土槿乙酸抑制人卵巢癌SKOV_3细胞增殖并诱导G_2/M期阻滞

目的探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和细胞周期的影响。方法 MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用;Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞术检测细胞周期;Real time-PCR和Western blot检测周期相关基因Cyclin B1、CDK1和CyclinD1的表达变化。结果 PLAB明显抑制SKOV3细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P<0.05),其24、48和72 h的IC50值分别为2.44、1.60、2.94μmol.L-1。5μmol.L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P<0.05),同时伴有Cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P<0.05),Cyclin D1呈低表达状态(P<0.05)。结论 PLAB可抑制SKOV3细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随Cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关。     

人白细胞介素1β(IL-1β)在诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡过程中的细胞周期阻滞作用和对线粒体Bcl-2家族蛋白的调节

目的研究人白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用流式细胞分析技术研究IL-1β对A375-S2细胞周期的影响。利用Westernβlot方法检测IL-1β对细胞线粒体内Bcl-2家族蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nM)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β可将细胞周期阻滞在G0/G1期,并具有时间依赖性。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。结论IL-1β通过将细胞周期阻滞在G0/G1期,上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。     

新型维甲酸衍生物ATPR对肿瘤细胞株SKOV3增殖及分化的影响

目的：探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（4-amino-2-trifluorometh—yl—phenylretinate,ATPR）对卵巢癌SKOV3细胞的增殖及分化作用。方法：ATPR作用于细胞株SKOV3后,MTT法检测细胞的增殖;吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化;ELISA法检测卵巢癌标志物糖链抗原125（CAl25）;流式细胞术检测细胞周期的变化情况。结果：ATPR呈浓度依赖性抑制SK—OV3细胞增殖,明显抑制作用出现在药物作用48h,但在72h后则更显著;倒置显微镜下观察发现细胞形态学趋于成熟分化;SKOV3中CAl25水平下降;流式细胞仪测定G0／G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0／G1期。结论：ATPR对SKOV3细胞具有抑制增殖和-定的诱导分化作用。     

TIMP-1基因体外稳定转染对人卵巢癌A2780细胞周期与增殖的影响

目的:探讨正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因对人卵巢癌细胞周期及增殖的影响。方法:将重组质粒正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用MTT细胞计数法检测肿瘤细胞生长增殖率,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果:经15～20 dG418筛选得到稳定表达细胞株,重组质粒TIMP-1稳定转染正义(PTs)组A2780细胞的增殖可明显受到抑制,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞。而反义(PTas)组细胞与之相反。结论:提示体外转染TIMP-1基因可使A2780细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。可为临床基因治疗及相关基因药物研究提供实验依据。     

Eag1钾离子通道在卵巢癌组织中的表达及意义

目的 检测Ether à go-go 1(Eag1)钾离子通道在人卵巢癌中的表达,对人卵巢癌细胞株SKOV3的影响及与卵巢癌患者临床特征的关系.方法 用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞SKOV3中Eag1的表达;用噻唑监比色法(MTT)检测Eag1钾离子通道抑制剂阿司咪唑(Astemizole)对SKOV3细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测阿司咪唑对对SKOV3细周期的影响;用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学的方法检测36例卵巢癌组织中Eag1蛋白的表达并结合临床病例资料进行分析.结果 阿司咪唑可明显抑制SKOV3细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期.在卵巢癌标本中,Eag1蛋白的阳性表达率明显高于正常卵巢组织.其在不同的临床分期方面差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Eag1钾离子通道异常表达于人卵巢癌组织中,并可能成为卵巢癌诊断和治疗的靶点.     

