将 CXCL10和 CXCR3的表达强度与各临床参数进行相关性分析。结果试验组外周血清中 CXCL10及外周血单一核细胞中 CXCR3 mRNA 的表达量均显著高于对照组;试验组血清CXCL10及 CXCR3 mRNA 的表达与年龄、病理分期、分化程度、肿瘤大小等均不存在相关性(P >0.05),但均与有无淋巴结转移相关(P <0.05)。结论CXCL10及 CXCR3的表达与膀胱癌的发生发展及淋巴结转移可能存在相关性,阻断 CXCL10/CXCR3反应轴,可能会成为膀胱癌治疗的一个新靶点。     

子宫内膜癌组织CXCL12及其受体CXCR4 mRNA表达及意义

目的了解趋化因子CXC配体-12(CXCL12)及其受体CXCR4在子宫内膜癌组织表达及其意义。方法采用RT-PCR方法,检测12例正常子宫内膜组织和29例子宫内膜癌组织CXCL12、CXCR4mRNA表达,分析子宫内膜癌组织CXCL12、CXCR4mRNA表达与临床病理特征的关系。结果子宫内膜癌组织CXCL12、CXCR4mRNA表达显著高于正常子宫内膜组织(t=3.338、4.174,P<0.01),且二者表达呈显著正相关(r=0.796,P<0.01)。子宫内膜癌组织中CXCL12mRNA表达与FIGO分期、淋巴结转移、细胞分化程度、病理类型及年龄无关(P>0.05);不同病理分级的子宫内膜癌组织CXCR4mRNA表达差异有统计学意义(F=5.535,P<0.01),且其表达与子宫内膜癌病理分级呈负相关(r=-0.472,P<0.05);CXCR4mRNA表达与FIGO分期、淋巴结转移、病理类型及年龄无关(P>0.05)。结论子宫内膜癌组织中CXCL12、CXCR4mRNA表达上调,提示CX-CL12和CXCR4可能在子宫内膜癌的发生、发展中发挥生物学作用。     

CXCL12、CXCR4、MVD在多发性骨髓瘤骨髓微龛中表达及意义

目的 探讨趋化因子配体12(CXCL12)、趋化因子受体4(CXCR4)、微血管密度(MVD)在多发性骨髓瘤(MM)骨髓微龛中的表达、分布、意义及其相互关系.方法 收集MM患者63例作为试验组,选择健康人42例作为对照组.采用免疫组织化学方法检测两组骨髓活检片中CXCL12、CXCR4、MVD表达及分布.结果 试验组骨髓活检组织中CXCL12、CXCR4、MVD表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),三者在骨髓中表达与性别、年龄、免疫球蛋白分型、轻链分类表达差异无统计学意义(P＞0.05);CXCL12表达与CXCR4、MVD表达均呈正相关(P＜0.05).结论 MM中CXCL12、CXCR4、MVD表达可能与疾病发生相关;CXCL12/CXCR4生物轴促进MM骨髓微龛血管新生.     

CXCL13和CXCR5在骨缺损成骨微环境中的表达特征

目的 研究CXCL13和CXCR5在骨缺损成骨微环境中的表达特征,为探索趋化因子调控成骨微环境与间充质干细胞行为提供依据.方法 以20只新西兰白兔建立骨缺损模型,以脱蛋白骨移植修复.在术后1、2、4、8和12周分别取材,采用免疫组织化学SP法、Western blotting技术和Real-Time PCR分别检测CXCL13和CXCR5蛋白及mRNA的表达.结果 免疫组织化学染色结果显示:CXCL13集中表达于载体支架与宿主骨床的修复界面;CXCR5在修复界面、髓腔及支架核心表达较强.Real-TimePCR检测结果显示:术后4周时,CXCL13和CXCR5 mRNA的表达与其他各时间点比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blotting检测结果显示:术后4周时,CXCL13和CXCR5蛋白表达水平最高.结论 CXCL13和CXCR5与成骨活跃程度相关,并表现为明显的时间与位点特征.     

