温针灸对不同时间点KOA模型兔关节软骨中MMP-1、MMP-13表达的影响

目的:观察温针灸(warming moxibustion)对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞中基质金属蛋白-1、13(matrix metalloproteinase-1、13,MMP-1、MMP-13)表达的影响,明确温针灸治疗KOA的作用机制。方法:选取70只新西兰大耳兔,其中10只作为空白对照组,剩余随机分为模型2周组、模型4周组、模型6周组、温针灸2周组、温针灸4周组、温针灸6周组。采用右后肢伸直位石膏固定制备KOA兔模型,模型2、4、6周组不予处理,温针灸2、4、6周组分别给予温针灸治疗2周,治疗结束后取材。采用免疫组化及RT-PCR检测各组治疗前后关节软骨中MMP-1、MMP-13蛋白及mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型2周组、模型4周组、模型6周组软骨中MMP-1、MMP-13表达明显升高(P0.05),且各组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。与相应模型组比较,温针灸治疗后,MMP-1、MMP-13的表达降低(P0.05),且各组间比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:温针灸可降低KOA兔软骨中MMP-1、MMP-13的表达,说明温针灸治疗KOA可能与其抑制MMP-1、MMP-13的表达有关。     

温针灸对兔膝骨性关节炎模型软骨细胞中c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的 观察温针灸治疗兔膝骨性关节炎（KOA）模型软骨中c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路及基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP -13的表达,为温针灸治疗KOA提供现代医学理论支持。方法 40只新西兰大耳兔随机选择30只采用右膝关节伸直位石膏固定制备KOA模型,另10只为正常对照组。固定6周后行X线检查确定造模成功后随机分为温针灸组、双氯芬酸钠组、模型组,每组10只。温针灸组选取足三里、鹤顶、内膝眼穴给予温针灸治疗,每天1次,15 min/次,治疗2周;双氯芬酸钠组按15 mg/kg灌胃,每天1次,治疗2周;模型组及正常对照组不予任何干预,正常饲养。采用免疫组织化学法、RT-PCR、免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测软骨中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达。结果 与正常对照组比较,模型组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达升高（P<0.05）,且温针灸组、双氯芬酸钠组关节软骨中MMP-1、MMP-13、JNK1、JNK2 mRNA及蛋白表达较模型组降低（P<0.05）,同时温针灸组MMP-1、MMP-13 mRNA蛋白表达及JNK1、JNK2 mRNA表达较双氯芬酸钠组降低更为明显（P<0.05）。结论 温针灸可抑制KOA软骨细胞中JNK1、JNK2、MMP-1、MMP-13的表达,温针灸治疗KOA可能是通过激活JNK信号通路,抑制MMP-1、MMP-13的表达而达到治疗作用。     

温针灸对兔膝骨关节炎模型基质金属蛋白酶及组织形态学影响的实验研究

目的:观察温针灸对膝骨关节炎模型血清基质金属蛋白酶及软骨组织形态学的影响,探讨温针灸治疗膝骨关节炎在软骨代谢方面的作用机制。方法:将新西兰兔随机均分为空白组、模型组、温针灸组。采用膝关节前交叉韧带切断术制备膝骨关节炎模型,造模1周后温针灸患侧膝关节"犊鼻"、"后三里"穴2个疗程,采用ELISA法测定各组血清中MMP-1、MMP-3、TIMP-1的浓度,股骨内髁行HE染色。结果:模型组MMP-1浓度、MMP-1/TIMP-1比值均高于空白组(P﹤0.05),MMP-3浓度低于空白组(P﹤0.05),TIMP-1变化不明显(P﹥0.05),HE染色示明显的病理损伤;与模型组比较温针灸降低了MMP-1的浓度与MMP-1/TIMP-1之比值,升高MMP-3的浓度,差异有统计学意义(P﹤0.05);且改善了软骨病理损伤。结论:温针灸能够提高膝骨关节炎软骨的自身修复能力,其软骨保护作用可能是通过调节异常的MMP-1、MMP-3与MMP-1/TIMP-1比值而实现的。     

