献血员HBsAg筛查的安全性和病毒变异分析

目的探讨国内血站对献血员乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）筛查的安全性和可靠性。方法收集经血站筛查HBsAg阴性的合格献血员血浆983份,用雅培Architect12000电化学发光仪定量检测HBsAg;巢式PCR扩增乙肝病毒S区、C区、X区。诊断为隐匿性乙肝病毒感染者,巢式PCR扩增病毒PreS／S区,产物直接测序并与标准病毒序列对比分析病毒株变异。结果经雅培Architect I2000复检HBsAg弱阳性率为6．5％（64／983）,HBsAg滴度中位数为0．171U／ml;60．9％（39／64）病毒两个区扩增阳性,4．0％（39／983）健康献血员为隐匿性HBV携带者;35．9％（14／39）病毒PreS／S区段扩增阳性,未发现“a”决定簇内的变异株。结论目前经血站常规检测ItBsAg为阴性的合格血液用敏感性更高的试剂仍能检测出HBsAg及HBV DNA。     

乙型肝炎病毒前S2抗原、核心抗体IgM与其五项指标联合检测的意义

目的探讨乙肝病毒前S2抗原（PreS2-Ag）、乙肝病毒核心抗体IgM（HBcAb-IgM）与乙肝五项指标联合检测的临床意义。方法采用ELISA法对618例标本进行乙肝五项指标和PreS2-Ag及HBcAb-IgM检测。结果乙肝五项指标中HBeAg阳性率最低（3.56%）,HBsAg阳性率较高（8.25%）,HBcAb阳性率最高（43.37%）。PreS2-Ag的阳性率（6.63%）高于HBeAg而低于HBsAg。在HBsAg阳性组中,PreS2-Ag阳性率为80.39%,HBsAg阴性组中无1例PreS2-Ag阳性。PreS2-Ag在“大三阳”组中阳性率为90.91%（10/11）,在“小三阳”组中阳性率为95.23%（20/21）,在“双阳”组（HBsAg、HBcAb阳性）中阳性率为58.33%（7/12）。HBcAb-IgM的阳性率较低（0.49%）。结论PreS2-Ag比HBeAg更敏感地反映了病毒的复制情况,PreS2-Ag、HBcAb-IgM与乙肝五项指标联合检测并利用s/co值能更好地对HBV感染者进行临床分析。     

前S1蛋白在乙型肝炎病毒检测中的临床意义

目的观察PreS1与HBeAg及HBV-DNA的相关性,探讨PreS1在乙肝病毒检测中的临床意义及实验室诊断价值.方法收集急、慢性乙型肝炎患者、HBsAg携带者和正常人体检的血清388份,检测Pre S1、HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、HBV-DNA,并分析Pre S1与乙肝病毒血清指标相关性.结果在388份血清中,HBeAg阳性血清85份,Pre S1阳性68例,阳性率80.0%;HBeAg阴性血清121份,Pre S1阳性40例,阳性率33.1%中,抗-HBe阳性血清88份,Pre S1阳性29例,阳性率32.9%;HBV-DNA阳性血清198份,PreS1阳性152例,阳性率76.8%.结论在HBsAg、HBeAg抗原抗体系统及HBV-DNA对HBV病毒的实验室检测中,Pre S1可以补充表达HBV病毒的活动性,提高HBV病毒感染复制及在发生变异时的检出率.     

前S1蛋白在乙型肝炎病毒检测中的临床意义

目的观察PreS1与HBeAg及HBV-DNA的相关性,探讨PreS1在乙肝病毒检测中的临床意义及实验室诊断价值.方法收集急、慢性乙型肝炎患者、HBsAg携带者和正常人体检的血清388份,检测Pre S1、HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、HBV-DNA,并分析Pre S1与乙肝病毒血清指标相关性.结果在388份血清中,HBeAg阳性血清85份,Pre S1阳性68例,阳性率80.0%;HBeAg阴性血清121份,Pre S1阳性40例,阳性率33.1%中,抗-HBe阳性血清88份,Pre S1阳性29例,阳性率32.9%;HBV-DNA阳性血清198份,PreS1阳性152例,阳性率76.8%.结论在HBsAg、HBeAg抗原抗体系统及HBV-DNA对HBV病毒的实验室检测中,Pre S1可以补充表达HBV病毒的活动性,提高HBV病毒感染复制及在发生变异时的检出率.     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

