拉米夫定治疗慢性乙型肝炎不同病毒基因型患者的疗效

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）基因型与拉米夫定疗效的关系。方法选用200例HBV DNA、HbeAg阳性，血清丙氨酸氨基转氨酶（ALT）异常的慢性乙型病毒性肝炎患者，口服拉米夫定（100mg／d）24个月。采用荧光探针定量PCR（FQ—PCR）检测HBVDNA，分析乙肝病毒野生型YMDD及突变耐药型YIDD／YVDD，HBV基因分型。结果200例慢性乙肝患者C基因型占39％，B基因型占26％，D基因型占22％，B＋C混合基因型占10％，其他占3％，包括1例出现YIDD耐药株。口服拉米夫定12个月后，YMDD变异发生率为6％（12／200）；口服拉米夫定24个月后，YMDD变异发生率为15％（30／200）。结论本研究中乙肝患者HBV基因型以C型为主，其次为B型及D型：服用拉米夫定后大多数患者的DNA水平明显降低，拉米夫定治疗可加速病毒YMDD变异发生，且与服药时间呈正相关；YMDD突变与乙肝病毒的基因型无关。     

拉米夫定耐药HBV毒株伴随变异与YMDD变异的关系

目的研究拉米夫定耐药（LAMr）HBV毒株伴随变异及其与YMDD变异的关系。方法PCR方法扩增LAMr病人血清的HBVRT区基因，直接测序PCR产物。对测序发现含有LAMr变异的105例病人血清检测变异时HBVDNA载量，分为第1组含rtV173L／M或rtV207M／L／I变异、第2组含rtS213T变异、第3组不含此3种变异，共3组进行分析。结果①拉米夫定（LAM）治疗B、C基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染的慢性乙型肝炎（CHB）病人耐药主要变异位点为YMDD变异，可以伴随rtL180M、rtV173L／M、rtV207M／L／I、rtS213T等变异，LAMr变异形式构成与基因型无关（P=0．2620）。②rtM204I、rtM204V、rtM204V／I变异分别有38．8％、89．2％、73.3％伴随其它位点变异（P〈0．0001）。③3组测序发现变异时HBVDNA载量分别为（7．43±0．16）log10拷贝／mL、（5．01±0．90）log10拷贝／mL、（5.75±0．34）log10拷贝／mL（F=4．48，P=0．0240）。结论LAM治疗B、C基因型HBV感染的CHB病人耐药变异形式构成无显著差异，rtM204V变异较rtM204I变异更易伴随其它位点变异，伴随变异rtV173L／M、rtV207M／L／I可以增强YMDD变异HBV毒株的复制能力。     

拉米夫定与HBV-YMDD变异关系的研究

目的探讨惠州地区慢乙肝（CHB）患者拉米夫定治疗与HBV～YMDD变异的发生和发展的关系。方法选取在肝病专科就诊的176例CHB患者，在服用拉米夫定前及服药后每半年进行HBV—DNA定量及YMDD变异检测，并选取35份发生YMDD变异和10份野生型YMDD血清样本进行DNA测序。结果176例CHB患者样本中，拉米夫定治疗前检出YMDD变异7例（其中YM／YVDD型2例、YVDD型3例、YIDD型2例），变异率3．98％；治疗2年后共检出62例（其中YVDD型9例、YIDD型36例、YM／YVDD混合型9例、YM／YIDD混合型3例、YV／YIDD混合型5例），变异率35．23％。6例CHB患者在拉米夫定治疗过程中其YMDD变异类型会发生改变。结论惠州地区CHB患者经拉米夫定治疗，随着病情发展，变异类型可能会发生改变，YIDD可能是最终的变异类型，YM／YVDD、YVDD和YM／YIDD可能都是过渡的变异类型。     

