3H-TdR掺入法测定TGFβ1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1(TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制。方法人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加。100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反。结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素。     

TGF-β1体外对人眼眶成纤维细胞3H-Pro掺入的影响

目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)3H-Pro掺入的影响。方法:体外培养人OF,用0.1,1.0,5.0,10.0,100.0μg/LTGF-β1对细胞进行处理,用3H-Pro掺入法测定细胞放射性强度来判断细胞胶原合成。结果:用0.1,1.0,5.0,10.0μg/L TGF-β1作用后OF3H-Pro掺入量增加。100.0μg/L TGF-β1对OF作用相反。结论:TGF-β对人OF合成胶原有双相调节性。     

K115对TGF-β1诱导的人Tenon 囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的　探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon 囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法　人Tenon 囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者。采用CCK-8实验检测K115对人Tenon 囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出TGF-β1对细胞增殖最佳作用浓度为5.0 μg·L^-1,最佳作用时间为24 h;K115对细胞增殖起始作用浓度为5.0 μmol·L^-1,最佳作用浓度为10.0 μmol·L^-1。依据这两个浓度进行分组,分别是对照组（不加TGF-β1与K115）,TGF-β1组（加5.0 μg·L^-1 TGF-β1）,TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组（加5.0 μg·L^-1TGF-β1和5.0 μmol·L^-1的K115）,TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组（加5.0 μg·L^-1 TGF-β1和10.0 μmol·L^-1 的K115）。采用Transwell 实验检测K115对人Tenon 囊成纤维细胞迁移的影响;免疫荧光法测定人Tenon 囊成纤维细胞中α-SMA蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。对实验所得各指标进行统计学分析。结果　本研究细胞培养状态良好,6～8周可见人Tenon 囊成纤维细胞铺满培养瓶瓶底。用CCK-8 试剂盒检测各组细胞增殖情况结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组、TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组光密度值分别为0.977±0.042、1.306±0.059、0.862±0.035、0.558±0.042,TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组、TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组光密度值均小于TGF-β1组 (均为P<0.05),并且呈现浓度依赖性减小,K115浓度越大细胞增殖减少幅度越大。Transwell 实验结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组、TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组迁移细胞数分别为（38.67±3.06）个、（81.00±4.00）个、（44.33±3.21）个、（23.67±2.52）个;TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组与TGF-β1组比较,迁移细胞数降低,差异有统计学意义（P<0.05）;TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组与对照组及TGF-β1组比较,迁移细胞数均明显降低,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。各组细胞内α-SMA蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组人Tenon 囊成纤维细胞胞浆内可见散在分布的绿色荧光物质,TGF-β1处理后24 h（TGF-β1组）,胞浆内绿色丝状荧光物质明显增加,荧光强度差异有统计学意义（P<0.05）;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组和 TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组细胞胞浆内的荧光强度呈浓度依赖性减弱,K115浓度越高荧光强度减弱越明显(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞凋亡率为（2.400±0.346）%,TGF-β1组为（0.900±0.173）%,TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组为（1.333±0.252）%,TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组为（1.067±0.058）%;TGF-β1组的细胞凋亡率较对照组降低（P<0.05）; TGF-β1+5.0 μmol·L^-1 K115组和TGF-β1+10.0 μmol·L^-1 K115组的细胞凋亡率均较对照组降低（均为P<0.05）,而与TGF-β1组比较,差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　K115对TGF-β1诱导的人Tenon 囊成纤维细胞增殖和迁移有明确的抑制作用,其作用机制可能与K115抑制了TGF-β1诱导的细胞内α-SMA的表达进而调控了细胞活化有关。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞外基质合成的影响

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对体外培养的牛角膜内皮细胞细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)合成的影响。方法将体外培养的牛角膜内皮细胞分为实验组和对照组,经0μg·L-1(对照)、0.1μg·L-1、1.0μg·L-1、10.0μg·L-1、100.0μg·L-1浓度的TGF-β1处理48h后,用SABC免疫组化法分别检测角膜内皮细胞纤维连接蛋白和层粘连蛋白的合成情况。结果与对照组相比,一定浓度(1.0μg·L-1及10.0μg·L-1)的TGF-β1能明显促进体外培养的角膜内皮细胞纤维连接蛋白及层粘连蛋白的合成,且呈剂量依赖性。但浓度为0.1μg·L-1及100.0μg·L-1的TGF-β1组OD值与对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论一定浓度(1·0μg·L-1及10.0μg·L-1)TGF-β1能促进牛角膜内皮细胞ECM的合成,提示TGF-β1可能在角膜内皮细胞损伤修复中扮演重要角色。     