阳和汤干预兔骨关节炎软骨中金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶抑制剂-1变化

目的:观察阳和汤对兔骨关节炎软骨中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-l,MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloprotease-1,TI MP-1)表达的影响。方法:新西兰大白兔20只随机分为正常组、模型组、氨糖美辛组和阳和汤组。按照Hulth法建立膝骨关节炎模型,术后第5周起至第7周末,阳和汤组予混有阳和汤的颗粒饲料,氨糖美辛组给予混有氨糖美辛的兔饲料,正常组及模型组均给予普通饲料;术后第8周分别取各组胫骨平台关节软骨,采用免疫组织化学染色测定软骨中MMP-1及TI MP-1表达的阳性指数。结果:模型组MMP-1及TI MP-1表达的阳性指数水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P0.01),阳和汤组MMP-1及TI MP-1表达阳性指数低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。阳和汤组和氨糖美辛组MMP-1及TI MP-1表达阳性指数比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:阳和汤可能是通过调控软骨细胞外基质中MMP-1及TI MP-1表达变化而维持软骨的动态平衡,延缓骨关节炎中软骨退变。     

针砂马准灸血清对培养软骨细胞u PA、MMP-1及MMP-13水平的影响

目的通过研究回医针砂马准灸血清对培养软骨细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响,探寻针砂马准灸对膝骨性关节炎(KOA)治疗的作用机制。方法将15只雄性新西兰大耳兔随机分为正常血清组、模型血清组和针砂马准灸血清组。造模采用右后肢膝关节伸直位石膏固定6周,结束后进行针砂马准灸治疗,取血清,配制完全培养液干预细胞。采用RT-PCR检测细胞中u PA、MMP-1、13mRNA表达水平; Western blot检测细胞u PA、MMP-1、13蛋白表达水平。结果模型血清组较正常血清组细胞u PA、MMP-1、13mRNA和蛋白表达显著升高(P 0. 05);针砂马准灸血清组较模型血清组细胞u PA、MMP-1、13mRNA和蛋白表达显著降低(P 0. 05);细胞u PA蛋白表达水平分别与MMP-1、13呈正相关(p 0. 05)。结论针砂马准灸血清可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、13的表达,提示针砂马准灸可能通过调控u PA的表达水平来影响细胞MMP-1、13的表达,从而达到治疗KOA的效果。     

针刺结合雷火灸对膝骨关节炎大鼠MMP-3、TIMP-1及TGF-β1的影响（英文）

目的:观察针刺结合雷火灸对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨针刺结合雷火灸治疗KOA的作用机制。方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,根据随机数字表法随机分成空白组、模型组和针灸组,每组10只大鼠。模型组和针灸组予木瓜蛋白酶右后膝关节注射造模。治疗2星期后,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠滑膜MMP-3、TIMP-1的含量,采用Motic B5显微摄像系统测定TGF-β1的含量。结果:模型组软骨组织中MMP-3和TIMP-1的含量较空白组显著增加(均P0.01);针灸组MMP-3和TIMP-1含量低于模型组,组间差异有统计学意义(均P0.05);针灸组MMP-3和TIMP-1含量高于空白组,组间差异有统计学意义(均P0.05)。模型组软骨组织中TGF-β1的含量较空白组显著降低(P0.01),针灸组TGF-β1含量较模型组升高(P0.05),但低于空白组,组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:针刺结合雷火灸能有效平衡KOA模型大鼠中MMP-3和TIMP-1的异常表达,并且对TGF-β1具有一定的上调功能,这可能是针刺结合雷火灸治疗KOA的作用机制之一。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

