高血压病患者NAD(P)H氧化酶P22phoxmRNA表达与抗活性氧单位、NO水平变化实验研究

目的 探讨高血压病人血吞噬细胞NAD（P）H氧化酶P^22phoxmRNA的表达水平，及其与高血压氧化应激时抗活性氧单位、一氧化氮（NO）水平变化间的关系。方法 研究对象分为原发性高血压组（EH）和正常组（N）。通过密度梯度离心法获取血中吞噬细胞，采用Rt—PCR技术检测吞噬细胞NAD（P）H氧化酶P^22phoxmRNA的表达量，比色法检测血清中NO含量及抗活性氧单位水平。结果 高血压组血吞噬细胞P^22phoxmRNA较正常组高表达，高血压组血清NO含量、抗活性氧单位水平较正常组降低。统计学相关性分析两组人群血清NO含量、抗活性氧单位水平与相应的吞噬细胞NAD（P）H氧化酶P^22phoxmRNA表达量呈直线相关。结论 高血压组血吞噬细胞NAD（P）H氧化酶P^22phoxmRNA较正常组有显著的高表达，高血压患者血清NO会号、抗活性氢单位水平的变化与吞噬细胞NAD（P）H氧化酶P^22phoxmRNA表达密切相关。     

抑制NAD(P)H氧化酶表达和活性对大鼠糖尿病肾病的影响

[目的]探讨NAD(P)H氧化酶在糖尿病肾病发病中的作用和防治方法.[方法]链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病模型随机分为糖尿病组NAD(P)H氧化酶抑制剂apocynin治疗组(0.2 g·kg-1·d-1)和血管紧张素转换酶抑制剂福辛普利治疗组(10 mg-kg-1·d-1),疗程8周.用RT-PCR检测肾NAD(P)H氧化酶亚基p22phox mRNA表达;组织病理学检查观察肾病变程度;测定血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(Ccr)、24 h尿蛋白排泄量、肾质量指数等.[结果]糖尿病大鼠肾p22phox mRNA的表达较正常大鼠明显升高(P＜0.05),apocynin 治疗不影响肾p22phox mRNA的表达;福辛普利治疗4周,明显降低了肾p22phox mRNA表达(P＜0.05);apocynin和福辛普利均显著降低了肾小球细胞外基质蛋白、Scr、尿蛋白和肾质量指数(P＜0.05),提高了Ccr(P＜0.05),但对血糖和血压均没有显著影响.[结论]糖尿病大鼠肾组织中,NAD(P)H氧化酶的表达明显升高并参与了糖尿病肾病发病;抑制NAD(P)H氧化酶活性和表达的治疗措施可延缓糖尿病肾病的发生和发展.     

芝麻素对自发性高血压大鼠的降压作用及机制

目的:观察芝麻素(Ses)对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用,并探讨其可能机制。方法:SHR 35只,随机分为SHR模型组、Ses160、80、40 mg/(kg·d)、卡托普利(Cap)30 mg/(kg·d),另设WKY正常对照组,于给药16周后,颈总动脉插管测收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及平均血压(MBP),Griess Reagent法测主动脉中一氧化氮(NO)含量,化学比色法测主动脉中过氧化氢(H2O2)含量,RT-PCR观察主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、p22phox及p47phoxmRNA表达。结果:与SHR组相比,Ses160、80 mg/kg组SBP、DBP、MAP均显著降低(P<0.01,P<0.05),主动脉中NO含量显著提高(P<0.01),eNOS mRNA表达显著增加(P<0.01,P<0.05),p22phox、p47phoxmRNA表达显著减少(P<0.01,P<0.05)。Ses各剂量组H2O2含量显著降低(P<0.01)。结论:芝麻素通过上调SHR主动脉中eNOS mRNA的表达,使内皮细胞合成和释放NO增多;下调主动脉NADPH氧化酶p22phox和p47phoxmRNA的表达,使NO活性恢复,发挥降血压的作用。     

