细胞因子对HCV基因疫苗诱生免疫反应的增强作用

目的 探讨细胞因子对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因疫苗诱生免疫应答强度的增强作用。方法 将包含ＨＣＶ－Ｃ蛋白的基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,构建重组质料ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ,将此重组质粒单独或与包含鼠ＩＬ－２或ＩＬ－１２基因的表达质粒共免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,ＥＬＩＳＡ法检测ＨＣＶ Ｃ特异性抗体产生情况,以ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ转梁小鼠ＳＰ２／０细胞,表达ＨＣＶ Ｃ抗原为靶细胞,进行     

IL—12提高DNA疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤的免疫研究

目的 观察ＩＬ－２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－ＳＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２＾ｄ）的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法肌肉注射ＤＮＡ疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞,观察成瘤情况,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ活性。结果 对照组、ｐＣＲ３．１－Ｓ及共同免疫     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞 …

目的 构建丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ融合蛋白的真核表达载体。方法 用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,用脂质体转染试剂将其转入ＣＯＳ７细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白,结果Ｅ２－ｐｒｅＳ融合蛋白基因包括了全长的ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,嵌合基因长度约１．６ｋｂ表达载体在ＣＯＳ７细胞表达出     

白细胞介素—2—乙肝病毒前S抗原融合蛋白在真核细胞中的分泌…

为了协同人白细胞介素－２与乙型肝炎病毒前Ｓ抗原的生物学功能，探索能打破持续性感染者对ＨＢＶ表面抗原的免疫耐受，诱导机体对ＨＢｓ－Ａｇ和ｐｒｅＳＡｇ产生体液和细胞免疫应签的基因免疫与治疗药物，用基因重组方法构建了ＩＬ－０２和ＨＢＶ完整ｐｒｅＳＡｇ的真核表达合基因及表达质粒ｐＣＷＩＩＰ。ｐＣＷＩＩＰ转染的Ｃｏｓ－７细胞能分泌表达ＩＬ－２－ｐｒｅＳ融合蛋白，其表达效率与ｐＣＩＩＬ－２转染的细胞表达ＩＬ－     

脂质转染剂增强基因疫苗诱导的免疫应答效力

目的 研究脂质转染剂（ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）提高丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因疫苗的抗病毒免疫应答效力。方法 人工构建包含ＨＣＶ Ｃ基因片段的的真核表达载体ｐｃＤ－ＮＡＨＣＶ－Ｃ,在证实期可以在真核细胞中表达之后,将期用脂质转剂包裹,形成ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ－ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ脂质混合物,将该混合物或单纯ｐｃＤＮＡＨＣＶ－Ｃ直接注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠股四头肌,以空载体ｐｃＤＮＡ     

HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导抗体的产生

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因疫苗可打破人群对ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）疫苗免疫无应答或低应答而产生保护性抗体,并有可能成为治疗ＨＢＶ持续性感染的特异性基因治疗剂。我们用构建的ＭＳ２－ｐｒｅＳ表达质粒ｐＭＩＰ、ＩＬ－２－ｐｒｅＳ原核表达质粒ｐＩＩＰ、ＩＬ－２－ｐｒｉＳ真核表达质粒ｐＣＷＩＩＰ产生抗体量高于ｐＭＩＰ（ＳＡＳ统计分析,Ｐ〈０．０１）,这说明ＩＬ－２－ｐｒｅＳ基因疫苗在体内可能有多种生物学     

白细胞介素2增强HBV基因疫苗的免疫效应

目的：构建乙型肝炎病毒基因疫苗ｐＣＲ３．１－Ｓ,观察重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２）作为佐剂对其诱导ＮＡＬＢ／ｃ小鼠产生免疫应答的影响．方法：以ＥＬＩＳＡ法检测免疫小鼠血清抗ＨＢｓ,另用＾３Ｈ－ＴｄＲ参入法测定淋巴细胞增殖活性,初步研究不同免疫组的体液和细胞免疫应答．结果：ｒｈＩＬ－２组免疫小鼠抗ＨＢｓ抗体和淋巴细胞增殖活性与对照组相比有显著差异（Ｐ〈０．０５）．结论：ＨＢＶ基因疫苗可诱发ＢＡＬ     

柯萨奇病毒B组3型VP1基因真核表达重组质粒诱导小鼠中和？…

以构建的柯萨奇病毒Ｂ组３型（ＣＶＢ３）ＶＰ１基因的真核表达重组质粒ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１作为侯选的基因疫苗，评价其诱导小鼠产生的中和抗体反应。大量制备并提纯ｐＣＥＰ４－ＣＶＢ３ＶＰ１ ＤＮＡ，用其接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清进行病毒中和试验。结果证明其可诱导小鼠机体产生特异性中和抗体，并能中和ＣＶＢ３毒力，起到基因疫苗的预防作用。     

