甲壳质套管桥接周围神经长度极限的研究

目的 通过采用不同间隙套接修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究,探讨甲壳质套管桥接修复周围神经损伤的长度极限.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,于大鼠右侧坐骨神经分叉处以上5 mm建立坐骨神经离断伤模型,部分切除坐骨神经后使用甲壳质套管桥接修复,使神经断端间留有2、5、8和10 mm间隙.8周后常规锇酸染色,镜下观察套管远端有髓神经纤维数目、轴突平均面积、髓鞘平均厚度及腓肠肌平均湿重,并进行定量组织学分析.结果 术后8周显示2 mm小间隙组神经纤维已有80%再生,再生效果最佳,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.01).随着间隙距离逐渐增加,神经纤维再生效果逐渐变差;5 mm间隙组再生约60%,效果优于8 mm间隙组(P＜0.01);8 mm间隙组再生约20%,优于10 mm间隙组(P＜0.01);10 mm间隙组只有1%有髓神经纤维成功长入远端,肌肉湿重降至正常的42.9%.结论 使用甲壳质套管桥接修复大鼠坐骨神经损伤时,2 mm左右小间隙套接修复效果最佳,5 mm间隙是修复后周围神经功能得到恢复的极限间隙,10 mm是神经单靠趋化性、营养作用再生的最大间隙.     

生物套管小间隙桥接修复周围神经的实验研究

目的　探讨用部分脱乙酰甲壳质生物套管小间隙桥接修复周围神经损伤的可行性。方法　将SD大鼠双侧坐骨神经切断后 ,按手术方法随机分为 5组。A组 :神经外膜原位缝合 (n =10 ) ;B组 :生物套管小间隙原位桥接 (n =10 ) ;C组 :断端旋转 180°外膜缝合 (n =10 ) ;D组 :断端旋转 180°生物套管小间隙桥接 (n =10 ) ;N组 :正常对照 (n =10 )。术后 6周行电生理学检查 ,光镜下作再生有髓神经纤维计数。结果　A、B、D组的运动神经传导速度快于C组但慢于N组 ,5组间差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。有髓神经纤维计数数目 ,A >B >D >C >N组 ,A、B、D组与C组相比 ,两者差异有显著意义 (P <0 .0 1,P<0 .0 5 ) ;但A、B、D 3组间的差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　部分脱乙酰甲壳质生物套管小间隙桥接修复周围神经的效果好于断端转位的外膜缝合 ,具有替代外膜缝合的可行性。     

甲壳质生物套管小间隙桥接大鼠周围神经的实验研究

目的探讨脱乙酰甲壳质生物套管小间隙桥接周围神经损伤的可行性。方法将120只SD大鼠右侧坐骨神经切断,按手术方法随机分为5组。A组:神经外膜原位缝合(n=24);B组:套管小间隙原位桥接(n=24,间隙5mm);C组:两断端相对旋转180°后外膜缝合(n=24);D组:两断端相对旋转180°后套管小间隙桥接(n=24,间隙5mm);E组:套管小间隙原位桥接(n=24,间隙5mm)后间隙内注射神经生长因子(NGF)。术后2、4、6、8周分别进行电生理学检查、组织学检查以及计算单位视野有髓神经纤维数。结果组织学检查术后4周各实验组的神经远端均见到再生的神经纤维;小间隙套管组(B,D组)运动神经传导速度在各个时间检测点上均好于相应的直接外膜缝合组(A组)和旋转后直接外膜缝合组(C组)(P<0·05)。小间隙套管组(B,D组)神经远端的有髓神经纤维计数在4、6、8周3个检测点上高于相应的直接外膜缝合组(A组)和旋转后直接外膜缝合组(C组)(P<0·01);在2周时差异没有统计学意义(P>0·05)。结论生物套管小间隙(5mm)桥接的修复周围神经的效果好于断端外膜直接缝合,具有替代直接神经外膜缝合的临床应用可行性。     

自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂的实验研究

目的 探讨应用自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂的可行性和优越性.方法 取SD大鼠40只,体质量250～350g,随机分成2组,每组20只.实验组:坐骨神经切断后采用自体神经外膜小间隙桥接法缝合;对照组:坐骨神经切断后采用神经外膜原位缝合.术后2、4、6、8、10、12、14及16周时,分别从2组中各取出2只大鼠,大体观察实验动物肢体恢复自主活动的时间,显微镜视下观察神经再生室及缝合口的大体形态,光镜及电镜下对2组再生神经纤维进行观察.结果 实验组大鼠恢复肢体自主活动快,缝合口与周围组织粘连轻.形态学观察发现小间隙神经纤维排列有序,结缔组织增生明显减少.电镜观察显示神经间隙远端再生神经髓鞘板层呈同心圆状排列致密、整齐,雪旺细胞增生明显.而对照组没有上述改变.结论 自体神经外膜小间隙桥接法构建神经再生室修复周围神经断裂是可行的,优于神经外膜原位缝合法,是修复周围神经断裂的一种新方法.     