一氧化氮和超氧阴离子在糖尿病小鼠创面愈合过程中的作用

目的了解在糖尿病小鼠模型的新鲜手术创面愈合过程中一氧化氮与超氧阴离子作用的分子机制。方法(1)建立链脲霉素(streptozotocin,STZ)诱导的Ⅰ型糖尿病小鼠创面模型;(2)检测糖尿病及正常对照组小鼠创伤前及创伤术后内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白表达水平及一氧化氮(nitric oxide,NO)水平;(3)采用选择性抑制剂,研究NAD(P)H氧化酶、黄嘌呤氧化酶和eNOS在糖尿病皮肤组织超氧阴离子(superoxide,O2-)产生机制中的地位。结果(1)链脲霉素可成功诱导小鼠形成稳定Ⅰ型糖尿病创面模型;(2)术后第5天正常对照组eNOS蛋白表达和NO水平显著升高(P<0.01),糖尿病组eNOS蛋白表达和NO水平则显著下降(P<0.05);(3)糖尿病小鼠皮肤组织O2-水平明显上升,NAD(P)H氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(APO)和白屈菜赤碱(CHE)可明显抑制糖尿病皮肤组织O2-生成。结论糖尿病创面愈合与皮肤组织中eNOS、NO和O2-水平变化关系密切,而NAD(P)H氧化酶途径是调节糖尿病皮肤组织O2-生成的主要途径。     

NAD(P)H氧化酶在血管紧张素Ⅱ损伤人胰岛细胞功能中的作用

目的 探讨分离纯化的人胰岛细胞是否表达NAD(P)H氧化酶亚基p22phox,通过体外实验了解该酶在血管紧张素Ⅱ损伤胰岛细胞功能中所起的作用.方法 对分离纯化后的胰岛分别进行p22phox亚基和胰岛素免疫荧光检测;使用化学发光法检测不同浓度血管紧张素Ⅱ、AT1受体拮抗剂及NAD(P)H氧化酶抑制剂干预下胰岛细胞胰岛素分泌功能.结果 免疫荧光标记胰岛p22phox亚基和胰岛素均呈强阳性;血管紧张素Ⅱ抑制高糖刺激下胰岛细胞胰岛素的分泌,使用AT1受体拮抗剂或者NAD(P)H氧化酶抑制剂能拮抗血管紧张素Ⅱ的抑制作用.结论 分离纯化的人胰岛细胞表达NAD(P)H氧化酶;血管紧张素Ⅱ可能通过激活细胞表面NAD(P)H氧化酶使胰岛细胞发生氧化应激,从而损伤胰岛细胞的分泌功能.     

阿托伐他汀对自发性高血压大鼠主动脉活性氧、p22phox表达和SOD活性的影响

目的　探讨自发性高血压大鼠(SHR)主动脉活性氧(ROS)和p22phox mRNA表达、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化及相关性,并探讨阿托伐他汀治疗对上述指标的影响。方法　以WKY大鼠为对照,观察给予SHR阿托伐他汀50mg/(kg·d)灌胃30 d后,大鼠血压、血清SOD、一氧化氮(NO)、主动脉ROS含量以及p22phox mRNA表达的变化。结果　阿托伐他汀治疗30 d后,SHR的血压、主动脉ROS含量及p22phox mRNA表达下降,血清SOD、NO水平上升。主动脉ROS含量与p22phox mRNA表达呈正相关,与SOD活性呈负相关。结论　p22phox亚单位表达上调和SOD活性降低是高血压血管ROS增多的重要机制。阿托伐他汀可下调p22phox亚单位表达和增加SOD活性,从而减少ROS。     

环氧化酶-2与氧化应激在急性肝损伤中的作用

目的 :研究环氧化酶 2 (COX 2 )在急性肝损伤中的表达 ,探讨COX 2与氧化应激在急性肝损伤中的作用。　方法 :将 3 0只Wistar大鼠随机分为三组 ,正常组 10只 ;对照组 10只 ,腹腔注射CCl4原液 1ml/kg ;实验组 10只 ,腹腔注射CCl4原液 1ml/kg、2h后给予 80mg/kg塞来昔布 (Celecoxib)灌胃。　 结果 :血清学检测结果显示 ,对照组和实验组大鼠血清丙氨酸转氨酶 (ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST)和细菌内毒素 (LPS)均较正常组大鼠显著增高(P <0 .0 5 ) ,对照组与实验组大鼠血清ALT、AST和LPS水平差异显著 (P <0 .0 5 )。对照组和实验组大鼠肝匀浆一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)均较正常组大鼠明显增高 (P <0 .0 5 ) ,对照组与实验组大鼠血清NO和MDA水平差异显著 (P <0 .0 5 )。H E染色光镜下示对照组和实验组大鼠大量肝细胞肿胀、空泡变性和脂肪变性 ,部分肝细胞坏死。免疫组化结果显示COX 2在正常肝组织无表达 ,实验组大鼠较对照组大鼠COX 2表达明显增高 (P <0 .0 5 )。　结论 :急性肝损伤后 ,内毒素刺激COX 2表达 ,氧化应激反应加剧 ,COX 2表达和NO水平增高可能是机体对抗损伤的一种保护性机制。     

