柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

青蒿琥酯通过PI3K/GSK-3β通路对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的改善作用研究

[目的] 观察青蒿琥酯对1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响,以及探究其作用机制。[方法] 取Balb/c小鼠腹腔注射200 mg/kg STZ建立1型糖尿病小鼠模型,随机分为模型组、青蒿琥酯组和胰岛素组。另随机选10只Balb/c小鼠为健康对照组,腹腔注射等量的生理盐水。建模成功后,青蒿琥酯组灌胃100 mg/kg青蒿琥酯,健康对照组和模型组灌胃等量的生理盐水,每日1次,共4周,胰岛素组皮下注射4 U/kg甘精胰岛素注射液,每日1次,连续5 d。检测各组小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、肝脏三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、血清游离脂肪酸（FFA）;苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠胰岛病理学;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组兔抗鼠磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、糖原合成酶激酶-3（GSK3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK3β）和谷氨酰胺合成酶（GS）蛋白表达水平。[结果] 与健康对照组比较,模型组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著增加（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著降低（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著增加（P＜0.05）。与模型组比较,青蒿琥酯组、胰岛素组的FBG、FINS、HOMA-IR、TG、MDA和FFA含量显著降低（P＜0.05）,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的蛋白比值以及GS蛋白表达量显著增加（P＜0.05）,p-GSK3β/GSK3β蛋白表达量比值显著降低（P＜0.05）。[结论] 青蒿琥酯可显著降低1型糖尿病小鼠胰岛素抵抗,降低葡萄糖含量,其作用机制可能抑制PI3K/GSK3β信号通路传导有关。     

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路研究心宝丸对慢性心力衰竭大鼠心肌肥厚的影响

目的探讨心宝丸是否能够通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路抑制慢性心力衰竭（CHF）大鼠模型心肌肥厚。方法将60只雄性SD大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组。除假手术组外所有大鼠采用腹主动脉缩窄法复制CHF模型，假手术组只分离腹主动脉，不结扎，术后4周心宝丸药物干预组［40、80、120 mg/（kg·d）］和贝那普利组［1.05 mg/（kg·d））］开始灌胃给药8周，假手术组和模型组用等体积生理盐水灌胃8周。术后12周用超声心动图检测大鼠心脏功能，全部大鼠禁食24 h后处死， HE染色法观察心肌组织形态，小麦胚凝集素染色（WGA）观察心肌细胞大小， ELISA法检测血清NT-proBNP值， Real-time PCR法检测肥厚相关基因ANP、Myh7 mRNA表达水平，Western Blot法检测心肌组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、GSK3β、p-GSK3β蛋白表达水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠术后第12周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）降低（P<0.01），左心室收缩末期内径（LVIDs）升高（P<0.05），心肌细胞横截面积（CSA）增大（P<0.01），血清NT-proBNP水平升高（P<0.01），ANP、Myh7 mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β蛋白表达水平上调（P<0.01，P<0.05），GSK3β表达水平下调（P<0.01）；与模型组比较，心宝丸低、中、高剂量组和贝那普利组LVEF升高（P<0.05，P<0.01），心肌细胞大小减小（P<0.01），Myh7 mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01），血清中NT-proBNP水平降低（P<0.01），p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平下调（P<0.01），GSK3β表达水平上调（P<0.01），心宝丸中、高剂量组FS升高（P<0.05），心宝丸中、高剂量组和贝那普利组LVIDs减小（P<0.05），心宝丸高剂量组和贝那普利组ANPmRNA表达水平降低（P<0.01）；HE染色结果显示：心宝丸可以改善心肌肥厚，心肌细胞排列紊乱，间隙增宽的病理变化。结论心宝丸可以抗心肌肥厚，提升心脏功能，其机制可能与抑制PI3K/Akt信号的磷酸化激活，抑制GSK3β的磷酸化有关。     

