冬虫夏草对哮喘大鼠肺组织NOD1和NOD2表达的影响

【】目的 通过观察NOD1和NOD2在哮喘大鼠肺组织中的表达,探讨冬虫夏草治疗哮喘的可能作用机制。方法 通过哮喘大鼠模型,给予冬虫夏草灌胃,分别采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测肺组织NOD1和NOD2蛋白或mRNA的表达。 结果 哮喘组(0.62±0.34)NOD1 mRNA的表达量显著低于对照组(1)(P﹤0.01);冬虫夏草组(0.98±0.22)NOD1 mRNA的表达量显著高于哮喘组(0.62±0.34)(P﹤0.01)。哮喘组NOD2蛋白(0.18±0.03 OD值)的光密度值显著低于对照组(0.24±0.03 OD值)(P﹤0.01),而哮喘组(0.92±0.32)NOD2 mRNA的表达量与对照组(1)差异无统计学意义(P>0.05);冬虫夏草组(依次为：0.23±0.02 OD值;1.27±0.48)NOD2蛋白和 mRNA的表达量显著高于哮喘组(依次为：0.18±0.03 OD值;0.92±0.32)(均P﹤0.05)。NOD2 mRNA和蛋白的表达水平无显著相关性 ( n=24, r =0.32,P>0.05);NOD1mRNA和NOD2 mRNA的表达水平无显著相关性( n=24, r =0.20,P>0.05)。结论 哮喘大鼠肺组织 NOD1和NOD2的表达下降,冬虫夏草能上调NOD1和NOD2表达的作用。     

地塞米松对哮喘大鼠中性粒细胞模式识别受体基因表达的影响

目的探讨核苷酸结合寡聚域(NOD)样受体在哮喘发病机制中的作用。方法采用哮喘大鼠模型分离提纯血中性粒细胞(PMN),实时荧光定量PCR法检测PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达。结果哮喘组NOD2 mRNA的表达量(3.11±0.82)显著高于对照组(P0.01),地塞米松组NOD2 mRNA的表达量(1.30±0.28)显著低于哮喘组(P0.01)。哮喘组NALP1 mRNA的表达量(0.51±0.21)显著低于对照组(P0.01),地塞米松组NALP1 mRNA的表达量(0.91±0.26)显著高于哮喘组(P0.05)。血PMN NOD2和NALP1 mRNA的表达水平呈显著负相关性(n=24,r=-0.74,P0.01)。结论哮喘大鼠血PMN NOD2 mRNA的表达升高,NALP1 mRNA的表达则相反,地塞米松具有调节模式识别受体的作用。     

核苷酸结合寡聚域在宫颈癌发病机制中的作用

目的探讨核苷酸结合寡聚域1(NOD1)在宫颈癌发病机制中的作用。方法免疫组化法检测107例宫颈癌、50例宫颈上皮内瘤变、50例慢性宫颈炎组织NOD1的表达。结果与慢性宫颈炎组比较,宫颈癌组NOD1的阳性率和阳性表达强度均显著增高[91.59%比62.00%,P0.01;(0.18±0.05)比(0.16±0.04),P0.05];宫颈癌组NOD1阳性率显著高于宫颈上皮内瘤变组(91.59%比76.00%,P0.05),但两组间NOD1的阳性表达强度差异无统计学意义[(0.18±0.05)比(0.18±0.04),P0.05]。宫颈癌组中,淋巴结转移者NOD1阳性率和阳性表达强度与无淋巴结转移者比较差异无统计学意义[94.44%比84.21%,P0.05;(0.18±0.05)比(0.19±0.05),P0.05]。结论 NOD1在宫颈癌组织中表达增强,可能与宫颈癌的发病机制相关,但与淋巴结转移无密切关系。     

