六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响

目的:探讨传统中成药六神丸及其成分蟾酥对K562/DOX细胞的增殖和MDR1基因表达的影响。方法:采用中药血清药理学方法制备六神丸和蟾酥的含药血清,以MTT法检测六神丸以及蟾酥含药血清、阿霉素处理后K562/DOX细胞的抑制率;RT-PCR检测MDR1 mRNA表达;Western blot检测MDR1蛋白的表达。结果:与对照组相比,蟾酥和六神丸对K562/DOX细胞均有抑制作用;六神丸组MDR1 mRNA表达降低,MDR1蛋白表达下降;而蟾酥组、阿霉素组未有明显变化。结论:六神丸可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性,而其成分蟾酥作用不明显。     

蟾酥逆转人白血病K562/DOX细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨传统中药蟾酥逆转人白血病K562/DOX细胞多药耐药性（MDR）的作用。方法 采用中药血清药理学方法制备蟾酥含药血清,以MTT法分别检测蟾酥含药血清联合柔红霉素,或单用蟾酥含药血清处理后,不同时段作用于K562/DOX细胞的抑制率;实时荧光定量PCR法检测蟾酥含药血清对K562/DOX细胞的Bcl-2 mRNA表达。结果 与空白对照组比较,蟾酥对K562/DOX细胞均有抑制作用;蟾酥组Bcl-2 mRNA表达降低。结论 蟾酥可能通过下调MDR1表达水平进而逆转K562/DOX细胞的耐药性。     

Cariporide降低K562/DOX细胞株表达P-糖蛋白而逆转耐药的影响

 目的 探讨cariporide对耐药细胞株K562/DOX中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的影响,为抗白血病多药耐药（multidrug resistance, MDR）提供新方法。方法 应用cariporide对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定野生型细胞系K562及耐药细胞株K562/DOX细胞内pH值及细胞酸化对K562和K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响。采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/DOX细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果 Cariporide处理3 h对K562及K562/DOX细胞的活力影响较小。在K562/DOX细胞中,P-gp的外排药物能力随细胞内pH值的降低而减弱,cariporide明显增加了细胞对罗丹明123（rhodaminel 123,Rh123）和阿霉素的累积。细胞酸化还在mRNA水平抑制了K562/DOX细胞中P-gp的表达。结论 Cariporide能够抑制K562/DOX耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。     

欧白芷素对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用(英文)

目的:探讨欧白芷素对耐药细胞株K562/A02中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drug resistance,MDR)提供新方法。方法:采用MTT法观察阿霉素对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测欧白芷素对K562和K562/A02细胞内阿霉素累积和细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果:欧白芷素对耐药细胞株K562/A02有显著的逆转耐药活性,最大逆转倍数为7.36。在K562/A02细胞中,欧白芷素明显增加阿霉素的累积,增加了罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)蓄积,抑制了Rh123的外排,同时欧白芷素还在mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达。结论:欧白芷素能够抑制K562/A02耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。     

吴茱萸碱逆转K562/Adr细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对白血病K562细胞及其耐药株K562/Adr的增殖、细胞周期及多药耐药性(MDR)的影响。方法用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测EVO和/或柔红霉素(DNR)对细胞增殖的影响,并计算耐药指数(RI)和逆转倍数(RF);流式细胞仪检测EVO和/或DNR对K562及K562/Adr细胞周期的影响;流式细胞仪检测K562及K562/Adr细胞内DNR的荧光强度;定量PCR检测K562及K562/Adr细胞中MDR1基因的表达;Western blotting检测K562及K562/Adr细胞中MDR1、BCRP蛋白的表达。结果EVO、DNR作用于K562和K562/Adr细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性;与K562细胞相比,K562/Adr细胞对DNR的RI为30.54,K562/Adr细胞对EVO的RI为19.09。当EVO(0.125 gmol/L)与不同浓度DNR联合作用后,能使DNR对K562/Adr细胞的IC_(50)明显下降,DNR+EVO对K562/Adr细胞的RF为12.07;EVO、DNR单独或联合作用于K562及K562/Adr细胞后,能够使K562/Adr细胞BCRP、MDR1蛋白及mRNA表达水平均明显下降。结论EVO能有效逆转白血病K562/Adr细胞对DNR的耐药现象,而这种作用可能与EVO通过减少细胞膜上多药耐药蛋白MDR1的表达有关。     