急性脑梗塞患者血清NO含量变化的研究

目的 探讨急性脑梗塞患者不同时期血清一氧化氮(NO)含量变化及其临床意义.方法 检测5Q例脑梗塞患者不同时期血清NO含量,50例健康人群作为正常对照组.结果 脑梗塞组急性期血清NO水平较恢复期及正常对照组显著升高(P＜0.01);脑梗塞组恢复期血清NO水平较急性期明显下降(P＜0.01),与正常对照组无显著性(P＞0.05);重度梗塞组No含量高于中度及轻度梗塞组(P＜0.05),中度梗塞组NO含量高于轻度梗塞组(P＜0.05),恢复期三者含量无统计学差异(P＞0.05).结论 NO在脑梗塞发病过程中发挥了重要作用,检测血清NO含量有助于脑梗塞早期诊断、观察病情演变及预后判断.     

大鼠IgA肾病模型的建立及血清中IL-6、FN、NO的检测

目的建立大鼠IgA肾病（IgAN）模型，测定大鼠血清中的白介素-6（IL-6）、纤维结合蛋白（FN）、一氧化氮（NO），探讨这些指标水平的变化与IgAN免疫损伤的相关性，为临床治疗提供动物实验研究依据。方法24只大鼠被随机分成3组，每组8只。模型组和治疗组用免疫复合物法复制；正常对照组用生理盐水。10周后，治疗组大鼠被给予雷公藤多甙片3周。留取所有大鼠血清测定IL-6、FN、NO；留取所有大鼠尿液测定红细胞（RBC）、总蛋白量（TPR）；留取所有大鼠肾组织作病理学检查。结果模型组中大鼠尿液中RBC、TPR含量较治疗组及正常对照组显著增高（P〈0．01）；血清中的IL-6、FN的水平较治疗组及正常对照组显著增高（P〈0．01）；血清中的NO水平较治疗组及正常对照组显著降低（P〈0．01）。治疗组的大鼠肾组织病理损伤程度较模型组明显减轻（P〈0．01）。结论血清中的IL-6、FN及NO的水平与RBC数、TPR及肾组织病理损伤程度相关，它们可作为观察IgAN治疗效果的重要指标，也可作为IgAN严重性的预测指标。下调血中的IL-6、FN及上调NO的水平，可减少IgA与FN免疫复合物的形成，从而改善肾组织的免疫损伤。     

血管紧张素Ⅱ体外诱导血管内皮细胞衰老的机制研究

目的 观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是否可诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老,并探讨其作用机制.方法 体外培养的HUVECs分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+valsartan组,观察细胞衰老改变及超氧阴离子(O)水平,分析各组细胞AngⅡ1型和2型受体(AT1R和AT2R)、NAD(P)H氧化酶p22phox的mRNA及蛋白表达.结果 给予AngⅡ后,β-gal染色阳性细胞数增加,细胞向G0-G1期停滞,细胞p16蛋白表达增高,出现衰老的特征性改变;衰老细胞NO生成减少,O2(-·)生成增加,p22phox和AT2R的mRNA及蛋白表达增加,ATlR表达下降;valsartan处理后改善了细胞的衰老改变,下调p22phox表达,降低O2(-·)水平,对AT2R表达无明显影响.结论 AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs衰老,AngⅡ从转录水平上调NAD(P)H氧化酶p22phox表达,进而使O2(-·)产生增加可能是诱导内皮细胞衰老的主要原因之一;Valsartan通过特异性阻断ATlR有一定的逆转内皮细胞衰老的作用.     