雅培Architect i2000,罗氏E170模块分析对血清乙型肝炎病毒标志物检测的比较

乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物是流行病学筛查和HBV感染临床诊断的重要数据。为比较不同方法对于乙肝标志物的检测性能,我们采用罗氏Modular Analytics E170仪器、雅培Architect i2000仪器和放射性免疫分析（IRMA）等3种方法,分别检测264例血清样本中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、263例血清样本中的表面抗体（anti-HBs）、224例血清样本中的e抗原（HBeAg）和202例血清样本中的e抗体（anti-HBe）,不同方法检测HBeAg的矛盾结果由定量PCR来确定。结果显示,3种方法检测的一致率很高,分别达到100%（HBsAg）,94.6%（anti-HBs）,91.6%（HBeAg）和82.2%（anti-HBe）。罗氏E170模块和雅培Architect i2000可对anti-HBs定量,低水平anti-HBs样本可观察到不符结果;3种方法检测anti-HBe的阳性率分别为Modular E170（60.9%）,IRMA试剂盒（54.1%）和Architect i2000（51.0%）。     

前S1蛋白与乙肝两对半各模式的相关性及其临床意义

目的 探讨PreS1与乙肝两对半(HBV免疫标志物)的相互关系、评价其临床义.方法 我们采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对247例携带乙型肝炎病毒不同标志物的急慢性乙型肝炎患者PreS1与HBV血清标志物进行比较.结果 乙肝病毒表面抗原(HBsAg)乙肝病毒e抗原(HBeAg)乙肝病毒核心抗体(HBcAb)阳性组PreS1的阳性率为87.1%,HBsAg和HBeAg阳性组PreS1的阳性率为77.7%,HBsAg抗HBe抗HBc阳性组中PreS1阳性率为52.8%,说明部分HBeAg阴性患者仍有病毒复制.结论 前S1蛋白在HBV感染早期就可检出,它能敏感地反映乙型肝炎病毒的复制情况,有助于乙型肝炎的诊断.     

自建两轮PCR法对低载量HBV DNA S区基因的扩增及实验条件优化

目的 探究低载量HBV DNA S区基因扩增的可行性并对实验条件进行优化,为隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV DNA S区基因突变检测提供依据.方法 采用传统巢式PCR和自建两轮PCR方法扩增6例低HBV DNA载量(100～200 IU/mL)和22例更低HBV DNA载量(20～99 IU/mL)的血清样本中HBV DNA S区基因,并对引物序列、引物量、PCR产物模板稀释倍数、退火温度、PCR反应循环数、PCR总反应体系等条件进行优化.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,切割目的条带凝胶进行克隆测序,然后对克隆测序结果进行核酸序列BLAST比对确认.结果 设计3对巢式PCR引物(P1～P3),扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化后,6例低HBV DNA载量的血清样本中仅2例经巢式PCR扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,22例更低HBV DNA载量样本无一例扩增成功.自建两轮PCR法设计了P4～P15共12对引物,扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化并筛选出P13为最佳引物后,6例低HBV DNA载量的血清样本全部扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列;15例(15/22,68.18％)更低HBV DNA载量的样本扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,经PCR产物克隆测序均证实为HBV DNA S区基因,该15例样本中HBV DNA载量最低为20.1 IU/mL.结论 基于引物P13自建的两轮PCR法更适用于低载量HBV DNA S区基因的扩增,扩增效率和特异性均优于传统巢式PCR;扩增产物可进一步应用于OBI者HBV DNA S区基因序列突变分析.     

乙型肝炎表面抗原阳性学生及其一级亲属乙型肝炎病毒感染流行病学调查与病毒变异分析

目的 探讨乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性学生家庭内乙型肝炎病毒（HBV）感染状况以及肝细胞癌相关的HBV变异情况,为HBV感染、肝细胞癌的防控提供科学依据。方法 从浦东新区15个学校及幼儿园60个班级中调查学生1 611名,其中HBsAg阳性学生8名。对该8名学生及其18名一级亲属进行流行病学调查,采集静脉血应用酶联免疫吸附实验检测乙肝五项。采用荧光PCR法检测HBV DNA,采用multiplex-PCR、巢式PCR法联合克隆测序方法检测HBV基因组、基本核心启动子（BCP）区和前S（PreS）区。结果 一级亲属HBsAg与HBcAb阳性率分别为33.3%（6/18）与38.9%（7/18）。母亲HBsAg与HBcAb阳性率均为71.4%（5/7）,高于其他一级亲属阳性率（P<0.05）。8个家庭中7个家庭（87.5%）有2人及2人以上HBV感染或曾经感染,8个家庭共26名家庭成员中14人HBsAg阳性,阳性率为53.8%。共检测了4组母亲和子女的HBV基因,其中3组HBV基因为C型,1组母亲为C型、子女为B型;在肝细胞癌相关HBV变异中,子女的BCP区热点突变频率低于母亲,PreS区C型有8个变异位点在母亲和子女体内均表达、其余关键位点均未在子女体内发现。结论 HBV感染存在明显的家庭聚集性;此次调查结果显示学生HBV感染通过母婴传播可能性较大,但也存在后天血液传播等方式感染;子女HBV基因进化程度低于母亲,符合HBV进化的规律。     