麝香通心滴丸通过p-Akt/p-GSK3β/GSK3β通路对心肌梗死小鼠的心肌保护作用研究

目的:研究麝香通心滴丸对于心肌梗死小鼠的心肌保护作用及其与p-Akt/p-GSK3β/GSK3β(磷酸化蛋白激酶B/磷酸化糖原合酶激酶3/糖原合酶激酶)通路的相关性。方法:将70只C57小鼠随机分为5组,分别为正常组(Control),心肌梗死组(Myocardial,MI),麝香通心滴丸小剂量组(MSM1),麝香通心滴丸中剂量组(MSM2),麝香通心滴丸高剂量组(MSM3),MI组与MSM各组制备心肌梗死模型,MSM各组在复制心梗模型前4周每日灌胃不同剂量的麝香通心滴丸,心脏彩超测定比较各组小鼠心功能,HE染色观察各组小鼠心肌组织病理变化,蛋白免疫印迹法测定各组小鼠心梗区心肌组织p-Akt,p-GSK3β蛋白的表达。结果:心脏彩超结果显示,MSM各组相较于MI组,LVEDd、LVESd、ExLVDd、FS 4项心功能指标均出现提升(均P0.05),此外,MSM2组相较于MSM1组及MSM3组相较于MSM2组,心功能指标LVEDd、LVESd、ExLVDd、PWs、FS出现渐进性改善(均P0.05);HE染色显示,相较于MI组,MSM各组随着麝香通心滴丸剂量增高,镜下可见的坏死损害心肌细胞逐渐减少;Western blot分析显示,MSM各组相较于MI组,p-Akt、p-GSK3β的表达量明显增加(均P0.05),随着麝香通心滴丸剂量增加,p-Akt、p-GSK3β的表达量均出现渐进性增加(均P0.05)。结论:麝香通心滴丸可有效发挥小鼠心梗后的心肌保护作用,其机制可能与激活p-Akt/p-GSK3β/GSK3β通路表达相关。     

电针对类风湿性关节炎大鼠足趾滑膜组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 观察电针对类风湿性关节炎(RA)大鼠足趾滑膜组织中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)的影响，探索电针治疗RA的作用机制。方法 将45只SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、甲氨蝶呤组、PI3K抑制剂组，每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。电针组予电针“足三里”“关元”,留针20 min,每日1次；甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤灌胃(0.35 mg/㎏),每周2次；PI3K抑制剂组予BEZ-235灌胃(45mg/kg),每日1次；空白组、模型组大鼠给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑操作。各组均干预3周。足趾容积测量仪检测各组大鼠左后肢足趾容积，Elisa法检测血清中IL-2的含量，Western blot法检测大鼠足趾滑膜组织PI3K、Akt、mTOR、p-mTOR、Beclin1蛋白表达水平，RT-PCR法检测滑膜组织ULK1mRNA、Atg13mRNA的表达。结果 与空白组比较，模型组足趾容积增大(P<0.01),IL-2含量显著性升高(P<0.001),PI3K、AKt、p-mTOR蛋白表达量显著性升高(P&...     

薯蓣皂苷通过GSK3β/Nrf2/HO-1通路改善尿酸诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的作用及机制研究

目的 探讨薯蓣皂苷（dioscin）对尿酸（uric acid,UA）诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）氧化应激损伤的影响及分子机制。方法 将HK-2细胞分为正常组、模型组（尿酸刺激造模）、条件对照组（尿酸+DMSO）和薯蓣皂苷组（尿酸+薯蓣皂苷）。通过尿酸诱导HK-2细胞氧化应激损伤模型;采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞活性氧（ROS）水平,Real-time PCR法检测糖原合成激酶3(GSK3β)、核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)在mRNA水平的表达,Western Blot法检测GSK3β、磷酸化糖原合成激酶3(p-GSK3β)、Nrf2及HO-1在蛋白水平的表达。结果 经尿酸刺激后,HK-2细胞的活力明显下降,ROS水平明显升高（均P<0.001）。经薯蓣皂苷治疗后,HK-2细胞的活力增加,ROS水平明显降低（均P<0.001）。在蛋白及mRNA水平上,尿酸刺激后Nrf2和HO-1的表达均下降,薯蓣皂苷干预后Nrf2和HO-1表达均明显增加（均P<0.001）。在蛋白水平上,模型组细胞p-GSK3β/GSK...     

