射频消融治疗对残癌细胞增殖能力的影响

目的探讨射频消融（radio frequency ablation,RFA）治疗后残余肿瘤细胞的增殖情况。方法VX2肿瘤组织块接种于新西兰兔肝脏,建立种植型肝脏肿瘤模型,2周后行RFA治疗,通过控制肿瘤边缘的温度,人为造成肿瘤残余。实验动物分实验组及对照组,实验组动物脾脏接种残癌组织,对照组动物脾脏接种未经RFA处理的VX2肿瘤组织,术后2、3、4周观察脾脏肿瘤体积、质量并测定肿瘤细胞的增殖指数。结果术后2周对照组肿瘤体积、质量大于实验组;术后3、4周两组间肿瘤体积及质量比较差异无统计学意义;术后2、3、4周肿瘤细胞的增殖指数无差别。结论射频消融治疗对残余肿瘤细胞的增殖无明显影响。     

射频消融对兔肝癌模型细胞凋亡的影响

目的　射频消融治疗肝脏肿瘤的机制目前尚不明了 ,我们通过本实验观察射频治疗后兔肿瘤模型及临床肝癌病例的分子生物学改变。方法　实验兔 3 2只制成VX2 细胞肝癌模型 ,分为射频组 ( 2 8只 )即术后 0、2、6、12、2 4、48、168h和对照组 ( 4只 ) ,通过HE染色、TUNEL法及二苯胺法观察肿瘤组织及治疗旁中心区组织的凋亡指数改变。结果　射频组肿瘤经射频治疗后发生凝固性坏死及细胞凋亡 ,凝固性坏死边缘区肿瘤组织凋亡指数明显高于对照组 ,其指数术后 0h即升高 ,术后 12h均值达高峰 (P <0 .0 1) ,后逐渐下降 ,但术后 168h仍高于术前组。结论　射频治疗通过诱导高温凝固性坏死区周边肿瘤细胞凋亡 ,进一步扩大了射频治疗的治疗范围 ,诱导细胞凋亡是射频治疗治疗恶性肿瘤的一个重要机制     

环五肽RGD靶向的纳米金偶联VEGFsiRNA增强兔VX2肝肿瘤射频消融损伤效应的研究

目的:探讨环五肽RGD(Tyr RGD)靶向的纳米金颗粒(GNPs)偶联VEGF小干扰RNA(Tyr RGDGNPs-VEGFsi RNA)复合物对兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)损伤效应的影响。方法:采取开腹肝脏种植VX2肿瘤组织块的方法建立兔VX2肝癌模型。首先将6只肝癌兔均分为两组分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物和GNPs,注射48 h后,透射电镜检测两者在肿瘤标本中的聚集和分布情况。然后将30只肝癌兔均分为3组,分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物、GNPs、生理盐水48 h后,行RFA治疗,48 h后切取标本,行病理学观察,测量肿瘤毁损体积,TUNEL法检测残癌细胞凋亡。最后将27只肝癌兔均分为3组,分别行RFA+Tyr RGD-GNPsVEGFsi RNA注射,RFA+生理盐水注射、生理盐水注射,饲养至自然死亡,记录生存时间。结果:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物在肿瘤中的聚集明显优于GNPs(14.2颗/500 nm视野vs.0颗/500 nm视野,P0.01)。注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物后的RFA治疗毁损体积明显大于注射GNPs和生理盐水(5.12 cm3 vs.1.78 cm3 vs.1.49 cm3,P0.01),且前者残癌区肿瘤细胞凋亡数明显高于后两者(111.7个vs.36.3个vs.34.7个,P0.01),而后两者上述指标差异均无无统计学意义(均P0.05)。RFA+Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA治疗的肝癌兔较RFA+生理盐水治疗、单纯生理盐水治疗的肝癌兔的平均生存时间明显延长(70.9 d vs.51.2 d vs.43.9 d,P0.01)。结论:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物能在肝脏肿瘤中靶向聚集,具有扩大RFA毁损范围和促进肿瘤细胞凋亡的作用,从而增强RFA疗效。     