三七总皂甙体外逆转K562/VCR细胞多药耐药的实验研究

目的:从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂,并初步研究三七总皂甙(PNS)对人白血病细胞K562(敏感细胞)及K562/VCR(耐药细胞)的影响.方法:以MTT法测定三七总皂甙注射液对K562及K562/VCR的直接细胞毒作用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;用流式细胞仪测定PNS作用后敏感细胞和耐药细胞内阿霉素的浓度;以流式细胞仪测定敏感细胞和三七总皂甙作用的耐药细胞表达多药耐药糖蛋白P-gp(P-170)的阳性率.以上实验均用维拉帕米作为阳性对照.结果:①三七总皂甙在300μg/ml浓度以下时对两细胞基本无毒性,为安全有效的逆转剂量.②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为28.7ng/ml和1141.8ng/ml,耐药倍数为39.7倍.③三七总皂甙能够增强阿霉素(DOX)对K562/VCR的细胞毒作用.④三七总皂甙能够增加耐药细胞K562/VCR细胞内的阿霉素的蓄积浓度.⑤三七总皂甙(200μg/ml)可下调多药耐药基因mdr-1表达的P-gp糖蛋白的量,而未发现维拉帕米的类似作用.结论:三七总皂甙能够部分逆转耐药细胞K562/VCR的多药耐药性.     

六神丸对K562/ADM细胞增殖的抑制作用及其机制研究

目的:研究六神丸对人类红白血病耐药细胞(K562/ADM细胞)的增殖抑制作用,并对其作用机制进行初步的探讨。方法:采用血清药理学方法,把六神丸含药血清加入K562/ADM细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,QPCR法检测Bcl-2 mRNA的表达,Western blot方法检测Bcl-2蛋白的表达。结果:六神丸对K562/ADM细胞有较明显的增殖抑制作用,QPCR结果显示六神丸能下调K562/ADM细胞Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结论:六神丸可能通过诱导K562/ADM细胞凋亡而抑制细胞增殖,其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制Bcl-2表达有关。     

解毒化瘀药逆转白血病K562/A02细胞多药耐药作用的研究

目的:探讨解毒化瘀中药复方含药血清对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用。方法:应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀药的兔血清,以MTT法检测经含药血清、干扰素、川芎嗪处理后K562/A02细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测K562/A02耐药细胞内柔红霉素(DNR)的潴留情况。结果:MTT结果显示,3组药物对K562/A02细胞的耐药逆转倍数分别为9.30倍、5.27倍和3.36倍,其耐药逆转率均在70%以上;流式细胞仪检测结果显示3种药物均可明显增加K562/A02细胞内DNR的浓度,解毒化瘀药含药血清作用最强,与川芎嗪组相比具有显著差异(P<0.01),但与干扰素组相比无明显差异(P>0.05)。结论:3种药物均对K562/A02细胞的耐药具有逆转作用,逆转强度依次为解毒化瘀药含药血清、干扰素、川芎嗪。     

白血病K562/A02细胞Mdr1基因的表达及解毒化淤药干预作用研究

目的探讨解毒化淤药含药血清对白血病K562/A02细胞Mdr1耐药基因表达的影响。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测解毒化淤药含药血清处理后K562/A02细胞Mdr1基因的表达,并与干扰素作对照。结果解毒化淤药含药血清能够降低K562/A02细胞Mdr1基因的表达。结论解毒化淤药含药血清通过降低K562/A02细胞Mdr1耐药基因的表达,逆转白血病细胞耐药。     