不同针灸方法对KOA模型大鼠软骨损伤生物标志物MMP-1、MMP-3、TIMP-1的影响

摘要：目的：观察比较不同针灸方法对KOA模型大鼠MMP-1、MMP-3、TIMP-1的影响。方法：将体重180-200g的SPF级雄性SD大鼠50只,适应性饲养7天后随机分为正常组（N）、模型组（M）、温针组（W）、电针组（D）、手针组（S）五组,每组10只。N组不作任何处理,其余四组腹腔注射戊巴比妥钠（1%,0.04ml/g）麻醉后,1mg单碘乙酸盐（MIA）溶于50μL 9%的无菌生理盐水,右膝关节注射造模,周期14天,造模前后进行行为学Lequesne MG评分检测。N、M组不作任何干预,其余三组对鹤顶、阳陵泉穴分别进行针刺、电针、温针干预,手针组0.25*25mm针灸针,刺入约5mm平补平泻手法,200 r/min,1min,留针20 min,10 min行针1次;电针组平补平泻后接电针,疏波,1mA,2Hz,20min/次;温针组平补平泻后,将直径5mm艾柱置于针柄,20min/次;三组均隔天干预,共28天。干预前后进行行为学机械刺激回缩阈值检测,28天后戊巴比妥钠麻醉,生理盐水心脏灌注取关节软骨和关节进行Western blot、免疫组化检测。结果：行为学Lequesne MG评分检测显示,造模前各组大鼠膝关节评分差异无统计学意义（P>0.05）,造模后除N组外,其余四组评分显著高于造模前,差异有统计学意义（P<0.05）。机械刺激回缩阈值检测显示,干预前M、W、D、S组与N组相比回缩阈值均降低,其结果有统计学意义（P<0.05）。干预后D组较M组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测关节软骨显示,MMP-1阳性表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）;D组较W组降低（P<0.05）,MMP-3阳性表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）,D组较S、W组降低（P<0.05）;T1MP-1阳性表达N、M、W、S组较D组降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,S组较M组升高（P<0.05）。Western blot检测软骨显示,MMP-1蛋白表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）,W组较D组升高（P<0.05）;MMP-3蛋白表达M组较N组升高（P<0.05）,D、S组较M组降低（P<0.05）;T1MP-1蛋白表达D、S、W组较M组升高（P<0.05）。其余结果无统计学意义（P>0.05）。结论：电针、温针、手针三种方法可有效改善KOA模型大鼠关节软骨损伤,可能通过升高TIMP-1的表达从而降低MMP-1、MMP-3的表达,相比之下电针更有利于调节上升TIMP-1且抑制MMP-1、MMP-3的表达,手针方法次之,温针效果则略逊于前两者。     

维药买朱尼含药血清对IL-1β作用下大鼠软骨细胞MMP-13、Type-ⅡCollagen表达的影响

目的:观察维药买朱尼含药血清对IL-1β作用下体外培养的大鼠关节软骨细胞Type-ⅡCollagen、MMP-1、MMP-13表达的影响,并进一步探讨维药买朱尼防治OA的作用机制。方法:从1周龄SD大鼠关节软骨中分离培养原代软骨细胞,经鉴定后选用第二代细胞随机分为空白对照组、模型组、维药买朱尼组,培养第3d时模型组、维药买朱尼组采用细胞因子IL-1β(10ng/ml)继续培养,分别在培养后第24h、36h、48h采用RealTimePCR方法检测并分析各组软骨细胞中MMP-13、Type-ⅡCollagen的表达情况。结果:在第24h时各组MMP-13表达增加,Type-ⅡCollagen有一定降低,但无统计学差异;而在第36h和48h时空白对照组与模型组MMP-13、Type-ⅡCollagen表达差异均有统计学意义(P0.05),维药买朱尼组较模型组MMP-13与Type-ⅡCollagen的表达在48h、72h时间点有显著性差异(P0.05)。结论:维药买朱尼可抑制IL-1β对Type-ⅡCollagen的降解和破坏作用,并能抑制IL-1β对MMP-13的诱导和激活作用。     