丹参提取物对脑外伤模型大鼠脑神经元SIRT1-FoxO1-自噬通路的影响

目的研究丹参提取物(SME)对脑外伤大鼠神经元沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)-叉头框蛋白O1(FoxO1)-自噬通路的影响。方法采用改良Feeney法构建大鼠脑外伤模型,将78只SD大鼠按照随机数字表法分成假手术组、模型组、SME低、中、高剂量组和抑制剂组,每组13只。假手术组和模型组大鼠腹腔注射生理盐水2mL,SME低、中、高剂量组大鼠分别按0.75、1.50、3.00mg/kg给予SME,抑制剂组予SME中剂量组剂量给药同时按照5mg/kg注射SIRT1抑制剂(EX-527)。通过尼氏染色观察大鼠右侧脑组织神经元损伤情况;免疫组织化学染色、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)分别测定SIRT1和FoxO1的细胞阳性率、转录(mRNA)水平和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组SIRT1和FoxO1的阳性细胞比例、mRNA和蛋白表达量均显著升高[(12.29±2.42)%比(4.36±1.21)%,(13.15±1.67)%比(3.31±1.50)%,(0.87±0.06)比(0.62±0.05),(0.89±0.03)比(0.69±0.04),(0.72±0.04)比(0.43±0.04),(0.76±0.08)比(0.31±0.09),P<0.05];与模型组比较,抑制剂组SIRT1阳性细胞比例、mRNA和蛋白表达量均显著降低[(6.88±2.12)%比(12.29±2.42)%,(0.71±0.09)比(0.87±0.06),(0.54±0.08)比(0.72±0.04),P<0.05],SME低、中剂量两组SIRT1蛋白水平升高[(0.98±0.05)、(1.12±0.08)比(0.72±0.04),P<0.05]及SME高剂量组SIRT1、FoxO1阳性细胞比例和mRNA和蛋白表达量均显著升高[(19.04±1.81)%比(12.29±2.42)%,(18.09±1.34)%比(13.15±1.67)%,(1.21±0.10)比(0.87±0.06),(1.19±0.03)比(0.89±0.03),(1.15±0.13)比(0.72±0.04),(0.95±0.09)比(0.76±0.08),P<0.05];与抑制剂组比较,SME中、高剂量两组FoxO1阳性细胞比例升高[(14.63±2.22)%、(18.09±1.34)%比(9.85±1.31)%,P<0.05],SME低、中、高剂量三组SIRT1阳性细胞比例、SIRT1、FoxO1的mRNA和SIRT1蛋白水平都显著升高[(12.52±2.01)%、(14.82±2.11)%、(19.04±1.81)%比(6.88±2.12)%,(0.86±0.08)、(0.92±0.05)、(1.21±0.10)比(0.71±0.09),(0.89±0.06)、(0.98±0.07)、(1.19±0.03)比(0.82±0.05),(0.98±0.05)、(1.12±0.08)、(1.15±0.13)比(0.54±0.08),P<0.05];与SME低剂量组比较,SME中剂量组FoxO1 mRNA和SIRT1蛋白表达量[(0.98±0.07)比(0.89±0.06),(1.12±0.08)比(0.98±0.05),P<0.05]及SME高剂量组SIRT1阳性细胞比例、SIRT1和FoxO1的mRNA和蛋白表达量均显著升高[(19.04±1.81)%比(12.52±2.01)%,(1.21±0.10)比(0.86±0.08),(1.19±0.03)比(0.89±0.06),(1.15±0.13)比(0.98±0.05),(0.95±0.09)比(0.79±0.07),P<0.05];与SME中剂量组比较,SME高剂量组SIRT1和FoxO1 mRNA表达显著升高[(1.21±0.10)比(0.92±0.05),(1.19±0.03)比(0.98±0.07),P<0.05]。结论SME能够明显促进脑外伤模型大鼠脑神经元SIRT1表达,增强SIRT1的去乙酰化活性,正向调节SIRT1-FoxO1-自噬通路发挥神经保护作用。     

槐杞黄对OVA诱导哮喘模型大鼠嗜酸性细胞凋亡及免疫调节因子的影响

目的探讨槐杞黄对哮喘模型大鼠嗜酸性细胞凋亡、Th1/Th2/Th17免疫调节及相关炎症因子的影响。方法将60只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、地塞米松组、槐杞黄组、槐杞黄联合地塞米松组,每组12只。卵清蛋白(OVA)致敏激发复制大鼠哮喘模型,对照组和模型组大鼠给予生理盐水,槐杞黄组大鼠按0.4g·100g-1·d-1给予槐杞黄颗粒混悬液灌胃,地塞米松组大鼠按0.1g·100g-1·d-1给予地塞米松混悬液,槐杞黄联合地塞米松组大鼠给予槐杞黄(0.4g·100g-1·d-1)+地塞米松(0.1g·100g-1·d-1),连续给药15天后,测定各组大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白介素5(IL-5)、白介素3(IL-3)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素17(IL-17)水平;肺泡盥洗液进行白细胞计数及分类;病理切片观察肺组织病理变化;实时定量-PCR测定肺组织Bcl-2、Bax及NF-κB mRNA表达。结果与模型组比较,地塞米松、槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松可显著降低哮喘大鼠血清IgE水平[(57.14±5.66)ng/mL、(57.87±5.31)ng/mL、(46.68±6.67)ng/mL比(84.17±5.41)ng/mL,P<0.05,P<0.01];槐杞黄联合地塞米松可明显降低哮喘大鼠血清IL-5[(23.56±6.60)pg/mL比(32.20±10.64)pg/mL,P<0.05]、IL-3 [(2717.38±128.88)pg/mL比(4235.66±165.50)pg/mL,P<0.01]、GM-CSF[(6.84±5.54)pg/mL比(13.20±2.01)pg/mL,P<0.01]及IL-17[(252.25±15.14)pg/mL比(415.80±32.67)pg/mL,P<0.01]水平;地塞米松和槐杞黄联合地塞米松可降低哮喘模型大鼠肺泡盥洗液白细胞总数[(83.41±4.65)、(63.7±6.10)比(169.40±11.18),P均<0.05],以及嗜酸粒细胞(EOS)[(1.05±0.02)、(0.71±0.04)比(7.01±0.18),P均<0.05]和淋巴细胞(LYM)[(7.91±0.09)、(8.18±0.23)比(17.91±0.11),P均<0.05]百分比。给药组均可缓解大鼠肺组织肺泡壁及气道周围炎症细胞浸润的现象。地塞米松、槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松均可明显降低哮喘模型大鼠肺组织Bcl-2/Bax mRNA相对表达量[(0.92±0.24)、(1.65±0.28)、(0.78±0.44)比(6.08±2.31),P均<0.01]。槐杞黄以及槐杞黄联合地塞米松可降低哮喘大鼠肺组织NF-κB mRNA相对表达量[(1.19±0.11)、(1.10±0.15)比(1.46±0.08),P均<0.05]。结论槐杞黄辅助治疗可减轻哮喘模型大鼠气道炎症,其机制可能与纠正Th1/Th2/Th17免疫失衡,促进嗜酸性细胞凋亡,减少哮喘发作炎症因子水平相关。     