六味地黄汤通过调节AMPK/Akt/GSK3β/Nrf2通路减轻糖尿病抑郁大鼠vHIP髓鞘损伤及抑郁样行为

目的:观察六味地黄汤对糖尿病抑郁(DD)大鼠抑郁样行为的影响,并探讨其作用机制。方法:50只SPF级雄性SD大鼠采用高脂饮食喂养加尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法制备糖尿病模型,随后糖尿病大鼠予28 d慢性不可预测的轻度应激(CUMS)的方法建立DD模型。随机分为5组,模型组,氟西汀组(10 mg·kg^-1·d^-1),六味地黄汤低、中、高剂量组(3.375,6.75,13.5 g·kg^-1·d^-1),每组10只。另取正常组10只,生理盐水灌胃。连续灌胃4周后,悬尾实验和旷场实验用于评估大鼠的抑郁表型,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测腹侧海马(vHIP)中丙二醛(MDA),活性氧(ROS),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH);采用免疫荧光检测vHIP区域髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,蛋白免疫印迹法检测MBP,髓鞘脂蛋白(PLP),髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)表达水平及通路蛋白磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶/腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK/AMPK),磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B(p-Akt/Akt),磷酸化糖原合成酶激酶3β/糖原合成酶激酶3β(p-GSK3β/GSK3β),核因子E2相关因子2(Nrf2)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠在悬尾实验中不动时间增加(P<0.01),在旷场实验中,模型组大鼠中心区时间下降(P<0.01)。与模型组比较,中、高剂量六味地黄汤干预后,大鼠的不动时间均有不同程度的下降(P<0.01),大鼠中心区时间明显增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠vHIP中髓鞘相关蛋白MBP,PLP,MOG蛋白表达降低(P<0.01),与模型组比较,低剂量组MBP表达量增加(P<0.05),MOG,PLP表达差异无统计学意义,氟西汀组、六味地黄汤中、高剂量组MBP,PLP,MOG蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组vHIP区域MBP荧光强度显著减少(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤中、高剂量组及氟西汀组MBP荧光表达强度增加(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组SOD,GSH下降(P<0.01),MDA,ROS,8-OHdG表达水平均有所增加(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤中、高剂量组及氟西汀组MDA,ROS,8-OHdG表达水平均下调(P<0.05,P<0.01),SOD,GSH表达水平上调(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠p-AMPK,p-Akt,Nrf2表达下调,p-GSK3β表达增加(P<0.01);与模型组比较,低剂量组p-AMPK蛋白表达明显增加(P<0.05),p-Akt,Nrf2蛋白表达明显增加,但差异无统计学意义,中、高剂量组及氟西汀组p-AMPK,p-Akt,Nrf2蛋白表达上调,p-GSK3β蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论:六味地黄汤改善DD大鼠抑郁样行为,其机制可能是通过激活AMPK/Akt/GSK3β/Nrf2通路,影响vHIP的氧化应激状态,促进髓鞘修复。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠GSK3β信号通路相关蛋白的影响＊