兔肝VX2肿瘤射频消融后不同区带VEGF的表达和细胞凋亡

目的分析兔肝VX2肿瘤射频消融(RFA)后不同区带血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达和肿瘤细胞凋亡情况。方法将48只兔肝移植VX2肿瘤,建立动物模型,分为实验组(n=42)和对照组(n=6)。对实验组行RFA,分别在术后即刻、1天、2天、1周、2周、3周各处死7只实验兔,留存肿瘤标本,进行HE染色、VEGF检测、Annexin V-FITC/PI标记和流式细胞仪检测,观察不同时间段、不同区带的VEGF变化及细胞凋亡情况。结果实验组RFA术后针道炭化区、热凝固区和消融边界区平均VEGF值差异均有统计学意义(P均0.05);针道炭化区、热凝固区及边界区术后即刻与其他时间点间两两比较差异均有统计学意义(P均0.05);针道炭化区及热凝固区VEGF在术后即刻达高峰,术后1天~3周呈整体下降趋势,消融边界区VEGF在术后即刻到1周呈上升趋势,2周后下降。术后针道炭化区、热凝固区和消融边界区平均肿瘤细胞凋亡率与对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05),各区带细胞凋亡率均在术后1天达高峰,后呈下降趋势。结论 RFA后针道区和热凝固区内肿瘤细胞VEGF下降和肿瘤凋亡显著,而消融交界区仍可能有存活的肿瘤细胞;在RFA后第3周时,残留肿瘤细胞的增殖能力可恢复到术前状态,此时宜进一步采取相应的治疗措施。     

射频消融治疗兔肝脏肿瘤的实验研究

目的探讨射频消融(RFA)对肿瘤组织的治疗效果及其意义。方法通过VX2肿瘤组织混悬液肝内注入法建立兔肝脏肿瘤模型,随机分为实验组及对照组,分别予以RFA治疗及假性处理,比较RFA治疗前后模型动物的肝脏功能变化及B超影像学改变。结果1周内肝功能出现明显异常改变,多数指标在2周左右恢复(P<0.05);RFA治疗后肿瘤呈逐渐缩小趋势;瘤体血流信号明显减少或消失。结论射频消融治疗术对肝脏肿瘤疗效确切,会造成肝脏功能一过性损害改变;B超等影像学检查手段为临床RFA治疗提供了重要技术支持。     

射频消融治疗兔肝VX2肿瘤后残余肿瘤细胞间信息传导功能的变化

目的　探讨射频消融治疗兔肝VX2肿瘤后残余肿瘤细胞间信息传导功能的变化。方法　用移植的方法建立兔肝VX2肿瘤模型 ,采用射频消融 (RFA)进行治疗 ,并通过控制肿瘤边缘的温度人为造成肿瘤残余。实验动物分为治疗组及对照组 ,治疗组根据活检时间分为 3个时相点 :第 1周、第 2周及第 3周。细胞间信息传导功能的测定采用显微注射荧光染料 (LY)的方法 ,细胞间连接蛋白 (Cx32 )的表达采用免疫组织化学方法检测。结果　Cx32阳性指数及LY扩散范围在治疗后第 1周 [Cx32阳性指数 :( 0 .2 0 3± 0 .0 14 ) ;LY扩散范围 :( 2 2 4.5± 34.6 ) μm ]、2周 [Cx32阳性指数 :( 0 .40 4± 0 .0 6 7) ;LY扩散范围 :( 2 5 7.8± 42 .7) μm]均明显高于对照组 [Cx32阳性指数 :( 0 .10 7± 0 .0 2 4) ;LY扩散范围 :( 137.5± 30 .6 ) μm] ( P <0 .0 1) ,但在第 3周与对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;LY在肿瘤组织内的扩散范围与Cx32阳性指数呈显著正相关 (r =0 .88,P <0 .0 1)。结论　残余肿瘤细胞在RFA治疗后 2周内GJIC功能比治疗前有明显改善 ,其恶性生物学行为可能有所改善。     

射频消融联合激活的树突状细胞疫苗对新西兰大白兔肝脏原位种植VX2肿瘤治疗的实验研究

目的 明确RFA联合激活的DC疫苗在对新西兰大白兔肝脏VX2种植瘤疗效以及生存率的影响.方法 24只雄性新西兰大白兔公分为2组(每组12只),分别为RFA+ PBS以及RFA+ DC组;建立新西兰大白兔肝脏VX2原位种植瘤模型,分离新西兰大白兔骨髓单核细胞体外培养并给予GM-CSF,IL-4诱导分化,加由VX2肿瘤组织制备的热休克抗原孵育加LPS刺激成熟,收集DC细胞接种至新西兰大白兔的爪垫处,3天后给予原位种植VX2肿瘤的新西兰大白兔进行超声引导下的射频消融治疗,观察90天后的存活率.结果 RFA对于肝脏原位种植VX2肿瘤的新西兰大白兔疗效确切,RFA联合激活的DC疫苗能够显著改善其生存率.     