17-β雌二醇对SKOV3细胞HOXA10基因表达及甲基化的影响

目的 探讨17-β雌二醇(17-β E2)对人卵巢癌细胞株SKOV3中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛DNA甲基化的影响.方法 体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,按实验目的分别加入1×10-6、1×10-7、1×10-8 mol/L的17-β E2培养48 h后,收集细胞,分别采用实时荧光定量RT-PCR反应和Western blot检测HOXA10 mRNA和蛋白表达;提取SKOV3细胞基因组DNA,纯化、修饰后用甲基化特异性聚合酶链反应检测HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态.结果 与对照组相比,不同浓度的17-βE2可显著提高SKOV3细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达(P＜0.05).同时17-β E2作用后HOXA10基因呈部分甲基化状态.结论 17-β 2可以逆转SKOV3细胞中HOXA10基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态,使HOXA10基因的表达上调.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制。方法 （1）选取 2 组人卵巢癌细胞(SKOV3 和 SKOV3/DDP; HO8910 和 HO8910-PM)后, 设置对照组和终浓度为 1、 3、 5 及 7 μmol/L SAHA 组(SAHA 1~4 组), 采用 CCK-8 法分别检测 SAHA 对细胞增殖的影响。（2） 设置对照组和 SAHA 1、 2 组(2 和 5 μmol/L), Annexin V-FITC/PI 双标记流式细胞术分别检测 SAHA 对细胞凋亡及周期的影响。（3） RT-PCR 和 Western blot 检测 SAHA 1~4 组表型相关蛋白的表达水平。结果 （1）随着 SAHA 浓度的增加, SKOV3 细胞株 SKOV3/DDP 及 HO8910 细胞株 48 h 光密度 （OD） 值均呈逐渐降低趋势(均 P＜0.05)。（2） 48 h SAHA 1、 SAHA 2 组凋亡率高于对照组(均 P＜0.05); SAHA 作用 48 h, 细胞周期发生阻滞, 与对照组比较, SAHA 1 组和 SAHA 2 组 SKOV3 和 SKOV3/DDP 细胞 S 期和 G2/M 期比例增高, HO8910 和 HO8910-PM 细胞 G0/G1期比例增高(P＜0.05)。（3） SAHA 1、 2 组 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的 mRNA 表达水平均低于对照组, Caspase-3、 p21 和 p53 的 mRNA 表达水平明显高于对照组(P < 0.05); SAHA 1~4 组 Ac-Histone H3 和 Ac-Histone H4 和 p53 蛋白的表达较对照组明显增强, CyclinB1、 Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱。结论 SAHA 通过调节恶性表型相关蛋白 Caspase-3、 p53、 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的表达水平, 促进组蛋白乙酰化, 抑制卵巢癌细胞增殖, 阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

乙酰丹参酮ⅡA对SKOV3细胞增殖的抑制作用及其促进TFF1表达的作用

目的 观察乙酰丹参酮ⅡA (ATA)对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的诱导作用及对雌激素诱发蛋白TFF1表达的影响,探讨可能的作用机制.方法 通过MTT法计算ATA对卵巢癌细胞的活力以及IC50值;用流式细胞术检测凋亡率及细胞周期变化情况;用实时荧光定量聚合酶连反应(RT-PCR)检测TFF1 mRNA的表达水平,并通过构建双荧光素酶报告基因系统分析ATA对TFF1启动子活性的影响.结果 ATA对多种人卵巢癌细胞系均具有增殖抑制作用,对表达雌激素受体ER的肿瘤细胞效果最明显;能使SKOV3细胞周期阻滞在G2/M期,并诱导SKOV3细胞凋亡;能促进TFF1 mRNA的表达;能增强TFF1启动子的转录活性,且在TFF1启动子区域,AP-1结合位点对TFF1启动子的活性起绝对性作用.结论 ATA能有效抑制SKOV3的生长并可促进TFF1启动子的转录活性.     

贝那普利对氧化低密度脂蛋白诱导的肾小管上皮细胞间质转化及转化生长因子-β/Smad通路的影响

目的探讨贝那普利对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化(EMT)及转化生长因子-β(TGF-β)/Smad通路的影响。方法体外培养NRK-52E细胞,分为对照组、ox-LDL组(50μg/mL ox-LDL)、贝那普利组(50μg/mL ox-LDL+10μmol/L贝那普利)、TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1)、贝那普利+TGF-β1组(50μg/mL ox-LDL+5 ng/mL TGF-β1+10μmol/L贝那普利)。高倍光学显微镜观察各组NRK-52E细胞表型变化;免疫荧光染色法检测EMT标志性蛋白α-SMA、E-cadherin荧光强度;免疫印迹法检测各组NRK-52E细胞中α-SMA、E-cadherin蛋白及TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL组梭形或不规则形细胞增多,α-SMA荧光强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05);E-cadherin荧光表达强度减弱,蛋白量明显降低(P0.05)。与ox-LDL组比较,贝那普利组细胞表型改变明显减轻,α-SMA荧光表达强度明显减弱,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05);TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),Ecadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与贝那普利组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度明显增强,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著升高(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显降低(P0.05)。与TGF-β1组比较,贝那普利+TGF-β1组细胞α-SMA荧光表达强度及α-SMA、TGF-β1、pSmad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白量显著降低(P0.05),E-cadherin荧光表达强度及蛋白量明显升高(P0.05)。结论贝那普利可逆转ox-LDL诱导的肾小管上皮NRK-52E细胞间质转化的发生,机制可能是通过抑制TGF-β/Smad通路活化而发挥作用。     