目的 观察电针“百会”“肾俞”穴对阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力及海马CA1区GSK3β信号通路相关蛋白的影响及机制研究。方法 30只SPF级SD雄性大鼠随机分成假手术组、模型组和电针组，每组10只。除假手术组外，其余各组大鼠双侧海马区各注射5 μL β淀粉蛋白25-35（Aβ_25-35）制备AD模型，假手术组给予同等剂量生理盐水注射。假手术组、模型组正常喂养，不做干预处理，电针组选取百会及肾俞穴（两侧肾俞穴交替选择）进行电针治疗，频率2 Hz，电流1 mA，每日1次。每个疗程6天，共2个疗程，两个疗程间隔1天。治疗结束后第2天上午8点开始Morris水迷宫（Morris water maze，MWM）检测大鼠学习记忆能力，行为学实验结束后第2天取材。苏木精-伊红染色（Hematoxylin eosin staining，HE）观察海马CA1区病理形态改变。免疫组化法（Immunohistochemical method，IHC）检测大鼠海马区Tau蛋白磷酸化的表达，及糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase3β，GSK3β）信号通路相关蛋白表达。免疫印迹法（Western blot，WB）检测磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B，AKT）、GSK3β相关蛋白的表达。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测AKT、GSK3β mRNA的表达。结果 与假手术组相比：模型组大鼠逃避潜伏期明显延长（P < 0.01），穿越平台次数明显减少（P < 0.01），目标象限停留时间明显缩短（P < 0.01）；模型组海马区Tau蛋白磷酸化水平明显提高（P < 0.01），GSK3β蛋白表达水平明显提高（P < 0.01）；模型组PI3K（P85）、AKT（Ser473）、GSK3β（Ser9）蛋白相对表达量降低（P < 0.05）；模型组AKT mRNA表达水平明显降低（P < 0.01），GSK3β mRNA表达水平明显提高（P < 0.01）。与模型组相比：电针组大鼠逃避潜伏期明显缩短（P < 0.01），穿越平台次数明显增加（P < 0.01），目标象限停留时间明显延长（P < 0.01）；电针组海马区Tau蛋白磷酸化水平明显降低（P < 0.01），GSK3β蛋白表达水平明显降低（P < 0.01）；电针组PI3K（P85）、AKT（Ser473）、GSK3β（Ser9）蛋白相对表达量增加（P < 0.05）；电针组AKT mRNA表达水平明显提高（P < 0.01），GSK3β mRNA表达水平明显降低（P < 0.01）。结论 电针治疗能够有效改善AD大鼠学习记忆能力，其机制可能与影响GSK3β信号通路相关蛋白表达从而抑制Tau蛋白磷酸化有关。     

温胆汤对精神分裂症模型大鼠海马组织PI3K，Akt和GSK3β的影响

目的:研究温胆汤对精神分裂症模型鼠海马组织磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为6组,分别为正常组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组和模型组灌胃生理盐水,氯氮平组灌胃氯氮平原药20 mg·kg~(-1);温胆汤高、中、低剂量组分别灌胃温胆汤生药40,20,10 g·kg~(-1); 1次/d,共21 d。在最后1次给药2 h后,除正常组外,其余各组采用一次性左侧腹腔注射MK8010. 6 mg·kg~(-1),以诱发精神分裂症。观察并记录大鼠的刻板行为,3 d后,处死并取其海马组织待测。依照Sams Dodd和Hoffman标准对大鼠的刻板行为评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定海马组织PI3K,Akt和GSK3β蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠刻板行为评分显著升高(P 0. 01),海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 01)。与模型组比较,温胆汤给药组能明显降低大鼠刻板行为评分(P 0. 05),升高海马组织PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:温胆汤通过改善精神分裂症模型鼠刻板行为、升高其海马组织PI3K,Akt,GSK3β的表达,调控PI3K/Akt/GSK3信号通路,从而达到治疗精神分裂症的目的。     