龙胆泻肝丸对胆汁淤积大鼠肝脏多药耐药蛋白及中性粒细胞CD18表达影响的研究

目的:从与胆汁分泌有关的转运蛋白及中性粒细胞CD18分子的角度探讨龙胆泻肝丸(LD)清肝胆,利湿热的可能作用机制。方法:将20只大鼠分为4组:对照组,模型组,LD 5.0,2.5 g.kg-1(按生药计算)组。给药组每日ig给药1次,连续8 d,对照组和模型组ig等体积的蒸馏水。其中第5天给药1 h后,除对照组ig花生油外,其他各组大鼠按100 mg.kg-1 1次性igα-萘异硫氰酸酯(ANIT)花生油。第8天摘取大鼠肝脏,提取肝脏总RNA,RT-PCR检测多药耐药蛋白MDR1a,MDR1b,MDR2和多药耐药相关蛋白MRP1 mRNA,MRP2 mRNA的表达;眼眶静脉取抗凝血,流式细胞仪测定中性粒细胞CD18表达,血细胞计数仪测定白细胞及粒细胞总数。结果:模型组大鼠肝组织MDR1a,MDR1b mRNA表达显著增加(P<0.05,P<0.01),MDR2 mRNA,MRP2 mRNA分别有表达增加或降低的趋势,MRP1 mRNA的表达无明显变化。LD 5.0,2.5 g.kg-1对胆汁淤积大鼠的肝组织MDR1a,MDR1b,MDR2,MRP1,MRP2 mRNA表达均无明显影响。LD各给药组白细胞总数以及粒细胞总数有下降趋势,CD18荧光强度明显低于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论:龙胆泻肝丸对ANIT诱导的胆汁淤积(类肝胆湿热证)具有利胆保肝作用,其作用机制主要与其抑制白细胞黏附,降低胆管炎症反应,减轻胆管损伤,从而有利于胆汁排泄有关,而与胆管上皮的转运体蛋白分子MDR,MRP关系可能不大。     

治疗剂量下4种抗结核药物与Caco-2细胞上P-gp相互作用研究

 目的 研究治疗剂量下4种抗结核药物(异烟肼、左氧氟沙星、乙胺丁醇、吡嗪酰胺对Caco-2细胞上P-糖蛋白功能、表达及MDR1 mRNA表达的影响,从而解释联合抗痨治疗中不同组合的合理性。方法 采用流式细胞仪测定细胞内罗丹明-123的浓度,考察药物对P-糖蛋白功能的影响,流式细胞术分析药物对Caco-2细胞上P-糖蛋白表达的影响,实时荧光定量PCR技术分析药物对Caco-2细胞MDR1基因mRNA水平表达的影响。结果 含药培养20 d后,异烟肼和乙胺丁醇减少了罗丹明-123在Caco-2细胞内的蓄积(P＜0.05,为诱导作用;异烟肼、乙胺丁醇均上调了Caco-2细胞上P-糖蛋白的表达(P＜0.05,其P-糖蛋白表达量分别为阴性对照组的3.5和3.8倍;同时上调了Caco-2细胞上MDR1 mRNA的表达(P＜0.05,其MDR1 mRNA的表达量分别为阴性对照组的11.5和11倍。左氧氟沙星增加了罗丹明-123在Caco-2细胞内的蓄积(P＜0.05,为抑制作用;下调了Caco-2细胞上P-糖蛋白和MDR1 mRNA的表达(P＜0.05,其P-糖蛋白和MDR1 mRNA表达量分别为阴性对照组的50%和32%。而吡嗪酰胺与P-糖蛋白无明显相互作用。结论 治疗剂量的异烟肼和乙胺丁醇为P-糖蛋白的诱导剂,左氧氟沙星为P-糖蛋白的抑制剂,而吡嗪酰胺对P-糖蛋白功能和表达无明显影响。     