超声空化联合乙醇消融治疗兔VX2肿瘤

目的探讨超声空化阻断兔VX2皮下肿瘤血供对无水乙醇消融肿瘤的增强作用。方法将32只VX2皮下肿瘤兔随机分为4组:超声空化组、乙醇消融组、超声空化联合乙醇消融组、对照组。对各组肿瘤治疗前、治疗后即刻及24h均行CEUS检查,分析肿瘤造影峰值强度及曲线下面积,最后获取肿瘤标本估算肿瘤坏死率。结果超声空化联合乙醇消融组治疗后24h,肿瘤CEUS峰值强度和曲线下面积均低于其余各组(P均0.05);超声空化联合乙醇消融组肿瘤坏死率显著高于其余各组(P0.05)。结论超声空化治疗可显著提高无水乙醇对兔VX2肿瘤的消融效果。     

射频消融联合亚砷酸局部治疗对兔肝VX2肿瘤MVD和VEGF表达的影响

目的探讨射频消融(RFA)联合亚砷酸(AA)局部治疗对兔肝VX2肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响。方法建立新西兰兔肝VX2肿瘤模型28只,按随机数字表法随机均分为4组,分别给予AA(AA组)、RFA(RFA组)、RFA AA(RFA AA组)和生理盐水(对照组)治疗,于治疗后第14d处死所有实验动物,通过免疫组织化学方法检测肿瘤组织MVD及VEGF的表达,并分析MVD与VEGF表达的相关性。结果对照组、AA组、RFA组及RFA AA组肿瘤组织MVD依次降低,分别为(38.50±0.44)、(23.07±0.47)、(18.65±0.39)和(11.36±0.36)个/HP,4组间两两比较均P<0.05;肿瘤组织VEGF表达阳性例数比也依次降低,分别为7/7、5/7、4/7和2/7,4组间两两比较均P<0.05。VEGF表达强度与MVD成正相关关系(r=0.47,P<0.01)。结论RFA AA联合治疗能减少肿瘤组织的MVD,抑制VEGF的表达。     

射频消融对兔肝癌肿瘤微血管密度及血管内皮细胞生长因子的影响

目的　探讨射频消融术对兔肝肿瘤模型的肿瘤微血管密度、血管内皮细胞生长因子的影响。方法　用 32只新西兰白兔制成VX2 细胞肝癌模型 ,分为对照组 (4只 )和射频组 (2 8只 ) ,即术后即时、2、6、12、2 4、4 8、16 8h取材 ,用免疫组织化学SP法观察并测量肿瘤组织的微血管密度 (mir crovesseldensity ,MVD)和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达。 结果　射频治疗后肿瘤组织MVD和VEGF的表达较术前明显降低 (P <0 .0 1) ,射频组内不同时间点间无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论　射频消融可以有效地破坏肿瘤组织的微血管 ,有效的抑制血管形成并减少肿瘤组织的血液供应。     

肝癌射频消融术后残留癌的肿瘤血管生成作用

目的 探讨肝癌射频消融(radiofrequency ablation,RFA)术后肿瘤血管生成在残留癌进展中的作用.方法 建立兔VX2肝癌模型,以不同温度(55℃、70℃和85 ℃)行RFA,建立肝癌RFA后残留癌模型,对照组未行RFA.通过大体病理观察不同消融温度对残留癌局部生长和肺转移的影响.采用免疫组化法检测残留癌组织MVD、VEGF的表达,Western blot法检测残留癌组织VEGF 蛋白表达,RT-PCR法检测残留癌组织VEGF mRNA表达.结果 肝癌射频消融术后与对照组(9.91±0.98)cm3比较,各RFA处理组局部肿瘤体积明显增大(分别t=-17.43,-10.11,-8.79,均P<0.05);与70℃组(17.08±2.28)cm3和85℃组(15.95±4.95)cm3比较,55℃组残留癌体积(21.26±2.32)cm3增大更为明显(分别t=4.69,6.78,均P<0.05).各RFA处理组肺转移程度较对照组显著增强,并以55℃处理组最为显著(分别t=-21.65,-30.15,均P<0.05).免疫组化法显示,与对照组比较,各RFA处理组残留癌组织MVD、VEGF表达均明显增强(MVD分别t=-13.01,-5.46,-5.63,均P<0.05),(VEGF分别t=8.00,4.92,4.21,均P<0.05);其中,与70℃组和85℃组比较,55℃组更为显著(MVD分别t=5.41,6.15,均P<0.05)(VEGF分别t=2.45,4.10,均P<0.05).各RFA处理组残留癌组织VEGF蛋白和VEGF mRNA表达水平均高于对照组.结论 VEGF过表达,加速肿瘤血管生成是肝癌RFA后残留癌快速进展的机制之一.