乙型肝炎病毒基因型与拉米夫定疗效的相关性研究

目的探讨衡阳地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型、以及对拉米夫定疗效的影响。方法对170例慢性乙型肝炎患者进行HBV基因分型、血清标志物、HBVDNA含量、ALT水平以及YMDD变异检测。结果170例患者中检测出B基因型135例（79．41％），C基因型34例（20．00％），BC混合基因型1例（0．59％）。接受拉米夫定治疗前B基因型与C基因型患者血清HBeAg阳性分别为113例与28例（x^2=0．04，P〉0．05），HBVDNA〉10^7拷贝／mL分别为106例与29例（x^2=0．77，P〉0．05），ALT〉120u／L分别为86例与10例（x^2=13．02，P〈0．05）。拉米夫定治疗24—48周时，B基因型和C基因型患者血清HBeAg阴转率各为24．78％和28．57％（x^2=0．20，P〉0．05），抗-HBe阳转率各为14．55％和15．88□（=x^2=0．31，P〉0．05），HBVDNA阴转率各为73．33％和55．88％（x^2=3．93，P〈0．05），ALT复常分别为77．04％和58．82％（x^2=4．61，P〈0．05）。拉米夫定治疗32—144周时，77例患者发生YMDD变异，变异发生率为45．29％，其中rtM204V型变异35例（20．59％），rtM204I型变异25例（14．71％），rtM204V／rtM20I型变异16例（9．41％），并有35例伴rtL180M突变。B基因型与C基因型患者发生YMDD变异各为61例与16例（45．19□与47．06□）（x^2=0．04，P〉0．05）。结论衡阳地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型存在B型、C型以及BC混合型，B基因型为优势基因型并与肝脏疾病的活动性相关；B基因型与C基因型患者HBVDNA栽量、HBeAg表达、以及HbeAg／HBeAb的转换率差异均无显著性；拉米夫定对B基因型患者的疗效优于C基因型；YMDD变异发生率与基因型无相关性。     

拉米夫定耐药者体内乙型肝炎病毒水平与YMDD变异关系的研究

目的 :探讨拉米夫定耐药者 YMDD变异类型、变异率及与体内病毒水平的关系。方法 :荧光定量 PCR检测拉米夫定耐药者血清 HBV-DNA浓度 ,PCR产物直接测序检测 YMDD变异情况。结果 :5 2例拉米夫定耐药者 YMDD变异检测结果 ,其中有 2 4例发生 YMDD变异 ,占 46.1 5 % ,并且 YMDD(酪氨酸、蛋氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨酸 )基序发生三种变异 ,第一种类型为 YVDD变异 ,共有 1 1例 (变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 A741→ G变异 ;第二种类型为 YIDD变异 ,共有 1 1例(变异率 2 1 .1 5 % ) ,即核苷酸 G743→ T变异 ,其中有 1例核苷酸 G743→ C变异也引起 YIDD变异 ;第三种类型为 YLDD变异 ,共有 2例 (变异率 3 .85 % ) ,即核苷酸 A741→ T变异。 YMDD野生型血清病毒浓度为 7.0× 1 0 6± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml,YVDD、YIDD、YLDD变异型病毒浓度分别为 7.5×1 0 6 ± 1 .5× 1 0 6 copies/ ml、7.6× 1 0 6 ± 1 .7× 1 0 6 copies/ ml、6.9× 1 0 6 ± 1 .3× 1 0 6 copies/ ml;经 t检验 ,YMDD变异型与 YMDD野生型血清病毒浓度之间的差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 :除已报道的拉米夫定耐药者 YMDD基序发生 YVDD和 YIDD变异外 ,还存在 YLDD变异 ;拉米夫定耐药者体内乙肝病毒水平与发生 YMDD变异及变异类型无     

乙肝拉米夫定治疗前后YMDD变异与DNA载量的关系

目的探讨原发性肝癌患者拉米夫定治疗前后HBV YMDD变异与HBV DNA复制水平的相关性,为临床治疗提供依据。方法应用实时荧光聚合酶链反应（PCR）技术检测72例原发性肝癌患者未服用拉米夫定治疗前血清HBV DNA载量以及服用拉米夫定治疗12个月血清中YMDD突变情况。结果 72例原发性肝癌患者中,出现YMDD变异者35例（48.6%）,其中YIDD变异者28例,YVDD变异者4例,YIDD和YVDD混合变异者3例。治疗后YMDD突变组HBV DNA载量显著高于YMDD野生组,拉米夫定治疗后YIDD及YIDD＋YVDD杂合型的突变率明显增加,而对YVDD的突变率则有所降低。结论拉米夫定对原发性肝癌患者治疗前后HBV DNA复制水平无显著影响,而拉米夫定治疗后HBV DNA复制水平与YMDD突变具有相关性,可作为早期监测原发性肝癌HBV YMDD突变的观察指标之一。     