哮喘小鼠肺组织和肺T细胞β1,3-N-乙酰糖基转移酶的表达

目的研究支气管哮喘模型小鼠肺组织及肺T细胞中三种β1,3-N-乙酰糖基转移酶（Fringe）RFNG、LFNG、MFNG的基因和蛋白表达的特点,探讨Fringe是否与哮喘发病有关。方法使用卵白蛋白腹腔注射后雾化吸入法制备BALB/c小鼠哮喘模型,并设置生理盐水对照组。经Perco1及尼龙毛法分离获取肺T细胞。采用半定量RT-PCR检测两组小鼠肺组织及肺T细胞中RFNG、LFNG、MFNGmRNA表达;Westernblot检测两组小鼠肺组织中RFNG、LFNG、MFNG蛋白表达。结果两组小鼠肺组织及肺T细胞中均存在三种Fringe表达。哮喘组肺组织及肺T细胞的RFNGmRNA表达较对照组增加（肺组织：0.92±0.35比0.51±0.13,P〈0.01;肺T细胞：0.33±0.06比0.18±0.07,P〈0.01）;LFNGmRNA表达较对照组减少（肺组织：0.77±0.32比1.61±0.31,P〈0.01;肺T细胞：0.49±0.19比0.71±0.03,P〈0.01）。MFNG在肺组织中的表达无明显差异（肺组织：1.44±0.29比1.70±0.44,P〉0.05）,但MFNG在肺T细胞中的表达明显减少（0.11±0.03比0.52±0.18,P〈0.01）。肺组织中三种Fringe蛋白表达与肺组织的mRNA结果相似。哮喘组的RFNG蛋白表达高于对照组（1.17±0.04比0.68±0.07,P〈0.05）,MFNG蛋白表达在两者之间没有明显的差异（8.10±0.60比9.12±0.07,P〉0.05）,而LFNG的蛋白表达则低于对照组（4.11±0.38比6.41±0.11,P〈0.05）。结论三种Fringe的异常表达可能与支气管哮喘的发病有关。     

地塞米松对支气管哮喘大鼠模型肺内EOTAXIN表达的影响

目的通过观察大鼠肺内eotaxin表达的变化,探讨地塞米松治疗哮喘的可能机制.方法以卵白蛋白致敏法制备大鼠哮喘模型,分为对照组(A组)、哮喘组(B组)和治疗组(C组).分别通过免疫组化和RT-PCR检测肺内eotaxin蛋白及mRNA的表达.结果哮喘组(A组)eotaxin蛋白及mRNA相对表达量(0.32±0.04;0.86±0.21)比对照组(C组)(0.10±0.03;0.18±0.05)显著增高(P<0.01),地塞米松治疗组(B组)(0.12±0.02;0.21±0.10)与A组比较,差异显著(P<0.01),接近C组.结论 eotaxin是诱导嗜酸粒细胞(EOS)气道募集的重要趋化因子,地塞米松下调eotaxin的表达,发挥抗嗜酸粒细胞(EOS)性气道炎症的作用.     