TGF-β1对Tenon''''s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对Tenon's囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法用MTT法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响.结果GF-β1能够剂量依赖性地促进Tenon's囊成纤维细胞增殖(P＜0.05);TGF-β1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mL TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05).结论GF-β1能够促进Tenon's囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制.     

白介素1α和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves'眼眶成纤维细胞增殖作用的影响

目的探讨白介素1α(IL-1α)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对培养的Graves'眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响.方法以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞:不同浓度的IL-1α刺激成纤维细胞48 h;30 U/ml的IL-1α刺激成纤维细胞24～72 h;不同浓度的IL-1ra或/和30 U/ml的IL-1α处理成纤维细胞48 h;75 ng/ml的IL-1ra和30 U/ml的IL-1α处理成纤维细胞24～72 h.用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率.结果IL-1α以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖,而IL-1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL-1α诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性,刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异.结论IL-1ra是IL-1α诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂,可望用于GO的治疗.     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bFGF以及0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、1ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ns/mJ的TGF-β,两组均设空白对照.6 d后进行细胞计数.选用t-test进行统计分析.每株细胞重复3次,共重复3株细胞,观察bFGF和TGF-β对巩膜成纤维细胞的生长调控作用.结果 bFGF能明显促进人巩膜成纤维细胞的生长,随浓度增加呈明显剂量效应关系.bFGF大于10 ng/ml时(包括10 ng/ml),和无bFGF的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).TGF-β能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,抑制细胞生长的作用亦呈明显的剂量效应关系.TGF-β大于0.3 ng/ml时(包括0.3 ng/ml),和无TGF-β的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 本实验结果显示,bFGF对人巩膜成纤维细胞生长具有明显促进作用,而TGF-β则表现为明显抑制作用.进一步证实外源性bFGF和TGF-β可能作用于巩膜组织,并通过调控巩膜成纤维细胞的生长及巩膜细胞外基质合成代谢单独或协同作用参与巩膜重塑过程.     

载5-氟尿嘧啶聚乳酸纳米微粒对人眼球筋膜囊成纤维细胞抑制作用的研究

目的 探讨载5-氟尿嘧啶(5-FU)聚乳酸纳米微粒(5-FU-PLA-NPs)对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞的抑制作用.方法 为实验研究.噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)的空载聚乳酸纳米微粒(PLA-NPs)在不同时间点(48和72 h)对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖的影响,MTT比色法检测不同剂最(0.1、1.0、10.0、100.0和1000.0 mg/L)5-FU纳米药物和5-FU原药在1～7 d内共7个时间点对成纤维细胞生长的抑制作用,计算并比较两者在7个时间点对成纤维细胞的抑制率.RT-PCR分别检测剂量为100.0 mg/L的5-FU纳米药物和5-FU原药作用成纤维细胞1、5、7 d后Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达情况.对同一天各浓度A值的比较用单因素方差分析,同一天相同浓度5-FU原药组A值与5-Fu-PLA-NPs组A值的比较用两独立样本t检验分析,采用单因素方差分析分别比较不同时间点各组COI3的相对A值.结果 空载聚乳酸纳米微粒对成纤维细胞的增殖没有影响.载5-FU纳米微粒和5-FU原药均抑制成纤维细胞的增殖,并使Ⅲ型前胶原蛋白mRNA的表达水平降低,该抑制作用具有时间和剂量依赖性.作用初期各剂量组5-FU纳米微粒的抑制作用低于原药,随时间延长抑制作用超过原药,差异有统计学意义(P<0.05).结论 聚乳酸(PEA)具有良好的生物相容性与安全性,可作为眼部用药的载体.载5-FU聚乳酸纳米微粒具有一定的缓释功能,可长期释放药物,随着作用时间的延长,5-FU纳米药物对成纤维细胞的抑制作用超过原药,其可作为靶向缓释药物载体.(中华眼科杂志,2009,45:26-31)     