膀胱癌组织TGF-β1mRNA表达及其意义

目的:探讨TGF-β1 mRNA表达与膀胱癌临床生物学行为的关系。方法;采用Northern杂交及斑点杂交方法检测了42例膀胱移行细胞癌及9例正常膀胱黏膜组织标本中的TGF-β1　mRNA表达情况,GAPDH作为内对照。结果:肿瘤组织中TGF-β1 mRNA含量高于正常膀胱黏膜组织(P<0.01)。从病理学分级看,G3级组中TGF-β1 mRNA含量高于正常黏膜组(P<0.01),但G1、G2、G3级3组间TGF-β1mRNA表达量无显著差别。从临床分期看,T2、T3期组中TGF-β1 mRNA含量均高于正常黏膜组(均P<0.05),T2期与T3期组也均高于T1期组(P<0.05和P<0.01),但T2期和T3期组间没有差别(P>0.05)。浸润性肿瘤组(T2期和T3期组)中TGF-β1mRNA含量高于表浅性肿瘤组(Ta和T1期组)。结论:TGF-β1 mRNA的表达量可作为判断膀胱癌浸润程度和预后的指标之一。     

蜂毒素对SGC-7901细胞生长及G_2/M期阻滞的影响

目的研究蜂毒素(Melittin)对胃上皮癌细胞SGC-7901细胞生长及细胞周期阻滞的影响。方法采用罗丹明B(SRB)染色法观察Melittin对SGC-7901细胞株生长曲线的影响;用流式细胞仪检测Melittin对该细胞周期阻滞的影响;RT-PCR检测细胞周期相关基因mRNA的表达。结果Melittin(1、2、4、8×10-3μg·L-1)体外给药24h,能抑制SGC-7901细胞的增殖活性(P<0.05orP<0.01);Melittin(4、8×10-3μg·L-1)作用SGC-790124h后,能明显阻滞该细胞株于G2/M期;并且降低G2/M期相关基因CylinB1-CDK1-Cdc25c mRNA的表达。结论Melittin具有抑制胃上皮癌细胞SGC-7901增殖的作用,其机制可能与干扰该细胞G2/M期相关基因的转录有关。     

2β(3羟丙氧基)骨化三醇对人肝癌细胞周期阻滞及P~(27kip1)蛋白的诱导表达

目的探讨2β(3羟丙氧基)骨化三醇(ED-71)诱导人肝癌细胞HepG2生长抑制和细胞周期G1阻滞,及对抑癌基因P27kip1表达的影响。方法培养HepG2,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察ED-71对HepG2的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,以Western-blot检测HepG2细胞中P27kip1蛋白的表达水平。结果ED-71处理后HepG2的生长缓慢,细胞生长受到明显抑制。细胞阻滞于G1期(80.6±2.6,48.7±3.0,P<0.05),P27kip1蛋白表达水平增强(0.11±0.06,0.67±0.08,P<0.05)。结论ED-71抑制人肝癌细胞株HepG2的生长,诱导人肝癌细胞分化,使细胞阻滞于G1期,可能与ED-71诱导人肝癌细胞中抑癌基因P27kip1蛋白的表达有关。     