Ⅱ类主要组织相容性抗原在博来霉素致大鼠纤维化肺组织中的表达

目的:在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型上,观察主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类分子及其上游调控因子Ⅱ类反式激活蛋白(class Ⅱ transactivator,CⅡTA)表达水平的变化,探索肺纤维化发病可能的免疫机制.方法:在大鼠气管内灌注博来霉素(纤维化组)或生理盐水(对照组),分别于第7、第28天处死大鼠,取大鼠肺组织行HE染色和Masson染色,用生化法测定肺组织羟脯氨酸含量,免疫组化sP法染色观察肺组织MHC Ⅱ类分子表达,利用Taqman探针方法实时PCR(real-time PCR)技术测定肺组织总CⅡTA及Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型CⅡTA mRNA表达.结果:(1)第7、第28天时纤维化组肺组织MHCⅡ阳性细胞百分比均较对照组增加[(0.10±0.03)vs(0.06±0.02),P<0.05;(0.15±0.03)vs(0.06±0.01),P<0.01];纤维化组第28天较第7天增加[(0.15±0.03)vs(0.10±0.03),P<0.05];(2)第7天时,纤维化组大鼠肺组织总CⅡTA较对照组升高170.4%[(2.89±1.07)vs(1.07±0.46),P<0.05],Ⅰ型CⅡTA较对照组升高258.8%[(0.77±0.38)vs(0.21±0.09),P<0.05],Ⅳ型CⅡTA较对照组降低87.2%[(0.39±0.15)vs(3.01±0.79),P<0.01];第28天时,纤维化组大鼠肺组织总CⅡTA较对照组升高98.6%[(4.14±1.15)vs(2.08±0.76),P<0.05],Ⅰ型CⅡTA较对照组升高137.1%[(0.79±0.34)vs(0.33±0.23),P<0.05],Ⅳ型CⅡTA仍较对照组低,但差异无统计学意义[(2.98±0.92)vs(3.95±0.93),P0.05].其中,纤维化组肺组织Ⅳ型CⅡTA在第28天时较第7天时升高667.3%[(2.98±0.92)vs(0.39±0.15),P<0.01].Ⅲ型CⅡTA在各时期与对照组比较差异均无统计学意义.结论:肺组织MHC Ⅱ/CⅡTA体系参与了博来霉素诱导的肺纤维化的病理生理过程.     

七氟醚预处理对脓毒症模型小鼠NALP3炎性体的影响

目的研究七氟醚预处理对脓毒症模型小鼠NALP3炎性体的影响。方法 C57BL/6N健康雄性小鼠84只,采用随机数字表法,分为七氟醚对照组、七氟醚脓毒症组、氧气对照组、氧气脓毒症组,每组21只,参照文献,采用盲肠结扎穿刺法制备小鼠脓毒症模型。观察比较四组小鼠生存率;肝、肺以及肾脏组织的炎性评分;RT-PCR方法检测血液、腹腔灌洗液、肺灌洗液NALP3、Caspase1及ASC mRNA表达。结果七氟醚脓毒症组小鼠生存率低于七氟醚对照组(66.67%比100%,P0.05),氧气脓毒症组小鼠生存率低于氧气对照组(55.56%比100%,P0.05)。与七氟醚对照组比较,七氟醚脓毒症组小鼠肺、肝、肾组织炎症评分明显升高[(2.08±0.21)分比(0.83±0.44)分、(2.33±0.57)分比(0.87±0.46)分、(2.25±0.49)分比(0.71±0.24)分,P均0.05];与氧气对照组比较,氧气脓毒症组小鼠肺、肝、肾组织炎症评分明显升高[(3.58±0.32)分比(0.82±0.37)分、(3.24±0.46)分比(0.92±0.33)分、(3.06±0.47)分比(0.67±0.22),P均0.05];七氟醚脓毒症组小鼠肺、肝、肾组织炎症评分明显低于氧气脓毒症组[(2.08±0.21)分比(3.58±0.32)分,(2.33±0.57)分比(3.24±0.46)分,(2.25±0.49)分比(3.06±0.47)分,P均0.05]。脓毒症组小鼠血NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达量显著高于对照组[NALP3:(1.58±0.42)比(1.10±0.49)、(1.47±0.54)比(1.06±0.36);Caspase-1:(1.93±0.42)比(1.06±0.44)、(1.76±0.32)比(1.03±0.29);ASC mRNA:(1.92±0.47)比(1.06±0.46)、(1.65±0.35)比(1.03±0.29),P均0.05];与氧气脓毒症组比较,七氟醚脓毒症组小鼠血NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达显著下调[NALP3:(1.47±0.54)比(1.58±0.42);Caspase-1:(1.76±0.32)比(1.93±0.42);ASC mRNA:(1.65±0.35)比(1.92±0.47),P均0.05]。氧气脓毒症组小鼠腹腔灌洗液NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达量显著高于氧气对照组[NALP3:(2.34±0.25)比(1.73±0.62)、(2.07±0.33)比(1.91±0.40);Caspase-1:(2.31±0.26)比(1.77±0.72)、(2.19±0.24)比(1.95±0.71);ASC mRNA:(2.33±0.57)比(1.86±0.52)、(1.06±0.42)比(1.81±0.32),P均0.05];与氧气脓毒症组比较,七氟醚脓毒症组NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达量显著下调[NALP3:(2.07±0.33)比(2.34±0.25);Caspase-1:(2.19±0.24)比(2.31±0.26);ASC mRNA:(1.06±0.42)比(2.33±0.57),P均0.05];脓毒症组小鼠肺灌洗液NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达量显著高于对照组[NALP3:(1.91±0.48)比(1.42±0.46)、(1.63±0.82)比(1.40±0.57);Caspase-1:(2.08±0.24)比(1.43±0.41)、(1.85±0.33)比(1.53±0.57);ASC mRNA:(1.84±0.19)比(1.59±0.61)、(1.80±0.40)比(1.79±0.33),P均0.05];与氧气脓毒症组比较,七氟醚脓毒症组NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达显著下调[NALP3:(1.63±0.82)比(1.91±0.48);Caspase-1:(1.85±0.33)比(2.08±0.24);ASC mRNA:(1.80±0.40)比(1.84±0.19),P均0.05]。结论七氟醚预处理可能抑制NALP3炎性体表达,降低脓毒症小鼠炎症水平。     