重组人单链白细胞介素12融合基因（rhscIL—12）的构建和真？…

目的 克隆人ＩＬ－１２（ｈＩＬ－１２）ｐ４０和ｐ３５亚单位ｃＤＮＡ，构建人单链ＩＬ－２（ｒｈｓｃＩＬ－２）融合基因，并在哺乳动物细胞中进行表达。方法从经ＰＤＢｕ刺激的ＥＢＶ转化的人Ｂ淋巴细胞株ＮＣ３７中提取ｍＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ分别获得ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位编码序列的ｃＤＮＡ，运用重组ＰＣＲ技术将两段基因通过一疏水性多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ＤＮＡ序列进行体外基因重组，构建ｒｈｓｃＩ     

丙型肝炎病毒E2基因激发小鼠细胞免疫的实验研究

目的 :研究丙型肝炎病毒E2基因接种能否诱导机体产生细胞免疫以及乙型肝炎病毒preS基因对其诱导细胞免疫能力的影响。方法 :以BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞株 (SP2 /O)为宿主细胞 ,建立表达丙肝病毒E2蛋白的靶细胞 ,将其注射于E2基因或 preS与E2融合蛋白基因免疫的小鼠腹腔 ,记录小鼠接种瘤细胞后的存活期 ,以小鼠存活期的长短作为反映基因免疫小鼠对HCVE2蛋白细胞免疫的有无或强弱的指标。结果 :靶细胞表达了相对分子质量约为 70 0 0 0的E2蛋白 ,E2基因接种小鼠的存活期长于对照组 ,单独E2基因接种组的存活期显著长于对照组 ,也长于 preS与E2融合蛋白基因免疫组。 结论 :E2基因接种能诱导细胞免疫 ,但与 preS融合后 ,其诱导细胞免疫的能力会降低。     

Murine antibody against E2 can capture hepatitis C virus in vitro

目的　寻找可能存在的抗丙型肝炎病毒 (HCV)感染的中和抗体。方法　构建两个分别含HCVE1和E2抗原基因的真核表达载体 ,用瞬时表达法检测其在哺乳动物细胞中的表达。将构建的载体连同IL 2基因一起经皮下给BalB/c小鼠进行注射 ,然后用ELISA法检测特异性抗体产生情况。最后通过研究抗体和病毒间的相互作用分析基因免疫诱导产生的抗血清在体外与HCV的相互作用情况。结果　经过基因免疫的小鼠分别产生了E 1和E2抗体。其中 ,用含E2基因的质粒载体免疫的小鼠所产生的E2抗血清不仅可以免疫沉淀来源血清中的HCV病毒颗粒 ,而且可以和与来源株非相关的HCV病毒颗粒相互作用。结论　我们的研究表明基因免疫诱导小鼠产生的E2抗体可以和HCV病毒颗粒发生交叉反应 ,这使我们看到了诱导产生具有广泛针对性的E2抗体的希望。     

HIV-1CNgp120与IL-6基因共表达质粒的构建及其免疫调节作用

目的 研究白细胞介素－6对人类免疫缺陷病毒（HIV）gp120基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建表达中国流行株HIV－1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV－1gp120基因与IL－6基因的核酸疫苗质粒pGPIL-6,并检测其在哺乳动物细胞中的表达。将上述两种质粒经胫前股注射BALB／c鼠,检测gp120抗体的产生情况及ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力。结果 以间接免疫荧光法（IFA）检测到gp120在哺乳动物细胞中得到表达。pGPIL-6与pGP均可刺激小鼠产生抗gp120抗体,协同注射gp120和IL－6基因的小鼠产生的抗体滴度明显高于单独注射gp120的小鼠,pGPIL-6免疫鼠对ConA和LPS诱导的T细胞增殖能力明显高于单独注射gp120的小鼠。结论 协同应用IL－6基因可明显加强HIV－1gp120基因的免疫反应,为中国流行株HIV－1核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。     

丙型肝炎病毒及乙型肝炎病毒联合基因免疫实验研究

目的 为HCV／HBV重叠或混合感染的防治寻求新的高效联合基因免疫策略。方法 分别将与HCV核心区基因互补的eDNA和HBV核心区基因克隆于真核表达载体(pRSC),构建pRSC-HBV／HCV,转染小鼠骨髓瘤细胞(SP2／0),通过免疫荧光和Western印迹法检测蛋白的表达,免疫Balb/c小鼠。用酶联免疫法、乳酸脱氢酶释放法及荷瘤试验观察小鼠体液免疫应答及细胞免疫应答。结果 pRSC-HBV／HCV转染的SP2／0细胞可见HBeAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞,相对分子质量14000及21000处均可见蛋白条带,Western印迹分析可见特异性的蛋白条带。10只免疫鼠中全部出现抗-HCV及抗-HBV抗体,而对照组(n=10)全阴性。免疫组小鼠脾细胞对转染pRSC-HBV／：HCV的SP2／0细胞的细胞毒活性明显高于对照组,荷瘤试验显示免疫组小鼠注射转染pRSC-HBV／HCV的SP2／0细胞后肿瘤生长缓慢。结论 pRSC-HBV／HCV在Balb／c小鼠可同时诱导对HBeAg及HCV核蛋白的体液免疫应答及细胞免疫应答。     