小间隙桥接周围神经损伤Gap-43表达变化的实验研究

目的 观察采用小间隙桥接法修复大鼠坐骨神经损伤时套管内Gap-43 mRNA含量的变化.方法 SD 大鼠78只,随机分为13组,每组6只.其中6组切断右侧坐骨神经并原位缝合,另6组切断右侧坐骨神经采用小间隙桥接法修复.1组为正常对照.分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、28 d以吻合口为中心,取上下各5 mm共1 cm坐骨神经提取总RNA,采取实时荧光定量反转录聚合酶链(Real-time RT-PCR)技术检测组织中Gap-43 mRNA含量变化.结果 鼠周围神经中Gap-43 mRNA含量在正常组织有低水平表达,在损伤后1 d即升高,在损伤后28 d降低,但仍高于正常坐骨神经内表达水平.桥接缝合组Gap-43表达高于外膜缝合组.结论 大鼠坐骨神经损伤后采用不同修复方法其Gap-43基因表趋势相似,但由套管形成的封闭空间蕴含了较高的神经再生相关因子,有利于神经再生.     

细胞外ATP对周围神经导管中再生轴突诱导作用的实验研究

目的 证实细胞对ATP对坐骨神经损伤后再生轴突的吸引性诱导作用。方法 将SD雌性大鼠制成5nm长坐骨神经缺损的模型,用长双臂“Y”形硅胶管桥接神经,硅胶管单臂端与坐骨神经近端作套入缝合,与左侧坐骨神经缝接的硅胶管两端缝合封闭,硅胶管两臂内注入ATP的为实验组,注入生理盐水的为对照组。与右侧坐肌神经缝接的硅胶管远端管中注入ATP的硅胶管与远端坐骨神经缝接。术后4周,8周取材,肉眼观察神经纤维生长情况;并作光镜,电镜观察及病理图像分析,观察再生神经纤维的数目和形成髓鞘的厚度。结果 再生的神经轴突均长入含ATP的硅胶管内,生理盐水对照组内未见任何神经纤维长入。远端与坐骨神经缝合能增强ATP的轴突诱导作用,并具有促进再生神经轴突成熟的作用。结论 细胞外ATP具有很强的再生神经轴突诱导作用,并具有促进再生轴突成熟的作用。     

周围神经小间隙动脉套接的免疫组织化学观察

目的:观察周围神经在动脉套管内的再生机制,比较小间隙套接法和外膜直接缝合的再生时相差别。方法:在大鼠腓总神经上分别做成2mm 间隙动脉套接和原位外膜缝合两组模型,于7、14、21及28天取材。采用免疫组化 ABC 法观察雪旺细胞及新生轴索的增殖和生长。结果:雪旺细胞沿动脉套管壁大量增殖,新生索轴沿雪旺细胞通过动脉套管达远侧神经断端;套接组新生纤维到达远端神经的时间比直接缝合组迟约2周;3周后远端神经断面的新生轴索数两组相近。结论:小间隙套接法有可能成为解决神经断端定位难及提高神经再生效果的有效手段。     

不同对位情况下神经直接缝合与小间隙套管法修复的疗效比较

目的比较不同对位情况下神经直接缝合与小间隙套管修复神经的疗效。方法取ＳＤ大鼠４０只，解剖并分离出右侧坐骨神经后于股中部切断，随机分为４组，每组１０只。Ａ组：行神经原位直接缝合；Ｂ组：将神经远端旋转１８０度后直接缝合；Ｃ组：用硅胶管套接原位修复神经，神经间隙为５ｍｍ；Ｄ组：神经远端旋转１８０度后用硅胶管套接修复，神经间隙为５ｍｍ。术后４、８、１２周检测坐骨神经功能指数（ＳＦＩ），神经电图和组织形态学变化。结果Ｂ组ＳＦＩ、运动神经传导速度（ＭＮＣＶ）比Ａ、Ｃ、Ｄ三组恢复均差（Ｐ＜０．０１），Ａ、Ｃ、Ｄ三组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。再生有髓纤维计数各组间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论神经断端对位正确时，无论是直接缝合还是用小间隙套管法修复，两者疗效一致；神经断端错位对合时，小间隙套管法修复的疗效优于神经直接缝合。     