T-bet/GATA-3的比值在哮喘大鼠免疫失衡中的意义

目的:探讨转录因子T-bet/GATA-3比值在支气管哮喘免疫失衡中的意义.方法:SPF级SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组12只.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法和Western blot法分别检测T-bet,GATA-3 mRNA和蛋白在肺组织的表达.结果:大鼠肺组织中对照组和哮喘组T-bet mRNA表达分别为0.71±0.19,0.08±0.12;T-bet蛋白表达分别为0.72±0.22,0.18±0.06,两组比较均有显著性差异(P＜0.01).大鼠肺组织中对照组和哮喘组GATA-3 mRNA表达分别为1.06±0.25,1.56±0.28;GATA-3蛋白分别为1.04±0.44,2.25±0.74,两组比较均有显著性差异(P＜0.01);对照组T-bet/GATA-3 mRNA表达量的比值0.73±0.32,明显高于哮喘组0.06±0.09 (P＜0.01),对照组T-bet/GATA-3 蛋白表达量的比值0.75±0.25,高于哮喘组0.09±0.04 (P＜0.01).结论:转录因子T-bet/GATA-3 mRNA和蛋白表达量比值在哮喘中明显降低,可作为评价哮喘免疫失衡的客观指标之一.     

二甲双胍通过激活Nrf2通路干预PC12细胞H_2O_2氧化损伤的机制研究

目的探讨二甲双胍对过氧化氢(H_2O_2)诱导的PC12细胞损伤的保护机制。方法 PC12细胞培养后共设置五组,分别为DMSO组、H_2O_2组、二甲双胍低(0.5mmol/L)、中(1mmol/L)、高(2mmol/L)剂量组,建立PC12细胞H_2O_2氧化损伤模型,使用CCK-8法和比色法检测PC12细胞生存率和乳酸脱氢酶(LDH)释放量;采用Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测PC12细胞凋亡和活性氧(ROS)水平;qPCR和Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路mRNA和蛋白表达水平;使用小干扰RNA沉默Nrf2检测H_2O_2诱导细胞的保护作用。结果与DMSO组比较,二甲双胍低、中和高剂量对PC12细胞有毒性作用[(99.67±1.53)%、(97.00±3.29)%、(96.10±3.46)%比(100.00±0.00)%,P均0.05];与H_2O_2组比较,二甲双胍低、中和高剂量对PC12细胞具有保护作用[(64.33±6.08)%、(67.67±7.51)%、(71.23±5.10)%比(61.00±3.61)%,P均0.05];与H_2O_2组比较,二甲双胍高剂量+H_2O_2组LDH释放量显著降低[(91.67±10.41)比(150.45±10.61),P0.05],细胞凋亡率下降[(12.33±2.08)%比(23.67±5.13)%,P0.05],ROS含量减少[(1.77±0.25)%比(3.43±0.40)%,P0.05];与DMSO组比较,二甲双胍低、中和高剂量显著提高Nrf2和HO-1 mRNA[Nrf2 mRNA:(1.24±0.18)、(1.56±0.23)、(1.93±0.02)比(1.02±0.12),P均0.05;HO-1 mRNA:(1.83±0.07)、(2.22±0.12)、(2.78±0.09)比(1.46±0.18),P均0.05]和蛋白[Nrf2蛋白:(0.92±0.12)、(1.24±0.18)、(1.86±0.11)比(0.43±0.05),P均0.05;HO-1蛋白:(1.29±0.18)、(1.83±0.21)、(2.59±0.06)比(0.62±0.09),P均0.05]表达;与二甲双胍高剂量+H_2O_2组比较,二甲双胍高剂量+H_2O_2+siNrf2组细胞生存率显著降低[(59.77±2.25)%比(78.02±7.63)%,P0.05]。结论二甲双胍可能通过激活细胞内Nrf2/HO-1通路对H_2O_2诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