乙肝患者前S1抗原前S2抗原与HBV—DNA和HBV—M的相关性分析

目的分析乙型肝炎患者前s1抗原（PreS1-Ag）、前s2抗原（PreS2-Ag）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）和血清标志物（HBV—M）之间的相关性。方法用酶联免疫法（ELISA）检测658例乙肝患者血清PreS1-Ag、PreS2-Ag和HBV-M,荧光定量PCR法检测HBV—DNA。结果乙肝病毒血清标志物HBV—M4种阳性模式组PreS1-Ag、PreS2-Ag、HBV—DNA的总阳性率分别为65．81％,59．27％,71．28％。在319例HBeAg阳性模式组,PreS1-Ag、PreS2-Ag、HBV—DNA阳性分别为281、236、297例,阳性检出率为88．09％,73．98％,93．10％,与HBeAg阴性组比较,阳性率差异具有统计学意义（P〈0．01）。HBV—DNA阳性组与HBV-DNA阴性组PreS1-Ag、PreS2-Ag、HBeAg阳性率比较,差异具有显著性（均P〈0．01）。结论前S1抗原、前S2抗原与HBV—DNA和HBeAg检测有显著相关性和互补性。提示前S1抗原、前S2抗原能够较好地反映病毒复制状况,可作为检测HBV复制新的血清标志物。     

乙肝病毒前S1抗原与乙肝血清标志物及HBV-DNA的相关性分析

目的：分析乙肝病毒前S1抗原（PreS1-Ag）与乙肝血清标志物、HBV-DNA的相关性,探讨PreS1-Ag检测在乙肝诊断中的意义。方法：分别采用ELISA、PCR的方法对328例乙肝患者进行HBV血清标志物、前S1抗原及HBV-DNA的检测。结果：在HBsAg（＋）HBeAg（＋）HBcAb（＋）、HBsAg（＋）HBeAg（＋）的模式下,HBV-DNA、PreS1-Ag的检出率分别为86.8%、85.8%和100.0%、100.0%,两者的检出率间差异无统计学意义（P〉0.05）,在HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）、HBsAg（＋）HBcAb（＋）及HBsAg（＋）HBeAb（＋）的模式下,HBV-DNA、PreS1-Ag的检出率分别为43.2%、45.8%;47.3%、46.1%;10.0%、10.0%。在HBV-DNA（＋）情况下,PreS1-Ag的阳性率为86.9%,HBV-DNA和PreS1-Ag的阳性率也比较吻合。结论：PreS1-Ag与乙肝血清标志物及HBV-DNA密切关联,能够很好的反映乙肝病毒的复制及传染性,对于乙肝的诊治具有指导意义。     

PreS1Ag与HBcAg检测在诊断乙肝病毒复制的意义

目的分析乙型肝炎病毒（HBV）前S1抗原（PreS1Ag）、核心抗原（HBcAg）与HBV DNA之间的关系,探讨对判断乙肝病毒的复制与指导乙肝的治疗的意义。方法收集门诊和住院乙型病毒性肝炎患者血清标本435例,检测血清乙肝标志物（两对半）、PreS1Ag、HBcAg及HBV DNA,统计分析其中的HBV DNA≥103拷贝/ml（HBV DNA阳性）的393例。结果在HBV DNA阳性393份标本中PreS1Ag、HBcAg和HBeAg表达阳性率分别为83.7%（329/393）,44.3%（174/393）与52.5%（205/393）。PreS1Ag的阳性表达率最高,与HBcAg和HBeAg的表达阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）。而HBcAg和HBeAg的表达阳性率无统计学差异（P〉0.05）,PreS1Ag阳性标本中的,HBcAg阳性和阴性百分率的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论检测PreS1Ag和HBcAg与HBV DNA关系密切,反映乙肝病毒复制状况。建议在传统两对半的基础上联合检测PreS1Ag和HBcAg。     

