温胆汤改良方对Aβ25-35诱导AD细胞模型bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的：温胆汤改良方含药脑脊液及含药血清对AD细胞模型凋亡及凋亡．相关蛋白bcl-2、bax表达的影响。方法：温胆汤改良方含药脑脊液和含药血清分别作用于Aβ25-35诱导NG108-15细胞建立的AD细胞模型，镜下观察细胞生长状况，流式细胞术检测细胞凋亡，免疫组化检测bcl-2、bax蛋白的表达。结果：与模型组比较，含药脑脊液组和含药血清组细胞凋亡率降低（p〈0．05），bcl-2表达无显著性差异（p〉0、05），bax蛋白表达减弱（p〈0．01），bcl-2／bax比值升高（p〈0．01）。结论：温胆汤改艮方能有效地抑制AD细胞模型凋亡，其作用机理可能与其干预凋亡相关基因bax的表达，升高bcl-2／bax比值有关。     

温胆汤改良方对Alzheimer病细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响

目的:探讨温胆汤改良方含药血清对AD细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响。方法:经老化处理的Aβ25-35(终浓度为5μmol/L)与NG108-15细胞共同孵育24h建立AD细胞模型,运用中药血清药理学方法,以温胆汤改良方含药血清作用于AD细胞模型,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,SABC免疫组化法检测p-JNK、p-c-jun蛋白的表达。结果:温胆汤改良方能显著性降低NG108-15细胞JNK、c-jun的表达,降低细胞凋亡率。与模型组比较,抑制剂组和含药血清组JNK、c-jun的表达降低有显著性意义(P<0.05)。结论:温胆汤改良方保护由Aβ25-35引起的NG108-15细胞损伤作用,可能与其作用于JNK信号转导通路有着密切的关系。     

愈风颗粒对MCAO大鼠神经细胞凋亡及bcl-2，bax表达影响的实验研究

目的：研究愈风颗粒对大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型脑神经细胞凋亡及bcl-2，bax表达的影响；方法：将MCAO大鼠分为3组：中药组，西药组及模型组，另设正常组做对照。观察各组大鼠脑组织TUNEL及bcl-2，bax表达的变化；结果：模型组大鼠脑组织TUNEL阳性数，bcl-2，bax阳性细胞数显著高于正常组，bcl-2／bax比值显著低于正常组（均P〈0．01）；中药组及西药组脑组织TUNEL阳性数，bax阳性细胞数显著低于模型组，bcl-2阳性细胞数及bcl-2／bax比值显著高于模型组（均P〈0．01）。结论：愈风颗粒有明显的抗凋亡作用，其作用机制可能与下调促凋亡基因bax水平，上调抗凋亡基因bcl-2水平，提高bcl-2／bax比值有关。     

黄芪甲甙保护阿霉素心肌损伤大鼠抗凋亡作用的机制研究

目的 探讨黄芪甲甙（简称黄芪）抗阿霉素所致心肌细胞凋亡的可能机制。方法 取SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄芪3个剂量（低、中、高）组。空白组腹腔注射生理盐水,余4组分别给予阿霉素造模（15mg／kg,隔日腹腔注射1次,共6次）。黄芪3个剂量组同时用不同剂量黄芪甲甙灌胃治疗,空白组和模型组同时给予羧甲基纤维素钠。采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡。细胞免疫组织化学检测bcl-2、bax蛋白的表达;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测bcl-2、bax基因的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞凋亡发生率增高（P〈0．01）,抑制凋亡因子bcl-2基因及蛋白表达下降（P〈0．01）,而促进凋亡因子bax基因及蛋白表达增强（P〈0．01）,bcl-2／baxmRNA比值降低（P〈0．05）。与模型组比较,黄芪高剂量组大鼠心肌细胞的凋亡率显著下降（P〈0．05）,bcl-2基因及蛋白水平表达增强（P〈0．05）,bax基因及蛋白水平表达下降（P〈0．05）,bcl-2／baxmRNA比值明显上升（P〈0．05）。结论 高剂量黄芪甲甙治疗可以抑制阿霉素所致大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与凋亡基因bcl-2表达有关。     