TGF-β1诱导CD90+和CD90-眼眶成纤维细胞亚群肌成纤维细胞转化的研究

目的依据培养的甲状腺相关性眼病患者眼眶成纤维细胞是否表达CD90分为两个亚群,分离这两个细胞亚群,分别进行肌成纤维诱导,研究它们在眼外肌纤维化中所起的不同作用。方法免疫磁分离法分离CD90 和CD90-的眼眶成纤维细胞,TGF-β1诱导CD90 和CD90-成纤维细胞亚群转化为肌成纤维细胞(MFB),免疫细胞化学法检测代表MFB标志的平滑肌动蛋白α-SMA的表达情况。结果在TGF-β1的作用下,48 h后部分CD90 细胞开始出现α-SMA弱表达,4 d后大部分细胞呈阳性。CD90-细胞不表达α-SMA。结论CD90 与CD90-眼眶成纤维细胞具有不同的功能,CD90 细胞群具有转化为MFB的潜能,与眼外肌纤维化和细胞外基质积聚有关;CD90-成纤维细胞不能转化为MFB。     

阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨不同浓度阿托品对大鼠巩膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法 取出生24 h的健康雄性SD大鼠眼巩膜组织(均为右眼)进行原代培养。取细胞进行分组：对照组(正常巩膜成纤维细胞),0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组(正常巩膜成纤维细胞分别加入三种不同浓度阿托品溶液),每组5只大鼠原代培养细胞。加药后24 h, CCK-8法检测各组巩膜成纤维细胞活力，流式细胞仪检测各组巩膜成纤维细胞凋亡率，Western blot法检测各组巩膜成纤维细胞光蛋白聚糖、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-14和MMP抑制剂(TIMP)-2蛋白表达情况。结果 CCK-8实验结果显示：与对照组相比，0.1 g·L^-1、1.0 g·L^-1及5.0 g·L^-1阿托品处理组细胞活力均增高，其中以1.0 g·L^-1阿托品处理组增高最显著，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果表明：阿托品处理组各...     

TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞生物学行为改变及表达整合素连接激酶(ILK)的研究

目的 探讨转化生长因子β2(transforming growth factor beta 2,TGF-β2)对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon fibroblasts,HTFs)生物学行为及表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的影响.方法 组织块贴壁法培养原代HTFs,免疫荧光染色鉴定波形蛋白和角蛋白.MTT法检测不同浓度TGF-β2对HTFs细胞的促增殖作用,RT-PCR检测TGF-β2作用前后α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA)、ILK mRNA的表达,Western Blot检测α-SMA、ILK、E-cadherin蛋白的表达,细胞免疫荧光染色检测α-SMA、E-cadherin蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,TGF-β2作用48 h、72 h,5.0 μg· L-1及10.0 μg· L-1诱导下的OD值显著高于0.1μg·L-1、1.0 μg·L-1组及空白对照组(均为P＜O.05),5.0 μg·L-1及10.0 μg·L-1作用48 h及72 h的OD值显著高于24 h(均为P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,5.0μg·L-1TGF-β2诱导48 h后,α-SMA mRNA及ILK mRNA水平和空白对照组相比明显上调,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).Western Blot检测结果显示,ILK、α-SMA及E-cadherin在空白对照组和5.0 μg· L-1TGF-β2处理组均有表达,但TGF-β2能够明显上调三者的表达,5.0 μg·L-TGF-β2处理48 h组与空白对照组差异均有统计学意义(均为P＜0.05).细胞免疫荧光染色结果显示,TGF-β2处理组α-SMA、E-cadherin均有荧光表达,其中oα-SMA表达在细胞质中,而E-cadherin在细胞质和细胞核中均有表达.结论TGF-β2可以诱导体外培养HTFs增殖,转分化及黏附性增强,同时促进ILK的高表达,提示ILK在青光眼术后瘢痕化过程中可能也起到一定作用.     