去甲肾上腺素诱导人巨噬细胞MMP-9的表达及机制

目的观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)预处理人巨噬细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及其致动脉粥样硬化机制。方法体外培养的U937巨噬细胞,以10-10、10-9、10-8、10-7mol/L NE分别刺激细胞0、1、3、6、12、24 h。RT-PCR法测细胞MMP-9 mRNA水平,Western blot法检测细胞MMP-9蛋白表达,ELISA法测细胞培养液上清中MMP-9蛋白水平的表达。预先加入抗氧化剂NAC(10 mmol/L)和NAD(P)H氧化酶抑制剂DPI(10-5mol/L)孵育1 h后再用不同浓度的NE分别刺激细胞24 h,用荧光探针法检测细胞内ROS的生成;用RT-PCR及ELISA法检测细胞MMP-9mRNA和蛋白的表达。结果 NE浓度时间依赖性地增加巨噬细胞MMP-9 mRNA(10-7mol/L NE为对照组的4.65倍,P<0.01)及蛋白(10-7mol/L NE为对照组的4.14倍,P<0.01)表达;随着NE浓度的升高,ROS的生成分别为对照组的2.18、3.22、3.64、4.50倍(P<0.01)。NAC和DPI都一定程度地抑制了MMP-9 mRNA[DPI组为NE组的0.752倍(P<0.05),NAC组为NE组的0.500倍(P<0.01)]和蛋白(DPI组为NE组的0.698倍,NAC组为NE组的0.671倍,均P<0.05)的表达。结论 NE浓度和时间依赖性地诱导人巨噬细胞U937 MMP-9的表达,通过NAD(P)H氧化酶介导的ROS通路而促进炎症反应,促进AS的发生、发展。     

高血压阳性家族史健康子代血管内皮功能和血清一氧化氮水平分析

目的分析有高血压阳性家族史但血压正常的健康子代,其内皮依赖性血管舒张功能和血清NO水平。方法入选有高血压阳性家族史,但本人血压正常的子代个体48例(男26例,女22例)作为家族史阳性组,取45例血压正常同时无高血压家族史的健康人作为对照组(男24例,女21例),按标准方法测定血压,计算体重指数〔体重指数(BMI)=体重(kg)/身高(m)2〕,抽取空腹静脉血查血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、尿酸、肌酐以及血清NO,用无创超声法测定两组血流介导的血管扩张(FMD)和硝酸甘油介导的血管扩张(NMD)。结果与对照组比较,家族史阳性组收缩压和血尿酸水平较高(P<0.05);同时家族史阳性组FMD和血清NO水平均较正常对照组低(P<0.05),而两组间NMD差异无统计学意义。结论有高血压阳性家族史的子代健康个体,即使血压在正常范围时,也已经发生血管内皮依赖性舒张功能降低,血清NO水平下降,对这类人群应早期和严格防治。     

Reevaluation of the Correlation between Angiotensinogen Gene M235T Polymorphism and Familial Essential Hypertension Using MS-PCR Technique

Renin- angiotensin system( RAS) candidat-ing gene,such as angiotensinogen( Ag T) as wellas angiotensin- converting enzyme( ACE) genepolymorphism were thought to have positive association with various cardiovasculardiseases.In1 992 ,Jeunemaitre[1] detected a microsatellitepolymorphism in the region of the an-giotensinogen gene which has linked to occur-rence of essential hypertension.Further analysisled to detection of several mutations in the cod-ing region of angiotensinogen gene[2 ] . Ma…     

血管衰老性重塑及其相关基因差异表达的变化

目的 分析相关基因差异表达与血管衰老性重塑的联系,探讨血管衰老性重塑可能的基因调控机制.方法 常规观察主动脉组织形态及显微结构变化,应用基因差异表达技术、逆转录-聚合酶链反应、Western印迹分析验证健康衰老进程中,4、10、16、22个月龄大鼠血管衰老性重塑相关基因及其差异表达变化.结果 基因差异PCR共选出5条表达差异的片段,同源性对比证明分别与L型Ca2+通道α1c亚单位(Cacna1c)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NAD(P)H氧化酶α亚单位(p22-phox)、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)、半胱氨酸蛋白水解酶-9(Casp9)基因高度同源.其中Cacnalc和p22-phox表达随龄增加,16月龄组(0.74±0.13;0.73±0.12)较10月龄组(0.12±0.05;0.20±0.03)增加.SDF-1α表达随龄降低.MMP-9和Casp9表达呈双相变化,16月龄组表达正向峰值(0.56±0.15;0.47±0.16).分别以平滑肌和胶原纤维为因变量作多元逐步回归分析,(r=0.92,P＜0.01);(r=0.93,P＜0.01)均呈正相关.结论 血管衰老性重塑并非恒速进行,存在缓慢起始、加速进展、减速维持的时相性过程.基因时相性差异表达变化同血管衰老性重塑高度相关.Cacna1c、p22-phox、SDF-1α基因时相性差异表达可能参与血管衰老性重塑.     