CCL1/CCR8在哮喘小鼠肺组织中的表达及地塞米松对其作用的研究

目的观察哮喘小鼠肺组织CCL1/CCR8 mRNA的表达及糖皮质激素对其表达的影响,探讨CCL1/CCR8在哮喘发病机制中的作用。方法30只小鼠随机分为对照组、哮喘组和地塞米松组,每组10只。哮喘组和地塞米松组用卵白蛋白致敏激发建立哮喘模型,地塞米松组给予腹腔注射地塞米松(2mg/kg),对照组均以生理盐水替代。测定BALF中细胞总数和分类计数,采用酶联免疫法检测BALF中IL-4水平,RT-PCR检测肺组织CCR8 mRNA和CCL1 mRNA的表达。结果对照组、哮喘组和地塞米松组BALF中嗜酸粒细胞百分比[(0.6±0.1)%、(32.4±3.4)%和(8.9±0.9)%,P0.01]、淋巴细胞百分比[(2.9±0.5)%、(14.0±3.0)%和(6.3±0.6)%,P0.01]、IL-4浓度[(5.16±1.23)pg/mL、(47.67±11.67)pg/mL和(19.76±4.72)pg/mL,P0.01]差异均有统计学意义,其中哮喘组较对照组显著增高(P0.01),地塞米松组较哮喘组显著降低但仍显著高于对照组(P0.01)。对照组、哮喘组和地塞米松组CCL1mRNA表达(0.11±0.06、0.76±0.16和0.53±0.13,P0.01)、CCR8 mRNA表达(0.18±0.09、1.26±0.13和0.79±0.12,P0.01)差异均有统计学意义,其中哮喘组较对照组显著增高(P0.01),地塞米松组较哮喘组显著降低但仍显著高于对照组(P0.01)。结论CCL1/CCR8在哮喘小鼠肺组织中的基因表达增强。糖皮质激素可能通过减少CCL1/CCR8的基因表达,减轻哮喘气道炎症。     

转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子与大鼠膀胱出口梗阻后逼尿肌收缩功能障碍的关系

目的 探讨转化生长因子β1(TGFβ1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与大鼠膀胱出口梗阻(BOO)后逼尿肌收缩功能障碍的关系.方法 建立Wistar大鼠BOO模型(BOO 2周组11只;BOO 6周组10只),假手术组(8只)作为对照,测定离体逼尿肌肌条M受体激动剂刺激下收缩力,RT-PCR方法测定逼尿肌中TGFB1 mRNA、bFGF mRNA的表达,ELISA测定尿液中TGFβ1、bFGF 的水平.结果 在1×10-4、1×10-3 mmo/L氯化氨基甲酰胆碱(Carbachol)浓度下BOO 2周组的最大逼尿肌收缩力[(0.96±0.11)、(1.98±0.21)g]大于对照组[(0.85±0.18)、(1.82 ±0.19)g,均P＜0.05];大鼠在1×10-5、1×10-4、1×10-3和1 × 10-2 mmol/L Carbachol浓度下BOO 6周组的最大逼尿肌收缩力[(0.19 ±0.02)、(0.65 ±0.06)、(1.12 ±0.08)和(1.40 ±0.19)g]均小于BOO 2周组[(0.24±0.03)、(0.96 ±0.11)、(1.98 ±0.21)和(2.16 ±0.21)g,均P＜0.05]和对照组[(0.23 ±0.04)、(0.85 ±0.18)、(1.82 ±0.19)和(2.12 ±0.26)g,均P＜0.05].TGFβ1 mRNA在对照组、BOO 2周组、BOO 6周组逼尿肌的表达分别为0.32 ±0.01、0.34 ±0.10和0.72 ±0.21,后两组之间差异有统计学意义(P＜0.01);bFGF mRNA表达分别为0.10±0.05、0.21±0.07和0.38 ± 0.13,组间两两比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).离体逼尿肌收缩力与其TGFβ1 mRNA、bFGF mRNA表达水平呈负相关(均P＜0.05).BOO 6周组尿中TGFβ1表达[(606±216)μg/mol肌酐]明显高于BOO 2周组[(131 ±49)μg/mol肌酐]和对照组[(107 ±22)μg/mol肌酐,均P＜0.05].结论 逼尿肌bFGF mRNA表达随BOO进展持续升高,TGFβ1 mRNA在失代偿阶段表达才明显升高;尿液TGFβ1在大鼠BOO 6周时呈强表达,有可能成为预测BOO后逼尿肌收缩功能的指标.     

基于PKA依赖cAMP信号介导肺胃SP表达探讨中医肺胃相关理论的机制研究

目的观察胃食管反流模型大鼠肺、胃、食管组织中蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷(cAMP)、P物质(SP)的表达量,探讨中医肺胃相关理论的分子机制。方法将12只SD大鼠随机数字表法分为正常对照组(n=6)和模型组(n=6),模型组大鼠麻醉后经口插胃管至食管的中下段,以8滴/min的速率缓慢灌注0.1 mmol/L盐酸(含0.5%胃蛋白酶)溶液,每次20 min,1次/d,连续14 d。正常对照组采用PBS液代替,方法同模型组。提取食管、胃和肺组织标本进行病理学观察,用免疫组化法测定PKA、cAMP、SP表达,并将结果进行线性回归分析。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肺、胃及食管组织HE半定量评分显著升高[(3.67±0.52)分比(0.00±0.00)分、(3.83±0.41)分比(0.00±0.00)分、(3.83±0.41)分比(0.00±0.00)分,P均<0.01]。与正常对照组比较,模型组大鼠肺、食管、胃组织的PKA蛋白表达量[(0.23±0.02)比(0.15±0.01)、(0.22±0.02)比(0.17±0.02)、(0.24±0.02)比(0.16±0.01),P均<0.01]、cAMP蛋白表达量[(0.20±0.02)比(0.15±0.02)、(0.24±0.03)比(0.15±0.02)、(0.25±0.03)比(0.17±0.02),P均<0.01]、SP蛋白表达量[(0.21±0.02)比(0.15±0.01)、(0.25±0.03)比(0.14±0.02)、(0.33±0.04)比(0.18±0.02),P均<0.01]均显著升高。线性回归结果表明,模型组大鼠胃与肺组织的PKA和SP平均光密度呈线性相关。结论激活后的PKA/cAMP是促进肺胃组织释放SP的重要通路,可能介导了胃食管反流咳嗽的病理生理过程,是肺胃相关理论可能的分子机制之一。     