改良三甲散含药脑脊液对Аβ诱导的海马神经元细胞损伤相关基因的影响

目的：探讨改良三甲散对β淀粉样蛋白（Аβ25-35）所致海马神经元细胞损伤时凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3表达的调控作用。方法：将原代培养的神经元细胞分空白组、模型组、脑复康组和改良三甲散低、高剂量组。选择性培养7d后吸去培养液,分别加入空白培养液、正常脑脊液（盐水组）、脑复康脑脊液和中药脑脊液低、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的Аβ25-35（终浓度为5μmol/L）,建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液,继续孵育24h后离心收集细胞,提取总RNA。应用半定量RT-PCR法测定bax、bcl-2和caspase-3基因的表达。结果：模型组bcl-2基因表达降低、bcl-2/bax比值明显降低,bax、caspase-3基因表达显著增加;改良三甲散组bcl-2基因表达明显升高,bax、caspase-3基因表达显著降低。结论：改良三甲散脑脊液能有效降低bax、caspase-3基因表达,提高bcl-2的表达,从而抑制细胞凋亡,促进海马神经元细胞存活。     

增液汤抑制幼鼠胸腺细胞凋亡作用的机制探讨

目的：观察预防性应用增强汤注射注射剂对幼鼠胸腺细胞凋亡及其相关基因的相关基因的影响。方法：给4－5周龄Wistar大鼠腹腔注射增液汤注射剂和地塞米松，采用原位末端标记（TUNEL）法分析不同处理组的凋亡细胞，同时采用免疫组化方法检测幼鼠胸腺细胞bcl-2和bax基因蛋白表达情况。结果：用TUNEL法标记凋亡细胞，荧光显微镜下，地塞米松组可见致密浓染的黄绿色荧光，呈局灶状分布；而增液汤组只有散在的荧光。光镜观察地塞米松组TUNEL阳性的细胞数目较多，其凋亡指数为0．41±0．01；而增液汤组只有散在的荧光，光镜观察地塞米松组TUNEL阳性细胞数目较多，其凋亡指数为0．41±0．01；增液汤组TUNEL阳性细胞数目较少，凋亡指数为0．07±0．004，与地塞米松组比较，差异有显著性（P＜0．01）。免疫组织化学结果表明，地塞米松组bcl-2基因蛋白呈低表达，其蛋白阳性率为（0．1960±0．0060）％，bax蛋白过度表达，蛋白阳性率为（0．4315±0．0165）％，bcl-2/bax<1；相反增液汤组细胞bcl-1基因蛋白呈高表达，bax基因蛋白仅有少量表达，其蛋白阳性率为（0．5010±0．0170）％和（0．1854±0．009％），bcl-2/bax>1。两组比较，差异有显著性（P＜0．01）。结论：通过调控凋亡基因bcl-2/bax表达，增强胸腺细胞对地塞米松的抵抗，进而抑制细胞凋亡，可能是增液汤抑制幼鼠胸腺细胞凋亡的重要作用环节之一。     

补肾益智方对AD细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响

目的：观察补肾益智方含药血清对AD（Alzheimer's Disease)细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响。方法：在神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交的NG108－15细胞培养液中加入预先老化4d的Aβ25－35片段共同孵育,建立AD细胞模型。分别加入正常老年大鼠血清、补肾益智方高剂量含药血清和补肾益智方低剂量含药血清培养48h后;应用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度（Ca^2 )的变化情况;荧光显微镜观察细胞骨架的重组情况,流式细胞仪检测细胞的凋亡细胞。结果：与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高剂量补肾方含药血清组、低剂量补肾方含药血清细胞内Ca^2 浓度的相对荧光值明显降低（P＜0．01）,而他们间两两比较则差异显著（P＞0．05）。正常大鼠血清加Aβ25－35的NG108－15细胞组可以看到,细胞骨架严重解聚并向边缘扩散,细胞形态变性,还有细胞死亡现象;而高、低剂量补肾方含药血清组细胞骨架呈现微弱解聚现象,细胞形态正常,无变性和死亡现象。与正常大鼠血清加Aβ25－35组比较,高、低剂量补肾方含药血清组NG108－15细胞凋亡率明显减少（P＜0．01）。结论：补肾益智方含药血清可以抑制细胞Ca^2 内流,平衡控制细胞内Ca^2 浓度;对Aβ引起NG108－15细胞骨架解聚、细胞变性等有保护作用,能部分保护Aβ25－35诱导的细胞凋亡。     

扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌PC-3细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨扶正利湿抗癌方含药血清对前列腺癌细胞株PC-3体外增殖能力的影响及其作用机制。方法:应用CCK-8法测定不同浓度扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞生长抑制情况,流式细胞仪检测其对PC-3细胞凋亡及细胞周期的影响,并以Western blot分析扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞凋亡调控蛋白bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:扶正利湿抗癌方含药血清对PC-3细胞体外增殖抑制作用明显,呈浓度及时间依赖性。流式结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可诱导PC-3细胞凋亡,并能够增加G_2/M期细胞比例,降低S期细胞比例,呈浓度依赖性。Western blot结果显示,扶正利湿抗癌方含药血清可下调bcl-2蛋白的表达,而上调bax蛋白的表达,呈浓度依赖性。结论:扶正利湿抗癌方含药血清可以通过调节bcl-2和bax蛋白的表达发挥体外抑制PC-3细胞增殖的作用。     

补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:研究补肾益气方对皮质酮致大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax、IL-2表达的影响。方法:1×10-5mol/L皮质酮处理乳鼠胸腺细胞制作病理细胞模型,分组:正常组;模型组;补肾益气组。Annexin V-PI双染色法结合FCM检测胸腺细胞凋亡;Real-time PCR和Western blotting法检测Bcl-2、Bax、IL-2的表达。结果:皮质酮诱导胸腺细胞凋亡率显著升高(P0.01);bax表达显著升高,bcl-2/bax比值、IL-2表达降低(P0.05)。与模型组比较,补肾益气组凋亡率降低(P0.05);Bax mRNA表达降低,bcl-2/bax比值、IL-2表达升高(P0.05)。结论:补肾益气方含药鼠血清能通过改善模型细胞bcl-2/bax的异常变化,抑制胸腺细胞过度凋亡,提高胸腺依赖性免疫功能。     

益气通络方对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达影响的血清药理学研究

目的：观察益气通络方含药血清对缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达的作用。方法：采用流式细胞仪检测缺氧再给氧心肌细胞bcl-2基因表达强度。结果：1．缺氧24h、再给氧4h组心肌细胞bcl-2阳性表达比率增加,与正常对照组比较具有显著差异（P＜0．01）;2．益气通络方低、中、高剂量含药血清组bcl-2阳性表达比率较单纯缺氧再给氧组增加,组间比较呈显著差异（P＜0．01）。讨论：缺氧再给氧能诱导心肌细胞bcl-2基因表达,益气通络方含药血清可增强其表达,可能是益气通络方保护缺氧再给氧心肌细胞,发挥抗缺血再灌注损伤的重要机制之一。     

中药何首乌饮对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2,bax表达的影响

目的通过测定不同剂量的中药何首乌饮含药血清作用后的大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达及caspase-3活性,探讨何首乌饮对卵巢自身功能的影响。方法制备排卵前卵巢模型,收集颗粒细胞分别与雌性SD幼鼠空白血清及含不同剂量何首乌饮的药物血清在体外共同培养,Western blotting检测GC内凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达情况;分光光度法检测颗粒细胞内caspase-3活性。结果何首乌饮含药血清可上调颗粒细胞bcl-2蛋白表达,下调bax蛋白表达,中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,可明显上调bcl-2蛋白表达(P均<0.01),中、高剂量组何首乌饮含药血清与对照组比较,明显下调bax蛋白表达(P均<0.01)。何首乌饮含药血清可下调颗粒细胞caspase-3活性,中、高剂量何首乌饮含药血清组与对照组比较有显著性差异(P均<0.01)。结论何首乌饮增加GC内凋亡抑制蛋白bcl-2表达及减少凋亡促进蛋白bax表达的作用,可能是其抑制GC凋亡,防止卵泡闭锁的作用途径之一;同时何首乌饮可能是在凋亡的较早阶段,通过阻断caspase-3的级联裂解即可开始起效,而发挥凋亡抑制作用。     