TGF-β1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。     

增生性玻璃体视网膜病变中细胞因子的作用

细胞因子与PVR形成密切相关。HGF通过自分泌或旁分泌方式作用于RPE和神经胶质细胞,导致RPE活化和胶质细胞迁移;通过活化磷脂酰肌醇3激酶促使神经胶质细胞产生血管内皮生长因子(VEGF)。PDGF-AA通过与含有α亚基PDGFR作用促进PVR形成,但表达PDGFβ受体的细胞不能诱导PVR发生。肌样成纤维细胞聚集是PVR中导致牵拉性视网膜脱离的重要因素,其α平滑肌肌动蛋白的表达依赖于TGF-β2RⅡ及TGF-β1在增生膜中的表达。IL-6是PVR形成的危险因素,是视网膜脱离术后PVR复发的重要预测指标。TNF-α可与RPE表面TNF受体作用并通过MAPK通路诱导RPE细胞高表达α1与α5型整合素,进而促进RPE在PDGF介导下的细胞转移。MCP-1可能在PVR早期起重要作用。     

PRK后兔角膜成纤维细胞分泌产生bFGF、TGF-β1及其对成纤维细胞增殖的影响

目的　探讨在准分子激光屈光手术后角膜伤口愈合过程中 ,是否有生长因子b FGF及 TGF- β1 参与 ,两种生长因子对成纤维细胞增殖的作用及其相应抗体对这一过程的影响。方法　对 PRK后兔角膜成纤维细胞原代培养 ,观察有否内源性生长因子 b FGF及 TGF-β1 的作用 ,内源性及外源性生长因子 b FGF及 TGF-β1 对细胞增殖的影响及相应抗体对抗原的中和作用。结果　在 PRK后兔角膜伤口愈合过程中成纤维细胞分泌产生b FGF及 TGF- β1 ,并刺激细胞的增殖 ,相应抗体可阻断这一生物效应。结论　 (1)准分子激光屈光手术后角膜愈合过程中成纤维细胞分泌产生生长因子 b FGF及 TGF- β1 ;(2 )两种生长因子对角膜成纤维细胞的增殖具有刺激作用 ;(3)相应抗体可阻断 b FGF及 TGF- β1 对细胞增殖的刺激作用。本研究结果提示抗 b FGF抗体及抗 TGF- β1 抗体作为准分子激光屈光手术后选择性用药的可能性 ,可防止或减少屈光回退和角膜上皮下混浊等两个主要并发症 ,提高手术效果     

生长因子诱导视网膜色素上皮细胞增殖的协同作用研究

目的从细胞水平探讨生长因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的协同调控作用。方法通过PPE细胞培养，采用氚标胸腺嘧啶核苷(3 H-thymidine,3 H-TdR)掺入测定三种生长因子单用和分别联用诱导RPE细胞DNA合成改变，细胞计数观察RPE细胞生长变化。结果三种生长因子单用均可明显促进RPE细胞DNA合成及细胞数目增加,TNF-α、IL-β和bFGF的3 H-TdR掺入每分钟计数值(counts per minute,cpm)分别是对照组的2.74、2.66和1.69倍(P<0.05)。两种生长因子联用较单用cpm明显提高,其中TNF-α+IL-βcpm是对照组的3.14倍(P<0.05)。三种生长因子联用时cpm是对照组的3.74倍(P<0.05)。结论三种生长因子间存在促RPE细胞增殖的协同作用,这可能是生长因子对RPE细胞增殖的重要调控机制之一。(中华眼底病杂志,1998,14:95-97)     

曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β1，2 mRNA表达的影响

目的观察曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞(human tenon fibroblast,HTF)TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.方法体外进行HTF细胞原代及传代培养.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),研究不同浓度和不同作用时间的曲尼斯特对HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.结果曲尼斯特作用24 h后,25.0、50.0、100.0 mg/L浓度曲尼斯特组与对照组相比均能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.05、0.01)和TGF-β2(P＜0.01、0.05、0.01)mRNA表达.50.0 mg/L曲尼斯特处理12 h、24 h、48 h组相对于相应时间对照组,能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.01、0.01)和TGF-β1(P＜0.01、0.01、0.01)mRNA表达.结论 曲尼斯特能够下调体外培养HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA的表达,下调效应随药物浓度和作用时间的延长而加强.(中国眼耳鼻喉科杂志,2006,681～83)     