温针灸对膝骨性关节炎兔行为学及关节软骨肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶-3含量的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔行为学及关节软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量的影响,探讨温针灸治疗KOA的作用机制。方法 :将雄性日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、治疗组,每组10只。采用关节机械制动法造成KOA模型,造模后对各组兔进行Lequesne MG行为学评估。治疗组选用"内膝眼""犊鼻""血海""阳陵泉"进行温针灸干预,每次干预20min,每日1次,共干预4周。4周后再次进行行为学评估,HE染色后观察膝关节软骨病理形态变化,并采用放射免疫分析法测定各组兔膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平。结果:造模后模型组与治疗组行为学评分明显高于正常组,治疗前后行为学评分差值治疗组明显高于模型组(均P0.05);HE染色结果显示,模型组与正常组相比有明显炎性反应细胞聚集现象,治疗组炎性反应现象较模型组有显著改善;模型组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平均明显高于正常组(均P0.05),治疗组膝关节软骨中TNF-α、MMP-3水平明显低于模型组(均P0.05)。结论:温针灸可有效治疗兔KOA并降低关节软骨中TNF-α、MMP-3水平,发挥抗炎作用可能是其起效的一个重要机制。     

火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎鼠关节形态及软骨LOXL2的影响

目的:探讨火针膝周密刺对膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)大鼠行为学、关节形态及软骨中赖氨酰氧化酶相关蛋白2(LOXL2)影响性。方法:选择30只健康雄性大鼠,10只作为对照不作任何处理。20只大鼠建立KOA模型,成模后随机分成2组,分别予普通针刺和火针膝周密刺,1次/3 d,连续6次。观察各组大鼠Leauesne MG评分、关节软骨细胞情况,外周血及关节软骨转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、LOXL2水平变化。结果:治疗后火针组Leauesne MG评分中的局部疼痛刺激反应、步态、关节活动范围、关节肿胀度较对照组、模型组差异有统计学意义(P<0.05)。血清及关节软骨MMP-3、TGF-β1、TNF-α含量水平显著低于模型组(P<0.05),LOXL2显著高于模型组(P<0.05)。火针组电镜下软骨细胞形状规则、细胞核完整且饱满,微绒毛少量存在,内质网丰富,有散在的染色质。结论:火针膝周密刺能减轻K0A关节软骨损伤,降低炎性反应,改善软骨LOXL2水平,这可能是火针治疗KOA一个作用机制。     

Effect of acupuncture plus thunder-fire moxibustion on MMP-3, TIMP-1 and TGF-β1 in rats with knee osteoarthritis

Objective

To observe the effect of acupuncture plus thunder-fire moxibustion on the expressions of matrix metalloproteinase-3 (MMP-3), tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in cartilage of knee osteoarthritis (KOA) rats, and to explore the mechanism of acupuncture plus thunder-fire moxibustion in the treatment of KOA.

Methods

Thirty Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into a blank control group, a model group and an acupuncture-moxibustion group by random digits table, 10 rats in each group. Rats in the model group and the acupuncture-moxibustion group were injected with papain in the right posterior knee joint to prepare the models. The levels of MMP-3 and TIMP-1 in rat synovium of each group were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) after 2 weeks of treatment. The level of TGF-β1 was determined by Motic B5 Micro-camera system.

Results

The levels of MMP-3 and TIMP-1 in the cartilage of the model group were significantly higher than those in the blank control group (all P<0.01); the levels of MMP-3 and TIMP-1 in the acupuncture-moxibustion group were lower than those in the model group, and the between-group differences were statistically significant (all P<0.05). The levels of MMP-3 and TIMP-1 in the acupuncture-moxibustion group were higher than those in the blank control group, and the differences were statistically significant (all P<0.05). The level of TGF-β1 in cartilage tissues of the model group was significantly lower than that in the blank control group (P<0.01); the level of TGF-β1 in the acupuncture-moxibustion group was higher than that in the model group (P<0.05), but it was lower than that in the blank control group, and the between-group difference was statistically significant (P<0.05).