小间隙桥接周围神经对缝合口神经调节蛋白-1表达变化的影响

目的 观察采用小间隙桥接法修复大鼠坐骨神经损伤时套管内神经调节蛋白-1(NRG-1)mRNA含量的变化.方法 取SD大鼠78只,体质量200～250 g.随机分为3组,其中实验组A和实验组B各有大鼠36只,正常对照组有大鼠6只.2组实验组根据观察时间的不同再分为6组,每组有大鼠6只.实验组A:切断并原位缝合右侧坐骨神经.实验组B:切断并采用小间隙桥接法修复右侧坐骨神经.分别于术后1、3、5、7、14、28 d以缝合口为中心,取上下各5 m共1 cm坐骨神经提取总RNA,采取实时荧光定量反转录聚合酶联(Real-time RT-PCR)技术检测组织中NRG-1mRNA的含量变化.结果 大鼠周围神经中NRG-1 mRNA含量在正常组织有低水平表达,在损伤后1 d即明显升高,在损伤后14 d降低,随即恢复较高水平,持续至伤后28 d.在部分时间点高于外膜缝合组.结论 大鼠坐骨神经损伤后采用不同修复方法NRG-1基因表达变化不同步,提示套管形成的封闭空间蕴含了较高的神经再生相关因子,有利于神经再生.     

坐骨神经不等径小间隙动脉套接吻合后再生时相的组织学观察

目的 观察大鼠坐骨神经不等径小间隙动脉套接吻合后神经再生的时相变化,探讨其神经再生的机制. 方法 选用Wistar大鼠20只,4只作为套接动脉供体,其余16只切断其右下肢坐骨神经作为实验模型,随机分成坐骨神经等径外膜吻合组和不等径小间隙动脉套接吻合组,每组各8只,分别于术后7、14、21、28 d取材,苏木精-伊红(HE)染色,观察两组神经再生时相的变化. 结果 不等径小间隙动脉套接组再生神经术后21d通过小间隙;手术后28 d,不等径小间隙动脉套接组再生的神经较近端数量增加,再生神经是成熟的,排列规整.结论 近端较细小与远端较粗大的神经通过小间隙动脉套接吻合,神经再生出现放大效应,具有储备功能;小间隙动脉套接吻合是发挥神经再生储备功能的有效手段.     

替代神经外膜缝合─小间隙套接法修复周围神经损伤

目的：在动脉套接的基础上，尝试一种海洋生物套管小间隙套接修复周围神经损伤，代替传统外膜缝合法的可行性方法：将SD大鼠坐骨神经切断后用不同的方法进行修复，进行动脉套接的早期和远期的组织学和电生理学观察，其后进行海洋生物套管桥接的组织学及电生理观察。结果：原位和旋转的动脉套接组与外膜原位缝合组取得了相似组织学和电生理学恢复效果，且明显好于旋转的外膜缝合组；此种海洋生物套管取得了与动脉套管相似的结果。结论：本实验结果提示动脉套接模型有利于神经再生，此种海洋生物套管小间隙套接的修复效果好于断端转位的外膜缝合，有可能成为替代临床外膜缝合的新方法。     