Abstract：

Objective To explore experimently the effect of tumor angiogenesis on rapid progression of residual tumor of liver cancer after radiofrequency ablation ( RFA). Methods A rabbit VX2 hepatoma model was established. Inoculated tumors were treated by using RFA at 55 ℃ , 70 ℃ and 85 ℃ respectively to establish the residual VX2 hepatoma model. Rabbits implanted with VX2 hepatoma but receiving no RFA treatment served as controls. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)was determined in tumors to assess the relationship between VEGF and the focal tumor volume and distant metastasis. The expression of VEGF and microvessel density ( MVD) in tumor tissues was assessed by immunohistochemistry. The protein expression of VEGF was assessed by Western blot. The expression of VEGF mRNA was detected by RT-PCR. Results There were significant differences of the local tumor volume between the control group (9.91 ±0.98) cm3 and the other groups (respectively t = -17.43,-10.11, -8.79,all P<0. 05). Compared with the 70 ℃ group (17. 08 ±2. 28 ) cm3 and the 85 ℃ group (15.95 ±4.95) cm3, the focal tumor volume of 55 ℃ group was the largest (21.26 ±2.32) cm3,( respectively t = 4. 69,6. 78, all P<0. 05). Much more metastatic lesions of lung were observed in the RFA treated groups in comparison to the control group. Moreover, the lung metastasis in 55 ℃ group was the most serious among the three RFA treated groups (respectively t = -21.65, -30. 15, all P<0. 05 ).Immunohistochemical staining indicated that the expression of VEGF and MVD in the RFA treated groups was much higher than those in control group ( MVD respectively t = -13.01, -5. 46, -5. 63, all P<0. 05), ( VEGF respectively t = 8. 00,4. 92,4. 21, all P<0. 05 ). Furthermore, the expression of both VEGF protein and VEGF mRNA in 55 ℃ group was the highest among the three RFA treated groups.Conclusions The over-expression of VEGF accelerating the tumor angiogenesis may be one of the mechanisms inducing rapid progression of residual liver tumor after RFA.     

缺血再灌注对肝癌组织及正常肝组织的损伤

目的:研究缺血再灌注（IR）对肝癌和正常肝组织的损伤作用。方法:超声引导穿刺新西兰兔肝脏左中叶注射VX2肿瘤组织混悬液，建立肝脏肿瘤模型。2周后，证实荷瘤模型已成功构建，乃剖腹阻断肝左中叶的肝动脉分支，60 min后去除血管阻断恢复血流;分别于再灌注0 min，1 h，1 d，3 d和7 d取肝癌组织和正常肝组织石蜡包埋切片，以HE染色法和荧光脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法观察两种组织细胞凋亡情况。结果:HE染色显示,IR后两种组织的凋亡细胞均有增加。至1 d时凋亡达峰值（肝癌为23%，正常组织为 10%），其后虽有降低，但至7d时仍明显高于IR前水平（P<0.01）。以癌组织细胞凋亡最为显著，其在各时点阳性细胞率均明显高于正常肝组织。TUNEL实验显示，IR前癌组织凋亡细胞（5%）即多于正常肝脏组织（1%）。IR后，癌组织和正常肝组织凋亡改变的特点与HE染色相似，于IR1 d和7 d凋亡细胞率分别为25%, 15% 和8%, 2%。结论:IR后肝癌组织的损伤和细胞凋亡较正常肝组织更为显著。     

致敏树突状细胞联合射频消融治疗对荷瘤大鼠免疫机能的影响

目的探讨经冻融肿瘤抗原致敏的树突状细胞（DCs）联合应用于射频消融术（RFA）后治疗大鼠实体瘤对大鼠抗肿瘤免疫的影响。方法30只荷Walker256实体瘤SD大鼠随机分成三组，每组10只：对照组1仅行RFA治疗；对照组2行RFA＋未致敏DC治疗；实验组行RFA＋冻融抗原致敏DC治疗。治疗前及治疗后第4天经流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋／CD8^＋比值；同时，超声评价治疗前后各组肿瘤体积变化，记录大鼠的荷瘤生存期，各组间比较。结果治疗后，实验组大鼠外周血CD4^＋T细胞及CD4^＋／CD8^＋比值的升高较两对照组比明显，与对照组2比差异显著（P〈0．05）；实验组外周血CD8^＋T细胞的降低显著大于两对照组（P〈0．05）。实验组大鼠肿瘤生长速度显著慢于对照组，其荷瘤生存期较对照组明显延长（P〈0．05）。结论肿瘤抗原致敏树突状细胞联合射频消融治疗可有效改善大鼠的抗肿瘤免疫机能，从而延缓肿瘤生长、延长荷瘤大鼠寿命。     