乙型肝炎病毒多聚酶基因YMDD变异与临床治疗反应

目的：了解深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中HBV多聚酶基因YMDD变异的情况及其对治疗反应的影响。方法：对100例拉米夫定治疗中28例出现血清病毒核酸（HBV DNA）阳性的患者,采用限制性片段长度多态性分析法（PCR－RFLP）检测YMDD变异,并观察其血清HBV DNA及丙氨酸转氨酶（ALT）水平。结果：100例中有17例YMDD变异阳性，其中以YVDD（M550V）变异为主,占64．7％（11／17），YIDD（M550I）变异为35．3％（6／17）。发生YMDD变异的患者均伴有HBV DNA及ALT水平反跳，1例住院患者停用拉米夫定后出现病情加重。结论：深圳地区慢性乙型肝炎患者在长期拉米夫定治疗中（疗程1年，100md/d）HBV多聚酶基因YMDD变异率为17．0％（17／100）。发生变异者较无变异者疗效降低，检测YMDD变异有助于监测疗效。     

肽核酸钳制PCR早期检测乙型肝炎病毒YMDD耐药变异

目的建立乙型肝炎病毒肽核酸钳制PCR（PNA-PCR）耐药监测方法,以提前监测乙型肝炎病毒YMDD耐药株的产生。方
法选取rtM204I（ATT）、rtM204V（GTG）突变型质粒与野生型质粒rtM204（ATG）按照不同比例混合后,用PNA-PCR法及直接测
序法对耐药位点进行检测,评价两种方法的灵敏度及特异性;选取临床耐药检测患者血清标本85例,采用PNA-PCR法及直接
测序法进行耐药检测,比较两种方法的耐药检出率。结果PNA-PCR法可在105倍野生型YMDD基因背景下检测出突变,灵敏
度为0.001%,可检测到最低限为101拷贝。而直接测序法可检测的基因突变的最低极限为104拷贝,检测灵敏度为10%。85例
临床耐药检测患者中,PNA-PCR法YMDD检测阳性率为85.9%（73/85∶YIDD∶40,YVDD∶23,YIDD+YVDD∶10）,而PCR产物
直接测序法检阳性率仅为40%（34/85∶YIDD∶21,YVDD∶11,YIDD+YVDD∶2）。阴性对照,两种方法均未测出HBV病毒,两种
方法的特异性均较好。结论PNA-PCR方法在灵敏度及特异性上均优于直接测序法,而且操作简便,快捷,在科研和临床上都有
很好的应用前景。
     

HBV P基因YMDD变异的检测及临床应用的初步研究

目的采用错配PCR扩增方法进行HBVP基因YMDD变异的检测，对其临床意义进行初步的研究。方法应用分子克隆方法，构建YMDD、YVDD和YIDD变异的阳性质粒，并对该方法进行敏感性及特异性试验。对65例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者检测YMDD变异情况。结果经PCR方法、酶切鉴定及直接测序鉴定出YMDD、YVDD和YIDD质粒构建成功，且该方法具有较好的敏感性和特异性。65例未经拉米夫定治疗的乙型肝炎患者存在YMDD变异，出现变异6例，阳性率为9．07％；其中YIDD和YI／YMDD各1例，YVDD3例，YV／YMDD1例。结论本检测方法简便、实用，在未经抗病毒治疗的患者中可存在YMDD变异，其与野生株一样是自然存在的，抗病毒药物压力不是导致HBV YMDD变异的唯一因素。     