调衡方对Lewis肺癌细胞凋亡标志物bax及bcl-2表达的影响

目的探讨调衡方含药血清诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的含药血清（无特定病原体雌性SD大鼠32只随机分为4组,每组8只,灌服给药,制备调衡方大、中、小剂量含药血清,正常血清。又将细胞分为5组,调衡方大、中、小剂量含药血清组,中剂量含药血清＋AG490干预组,正常血清组）处理Lewis肺癌细胞,用溴化四唑蓝（MTT）法检测药物对细胞增殖的影响;以流式细胞仪测定碘化丙啶染色细胞周期的变化;采用实时聚合酶链式反应（PCR）法检测bax和bcl-2的mRNA表达。结果调衡方含药血清处理Lewis肺癌细胞后,随着药物浓度增加,作用时间延长,细胞增殖速度减慢。流式细胞仪检测结果显示,调衡方含药血清使Lewis肺癌细胞阻滞于S期,随着药物浓度的增加,细胞凋亡逐渐增加,中、大剂与中剂量＋AG490组尤为明显（P〈0.01）。调衡方含药血清还能够促进细胞中bax mRNA表达,减少bcl-2 mRNA表达（P〈0.05,P〈0.01）,并呈浓度依赖性。结论调衡方含药血清能降低Lewis肺癌细胞内bcl-2含量及提高bax的表达,使bax/bcl-2比值升高,这可能是调衡方抗肿瘤诱导Lewis肺癌细胞凋亡的机制。     

龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠诱导的大鼠软骨细胞bax、bcl-2表达的影响

目的：比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对硝普钠（SNP）诱导后软骨细胞bax、bcl-2表达的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机理。方法：取第三代4周龄SD大鼠关节软骨细胞,经SNP诱导凋亡后,采用免疫组化染色法及Realtime-PCR观察龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对软骨细胞bax、bcl-2表达的影响。结果：龟鹿二仙胶及其拆方各组均可引起bcl-2表达升高及bax下降,与生理盐水组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,龟鹿二仙胶与龟板、鹿角比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：龟板、鹿角、人参、枸杞均具有抑制软骨细胞凋亡的作用,而4味药同用,人参、枸杞并无显著加强龟板、鹿角的抑制凋亡作用。     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤凋亡基因bax bcl-2和caspase-3表达的影响

目的：探讨古方地黄饮子对B淀粉样蛋白（Aβ25-35）所致PC12细胞损伤时凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3表达的调控作用。方法：把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为6组：空白对照组、模型对照组、VitE脑脊液组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。待24h细胞贴壁后吸去培养液，分别加入空白培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高刺量，加培养液补至等量，37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的AB25—35（终浓度为10μmol／L），建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液，继续孵育24h后离心收集细胞，提取总RNA。应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定bax、bcl-2和easpase-3基因的表达。结果：地黄饮子能下调bax、easpase-3基因的表达，对bcl-2基因的表达有上调作用。结论：地黄饮子脑脊液能有效降低bax、easpase-3基因表达，提高bcl-2的表达，从而抑制、延迟细胞凋亡过程，阻止细胞凋亡，促进PC12细胞存活。     

马红丸含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和baxmRNA表达的影响

目的 探讨马红丸(马钱子、红娘子、全蝎等)含药血清对人肝癌smmc-7721细胞bcl-2和bax mRNA表达的影响.方法 采用血清药理学方法制备马红丸(MHP)和阿霉素(ADM)含药血清以及对照血清,作用于smmc-7721细胞.MTT 法检测含药血清对srmmc-7721细胞增殖的影响;测定含药血清对smmc-7721细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测含药血清对smmc-7721细胞bcl-2mRNA和bax mRNA表达的影响.结果 30％体积的马红丸和阿霉素含药血清作用于srmmc-7721细胞72 h,明显抑制细胞的增殖(P＜0.01),培养液中LDH的释放量和细胞凋亡率明显高于空白血清组(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高(P＜0.01).结论 30％马红丸含药血清作用于人肝癌smmc-7721细胞72 h,可明显抑制细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞中bcl-2mRNA表达,促进bax mRNA表达有关.     