解毒祛瘀方对乳腺癌细胞MCF-7/ADM的耐药逆转作用

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药逆转的作用及机制。方法:以MCF-7/ADM细胞为研究对象,利用噻唑蓝(MTT)比色法检测解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM生长的影响;应用流式细胞术检测肿瘤细胞内罗丹明123(Rh-123)的含量;分别利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤细胞内多药耐药蛋白1(MDR1),乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)mRNA及蛋白表达变化。结果:与空白组比较,经1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方作用后,阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的逆转倍数(RF)分别提升1.7倍和3.0倍(P0.05);人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中Rh-123含量分别提高了1.8倍和2.5倍(P0.05),MDR1和BCRP蛋白和mRNA表达水平明显下降(P0.05),1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方MDR1 mRNA表达分别降低35.5%和56.0%(P0.05),BCRP mRNA表达分别降低41.6%和49.5%(P0.05)。结论:解毒祛瘀方可提高人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM对阿霉素的敏感性,逆转该细胞对阿霉素的耐药性,其机制可能与降低MDR1和BCRP蛋白和mRNA的表达,抑制细胞药物外排作用相关。     

四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

研究四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。采用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)分析Caco-2细胞上MDR1基因mRNA的表达量;采用流式细胞仪检测经四物汤水煎液处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测四物汤水煎液对Caco-2细胞P-gp蛋白表达量的影响。与空白对照组比较,四物汤水煎液3.3,5.0,10.0 g·L^-1孵育Caco-2细胞24,48,72 h对MDR1基因mRNA的表达量具有上调作用,表明四物汤水煎液对MDR1具有诱导作用;四物汤水煎液作用于Caco-2细胞48 h后,细胞内罗丹明123的摄取量分别减弱了16.6%,22.1%(P<0.05),45.4%(P<0.01),提示长期应用四物汤水煎液,可增强Caco-2细胞P-gp的外排功能;四物汤水煎液孵育Caco-2细胞48 h后,上调了Caco-2细胞膜上P-gp蛋白表达量,表明四物汤水煎液对P-gp的蛋白表达量具有诱导作用。     

18α-甘草酸和18β-甘草酸对Caco-2细胞P-gp功能和表达的影响

目的:研究甘草酸18位差向异构体18α-甘草酸、18β-甘草酸对Caco-2细胞上P-糖蛋白功能和表达的影响。方法:建立Caco-2细胞模型,采用罗丹明-123摄取法评价P-糖蛋白的功能;利用流式细胞术和荧光定量PCR分析Caco-2细胞膜上P-糖蛋白的表达。结果:中、高浓度(10,60μmol.L-1)α-GL使细胞内Rho-123摄取增加,对P-gp表现出抑制作用,但没有呈现出剂量依赖性;β-GL各浓度组使细胞内Rho-123摄取减少,对P-gp表现出诱导作用,但也没有表现出剂量依赖性。二者对Caco-2细胞上P-gp功能的影响呈相反的趋势;Caco-2细胞与药物孵育72 h后,中、高浓度(10,60μmol.L-1)α-GL下调MDR1 mRNA表达,β-GL只在高浓度(60μmol.L-1)上调了MDR1 mRNA表达;高浓度(60μmol.L-1)β-GL在蛋白水平对P-gp有诱导作用,α-GL各浓度没有表现出对P-gp表达的影响。结论:转录水平上α-GL,β-GL对P-gp的影响与α-GL,β-GL对CYP3A的影响呈现一定的同向性,甘草酸18位差向异构体对CYP3A与P-gp的影响有相似的立体选择性,其机制是否与孕烷X受体(PXR)有关,有待进一步研究。     