卵巢癌趋化因子受体CXCR4的表达及意义

目的　探讨趋化因子受体及配体CXCR4 /CXCL12 (SDF - 1)在上皮性卵巢癌细胞中的表达及在肿瘤转移中的作用。方法　采用RT -PCR和WesternB1ot对 15例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞系CAOV3中CXCR4和腹膜后淋巴结组织中SDF - 1在mRNA和蛋白水平的表达进行检测 ,并比较趋化因子作用前后CXCR4的变化。ELISA检测上皮性卵巢癌腹水中趋化因子CXCL12的含量。以Boyden小室检测重组人SDF - 1、上皮性卵巢癌腹水对卵巢癌细胞的趋化活性。结果　 (1)在上皮性卵巢癌组织及CAOV3细胞中CXCR4在mRNA及蛋白水平显著表达 ,趋化因子作用后CXCR4的含量明显减少 ,差异有显著性 (P<0 0 5 )。 (2 )卵巢癌性腹水及腹膜后腔淋巴结组织均含较高水平的CXCL12。 (3)重组人CXCL12、卵巢癌性腹水均可诱导上皮性卵巢癌细胞的迁移 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论　CXCR4 /CX CL12受体配体系统可通过诱导癌细胞的迁移在上皮性卵巢癌的转移中起重要作用。     

神经干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠CXC趋化因子1和2及其趋化因子受体2表达的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注损伤梗死区CXC趋化因子1(CXCL1)和CXC趋化因子2(CXCL2)及CXC趋化因子受体2(CXCR2)表达的影响。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,实验动物随机分为假手术组、模型组和NSCs组。NSCs组尾静脉注射PKH26标志的NSCs细胞悬液,缺血72 h后行神经功能损害评分(NSS),2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测脑梗死体积,苏木精-伊红(HE)染色观察梗死区病理变化,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测梗死区CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA表达。结果脑缺血后72 h,模型组和NSCs组NSS评分和脑梗死体积高于假手术组(P<0.05);NSCs组NSS评分和脑梗死体积低于模型组(P<0.05)。HE染色可见模型组梗死区大量炎性细胞浸润,而NSCs组梗死区炎性细胞浸润较少;NSCs组在梗死区有红色荧光信号表达,而假手术组和模型组未发现红色荧光信号。模型组CXCL1、CXCL2、CX-CR2蛋白和mRNA相对表达高于假手术组(P<0.05);NSCs组CXCL1、CXCL2、CXCR2蛋白和mRNA相对表达低于模型组(P<0.05)。结论 NSCs移植具有促进脑缺血损伤神经功能恢复和减少脑梗死体积的作用,其机制可能与其下调炎症趋化因子CXCL1、CXCL2及其受体CXCR2表达、进而抑制炎症反应有关。     

NGF、NCAM、CXCL12/CXCR4在涎腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中作用的研究

目的：探讨涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）中神经生长因子（nerve growth factor,NGF ）、神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM）、趋化因子（CXC chemokine ligand 12,CXCL12 ）及趋化因子受体（CXC chemokine receptor type 4,CXCR4）表达与嗜神经侵袭的关系。方法：选取临床病理资料齐全的SACC 60例,分为嗜神经侵袭组（36例）和非嗜神经侵袭组（24例）,制作组织芯片。采用免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术检测两组NGF、NCAM、CXCL12/CXCR4蛋白的表达,分析指标表达与临床病理参数的相关性。结果：NGF、CXCL12、CXCR4蛋白在SACC嗜神经侵袭组阳性表达率均高于非嗜神经侵袭组,差异具有统计学意义（P＜0.05）;NGF、CXCL12、CXCR4表达与患者性别、组织学类型、肿瘤发生部位及大小均无关（P＞0.05）。SACC中NGF与CXCL12的阳性表达相关（r=0.279,P＜0.05）,也与CXCR4阳性表达相关（r=0.451,P＜0.05）,但CXCL12与CXCR4无明显相关（r=0.254,P=0.05）。NCAM在两组SACC中均呈阴性表达。结论：NGF、CXCL12/CXCR4过表达共同参与了SACC的嗜神经侵袭过程。     