双调控肿瘤特异性溶瘤腺病毒对卵巢癌靶向治疗的研究

目的 构建表达携带切除修复交叉互补基因1(ERCC1)siRNA的人端粒酶反转录酶启动子(hTERT)及缺氧诱导因子(HIF)的双调控肿瘤特异性溶瘤腺病毒(RSOAds-hTERT/HIF-ERCC1,以下简称双调控腺病毒),作用于卵巢癌细胞后研究其抑瘤作用及相关分子机制,为卵巢癌的基因治疗奠定基础.方法 2018年1—12月,以人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)调控腺病毒Ela基因,缺氧调控元件序列(HRE)调控E1b基因,重组hTERT/HIF双调控双功效的肿瘤特异性溶瘤腺病毒载体;于E1区插入ERCC1基因序列设计特异基因构建双调控腺病毒.将构建好的病毒增加荧光载体,荧光显微镜下观察SKOV3人卵巢癌细胞中病毒转染情况.以噻唑蓝(MTT)实验检测不同组别癌细胞增殖活性,流式细胞术检测不同组别癌细胞凋亡情况.蛋白质印迹法检测SKOV3细胞中ERCC1蛋白、JAK/STAT、PI3K/Akt通路蛋白表达情况.结果 成功构建了双调控腺病毒,病毒能够在卵巢癌中高效转染并快速增殖,屏蔽ERCC1耐药基因,并具明显的抑瘤作用.MTT结果显示,24 h后双调控腺病毒对SKOV3细胞株具有明显增殖抑制,随着病毒数目增加抑制率逐渐上升,感染强度(MOI)=30时,卵巢癌SKOV3细胞增殖率下降到50％以下,且AD-ERCC1-siRNA组与AD-NC-siRNA组肿瘤抑制差异无统计学意义(P>0.05),AD-ERCC1-siRNA联合顺铂(74.19±3.04)％抑瘤作用较AD-NC-siRNA+DDP组(56.85±2.51)％更强.流式细胞术结果显示:AD-ERCC1-siRNA组细胞凋亡率(5.5±0.75)％较对照组(0.5±0.24)％明显升高.我们对病毒作用后的SKOV3细胞运用WB方法进行检测,结果显示作用后的细胞ERCC1蛋白表达(0.567±0.016)较对照组(1.612±0.072)下降(P<0.01),JAK2[(0.860±0.010)比(0.694±0.011)]、STAT3[(0.826±0.032)比(0.651±0.037)]显著高于对照组,(P<0.01),而PI3K[(0.292±0.013)比(0.291±0.015)]、AKT[(0.810±0.018)比(0.813±0.024)]较对照组差异无统计学意义(P>0.05).结果提示,当病毒接触卵巢癌细胞24 h后发挥出对卵巢癌细胞较明显的抑瘤作用,且AD-ERCC1-siRNA组与AD-NC-siRNA组无明显差异,在感染强度(MOI)=30时,卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率下降到50％以下.结论 双调控腺病毒成功构建且具备高转染效率,该病毒对卵巢癌SKOV3细胞株有明显生长抑制及促凋亡作用,可能与JAK/STAT通路激活有关,而且该病毒能增强顺铂的用药效果,其机制可能与该病毒成功屏蔽ER-CC1耐药基因有关.     

PARP1基因抑制对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生中的作用以及PARP-1小干扰RNA对紫杉醇耐药卵巢癌细胞增殖的影响。方法使用紫杉醇刺激紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3,应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PARP-1基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测紫杉醇单独以及联合PARP siRNA对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 SKOV3/TAX细胞中PARP-1表达高于SKOV3细胞;紫杉醇可以减少SKOV3细胞中PARP-1的表达和抑制细胞的增殖,而对SKOV3/TAX细胞无明显作用;PARP-1 siRNA可以明显增强紫杉醇对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,逆转SKOV3/TAX细胞对紫杉醇的耐药性。结论 PARP-1在卵巢癌细胞表达水平与耐药性密切相关;PARP-1基因抑制可以增强紫杉醇对SKOV3增殖的抑制,逆转SKOV3/TAX对紫杉醇的耐药性。     

lncRNA SOX21-AS1的表达对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA SRY-box转录因子21反义RNA 1（lncRNA SOX21-AS1）对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响及其作用机制。方法 选取卵巢癌组织和其邻近的癌旁组织各75例,另选取卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、OVCR3和人卵巢正常上皮细胞HOSE作为实验对象,实时荧光定量PCR法检测lncRNA SOX21-AS1在组织和细胞中的表达。根据是否干扰lncRNA SOX21-AS1表达将细胞分为si-NC组和si-SOX21-AS1组。MTS实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞转移能力,TOP/FOP荧光素酶实验和Western blot实验检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性和相关蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌组织中的表达上调（P<0.05）。与卵巢正常上皮细胞HOSE相比,lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌细胞中的表达上调,SKOV3中最高（P<0.05）。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、无淋巴结转移的患者相比,FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、有淋巴结转移患者lncRNA SOX21-AS1相对表达水平升高（P<0.05）。干扰lncRNA SOX21-AS1表达可抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力、抑制Wnt/β-catenin信号通路活性并降低Wnt/β-catenin信号通路各蛋白的表达水平（P<0.05）。结论 lncRNA SOX21-AS1在卵巢癌组织和细胞中高表达,干扰lncRNA SOX21-AS1的表达可抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力。     