电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌Calponin和Caldesmon表达的影响

目的探讨电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌钙样蛋白(Calponin)和钙调结合蛋白(Caldesmon)表达的影响。方法 78只雌性Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组6只,模型组、电针组和假手术组各24只。采用腔内线栓法阻滞大鼠左侧大脑中动脉,制备脑梗死模型。电针组造模后即电针水沟穴20min,空白组、假手术组、模型组大鼠仅同样抓取固定。采用免疫印迹法检测各组大鼠造模后0.5、1、3、6h脑血管平滑肌Calponin和Caldesmon表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠1、3、6h脑血管平滑肌Calponin表达量下调[(0.68±0.17)比(0.89±0.12)、(0.40±0.17)比(0.89±0.08)、(0.32±0.01)比(0.97±0.06),P均0.05];与模型组比较,电针组大鼠3、6h脑血管平滑肌Calponin表达水平上调[(0.73±0.09)比(0.40±0.17)、(0.69±0.03)比(0.32±0.01),P均0.05];与假手术组比较,模型组大鼠1、3、6h Caldesmon表达水平下调[(0.70±0.06)比(1.04±0.16)、(0.61±0.24)比(0.82±0.08)、(0.51±0.19)比(0.83±0.04),P均0.05];与模型组比较,电针组大鼠1、3、6h Caldesmonn表达水平均上调[(0.80±0.10)比(0.70±0.06)、(0.73±0.06)比(0.61±0.24)、(0.60±0.06)比(0.51±0.19),P均0.05]。结论电针水沟穴可抑制脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌收缩关键蛋白Calponin和Caldesmon表达下调。     

右归饮对轻微中枢神经损伤模型大鼠海马组织细胞自噬表达的影响

目的观察右归饮对轻微中枢神经损伤模型大鼠海马组织细胞自噬相关基因和蛋白的表达,及海马组织细胞形态改变的影响。方法将48只SD雄性大鼠随机分为损伤模型组、右归饮组和空白对照组,每组16只。除空白组大鼠外,其余大鼠采用改良重物自由落体法进行轻微中枢神经损伤造模,造模结束后,右归饮组予右归饮(10g/kg体质量)进行灌胃,共持续4周。损伤模型组和空白对照组大鼠同时予等量的生理盐水灌胃。4周后处死所有大鼠,取出大鼠大脑海马组织,采用HE染色观察海马组织细胞形态学改变,以及免疫组化、QPCR检测自噬因子Beclin-1、LC3、mTOR的蛋白和mRNA表达量。结果 HE染色发现损伤模型组大鼠海马组织神经细胞数目稀少,排列紊乱,细胞边缘较为模糊,右归饮组大鼠海马组织细胞数目较损伤模型组多,排列较均匀,细胞边缘欠清晰。右归饮组大鼠自噬蛋白表达量与损伤模型组比较,差异有统计学意义[Beclin-1:(0.11±0.04)比(0.05±0.05),P0.01;LC3:(0.03±0.02)比(0.01±0.00),P0.01;mTOR:(0.03±0.03)比(0.09±0.04),P0.05];右归饮组大鼠自噬相关基因Beclin-1与LC3 mRNA表达量与损伤模型组比较也显著上调[Beclin-1:(1.06±0.21)比(0.34±0.11),P0.01;LC3:(1.75±0.21)比(1.12±0.09),P0.01],mTOR表达下调[(0.91±0.17)比(1.74±0.73),P0.01]。结论右归饮可以上调自噬的表达,减轻中枢神经细胞的破坏,缓解轻微中枢神经损伤的进展。     

阿魏酸钠对肺纤维化大鼠肺组织Smad4的影响及意义

目的观察阿魏酸钠对肺纤维化大鼠肺组织Smad4 mRNA表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用及机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、肺纤维化组和阿魏酸钠治疗组,每组10只。肺纤维化组和阿魏酸钠治疗组以气管内滴入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化动物模型,治疗组采用阿魏酸钠(150mg/kg体重)灌胃治疗。苏木精-伊红染色检测肺组织病理改变;免疫组化检测Ⅰ型胶原纤维;原位杂交检测Smad4 mRNA的表达。结果与对照组比较,肺纤维化组Ⅰ型胶原纤维(0.97±0.34比0.27±0.08,P<0.001)和Smad4 mRNA(0.17±0.10对0.07±0.03,P<0.01)的表达均显著增高。阿魏酸钠治疗组与肺纤维化组比较,Ⅰ型胶原纤维(0.39±0.25比0.97±0.34,P<0.001)和Smad4mRNA(0.11±0.03对0.17±0.10,P<0.05)的表达均显著降低。结论阿魏酸钠可能通过抑制大鼠肺组织Smad4 mRNA的表达,从而具有抗肺纤维化的作用。     

