阿魏酸钠对肺纤维化大鼠肺组织Smad4的影响及意义

目的观察阿魏酸钠对肺纤维化大鼠肺组织Smad4 mRNA表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用及机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、肺纤维化组和阿魏酸钠治疗组,每组10只。肺纤维化组和阿魏酸钠治疗组以气管内滴入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化动物模型,治疗组采用阿魏酸钠(150mg/kg体重)灌胃治疗。苏木精-伊红染色检测肺组织病理改变;免疫组化检测Ⅰ型胶原纤维;原位杂交检测Smad4 mRNA的表达。结果与对照组比较,肺纤维化组Ⅰ型胶原纤维(0.97±0.34比0.27±0.08,P<0.001)和Smad4 mRNA(0.17±0.10对0.07±0.03,P<0.01)的表达均显著增高。阿魏酸钠治疗组与肺纤维化组比较,Ⅰ型胶原纤维(0.39±0.25比0.97±0.34,P<0.001)和Smad4mRNA(0.11±0.03对0.17±0.10,P<0.05)的表达均显著降低。结论阿魏酸钠可能通过抑制大鼠肺组织Smad4 mRNA的表达,从而具有抗肺纤维化的作用。     

屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定

目的探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析。方法逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增培养后测序鉴定正确后大量表达;采用亲和层析法纯化表达产物,免疫印迹(Western blot)法鉴定其过敏原性;生物信息学方法分析其基因的同源性。结果 RT-PCR显示Der p7基因片段大小约700 bp;大量表达后进行的SDS-PAGE电泳分析显示,Der p7蛋白表达于沉淀物中,以包涵体蛋白为主,分子质量约39 kDa。Western blot显示该重组基因所表达的蛋白可与尘螨过敏患者的血清起反应,表明该重组蛋白具有过敏原性。生物信息学分析显示克隆的Der p7基因与Der f7基因的同源性约79.14%。结论本实验成功获得大量表达及纯化后具有过敏原性的Der p7蛋白,对临床上完善对过敏性疾病的检测与治疗具有积极的意义。     

腐食酪螨Tyr p 13克隆表达、纯化及免疫鉴定

目的 克隆腐食酪螨第13组变应原基因(Tyr p 13),表达纯化其重组蛋白,并进行免疫学特性鉴定,利用生物信息学软件分析该过敏原抗原表位等信息。方法 挑取腐食酪螨,提取螨总RNA。逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增cDNA,根据已知的Tyr p 13基因序列(GeneBank登录号 AY710432.1)设计引物,PCR大量扩增目的基因。构建原核表达载体pET-32a(+)-Tyr p 13,转化感受态细胞E. coli Rosetta (DE3),用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导目的蛋白表达;层析纯化表达产物,免疫印迹(Western Blot)法检测纯化后的表达产物免疫学活性;通过生物信息学软件推测其抗原表位、构建进化树。结果 克隆得到的序列经基因测序可知其长度约400 bp,其表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分子量约为14 kD,呈可溶性表达。免疫印迹结果显示,Tyr p 13能够与过敏患者血清IgE特异性结合,表明其具有过敏原性;表位分析进一步证实该过敏原具有免疫原性。结论 经克隆表达、纯化后得到纯度较高的腐食酪螨Tyr p 13,为进一步开展临床特异性诊断和治疗提供参考。     

麻黄调控哮喘豚鼠气道炎症的作用

支气管哮喘是一种由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症疾患。麻黄的舒张支气管作用及其机制已研究明确,但麻黄对哮喘气道炎症的作用及其机制尚未见报道。为了评价麻黄在调控哮喘气道炎症的作用并探索其机制,我们对哮喘豚鼠采用麻黄煎剂灌胃处理,并测定各组豚鼠支气管肺泡灌     

麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞STAT1信号传导影响

目的探讨麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症和气道上皮细胞信号转录因子与转录活化因子1（STAT1）表达水平及其信号传导途径的调控作用。方法将36只豚鼠随机分为三组：哮喘组、麻黄煎剂组及生理盐水组（正常对照组），每组各12只。用卵蛋白腹腔注射致敏及雾化吸入激发建立哮喘模型，给予麻黄水煎剂干预治疗。用ELISA法测定其支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-5（IL-5）浓度，用SABC免疫组化测定气道上皮细胞STAT1表达，同时观察BALF炎性细胞数及豚鼠肺组织病理学改变，分析其相关性。结果麻黄煎剂组豚鼠肺内炎症改变明显减轻，其BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、IL-5浓度，明显低于哮喘组，两组比较差异有显著性，哮喘组BALF中IL-5含量与支气管上皮细胞STAT1表达均明显升高，且呈正相关关系，但麻黄煎刺组STAT1的表达与哮喘组比较差异无显著性。结论麻黄水提物对哮喘豚鼠气道炎症有明显的调控作用，其作用机制可能与抑制IL-5的表达和炎性细胞聚积有关，但麻黄不能有效抑制STAT1的表达和信号传导异常。     

虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺TGFβ1及其信号通路分子mRNA表达的影响

目的观察虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺转化生长因子beta1(TGFβ1,)及其信号通路分子mRNA表达的影响,以探讨虫草菌粉调控肺纤维化胶原代谢失衡的机制及作用靶点.方法取健康SD大鼠60只,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,于14天及28天取大鼠肺组织,运用组织芯片结合图像分析技术,通过苏木素-伊红(HE)及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,以免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白含量及原位杂交技术对转化生长因子βⅡ型受体(TGFβR Ⅱ)及smad4的mRNA表达进行定位定量分析,用实时荧光定量RT-PCR技术检测TGFβ1mRNA的表达.结果虫革菌粉在两时相皆有抑制TGFβ1 mRNA表达上调之作用(与内参校正值分别从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051,P＜0.05),而对TGFβⅡR及smad4mRNA的表达上调无明显影响(P＞0.05).结论虫草菌粉具有抑制胶原纤维过度沉积的作用,其机制可能为抑制TGF-β1mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smad,信号通路对靶基因的激活而实现的.     

肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织糖皮质激素受体的表达

目的探讨糖皮质激素受体(GR)mRNA在肾阳虚肺纤维化和肺纤维化大鼠肺组织的表达及其意义。方法60只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及肾阳虚肺纤维化组(RYA),每组再分成两亚组,每亚组10只,用博莱霉素气管内滴入及腺嘌呤灌胃复制肺纤维化及肾阳虚肺纤维化大鼠模型,于14 d及28 d取大鼠肺组织,运用组织芯片,通过HE及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,通过原位杂交(ISH)对肺组织GRmRNA表达进行定位定量分析。结果14 d时,肾阳虚组及肺纤维化组GRmRNA表达皆呈上调趋势,但无统计学意义(P>0.05);28 d时,BLM组GRmRNA表达明显上调,与BLM组比较,RYA组GRmRNA表达则明显下调(P<0.05)。结论肺组织GRmRNA表达的上调是糖皮质激素防治肺纤维化之所以有效的机理之一,而肾阳虚状态下肺纤维化肺组织GRmRNA表达下调是临床上许多肺纤维化病人对糖皮质激素不敏感的原因之一,同时,温阳药也极可能具有防治肺纤维化的作用。     

补肾通窍治疗功能性不射精65例

功能性不射精是男性性功能障碍的常见病之一,影响夫妻感情,作者以补肾通窍中药治疗65例疗效较好,现报道如下。1临床资料1．1一般资料：124例中,22～25岁29例,26～30岁76例,31～35岁19岁,36～38岁10例;病程3个月～l年47例,2～3年56例,4～5年9例;原发性功能性不射精112例,继发性功能性不射精12例;有遗精史109例,有手淫射精史15例。分为中药组65例,西药组59例,两组年龄、病程无明显差异,具有可比性。1．2诊断标准：①性刺激后有性兴奋,阴茎勃起,性交正常,但无性高潮而不射精,阴茎退出阴道后痿软;②有造精或手淫射精史;…     

虫草菌粉调控肺纤维化大鼠肺胶原代谢失衡的作用及其机制

目的探讨虫草菌粉(CS)对肺纤维化肺胶原代谢失衡的调控作用及其机制。方法 60只健康SD大鼠,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组20只,再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,分别于14 d和28 d取大鼠肺组织,运用组织芯片,进行胶原纤维染色及免疫组化和原位杂交分别定量肺内胶原蛋白、I型胶原和转化生长因子βⅡ型受体(TGFβⅡ)及Smad4 mRNA,同时,运用实时荧光定量RT-PCR检测I型前胶原α链[ProcolIα1(1)]和转化生长因子(TGFβ1)mRNA的表达。结果虫草菌粉对两时相的胶原(IOD分别从0.549 2±0.210 5和0.957 8±0.375 6降至0.284 9±0.169 7和0.411 1±0.220 0)及28 d的I型胶原皆有明显抑制其过度沉积之作用(P<0.05),对两时相TGFβ1mRNA表达(从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157分别降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051)也有明显抑制作用(P<0.05),但对ProcolIα1(1)、TGFβRII及Smad4 mRNA表达无明显影响(P>0.05)。结论虫草菌粉在肺纤维化胶原代谢失衡中具有调控作用,能抑制胶原纤维的过度沉积,尤其是I型胶原的过度沉积,其作用机制可能为抑制TGF-β1 mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smads信号通路对靶基因的激活而实现的。     

哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT1)的表达及动态变化,探讨STAT1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响.方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0 h、24 h、72 h、5 d,以及地塞米松治疗后第5 d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量, 酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT1表达.结果豚鼠在诱喘后各个时相(0 h、24 h 、72 h及5 d) BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P＜0.001).气道上皮细胞中STAT1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P＜0.001; r=0.692,P＜0.01) .地塞米松能抑制上皮细胞STAT1表达(5 d与治疗组相比,P＜0.01).BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT1表达呈负相关(r=-0.499,P＜0.05).结论支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系.