胶质瘤中CXCL12 CXCR4和CXCR7的表达及意义

目的检测胶质瘤中趋化因子配体12(CXCL12)、趋化生长因子受体4(CXCR4)和趋化生长因子受体7(CXCR7)的表达,探讨三者在不同临床特征中的表达差异。方法选择105例胶质瘤手术后存档的蜡块及临床资料为研究组,另选择80例脑出血术后边缘经病理证实为正常脑组织蜡块为对照组。应用免疫组化方法检测两组中CXCL12、CXCR4和CXCR7的表达。结果研究组中CXCL12、CXCR4和CXCR7的阳性率明显高于对照组,研究组中3种蛋白表达的阳性率与肿瘤的最大径、Ki67表达及分级密切相关。经线性相关分析显示,研究组中CXCL12和CXCR4、CXCL12与CXCR7呈正相关。结论胶质瘤中CXCL12、CXCR4与CXCR7均高表达,CXCL12分别与CXCR4、CXCR7具有协同作用,3种蛋白对肿瘤进展有重要促进作用。     

血清CXCL12和CXCR7在脑梗死后血管性认知功能障碍患者中的检测价值分析

目的 探讨血清趋化因子配体12(CXCL12)和趋化因子受体7(CXCR7)在脑梗死后血管性认知功能障碍(VCI)患者中的检测价值。方法 选取我院2021年2月至2023年2月收治的176例脑梗死患者作为研究组,根据有无发生VCI分为VCI组(47例)和非VCI组(129例),另选取同期在本院体检,且一般资料与研究组患者相匹配的176例健康者作为对照组。采用Spearman法分析脑梗死患者血清CXCL12、CXCR7表达水平与MoCA评分的相关性,Logistic回归分析影响脑梗死患者发生VCI的相关因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CXCL12和CXCR7对脑梗死后VCI的诊断价值。结果 脑梗死患者血清CXCL12和CXCR7表达水平显著高于对照组,且VCI组二者表达水平均高于非VCI组(P<0.05);脑梗死患者血清CXCL12和CXCR7表达水平均与MoCA评分呈负相关(r=-0.857、-0.873,均P<0.05);VCI组和非VCI组年龄、临床类型比较,差异有统计学意义(P<0.05);年龄、临床类型、CXCL12、CXCR7为脑梗死患者发生VCI...     

加味四君子汤对脾气虚肺癌转移小鼠Fas和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:探讨脾气虚对肺癌转移的影响机制以及加味四君子汤的作用机制。方法:采用苦寒泻下、劳倦、饮食节制复合因素法建立脾气虚小鼠模型,连续16 d。造模第17天眼球取血测血清胃泌素浓度,综合验证脾气虚模型。脾气虚模型成功后C57小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞,制备肺癌小鼠模型。小鼠随机分为正常组、脾气虚模型组、肺癌组、脾气虚肺癌组、脾气虚肺癌健脾组,肺癌组及脾气虚肺癌组生理盐水灌胃,脾气虚肺癌健脾组加味四君子汤灌胃。14 d后观测肺转移结节数,采用Real-time PCR方法检测Fas、Bcl-2基因的mRNA表达。结果:与脾气虚肺癌组比较,肺癌组、脾气虚肺癌健脾组肺转移结节均较少;与肺癌组比较,脾气虚肺癌组Fas mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA表达上调;与脾气虚肺癌组比较,脾气虚肺癌健脾组Fas mRNA表达上调,Bcl-2 mRNA表达下调。结论:脾气虚可通过抑制Fas mRNA表达及促进Bcl-2 mRNA表达,促进肺癌转移;加味四君子汤可通过促进Fas mRNA表达及抑制Bcl-2 mRNA表达,抑制肺癌转移。