茵栀黄注射液基于FXR调控MDR3治疗肝内胆汁淤积的作用机制

目的:通过研究茵栀黄注射液(Yinzhihuang injection,YZH)对人正常肝细胞系HL-7702细胞的法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR),多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance associated protein 3,MDR3)基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液调控肝脏胆汁酸代谢的作用靶点及机制,为茵栀黄注射液治疗肝内胆汁淤积的临床应用提供实验依据。方法:不同浓度茵栀黄注射液干预HL-7702,采用细胞活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)探索茵栀黄注射液对HL-7702的活性影响,结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法确定茵栀黄注射液的理想干预浓度和时间;用GW4064(FXR激动剂)促进FXR基因的表达,分为茵栀黄注射液组,GW4064组,GW4064+茵栀黄注射液组,正常组,DMSO组;小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默FXR基因,分为siRNA组,siRNA+茵栀黄注射液组,正常组,阴性组。Real-time PCR法、蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测FXR,MDR3 mRNA及蛋白质的相对表达量,免疫荧光(IF)检测FXR蛋白的表达。结果:研究结果表明茵栀黄注射液对HL-7702的理想干预浓度1.08%,理想干预时间为15.47 h;茵栀黄注射液对HL-7702活性影响呈剂量依赖性;与正常组比较,GW4064组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与正常组比较,siRNA组抑制FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与GW4064组比较,GW4064组+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01);与siRNA组比较,siRNA+茵栀黄注射液组促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达(P0.01)。结论:茵栀黄注射液促进FXR,MDR3 mRNA和蛋白的表达,茵栀黄注射液通过FXR促进MDR3 mRNA和蛋白的表达来调控肝脏胆汁酸的代谢,本实验为其临床应用于治疗肝内胆汁淤积提供实验依据。     

肠胃清对长春新碱诱导的人结肠癌耐药细胞株Y盒结合蛋白核移位及P-糖蛋白表达的影响

目的观察肠胃清对长春新碱诱导的人结肠癌耐药细胞株HCT8/V的Y盒结合蛋白(YB-1)核移位、多药耐药基因MDR1及P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,进一步探讨该方逆转肿瘤多药耐药的分子机制。方法制备大鼠灌胃后的肠胃清药物血清,以Western blot方法检测肠胃清药物血清作用下HCT8/V细胞胞浆、胞核YB-1表达情况,EMSA法分析YB-1与MDR1基因启动子结合活性,RT-PCR检测MDR1、YB-1、多药耐药相关蛋白(MRP)mRNA转录水平,流式细胞仪检测细胞膜表面P-gp表达。结果在1.25%、2.5%、5%药物血清作用下,HCT8/V细胞核内YB-1表达逐渐减弱,细胞质内YB-1表达则逐渐增强;YB-1与MDR1基因启动子结合活性逐渐下降(P0.01);MDR1 mRNA转录水平逐渐降低(P0.05,P0.01),YB-1和MRPmRNA的水平无明显变化(P0.05);细胞膜表面P-gp表达荧光强度值减弱(P0.05,P0.01)。结论肠胃清可通过影响耐药细胞YB-1的核移位、降低MDR1/P-gp的表达,逆转结肠癌细胞的耐药。     

参芪健胃汤对胃癌多药耐药基因及肺耐药蛋白逆转作用的临床观察

目的：观察参芪健胃汤对胃癌患者MDR1-mRNA（多药耐药基因）、LRP（肺耐药蛋白）的逆转作用。方法：（1）建立数学模型分别分析患者MDR1-mRNA、LRP在胃癌组织与外周血中表达水平的相关性；（2）采用PT—PCR法及流式细胞仪定量检测治疗组与对照组治疗前后MDR1-mRNA、LRP在外周血中的表达水平，并分析其在治疗前后变化的差异性；（3）探讨参芪健胃汤对患者胃癌组织多药耐药的逆转作用及其主要靶点；（4）综合评价以参芪健胃汤辅助胃癌化疗患者的血常规、肝功能、免疫功能、肿瘤标志物水平、临床症状及生活质量的改善情况。结果：参芪健胃汤能抑制胃癌MDR1-mRNA基因的表达水平，从而可逆转胃癌患者的多药耐药。结论：参芪健胃汤能改善化疗患者的生活质量、临床症状，减轻化疗药物的血液学毒性及肝功能损害。