电针对糖尿病肥胖大鼠肝脏Akt/FoxO1信号通路的影响

目的：观察电针对Zucker糖尿病肥胖（ZDF）大鼠肝脏蛋白激酶B(Akt)/叉头框转录因子1(FoxO1信号通路的影响，探讨电针改善2型糖尿病肝脏胰岛素抵抗的可能机制。方法：12只雄性2月龄ZDF大鼠以高脂饲料喂养4周制备糖尿病模型，成模后随机分为模型组与电针组，每组6只；6只雄性Zucker瘦型（ZL）大鼠作为空白组。电针组大鼠予电针双侧“足三里”“三阴交”“胃脘下俞”“脾俞”干预，同侧“足三里”“胃脘下俞”连接电针，连续波，频率15 Hz，每次20 min，每日1次，每周6次，共干预4周。比较各组大鼠造模前及干预前后空腹血糖（FBG）水平；采用放射免疫法检测各组大鼠血清胰岛素（INS）、C肽含量，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;HE染色法观察各组大鼠肝脏组织形态；Western blot法检测各组大鼠肝脏Akt、FoxO1、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）蛋白表达。结果：干预前，与空白组比较，模型组、电针组大鼠FBG升高（P<0.01）；干预后，与模型组比较，电针组大鼠FBG降低（P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠血清INS和C肽含量、HOMA-IR...     

温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞凋亡及PI3K，Akt，GSK3β表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对谷氨酸环境下星型胶质细胞的保护作用及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组,其中正常组20只,氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,每组10只。正常组给予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予氯氮平原药20 mg·kg-1灌胃,温胆汤组分别给予剂量为40,20,10 g·kg-1的温胆汤灌胃,1次/d,8 d后处死大鼠,取血,离心取血清,灭活,过滤除菌,离心管分装备用。将星型胶质细胞分为空白组、模型组、氯氮平组、温胆汤高、中、低剂量组,其中空白组、模型组给予空白血清培养,其余各组给予相应含药血清培养;除空白组外,其余各组用10 mmol·L-1谷氨酸处理24 h后予流式细胞仪检测星形胶质细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测星型胶质细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白和mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞凋亡率则显著下降(P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3β蛋白、磷酸化蛋白表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。与空白组比较,模型组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA的表达显著降低(P0. 01);与模型组比较,温胆汤各剂量组细胞PI3K,Akt,GSK3βmRNA表达明显升高(P0. 05,P0. 01)。结论:温胆汤含药血清可有效升高PI3K,Akt,GSK3β表达,从而调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路,保护神经细胞。     

电针内关预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌PI3K/Akt通路的影响

目的:观察电针内关穴预处理对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型大鼠心肌组织自噬相关通路磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的影响，探讨电针对MIRI的治疗作用机制。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组，每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎法建立MIRI模型。针刺组电针双侧“内关”穴，30 min/次，1次/d,连续干预7 d。记录不同组大鼠在造模前、结扎后40 min、松解后1 min、再灌注60 min的心电图并分析其ST段电位变化。HE染色观察心肌明显损伤部位病理变化；免疫组化法观察大鼠心肌组织PI3K、Akt表达。Western blotting法检测心肌组织PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)表达水平，并计算各组p-Akt/Akt比值。结果:模型组和针刺组结扎后40 min与松解后1 min的ST段电位均较假手术组升高，差异有统计学意义(均P<0.05)。模型组和针刺组松解后1 min、再灌注60 min时心电图ST段电位均较结扎后40 min降低，差异有统计学意义(均P<0.05)。针刺组再灌注60 min的心电图...     