不同人群隐匿性乙型肝炎病毒感染检测分析

目的：探讨不同人群隐匿性乙型肝炎病毒（HBV）感染情况及ELISA检测血清HBsAg阴性的原因。方法：采用巢式聚合酶链反应（PCR）检测150例健康献血员、263例健康体检自然人群和21例不明原因肝炎患者血清HBV DNA。用电化学发光免疫技术对检测出的隐匿性HBV感染者血清HBsAg进行定量测定。结果：隐匿性乙型肝炎病毒感染率分别为1．3％、4．2％和38．1％。电化学发光免疫技术检测隐匿性HBV感染者血清HBsAg,未检出有5例,在0．05ng／ml～0．1ng／ml有7例,0．1ng/ml～0．5ng／ml有6例,0．5ng/ml～10ng/ml有2例。结论：隐匿性HBV感染在不同人群中广泛存在。血清HBsAg阴性的机制主要是HBV复制和基因表达的严重抑制,以及HBV基因突变。     

隐匿性HBV感染者血清中HBVS基因变异分析

目的分析隐匿性HBV感染者的HBV DNA基因序列,查找基因变异位点,探讨隐匿性HBV感染的分子生物学机制。方法选择不明原因肝病患者76例,分离患者血清,采用巢式PCR检测患者血清HBV DNA,阳性者随机抽取8例扩增nt56-nt767 HBV S区DNA片段并采用直接测序法检测S区基因的变异情况。结果本组76例不明原因肝病患者中16例血清HBV DNA阳性,随机选择8例测序比对发现,a决定簇内nt587出现G→A的突变,推导氨基酸由甘氨酸变异为精氨酸,即较为常见的G145R突变。a决定簇外nt355、nt484碱基均由A→C,推导氨基酸无变化,nt512碱基由C→A,推导氨基酸由脯氨酸变异为苏氨酸。结论 HBV S区的变异影响了体内HBV清除,导致病毒的低水平复制,其中G145R突变是隐匿性HBV感染发生的原因之一。     

乙肝病毒前S1蛋白与乙肝病毒两对半联合检测的临床意义

目的:通过分析HBsAg阳性血清中乙型肝炎病毒前S1蛋白与乙肝两对半常见模式和乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)的关系,以探讨前S1蛋白与乙肝两对半联合检测的临床意义。方法:用ELISA法检测243例HBsAg阳性血清前S1蛋白与乙肝两对半标志物,同时用荧光定量PCR技术检测HBV-DNA的含量。结果:在HBV不同血清型感染模式(HBV-M)中,HBeAg阳性血清中PreS1、HBV-DNA阳性率分别为81.8%(63/77)、90.9%(70/77);HBeAg阴性血清中PreS1、HBV-DNA阳性率分别为49.4%(82/166)、55.4%(92/166)。结论:前S1蛋白与HBV-DNA,是乙肝病毒感染、复制、传染的敏感标志,可弥补乙肝两对半的不足,有助于临床诊断、治疗及疗效观察。在不具备HBV-DNA检测设备的情况下,使用简单准确,价格低廉的PreS1检测并联合乙肝两对半的检测,对HBV的防治具有重要的临床价值。     

乙型肝炎病毒“a”决定簇的变异对HBsAg定量的影响

目的为了明确乙型肝炎病毒"a"决定簇的变异对乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)定量的影响。方法收集广州血液中心无偿献血者的乙肝HBsAg阳性血清标本,共41例;采用时间分辨免疫荧光法对乙肝HBsAg进行定量,根据HBsAg定量结果将标本分为两组:低HBsAg组(0.05~100 IU/mL)和高HBsAg组(100 IU/mL);提取乙型肝炎病毒DNA,采用高灵敏度巢式PCR扩增病毒DNA的S区,对S区"a"决定簇氨基酸序列进行比对。结果 41例乙肝HBsAg阳性标本中,以B基因型为主,占75.6%;C基因型占24.4%;对HBV病毒S区"a"决定簇氨基酸置换位点和置换率进行分析,没有发现低HBsAg组(0.05~100 IU/mL)和高HBsAg组(100 IU/mL)存在特异性的氨基酸置换位点。低HBsAg组与高HBsAg组S区中"a"决定簇的氨基酸置换率相比差异无统计学意义(P0.05)。结论乙肝病毒"a"决定簇的变异并不是影响HBsAg定量的主要因素。     