周围神经端侧动脉套接后神经再生的研究

目的研究周围神经端侧动脉套接后神经再生的可能性及其特点. 方法取SD大鼠75只,在股骨中下段切断腓神经,将近断端逆转90度包埋于肌肉中.随机分为5组.A组:将截取的左颈总动脉套接于右侧正常胫神经侧方与腓总神经远端2 mm距离之间,缝合部胫神经外膜不予切除;B组:在胫神经套接部外膜开窗1.0 mm;C组:腓总神经切断14天后再予动脉套接,余同B组;D组:同B组,且于动脉套接部注入神经生长因子(neural growth factor, NGF)1 ml;E组:将腓总神经远端以端侧缝合形式直接缝合于胫神经的一侧,外膜开窗1.0 mm.术后4、8和12周分别行组织学、电镜和神经纤维计数等检查. 结果 4周时C、D及E组周边区域有神经纤维轴突和髓鞘再生,A组则无神经纤维生长; 8周时C、D及E组再生神经纤维较B组多,E组神经纤维较C、D组多,差异有统计学意义(P<0.05); 12周时C、D及E组神经纤维多于B组,差异有统计学意义(P<0.05);C组及D组有较丰富的神经再生,与神经端侧直接吻合的E组差异无统计学意义(P>0.05). 结论神经端侧2 mm距离动脉套接可作为修复周围神经损伤的一种可行方法.     

小肠粘膜下层(SIS)桥接周围神经缺损的实验研究

目的 应用小肠粘膜下层(SIS)桥接周围神经缺损并观察结果。方法 选取健康的SD大鼠30只，随机分成三组，每组10只。先造成坐骨神经10mm缺损，然后分别用SIS桥接、自体神经移植和旷置不做处理，即SIS桥接神经组、自体神经移植对照组和空白对照组。分别于术后6周和10周取材，通过病理组织检查、神经电生理检查和计算机图像分析来评价神经再生。结果 SIS桥接神经组可见有再生神经组织长过缺损，呈条索状连续样，且神经纤维多集中在SIS形成的桥接管周缘区域，而中心区域可见胶原组织和孔隙较多。从电生理检查和计算机图像分析结果来看，SIS桥接神经组比自体神经移植组略差。结论 SIS具有促进周围神经轴突再生的作用，有望成为自体神经的替代材料应用于周围神经缺损的修复。     

人发角蛋白桥接周围神经缺损的形态学观察

目的 :了解人发角蛋白在神经再生中的作用 ,为临床桥接周围神经缺损寻求新的替代材料。方法 :将 18只新西兰兔的双侧坐骨神经切断 ,造成 10mm缺损 ,一侧用人发角蛋白桥接 (实验组 ) ,另一侧用空硅胶管桥接 (对照组 ) ,术后 1、 2、 3个月通过肉眼观察 ,光镜、电镜和有髓神经密度测定 ,观察、分析神经再生情况。结果 :实验组再生神经均通过 10mm缺损 ,对照组有 2例无神经生长 ;实验组再生神经排列较紧密、有序 ,髓鞘形成早于对照组 ;神经纤维密度明显高于对照组 (P <0 0 1)。结论 :人发角蛋白可促进周围神经再生 ,是桥接周围神经缺损的理想材料。     

纤维蛋白胶粘合修复周围神经损伤的实验研究

目的 比较纤维蛋白胶粘合法与神经外膜缝合法修复周围神经损伤的效果。方法 将雄性Wistar大鼠20只随机分为两组，即粘合组和缝合组，每组10只。以大鼠左侧坐骨神经为修复神经模型进行实验。术后8周，各组取8只大鼠进行电生理、组织学检查，每组其余2只取标本做透射电镜观察。结果 术后8周粘合组神经纤维较缝合组平直，粘合组与缝合组比较，运动神经潜伏期延迟比、吻合口神经纤维通过比、有髓纤维截面积恢复比、肌湿重恢复比差别具有显著性意义(t值分别为2．32、2．43、2．39、2．36，P值分别为0．032、0．029、0．030、0．031)。结论 应用纤维蛋白胶粘合修复周围神经损伤是一种较为有效的神经接合方法。     

Axonal regeneration stimulated by the combination of nerve growth factor and ciliary neurotrophic factor in an end-to-side model.

The aim of this study was to investigate the potential for stimulating axonal regeneration in the context of end-to-side coaptation using a combination of nerve growth factor and ciliary neurotrophic factor in the rat sciatic nerve model. Four experimental groups (n = 8) were used: end-to-side coaptation only, end-to-side coaptation plus growth factor injection, primary repair, and nontransferred gap control. Twenty weeks after surgery histologic analysis showed that the ratio of axon density was significantly increased for the growth factor injection group. Histologic evidence suggested contamination from the proximal peroneal stump. Electrical stimulation and muscle weights showed that the target muscles had been reinnervated in all groups except the nontransferred gap control group. These data support the conclusion that the use of nerve growth factor and ciliary neurotrophic factor in combination may enhance regeneration in the peripheral nervous system. This is consistent with previous reports on the central nervous system and suggests a potential application in future studies aimed at improving peripheral nerve regeneration. Another conclusion is that contamination from the proximal peroneal stump may explain the regeneration observed in the end-to-side model. Further study using retrograde labeling is needed to establish the origin of the regenerating axons. Finally, evidence suggests that regenerating axons can use the epineurium of an intact nerve to bridge a gap in continuity.     