紫杉醇对U373细胞周期阻滞及增殖抑制的机制研究

目的研究紫杉醇(PTX)诱发神经胶质瘤U373细胞的周期阻滞和增殖抑制的相关机制。方法 MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫细胞荧光化学观察细胞形态学变化,RT-PCR和Western blot检测细胞周期相关CyclinB1、CyclinD1、CDK1、CDK2和p53的表达变化。结果 PTX可以明显抑制U373细胞的增殖活性,抑制作用呈时间浓度依赖性;细胞周期分析显示,实验组细胞G2/M期比例增高;细胞免疫荧光检测实验组细胞阻滞于有丝分裂期;RT-PCR和Western blot显示,PTX可以增加CDK1和CyclinB1表达,降低CyclinD1表达(P<0.05),而对CDK2无明显影响。结论 PTX能够抑制神经胶质瘤U373细胞增殖,引起有丝分裂期阻滞,诱导细胞凋亡,与其细胞周期相关蛋白表达水平密切相关。     

Survivin基因沉默对裸鼠人卵巢癌细胞移植瘤凋亡的影响

目的探讨survivin基因沉默对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤凋亡的影响。方法将重组survivin shRNA plasmid转染人卵巢癌细胞株SKOV3细胞,通过裸鼠移植瘤实验比较survivin基因沉默对裸鼠移植瘤的生长抑制作用,荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法检测与凋亡密切相关的cytochrome-c、caspase-9和caspase-3基因的表达。结果裸鼠移植瘤实验显示,与对照组(空载体组和未转染组)相比,survivin shRNA plasmid转染组人卵巢癌细胞株SKOV3细胞生长速度减慢,肿瘤体积缩小(P<0.05);荧光定量PCR和蛋白印迹法结果都显示,与对照组相比,survivin shRNA plasmid转染组cytochrome-c、caspase-9和caspase-3的表达明显升高(P<0.05)。结论 survivin基因沉默可通过促进肿瘤细胞的凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长。     

棘豆素对人雄激素非依赖性前列腺癌 PC-3细胞的作用研究

【】目的: 研究棘豆素(2′, 4′-dihydroxychalcone,TFC)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞的作用,并探讨其作用机制。方法：CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色、荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期的变化, Western blot检测药物对肿瘤细胞中P27kip1和PTEN蛋白表达的影响。结果：TFC能显著抑制PC-3细胞的增殖,细胞呈现凋亡形态学改变,细胞凋亡率明显增加,细胞周期阻滞于G0/G1期。此外,P27kip1和PTEN蛋白表达量明显增加。结论：TFC通过诱导PC-3细胞凋亡抑制肿瘤细胞增殖,可能与其G0/G1细胞周期阻滞,以及PTEN 和P27Kip1蛋白表达上调有关。     

熊果酸对人上皮性卵巢癌 SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究熊果酸(UA)对人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 将处于对数生长期人上皮性卵巢癌SKOV3细胞随机分为5组:正常对照组、熊果酸(40、20、10 mg·L-1)干预组和顺铂(40 mg·L-1)干预组(阳性对照组)。药物干预48 h后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增值抑制率;通过流式细胞仪分析细胞周期的改变、观察细胞凋亡并计算细胞凋亡率;通过RT-PCR技术检测细胞Bax mRNA和bcl-2 mRNA表达并计算Bax/bcl-2表达比值,Western blot法检测细胞半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达并进行半定量分析。结果 较正常对照组,熊果酸(40、20 mg·L-1)干预组细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01),细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);熊果酸(40、20 mg·L-1)干预组细胞中bcl-2 mRNA表达显著下调、Bax mRNA表达显著上调,Bax/bcl-2表达比值显著升高(P<0.01),caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论 熊果酸具有抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖并促进其凋亡的作用,其作用机制可能与熊果酸能够有效下调bcl-2 mRNA表达、上调Bax mRNA表达、提高Bax/bcl-2表达比值以及上调caspase-3蛋白表达有关。     

青藤碱对类风湿关节炎患者滑膜细胞凋亡细胞周期及bal-2蛋白的影响

目的探讨中药青藤碱(SN)诱导类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞凋亡的发生机制,为RA治疗提供新的理论基础。方法光镜和荧光显微镜观察滑膜细胞凋亡形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期及bcl-2基因的表达。结果光镜及荧光显微镜下可见核固缩,变圆,荧光染色增强等典型凋亡形态学变化。流式细胞仪结果显示,在2.8～3.2mmol/L浓度范围内,随着SN浓度的增强,滑膜细胞的凋亡率增加。作用48h后,bcl-2蛋白在凋亡过程中的表达持续下调,细胞周期阻滞在G1～S期。结论SN在一定浓度及作用时间内可诱导RA患者滑膜细胞凋亡,其作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达及阻滞G1期细胞向S期移行有关。