乙型肝炎病毒前S2抗原、核心抗体IgM与其五项指标联合检测的意义

目的 探讨乙肝病毒前S2抗原(PreS2-Ag)、乙肝病毒核心抗体IgM(HBcAb-IgM)与乙肝五项指标联合检测的临床意义.方法 采用ELISA法对618例标本进行乙肝五项指标和PreS2-Ag及HBcAb-IgM检测.结果 乙肝五项指标中HBeAg阳性率最低(3.56%),HBsAg阳性率较高(8.25%),HBcAb阳性率最高(43.37%).PreS2-Ag的阳性率(6.63%)高于HBeAg而低于HBsAg.在HBsAg阳性组中,PreS2-Ag阳性率为80.39%,HBsAg阴性组中无1例PreS2-Ag阳性.PreS2-Ag在"大三阳"组中阳性率为90.91%(10/11),在"小三阳"组中阳性率为95.23%(20/21),在"双阳"组(HBsAg、HBcAb阳性)中阳性率为58.33%(7/12).HBcAb-IgM的阳性率较低(0.49%).结论 PreS2-Ag比HBeAg更敏感地反映了病毒的复制情况,PreS2-Ag、HBcAb-IgM与乙肝五项指标联合检测并利用s/co值能更好地对HBV感染者进行临床分析.     

HBV-DNA含量升高患者血清PreS1抗原和其他标志物相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与HBV-DNA、HBV血清标志物(HBV-M)和ALT之间的相关性和临床应用价值。方法收集380例荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量升高患者血清,用酶联免疫法(ELISA)检测乙肝病毒前S1抗原和HBV血清标志物、用速率法检测ALT。结果380例HBV-DNA含量升高乙肝患者中,PreS1的阳性率为84.6%,HBeAg阳性率为67.8%,两者比较差异有统计学意义(P<0.005);在各种模式HBV血清标志物中,HBeAg阳性组PreS1阳性率和ALT异常升高与HBeAg阴性组比较,差异有统计学意义(P<0.05);随着HBV-DNA含量的增加,HBeAg和PreS1的阳性率也增加,HBV-DNA拷贝数为5×102～1×105范围时,PreS1的阳性率高于HBeAg阳性率(P<0.005),当HBV-DNA拷贝数高于1×105时,HBeAg阳性率与PreS1阳性率相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论乙肝病毒前S1抗原和HBeAg两者阳性率与HBV-DNA含量密切关联,乙肝病毒前S1抗原检测可作为乙肝病毒复制、传染性及肝细胞损伤的指标,同时也可用于指导临床由于病毒变异和其他原因造成HBeAg阴性乙肝患者的诊断和治疗。     

乙肝病毒前S1、S2抗原检测的临床应用

目的:对乙型肝炎病毒前S1(PreS1)、前S2(PreS2)抗原检测的临床应用价值进行探讨。方法:采用ELISA法检测500例乙肝患者和120例健康体检者乙肝血清标志物(HBV M)、PreS1、PreS2抗原;采用PCR法检测HBV DNA。结果:发现500例HBsAg阳性病例中,前S1抗原的阳性率是73.2%,前S2抗原的阳性率是72.2%;HBeAg阳性组中的前S1看抗原的阳性率和前S2抗原的阳性率均比HbeAg阴性组明显高;PreS1、PreS2抗原在HBV DNA(+)组中的检出率分别高于HBV DNA(-)组。结论:认为PreS1、PreS2抗原与HBeAg具有很好的一致性,与HBV病毒颗粒密切相关,具有重要的诊断价值。     

不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染的研究

目的了解不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染的情况及与临床的关系。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测89例不明原因肝病患者血清乙肝病毒标志物（HBVM）,应用巢式PCR方法检测血清中HBVDNA。结果 89例不明原因肝病患者中,HBVDNA阳性18例。其中,HBVM全阴性3例,抗HBc阳性14例,抗HBe＋抗HBc阳性1例。隐匿性HBV感染者中,慢性肝炎5例,占10.41%（5/48）;肝硬化者12例,占38.9%（12/37）;肝癌1例,占25%（1/4）。结论不明原因肝病患者中隐匿性HBV感染率为20.22%,并与肝硬化关系密切。