白介素1a和白介素1受体拮抗剂对培养的Graves’眼眶成纤维细胞增殖作用的影响

目的 探讨白介素1a(IL-1a)和白介素1受体拮抗剂(IL-1ra)对培养的Graves’眼病(GO)患者眼眶成纤维细胞增殖的影响。方法 以下述方法分别处理培养的GO和正常人眼眶成纤维细胞：不同浓度的IL-1a刺激成纤维细胞48h；30U／ml的IL—1a刺激成纤维细胞24～72h；不同浓度的IL—1ra或／和30U／ml的IL—1a处理成纤维细胞48h；75ngml的IL—1ra和30U／ml的IL-1a处理成纤维细胞24～72h。用MTT法测定成纤维细胞增殖的刺激或抑制率。结果IL-1a以剂量和时间依赖的方式刺激GO和正常人眼眶成纤维细胞增殖，而IL—1ra以剂量和时间依赖的方式抑制IL—1a诱导的GO和正常人眼眶成纤维细胞的增殖活性，刺激和抑制作用在GO和正常人眼眶成纤维细胞之间无明显差异。结论IL—1ra是IL—1a诱导的人眼眶成纤维细胞增殖的强有力的抑制剂，可望用于GO的治疗。     

转化生长因子-β1对人Tenon囊成纤维细胞表型转化的作用

目的探讨转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(humansubconjunctivalTenon’scapsulefibroblast,HTCF)表型转化的作用。方法人白内障手术中取结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞。用第5~9代细胞,以不同浓度TGF-β1(0μg·L-1,2μg·L-1,5μg·L-1,10μg·L-1,20μg·L-1)、不同时间(24h、48h、72h)诱导成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。结果体外用TGF-β1诱导HTCF,在0~10μg·L-1内,TGF-β1呈剂量依赖性增加平滑肌肌动蛋白在蛋白水平的表达,至20μg·L-1时表达迅速下降;10μg·L-1TGF-β1诱导48h后其平滑肌肌动蛋白的表达与24h、72h相比,差异有显著性(P<0.01,n=6)。结论一定浓度和剂量的TGF-β1能显著诱导HTCF表型转化为肌成纤维细胞,在人Tenon囊组织局部组织损伤修复及瘢痕形成中具有重要作用。     

抗TGF—β2抗体对滤过泡瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的 观察抗转化生长因子-β2(TGF-β2)抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法 利用手术修复人眼小梁切除术后失败滤过泡修复时切除下来的瘢痕组织进行组织块培养,获得成纤维细胞(FB).将0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用于FB 24h以及0.14μg/mL(半数抑制率质量浓度,IC50)抗体作用0、24、48、72h,通过生物化学显色法、RT-PCR法检测抗TGF-β2抗体对成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达量. 结果在FB中加入0、0.01、0.1、1μg/mL抗TGF-β2抗体作用24h及IC50质量浓度处理0、24、48、72h,结果显示随着抗TGF-β2抗体质量浓度增加及作用时间延长,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达依次减少,羟脯氨酸(HPr)及胶原含量逐渐降低(P＜0.05).结论 抗TGF-β2抗体能减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达及合成.     

层黏连蛋白对人翼状胬肉成纤维细胞生长的抑制作用

目的:探讨层黏连蛋白对体外培养的人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养的第3代翼状胬肉成纤维细胞,接种于层黏连蛋白包被培养皿(Ln组)和空白培养皿(对照组)中,倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法检测细胞增殖状态,作出生长曲线;免疫荧光法检测α-SMA在细胞内的表达;RT-PCR法检测TGF-β1和cytokeratin mRNA的表达水平.结果:Ln组成纤维细胞数量少于对照组;3～7 d,Ln组A570明显低于对照组(0.20 vs 0.28,0.22 vs 0.30,0.28 vs0.34,0.31 vs0.36,0.33 vs 0.36,P＜0.05);α-SMA在对照组细胞内表达良好,在Ln组的表达受到抑制;与对照组相比,Ln组TGF-β1 mRNA的表达下降,cytokeratin mRNA表达增加.结论:层黏连蛋白能抑制翼状胬肉中成纤维细胞的增殖.