千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨的保护作用及相关机制

【目的】 观察千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨蛋白激酶B（Akt）/ 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路表达的影响,探讨千草方熏洗对膝骨关节炎大鼠软骨的保护作用及相关机制。【方法】 将32只SD大鼠随机分成4组,即正常组、模型组、千草方组和透明质酸组,每组8只。除正常组,其他3组大鼠采用改良Hulth法构建膝骨关节炎模型。制模后,千草方组大鼠给予千草方熏洗,透明质酸组大鼠给予关节腔内注射透明质酸,模型组不给予任何治疗。治疗30 d。给药结束后,采用苏木素-伊红（HE）染色法和Masson染色法观察大鼠膝关节软骨组织,行Mankin’s评分,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测血清白细胞介素（IL）-6、IL-10和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量,免疫组织化学法检测软骨组织Ki67的表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测软骨组织Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、mTOR、磷酸化mTOR（p-mTOR）、糖原合成酶激酶3β（GS3Kβ）、磷酸化GS3Kβ（p-GS3Kβ）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达。【结果】 与正常组比较,模型组大鼠膝关节软骨细胞排列紊乱,结构不清晰,Mankin’s评分升高（P < 0.05）,血清IL-10含量下降,IL-6和TNF-α含量升高（P < 0.05）,软骨组织Ki67表达量,p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-GSK3β/GSK3β和CyclinD1的相对表达量均显著减少（P < 0.05）。与模型组比较,千草方组大鼠膝关节软骨表面更加光滑,结构较清晰,软骨基质着色较均匀,Mankin’s评分降低（P < 0.05）,血清IL-10含量升高,IL-6和TNF-α含量降低（P < 0.05）,软骨组织p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-GSK3β/GSK3β和CyclinD1的相对表达量显著增加（P < 0.05）。【结论】 千草方熏洗能够通过促进Akt/mTOR信号通路活化及软骨细胞增殖来缓解膝骨关节炎。     

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。     

基于突触可塑性理论研究电针对抑郁模型大鼠行为学及海马突触相关蛋白mTOR、GSK-3β的影响

目的：通过观察电针“印堂”和“百会”对抑郁模型大鼠大的行为学及海马突触相关蛋白mTOR、GSK-3β(糖原合成酶激酶-3β)的影响，探讨针刺治疗抑郁症的作用机制。方法：正常组15只Wistar大鼠，45只WKY(Wistar-Kyoto)大鼠随机分为电针组、假针组、模型组，治疗前后对所有大鼠进行糖水偏好试验(Sugar Preference Test, SPT)、旷场试验(Open Field Test, OFT)和体重测量。电针组取大鼠“百会穴”“印堂穴”电针治疗，假针组进行假针刺干预，模型组和正常组不进行任何干预。电针组、假针组每天干预1次，干预21天。治疗结束后，用Western Blot法检测大鼠海马mTOR、GSK-3β的表达。结果：和Wistar大鼠相比，干预前WKY大鼠的体重、OFT和SPT评分明显降低(P<0.01)。干预21次后，与模型组及假针组相比，电针组大鼠的体重、OFT和SPT评分明显升高(P<0.01);电针组海马mTOR的表达量要比模型组和假针组更高(P<0.05),且正常组的明显高于模型组(P<0.01);电针组海马GSK-3β的表...     

甘草主要成分改善L6大鼠成肌细胞胰岛素抵抗的机制

目的:确定甘草主要化学成分是否通过调节L6大鼠成肌细胞内糖原合成、糖酵解途径和脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。方法:利用0.05 mmol·L^-1棕榈酸(PA)孵育9 h诱导L6大鼠成肌细胞建立胰岛素抵抗(IR)细胞模型;实验设正常组,模型组,甘草酸(GA,25μmol·L^-1)组,18β-甘草次酸(18β-GA,25μmol·L^-1)组,异甘草素(ILG,25μmol·L^-1)组和异甘草苷(ILQ,25μmol·L^-1)组;葡萄糖试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖含量;糖原检测试剂盒测定肌糖原含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测糖酵解关键酶的mRNA水平。结果:与正常组比较,模型组IR-L6大鼠成肌细胞中葡萄糖消耗率显著下调(P<0.01),细胞中的糖原含量减少(P<0.05),SREBP-1c和FAS蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),磷酸果糖激酶1(PFK1),丙酮酸激酶(PK)和己糖激酶(HK)mRNA水平下调(P<0.05),GSK3β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组GA,18β-GA和ILG可以明显增加IR-L6大鼠成肌细胞中糖原含量(P<0.05,P<0.01),GA,18β-GA和ILQ则明显增加SREBP-1c蛋白表达(P<0.05,P<0.01),而GA,18β-GA,ILG和ILQ可明显增加FAS的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)以及PFK1,PK和HK mRNA表达(P<0.05,P<0.01),但下调GSK3β蛋白表达(P<0.05)。结论:甘草主要成分通过促进糖酵解和糖原合成发挥降糖作用,并且可通过调节脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。     