拉米夫定治疗50例慢性乙型肝炎患者自身前后对照试验

目的：探讨拉米夫定对慢性乙型肝炎病人的临床疗效。免疫学状态（HBeAg血清转换）、HBV DNA水平及YMDD耐药株（YIDD／YVDD）的影响。方法；观察50例乙肝病人口服拉米夫定治疗前和治疗后12周，24周，36周，48周的肝功能（ALT）及免疫学指标的变化，并采用荧光定量PCR技术检测HBV DNA含量和YMDD耐药变异株。结果：治疗前50例病人中有3例抗－HBe阳性，47例HBeAg阳性。治疗后12－24周有9例（19％，9／47）HBeAg转阴，其中3例出现抗－HBe，有1例HBeAg和HBsAg先后消失，治疗前病人血清YMDD变异检测结果为YMDD4例，YVDD22例，YMDD＋YVDD11例，其他尚不明确，在治疗后36－48周时，14例（14／50，28％）出现反跳，HBV DNA升高超过两个数量级，其中只有3例伴ALT升高但未超过治疗前的基线值，并在36周时由YMDD变异为YIDD，结论：拉米夫定用药9－12个月后28％出现HBV DNA升高，但不伴严重的临床改变，治疗前野生型YMDD仅是少数，而YVDD占多数，个别IDD诉出现常伴ALT的和HBV DNA的升高。     

乙型肝炎病毒基因型、拉米夫定耐药突变的RFLP检测及临床相关性分析

目的对乙型肝炎（简称乙肝）肝病毒进行基因分型,检测患者服用拉米夫定后血清中乙肝病毒突变情况,并进行临床相关性分析。方法设计乙肝病毒突变及基因分型特异性引物和酶切位点,系用限制性片断长度多态性（RFLP）分析法检测突变类型并对乙肝病毒进行基因分型。结果在115份被检测的血清标本中,75份（65%）标本为野生型,18份（15.7%）标本为YIDD突变,10份（8.7%）标本为YVDD突变;在混合型突变中,YIDD+YVDD 存在于6份（5.2%）标本中,YMDD+YIDD存在于4份（3.5%）标本中,2份（1.7%）标本为YMDD+YVDD混合突变型;未检测到YSDD突变型。在180位点的突变检测中,98份（85%）标本为野生型,5份(4.3%)标本为rtL180M,L180M+M204I存在于8份(6.96%)标本中,另4份(3.5%)标本为L180M+M204V混合突变型。在115份标本中,102份标本为C基因型,13份标本为B基因型,未发现其他基因型。通过χ²检验,乙肝病毒YMDD突变与患者的性别、血清DNA水平、病毒基因型之间没有相关性(P＞0.05),而乙肝病毒YMDD变异与患者服用拉米夫定的时间长短有相关性（P＜0.05）,用药时间越长,发生突变的几率越大。乙肝患者服用拉米夫定后,180位点的突变和204位点突变具有相关性（P＜0.05）。结论采用RFLP分析法可以有效地检测乙肝病毒YMDD突变并对乙肝病毒进行基因分型。     

乙型肝炎病毒基因型和基因变异在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎中的意义

目的探讨HBV基因型及基因变异等病毒因素在乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎（HBV-GN）中的意义。方法选择41例HBV-GN患者,采用荧光PCR法检测HBV-GN患者基因型,HBV多态性芯片检测基因变异,同时测定尿常规、肾功能和血压等临床资料。结果41例HBV-GN患者,B基因型14例,C型24例（86．8％）,B＋C混合型3例。B型和C型患者间24h尿蛋白有显著性统计学差异（P〈0．05）,尿红细胞计数、血压、尿素氮和血清肌酐无显著性统计学差异（均P〉0．05）。12例为前C区1896位变异,1896位变异与未变异者间小便常规,血压和肾功能无显著性差异。结论HBV-GN患者HBV基因以B、C两型为主,C型为多。C型患肾脏损害可能更为严重。前C区1896位变异和YMDD变异对HBV-GN患者小便常规、血压和肾功能无明显影响。     