Effects of valsartan on oxidative stress and the atherogenesis

Introduction　Oxidativestressandtheproductionofintracellularreactiveoxygenspecies (ROS)havebeenimplicatedinthepathogenesisofatherosclero sis[1] .ROSandtheirbyproductsnotonlymaybecyto toxictocellsbutalsoplayaroleinsignaltransductionprocessessuchascell growthandposttranslationalmodificationofproteinswhichwillcontributetotheformationofatherosclerosis[2 ] .EarlystudiesreportedthattheactivationofAngiotensinⅡtypeⅠreceptorisinvolvedintheoxidativestress :ItnotonlyspecificallyactivatesNAD(P)Hoxi…     

葱白提取物对急性心肌缺血大鼠气体信号分子H_2S和NO水平的影响

目的观察葱白提取物对急性心肌缺血大鼠血浆气体信号分子硫化氢(H2S)和一氧化氮(NO)水平的影响,阐明葱白提取物抗心肌缺血作用机制。方法将SPF级SD雄性大鼠40只随机分为正常对照组、空白模型组、葱白提取物组、硝酸甘油组,每组10只。结扎大鼠冠状动脉左前降支,建立急性心肌缺血模型。用生化分析仪检测血清Tn I、CK-MB、LDH水平,采用去蛋白法检测血浆H2S和NO水平。结果与空白模型组相比,葱白提取物组、硝酸甘油组均降低了ST段抬高、血清Tn I、CK-MB、LDH水平(P0.01);升高了血浆H2S和NO水平(P0.01)。结论葱白提取物有明显抗大鼠急性心肌缺血作用,其机制可能与升高血浆H2S和NO水平有关。     

NAD对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的   探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 对血管紧张素II（AngII)诱导的大鼠心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达的作用。方法   提取新生Wistar大乳鼠原代心肌成纤维细胞,传代培养,采用2~4代细胞。实验分为空白对照组,AngII (0.01、 0.1、 1μmol／L)组,NAD(250μmol／L)组, AngII(1μmol／L)+ NAD (250μmol／L )组,FAM组,Sirt1-siRNA+AngII(1μmol／L)组,Sirt1-siRNA 组,Sirt1-siRNA+ NAD（250μmol／L）组,Sirt1-siRNA+Ang II(1mol／L)+NAD（250μmol／L）组。刺激24h后,提取总RNA, Real time RT-PCR法分别检测SIRT1和I型胶原mRNA的表达。结果   心肌成纤维细胞I型胶原mRNA的表达随着AngⅡ浓度升高明显增加(P＜0.05),呈浓度依赖性。与空白对照组比较,NAD（250μmol／L）组SIRT1 mRNA表达增高(P＜0.05)。与AngⅡ（1μmol／L）组比较,AngII (1μmol／L)+ NAD(250μmol／L )组I型胶原mRNA的表达明显减少(P＜0.01)。相对于FAM组,Sirt1-siRNA转染后各组SIRT1 mRNA的表达减少(P＜0.05),而心肌成纤维细胞I型胶原mRNA表达增多(P＜0.05)。结论   NAD可以抑制心肌成纤维细胞 I型胶原mRNA的表达,SIRT1影响I型胶原mRNA的表达,它们对Ang II诱导的心肌纤维化有保护作用。     

PKC-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏NADPH氧化酶与SOD蛋白表达的影响

目的研究蛋白激酶C(protein kinase,PKC)-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶与超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的影响。方法 24只SD雄性大鼠(240~260 g),采用抽签法随机分为正常对照组(normal control,NC)、糖尿病组(diabetes mellitus,DM)及LY333531(LY)治疗组。LY组灌胃给予PKC-β抑制剂LY333531〔1 mg/(kg.d)〕治疗4周后测量血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr)、游离15-F2t-Isoprostane、总抗氧化浓度及SOD活性。Western blotting分析NADPH氧化酶亚基P22phox与P67phox,SOD亚型Cu/Zn-SOD与Mn-SOD蛋白改变。结果与NC组比较,DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、Ccr、血浆与肾脏中15-F2t-Isoprostane、血浆总抗氧化浓度及P22phox与P67phox表达明显增加,而肾脏总抗氧化物浓度、血浆与肾脏SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达明显减少(P<0.05)。LY333531除对血糖与Mn-SOD的表达无显著影响外,均能显著逆转上述变化。结论 LY333531通过抑制糖尿病肾脏NADPH氧化酶的活化与表达,及促进Cu/Zn-SOD的表达而恢复SOD活性,以减少早期糖尿病肾脏的氧化损伤,从而发挥其保护肾脏作用。