七芪地黄丸对糖尿病肾病大鼠的保护作用及机制研究

目的:研究七芪地黄丸对糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)大鼠的保护作用及可能的作用机制。方法:DN大鼠模型制作成功后,随机分为正常组、模型组、七芪地黄丸(4.68和9.36 g生药/kg)组和厄贝沙坦0.039 g/kg组;治疗组各组大鼠分别给予相应的药物。给药8周后,进行体重、进食量、饮水量、24h尿量、尿蛋白和尿糖检测,取血进行Glu、TC、TG、LDL、HDL、BUN、Scr、ROS、T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β1和IL-4、IL-10含量分析,取肾脏进行肾脏组织形态学分析,Western blot法检测肾脏组织中PI3K/Akt/GSK3β和线粒体凋亡通路相关蛋白表达。结果:七芪地黄丸(4.68和9.36 g生药/kg)对DN大鼠肾功能具有显著的改善作用,可明显改善DN大鼠一般症状,显著降低尿糖、尿蛋白水平和肾脏质量指数;明显降低血清中Glu、TC、TG、LDL、BUN、Scr、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1含量,升高HDL、IL-4、IL-10含量和T-AOC、SOD、CAT、GSH-Px活性;上调肾脏组织中p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β和Bcl-2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-GSK3β/GSK3β和Bcl-2/Bax比值,下调Bax、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3蛋白表达,抑制肾小管上皮细胞空泡样病变、间质纤维化和炎性浸润。结论:七芪地黄丸对DN具有显著保护作用,其作用机制可能与激活PI3K/Akt/GSK3β信号通路来减轻肾脏的炎症和氧化应激损伤、抑制肾小管上皮细胞凋亡有关。     

养阴通络方对脑缺血大鼠海马p-Akt、Akt及PI3K蛋白表达的影响

目的:观察养阴通络方对脑缺血损伤大鼠磷酸化Akt(P-Akt)、蛋白激酶B(Akt)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白表达作用,对其神经保护作用机制进行探讨。方法:在长期激怒法致肝肾阴虚证动物模型基础上,采用大鼠线栓法复制局灶性脑缺血再灌注模型,免疫印迹法检测海马p-Akt(Ser473)、Akt、PI3K蛋白的表达。结果:与模型组比较,养阴通络方16g/kg组大鼠海马Akt蛋白表达增加(P<0.01),p-Akt(Ser473)、PI3K蛋白表达水平有升高趋势。结论:养阴通络方对脑缺血损伤保护作用的机制,可能是通过上调PI3K、Akt的表达,促进Akt的磷酸化。     

电针调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路对急性结肠炎症大鼠的腧穴特异性研究

目的 探究电针不同腧穴对急性结肠炎症模型大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响及不同腧穴对急性结肠炎症是否具有特异性。方法 将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、各电针干预组（分别为天枢组、上巨虚组、足三里组、大肠俞组），每组6只。除空白组外，其余各组均采用冰乙酸灌肠法造模。给予各电针干预组电针治疗3 d，每天1次，留针20 min。苏木精-伊红（HE）染色法观察各组大鼠结肠组织病理改变；免疫组织化学（IHC）法检测NLRP3在各组大鼠结肠组织的阳性表达；ELISA测定大鼠血清中IL-1β的含量；Wsetern blotting测定大鼠结肠中NLRP3、Caspase-1的蛋白表达。结果 与空白组相比，模型组大鼠血清中IL-1β含量显著升高（P <0.05）；与模型组相比，各电针干预组大鼠血清中IL-1β含量均下降（P <0.05）；足三里组与天枢组、大肠俞组、上巨虚组相比，IL-1β明显降低（P <0.05）。与空白组相比，模型组大鼠结肠组织中NLRP3蛋白表达显...