清金得生片对人肺腺癌细胞端粒酶及凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的探讨清金得生片抑制肺癌细胞生长的相关分子机制。方法采用免疫组织化学染色(SABC)方法检测清金得生片含药血清处理后人肺腺癌细胞株端粒酶活性和凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果清金得生片含药血清作用72h,人肺腺癌细胞端粒酶活性明显抑制,同时可下调bcl-2蛋白阳性细胞染色率、上调bax蛋白阳性细胞染色率。结论清金得生片通过抑制人肺腺癌细胞端粒酶活性,调节bcl-2和bax蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用。     

益脑灵对老年性痴呆模型大鼠脑组织bcl-2、bax影响的研究

雄性Wistar大鼠连续腹腔内注射D-半乳糖6W后,双侧海马内注射Aβ25-35造成老年性痴呆(AD)模型。通过检测益脑灵对AD模型大鼠学习、记忆能力及脑组织细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达的影响,探讨益脑灵防治AD的作用机理。结果显示,益脑灵可改善AD模型大鼠行为学障碍,可提高bcl-2蛋白的表达、降低bax蛋白的表达。结论:益脑灵改善AD学习、记忆能力,防治老年性痴呆的机理可能与抑制细胞凋亡有关。     

黄芪注射液对SAP肺损伤大鼠SOD、MDA及肺组织bcl－2、bax蛋白表达的影响

探讨氧化／抗氧化失衡和凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达在SAP肺损伤发病机制中的作用及黄芪注射液对其的潜在防治作用。方法：SD大鼠96只随机分为模型组,假手术组（对照组）,黄芪低、高剂量组。通过逆行胰胆管注射3．5％牛磺胆酸钠建立重症胰腺炎肺损伤大鼠动物模型,检测血清SOD活力和MDA含量、肺组织bcl-2、bax蛋白表达（免疫组化）及光镜观察胰腺、肺组织病理变化情况。结果：与正常组比较,模型组大鼠血清SOD活力降低而MDA含量升高,肺组织bcl-2、bax蛋白表达均明显增强;与模型组比较,黄芪低、高剂量组大鼠血清SOD活力升高而MDA含量降低,黄芪高剂量组bcl-2蛋白表达升高,黄芪低、高剂量组bax蛋白表述降低;胰腺和肺组织损伤程度明显减轻;差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：黄芪注射液能通过纠正氧化／抗氧化失衡和调节肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax表达对SAP肺损伤起到防治作用。     

黄角颗粒对MCAO大鼠神经细胞bcl-2、bax表达影响的实验研究

目的 研究黄角颗粒对大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型脑神经细胞bcl-2、bax表达的影响。方法 将MCAO大鼠分为中药大、中、小剂量组，西药组及模型组，另设正常组作对照；观察各组大鼠脑神经细胞bcl-2、bax表达的变化。结果 模型组大鼠脑组织bcl-2、bax阳性细胞数显著高于正常组，bcl-2／bax比值显著低于正常组；中药大、中、小剂量组及西药组脑组织bax阳性细胞数显著低于模型组，bcl-2及bcl-2／bax比值显著高于模型组；中药大剂量组脑组织bcl-2、bax阳性细胞数与西药组相近，其bcl-2／bax比值显著高于西药组。结论 黄角颗粒能下调MCAO大鼠脑组织促凋亡基因bax水平，上调抗凋亡基因bcl-2水平，提高bcl-2／bax比值；此可能是其抗急性缺血性神经细胞凋亡的机制之一。     

赤芍水提物对肝星状细胞HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究赤芍水提物对肝星状细胞株HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响.方法 采用乙醛造模后的肝星状细胞株HSC-T6细胞作为酒精性肝纤维化的体外研究模型;以赤芍水提物给彼格犬一次性灌胃,取给药后2 h的血清作为实验药物血清;免疫细胞化学法检测肝星状细胞HSC-T6中bax、bcl-2、caspase-3蛋白表达.结果 乙醛造模后的HSC-T6细胞中bcl-2的表达较正常组细胞增加,bax 、caspase-3表达降低;药物血清作用后的肝星状细胞HSC-T6细胞中bcl-2的表达较模型组的HSC-T6细胞显著性降低, bax、caspase-3的表达较模型组细胞显著性增加.结论 赤芍水提物可能是通过影响bax、bcl-2、caspase-3等基因异常表达来实现对HSC-T6的抑制增殖及促凋亡作用的,这可能与一些凋亡相关疾病如酒精性肝纤维化的发生有关.