EFFECTS OF HBV preS AS A HUMORAL ENHANCER ON THE ABILITIES OF HCV E2 PROTEIN TO INDUCE IMMUNE RESPONSESIN THE DNA-IMMUNIZED MICE

Objective. To study whether the abilities of hepatitis C virus (HCV) E2 gene immunization to induce humoral and cellular immune responses to E2 protein were affected by hepatitis B virus (HBV) preS gene when they were fused in DNA-immunized mice.Methods. Mice were immunized with E2, preS-E2(preS gene was upstream of E2 gene), and E2 - preS (preS gene was downstream of E2 gene)gene by their eukaryotic expression vectors, respectively. The anti - E2 or anti - preS antibodies were detected using the E2 and preS antigens. The cellular immune response to E2 protein in immunized mice was presented by its survival time after injecting SP2/O myeloma cells expressing HCV E2 protein into the abdominal cavity.Results. Chimeric E2 and preS gene immunization can induce mice to develop anti-preS and anti-E2 antibodies. The number of the mice developing anti-E2 antibody and the antibody titers in preS-E2 gene-injected group were higher than those in E2-preS gene-immunized group. However, the mice injected with E2 gene     

Effect of immunization in mice with recombinant DNA encoding the hepatitis C virus structural protein

OBJECTIVE: To explore the possibility and the efficacy of immune responses in mice inoculated with recombinant plasmid pCD-HCV1 and to lay a foundation for HCV nucleic acid vaccine development in the future. METHODS: The gene fragment coding C and E regions of HCV-II (type I b) was inserted into pCD-SR alpha 1 expression vector and formed pCD-HCV1 and then was injected into quadriceps muscles of Balb/c mouse. Serum anti-HCV level of mice was tested by ELISA (A value). Spleen cells proliferation responses to HCV antigens were detected by 3H-TdR incorporation (cpm). RESULTS: Balb/c mice immunized with recombinant plasmid pCD-HCV1 three or four times can generate specific antibody responses to HCV antigens and the antibody levels gradually ascend to the plateaus and did not have the trend of descending in 18 weeks detected. The serum antibodies in mice immunized by recombinant plasmid pCD-HCV1 were 100 percent positive when the serum were diluted 40 times and the positive rate of antibody still were 16.6 percent positive when the serum were diluted 320 times. Balb/c mice immunized with recombinant plasmid pCD-HCV1 (100 micrograms, 50 micrograms 10 micrograms/mouse three times respectively) can elicit antibody responses to HCV antigens and the antibody levels of three groups were 0.70 +/- 0.07, 0.33 +/- 0.04 and 0.11 +/- 0.09 respectively. Spleen cells of Blab/c mice injected with pCD-HCV1 three times were induced to produce proliferation responses to HCVc + e specific antigens. CONCLUSIONS: These results demonstrated that constructs expressioning HCV core and envelope proteins can generate anti-HCVc + e specific antibody responses and lymphoproliferation responses in mice, which suggested it to be possible to elicit immune responses to viral epitopes from HCV via DNA immunization with HCV-DNA recombinant and to warrant further investigation as a potential vaccine against HCV infections.     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)E2和乙型肝炎病毒(HBV)preS融合蛋白的真核表达载体.方法:用PCR方法扩增HBV preS和HCV E2蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体pcDNA3中,用脂质体转染试剂将其转入COS7细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白.结果:E2-preS融合蛋白基因包括了全长的HBV preS和HCV E2蛋白基因,嵌合基因长度约1.6 kb.表达载体在COS7细胞表达出了E2-preS融合蛋白.结论:构建的E2-preS融合蛋白表达载体能在哺乳动物细胞中表达融合蛋白,为获得真核表达的融合蛋白及研究此蛋白的免疫原性打下基础.     

Antibody response to E2 glycoprotein induced in mice by immunization with plasmid DNA containing sequence derived from a Chinese genotype III/2a isolate of hepatitis C virus

OBJECTIVE To induce antibody response against E2 glycoprotein derived from a Chinese genotype III/2a isolate of hepatitis C virus (HCV) in BALB/C mice by plasmid DNA-based immunization.

METHODS Plasmid p3W14 containing E2/NS1 gene derived from a Chinese genotype III/2a isolate of HCV, which was verified to express 70 kDa E2 glycoprotein in NIH3T3 cells, was used for direct intramuscular injection in BALB/C mice. Specific antibody to E2 glycoprotein was detected by recombinant E2 protein.

RESULTS Specific anti-E2 antibody could be detected in mice inoculated with p3W14(5/6). Titer of antibody ranged from 1:15 to 1:120.

CONCLUSIONS Successfully inducing anti-E2 antibody in mice by plasmid DNA-based immunization containing E2/NS1 gene from a Chinese genotype III/2a isolate of HCV is the first time in China.