高强度超声治疗早期兔肝脏肿瘤

目的 探讨高强度超声（ＨＩＶ）治疗早期兔肝ＶＸ２肿瘤（病毒诱导的兔鳞癌）的有效性和安全性。方法 实验分３组,移植肿瘤后５ｄ,Ａ组（ｎ＝８）接受假照治疗;Ｂ组（ｎ＝２）接受ＨＩＵ治疗;Ｃ组（ｎ＝８）接受手术治疗。从Ｂ组中任选４只兔于治疗后２ｄ处死,对靶区进行病理学检查。在ＨＩＵ治疗过程中,测量靶区组织温度变化。检查兔肝肾功能,记录兔生存时间。结果 靶区组织发生坏死,靶区外的组织不受损伤。靶区温度达８５℃,靶区外０．５ｍｍ处仅升高２℃。Ａ、Ｂ、Ｃ组中位生存时间分别为５４、１５０、１５０ｄ;治愈率为０、７５．０、６２．５;Ｂ、Ｃ两组较Ａ组生存时间明显延长（Ｐ〈０．０５）;Ｂ、Ｃ两组间生存时间和治愈率差异无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论 ＨＩＵ能较有效安全地治疗早期兔肝ＶＸ２肿瘤。     

Radiofrequency ablation for eradication of pulmonary tumor in rabbits

BACKGROUND: Radiofrequency ablation (RFA) has emerged as an alternative for surgery in clinical oncology. This animal experiment was conducted to evaluate the feasibility of RFA in the treatment of pulmonary tumor. METHODS: Eighteen rabbits with pulmonary implantation of VX2 tumors were divided into two groups. Group A (n = 12) was treated with RFA by using a cooled-tip electrode technique. Group B (n = 6) received sham operation. The therapeutic efficacy was evaluated by survival rate, magnetic resonance imaging (MRI), postmortem microangiography, and histology. RESULTS: All animals in group B died within 3 months after tumor implantation. Tumor eradication was achieved in 9 of 12 rabbits (75.0%) in group A, of which 4 rabbits survived longer than 3 months free of disease and another 5 rabbits were found free of viable tumor when sacrificed. One rabbit was subjected to incomplete tumor ablation and two rabbits suffered from local tumor relapse and/or lung metastasis. The 3-month survival rate of RFA-treated rabbits was significantly higher (P < 0.01) than that of control rabbits. The typical MRI appearances of the acute RFA lesion consisted of five characteristic concentric zones, which corresponded to central needle track (zone A), tumor coagulation (zone B), pulmonary parenchyma coagulation (zone C), peripheral hemorrhage (zone D), and inflammatory layer (zone E) on histology. CONCLUSIONS: Eradication of pulmonary tumor could be achieved with current RFA technique in rabbits. MRI is a useful modality for assessment of lung tumor ablation.     

RFA联合ＴＡＣＥ和HFH对兔肝VX2肿瘤的作用

目的 探讨肝细胞癌(HCC)伴脾功能亢进患者肝脾联合切除术后免疫功能和肝功能的变化.方法 回顾性分析126例HCC伴脾功能亢进患者的临床资料.根据不同手术方式分2组肝脾联合切除58例(A组),单纯肝癌切除68例(B组).比较两组术后血清总胆红素、转氨酶及免疫功能状况.结果 术后7 d血清总胆红素A,B组分别为(25±6)μmol/L和(3 8±12)μmol/L,差异有显著性(P＜0.05);术后7 d,A组和B组谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)分别为(49.8±35.8)U/L和(71.8±57.4)U/L,(45.6±39.3)U/L和(61.4±41.2)U/L,两组差异均有显著性(P＜0.05).A,B组两个月后CD4和CD4/CD8分别为(41.7±4.2)和(32.6±3.5),(1.9±0.21)和(1.1±0.18),差异均有显著性(P＜0.05).A,B组术后并发症发生率分别为7.24%(10/58)和16.18%(11/68),差异无显著性(P＞0.05),A,B组3和5年无瘤生存率分别为50.0%(14/28)和32.26%(10/31),37.50%(3/8)和20.0%(2/10),差异均有显著性(P＜0.05).结论 肝脾联合切除治疗HCC伴脾功能亢进可促进机体T细胞亚群恢复平衡,改善机体抗肿瘤免疫功能,并可减轻术后肝脏胆红素代谢的负担,促进肝功能恢复.术后并发症发生率并不增加,3年和5年无瘤生存率明显提高.