基于DA受体cAMP-PKA信号通路探讨加味当归芍药散治疗HPRL大鼠的机制

目的研究加味当归芍药散治疗高泌乳素血症(HPRL)大鼠的机制。方法 96只雌性SD大鼠采用随机数字表分为空白组,模型组,阳性组,高、中、低浓度组,每组16只,经背部皮下注射甲氧氯普胺液,制造HPRL模型,5天后造模成功,定时定量给药30天后立即处死取材,采用免疫组化法检测下丘脑多巴胺D1受体(DRD1)、D2受体(DRD2)、蛋白激酶A(PKA)的表达,酶联反应法(Elisa)检测各组大鼠血泌乳素(PRL)、多巴胺(DA)、环磷酸腺苷(cAMP),实时荧光定量PCR检测各组HPRL模型大鼠下丘脑多巴胺D1受体mRNA (DRD1 mRNA)、多巴胺D2受体mRNA(DRD2 mRNA)。结果与模型组相比,中高浓度组PRL水平降低[(260.12±4.814)、(241.98±8.351)比(332.18±9.472)](P0.05),cAMP水平显著性降低[(1.05±0.427)、(0.89±0.745)比(1.37±0.002)](P0.01),DA表达数量升高[(41.53±6.19)、(50.69±3.28)比(14.87±5.12)](P0.05),三组不同浓度中药组与模型组比较,PKA活性明显降低,且低浓度组略高于高浓度组[(0.30±0.024)、(0.23±0.061)、(0.20±0.034)比(0.51±0.037),(0.30±0.024)比(0.20±0.034)](P0.05);DRD1 mRNA表达各浓度组无差异、DRD2 mRNA表达增高且高浓度组表达量明显高于低浓度组[(0.20±0.322)比(0.11±0.700),P0.05];与模型组比,DRD1有增高趋势,DRD2除了低浓度组数量略增高[(0.34±0.040)比(0.41±0.019),P0.05],其余均明显增高(P0.01)。结论加味当归芍药散可能作用于DRD2通过cAMPP-PKA信号通路发挥治疗高泌乳素血症模型大鼠的作用。     

早孕母胎界面固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达

【目的】 明确早期妊娠母胎界面中固有模式识别受体NOD1/NOD2的表达情况?【方法】 分别用免疫组织化学法及Real-Time PCR法检测12例早孕期绒毛及蜕膜组织中NOD1/NOD2表达?【结果】免疫组织化学结果显示绒毛组织中NOD1/NOD2主要定位于绒毛滋养细胞胞质中,蜕膜组织也检测到NOD1/NOD2分子的表达?在mRNA水平上,绒毛组织中NOD1/NOD2的表达量高于蜕膜基质细胞(DSC),分别为P = 0.03和P = 0.009;DSC中NOD1的表达量高于NOD2,P = 0.029,差异具有显著性?绒毛组织中NOD2的表达高于NOD1,差异无统计学意义(P > 0.05)?【结论】 NOD1/NOD2在早孕期母胎界面中绒毛组织有表达,可能参与胚泡的着床?     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路研究南葶苈子水提液对心力衰竭模型大鼠心室重构的影响

目的观察南葶苈子水提液对压力后负荷性心衰模型大鼠心室重构的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR信号通路在其中的作用。方法雄性SD大鼠15只,按随机数字表法分为正常组、模型组和南葶苈子组,每组5只。SD大鼠心力衰竭动物模型建立后,正常组及模型组大鼠给予5mL·kg~(-1)·d~(-1)生理盐水灌胃,葶苈子组大鼠给予南葶苈子水提液10g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,共4周。4周后处死大鼠,测定各组大鼠心室肥厚指数;HE染色法和电镜观察心室组织病理变化;Western blot检测各组大鼠左心室心肌组织Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果南葶苈子组大鼠心室肥厚指数较模型组降低[(0.0033±0.0002)比(0.0037±0.0001),P0.05];HE染色和电镜显示,南葶苈子组心肌纤维排列不规则和心肌细胞肥厚程度较模型组减轻;Western blot证实,南葶苈子组大鼠Bcl-2/Bax蛋白表达灰度值较模型组上调[(0.75±0.20)比(0.54±0.18),P0.05];Caspase-3/GAPDH蛋白表达灰度值较模型组下调[(1.31±0.22)比(1.62±0.26),P0.05];p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白表达灰度值较模型组上调[p-Akt/Akt:(1.50±0.18)比(1.18±0.21),P0.05;p-mTOR/mTOR:(1.36±0.32)比(1.16±0.12),P0.05]。结论南葶苈子水提液能改善压力后负荷性心衰模型大鼠心室重构,其作用机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞凋亡有关。