Assessment of effects of pinealectomy and exogenous melatonin administration on rat sciatic nerve suture repair: an electrophysiological,electron microscopic,and immunohistochemical study

Summary Background. Collagen scar formation at the cut end of a nerve, an important problem in clinical practice for neurosurgeons in peripheral nerve surgery, obstructs sprouting of axons into appropriate distal fascicles, and thereby limits nerve regeneration. Researchers attempt to control collagen accumulation in the formation of neuroma by various physical and chemical methods, but these have yielded only limited functional success. This is the first experimental study investigating the effects of melatonin (MLT) on nerve repair and neuronal regeneration in rat sciatic nerve suture repair.Methods. The hypothesis that exogenous MLT administration may inhibit the formation of neuroma in peripheral nerve surgery was investigated in rat sciatic nerve model. In this study, a total of 80 rats were used for control groups (Groups Ia, Ib, IIa, and IId), MLT group (Group Ic), surgical pinealectomy (Px) groups (Groups IIb and IIc), and group of MLT treatment following Px procedure (Group IIe). All animals underwent a surgical intervention consisting of bilateral sciatic nerve section and primary suture repair. At 8 weeks after repair, the animals were killed following completion of recording of nerve action potentials (NAPs). Then, unilateral sciatic nerve specimens including the suture repair region were carefully removed and the excised segments were processed for electron microscopy examination. Afterwards, contralateral sciatic nerve specimens from two animals from each group were removed and stained for immunohistochemical analysis.Results. Results of morphometric analysis revealed that Px procedure caused an elevation of collagen content of the sciatic nerve and macroscopic neuroma formation, and that there was a statistically significant reduction in collagen content of the same region in pinealectomized animals treated with MLT (p<0.001). Accordingly, electrophysiological findings demonstrated that the stimulus intensities required to excite a NAP response were increased in surgical Px group, but the presence of a reduced threshold response was found in the group treated with MLT following Px procedure (p<0.01). Immunohistochemical staining for Type I collagen and Type III collagen was markedly more intense in the epineurium of animals after Px. Virtually no or only weak staining was observed in animals in control groups and the MLT treatment group. Results of immunohistochemical analysis revealed that surgical Px procedure caused a strong immunoreactivity for Type I collagen and Type III collagen in all connective tissue planes of the nerve, especially in the epineurium, and there was a statistically significant reduction in immunoreactivity of the repair region in animals receiving MLT treatment after Px procedure (p<0.001).Conclusion. This study demonstrates that exogenous MLT administration significantly inhibits collagen accumulation in the formation of neuroma in the suture repair site and thereby improves nerve regeneration. From a clinical standpoint, the positive effect of MLT administration on neuroma formation and nerve regeneration seems a particularly attractive treatment option. Therefore, we believe that nerve repair with addition of MLT may be a worthwhile option in addition to other treatment modalities in case of MLT deficiency, such as aging. However, further experimental and clinical studies using functional analysis warranted to confirm this result in future.     

己丁糖处理神经吻合口促进神经再生的实验研究

目的:神经离断伤经显微手术修复后,神经吻合口粘连常可阻碍神经再生。本研究利用己丁糖防止粘连的作用并与其他方法进行对比,探索促进神经再生的办法。方法:将48只兔随机分为4组:己丁糖组、强的松龙组、静脉包裹组及单纯缝合组。将兔的胫神经切断后吻合,吻合口分别用己丁糖、强的松龙处理、静脉包裹及不作处理。于术后2、4、10、16周行肉眼观察及光镜检查,第16周行电镜、电生理检查及作轴突图像分析。结果:己丁糖在瘢痕床上的使用可有效防止瘢痕对修复段神经的压迫、粘连和固定,强的松龙也有防止神经粘连的作用,二者优于静脉包裹和单纯缝合组。经统计学处理,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:术中使用己丁糖、强的松龙处理神经吻合口,能有效地防止周围神经粘连,促进周围神经再生,最大限度地恢复周围神经的功能。