未予核苷(酸)类似物治疗慢性乙型肝炎病毒感染者YMDD变异及特点

目的探讨未予核苷(酸)类似物(NA)治疗乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者P基因YMDD基序变异对于血清肝脏生化指标的影响,及YMDD变异两种形式YIDD/YVDD与HBV e抗原(HBeAg)的关系。方法采用引物特异性实时荧光聚合酶链反应(PCR)法检测慢性HBV感染者外周血HBV P基因区YIDD/YVDD变异及HBVDNA载量,并检测HBeAg、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平。结果 334例未经NA抗病毒治疗的慢性HBV感染者中,HBV未变异300例,YVDD变异23例,YIDD变异9例,YIDD、YVDD共生株2例。慢性HBV感染者HBeAg阳性与YIDD变异有关(P<0.05),与YVDD变异无关(P>0.05)。YMDD变异者与未变异者AST、ALT水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);而HBV DNA比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HBV感染者发生YIDD/YVDD变异者,其血清ALT、AST水平均低于未变异者。HBeAg阳性者可能更易发生HBV YIDD变异,而YVDD变异可能与HBeAg状态无关。     

基因芯片技术在检测乙型肝炎病毒 P区YMDD变异中的研究

目的 用基因芯片检测未经抗病毒治疗的HBV DNA阳性血清中HBV P区YMDD变异情况,从分子生物学角度了解YMDD两种变异的状态,为科学合理地指导临床抗病毒治疗及预测患者临床预后提供有力的依据。方法 将150份未经抗毒治疗的HBV DNA阳性血清,用PCR方法扩增P区,扩增产物与基因芯片上的寡核苷酸进行杂交,杂交结果通过扫描仪扫描到计算机上,经软件分析可得到HBVY MDD野生型及其YVDD和／或YIDD变异型结果,并对部分阳性标本用基因序列测序证实。结果 150份HBV DNA阳性血清,用基因芯片方法检出阳性标本(包括YMDD野生型和变异型)共122例,占81．3％,阴性标本28例,占18．7％;在122例阳性标本中,单纯YMDD野生型(即无变异标本)有90例,占73．8％;YVDD变异28例,占22．9％;YIDD变异2例,占1．6％;YVDD和YIDD混合变异2例,占1．60A,,变异株检出率为26．2％,而且变异株均与野生株共存。其中8份阳性标本进行基因序列测序,证实与芯片检测结果完全一致。结论(1)用当前先进的基因芯片技术检测HBVP区YMDD变异,操作简便,结果可靠,特异性高。(2)基因芯片可快速、同时、多人份检出HBVYMDD野生株及其YIDD和／或YVDD突变株的共同感染。(3)部分HBV感染者在未经抗病毒治疗情况下已自然存在HBV YMDD变异,而且变异株均与野生株共存,其中以YVDD变异为多。(4)HBV感染患者在治疗前后有必要检测是否存在HBV YMDD变异株感染,为指导临床科学合理用药和制定治疗方案提供依据。     

乙型肝炎病毒感染者YMDD自然变异研究

目的了解未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBVP基因YMDD变异情况，并观察YMDD自然变异组与非变异组临床病情轻重的关系。方法采用PCR和荧光探针杂交检测技术，检测60例慢性乙型肝炎患者血清HBV YMDD自然变异情况。结果在60例患者中，YMDD变异阳性5例(8．33％)，阴性55例，5例变异中2例为YIDD阳性，3例为YVDD阳性。结论未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者存在YMDD自然变异株；YMDD自然变异的患者没有临床病情加重的趋势。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎发生病毒学反弹患者YMDD变异分析

选取402例服用拉米夫定后出现乙型肝炎病毒(HBV)DNA反弹的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清样品,应用荧光PCR法定性检测YMDD变异情况。402例中有309例(76.87%)检测出YMDD变异,其中120例为YVDD变异,74例为YIDD变异,115例为YVDD+YIDD联合变异;309例YMDD变异患者中同时检测出变异株与野生株占69.26%(214/309),仅检测出变异株占30.74%(95/309)。另外,93例为YMDD野生型阳性。