Conclusion

Acupuncture plus thunder-fire moxibustion can effectively recover the abnormal expressions of MMP-3 and TIMP-1 in KOA model rats and somewhat up-regulate TGF-β1, which may be one of its mechanisms of acupuncture plus thunder-fire for KOA.

     

筋针结合关节松动术对兔膝骨关节炎受体Notch2、配体Jagged-1影响的研究

目的观察筋针结合关节松动术对膝骨关节炎兔膝关节软骨中Notch信号通路Notch2、Jagged-1表达的影响,探讨筋针结合关节松动术治疗膝骨关节炎的可行性和相关作用机制。方法选取26只大耳白兔,随机取6只作为空白组,其余兔采用改良Hulth手术法建立左膝膝骨关节炎模型。将建模成功的18只兔随机分为模型组、氨糖组和筋针结合松动术组各6只,氨糖组给予盐酸氨基葡萄糖灌胃6周,筋针结合松动术组给予筋针结合关节松动术治疗6周,空白组和模型组不予任何干预。干预结束后取各组兔的左膝软骨,分别采用Western blot法和荧光PCR法检测软骨细胞中Notch2、Jagged-1的蛋白和mRNA表达量。结果模型组软骨细胞中Notch2、Jagged-1蛋白和mRNA表达量均明显高于空白组(P均<0.05),氨糖组和筋针结合松动术组均明显低于模型组(P均<0.05),且筋针结合松动术组均明显低于氨糖组(P均<0.05)。结论筋针结合关节松动术可以有效下调膝骨关节炎兔软骨中Notch2和Jagged-1的表达,从而保护关节软骨。     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

南星骨痛凝胶贴膏对兔膝骨关节炎关节形态及血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1表达的影响

目的观察南星骨痛凝胶贴膏对兔膝骨关节炎关节形态及血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1表达的影响,探讨南星骨痛凝胶贴膏治疗兔膝骨关节炎可能的作用机制。方法 18只健康6月龄新西兰兔随机分成3组:空白组(A组)、模型组(B组)、骨痛膏治疗组(C组). BC组用3%木瓜蛋白酶关节腔内注射造模后C组给予南星骨痛凝胶贴膏外敷,给药4周后,用Aloka Latheta LCT-200观察兔膝骨关节影像学改变、用ELISA法检测血清IL-1、TNF-α、MMP-13、TIMP-1含量。结果 C组兔膝关节病变程度较B组轻,C组兔血清中IL-1、TNF-α、MMP-13含量较B组降低(P<0. 05),TIMP-1含量较B组升高(P <0. 05)。结论南星骨痛凝胶贴膏能减轻兔膝关节骨关节炎病变程度,对关节软骨有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症因子IL-1、TNF-α及MMP-13表达,增加TIMP-1表达有关。     

女贞子提取物干预大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的观察女贞子提取物对膝骨关节炎(KOA)大鼠关节疼痛的影响,研究其对KOA大鼠软骨的保护作用。方法32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、女贞子灌胃组和女贞子注射组。模型组、女贞子灌胃组和女贞子注射组均采用碘乙酸关节腔注射造模法构建大鼠KOA模型,女贞子灌胃组大鼠进行女贞子提取物灌胃处理,女贞子注射组大鼠予以关节腔内注射女贞子提取物。治疗持续4周,于最终给药后1周测定行为学数据;取各组大鼠膝关节软骨组织,进行番红O染色和Mankin′s评分,免疫组化检测Col2的表达。取大鼠原代软骨细胞,以不同浓度的女贞子提取物进行干预,采用MTT法测定女贞子提取物对软骨细胞增殖的影响,选取最佳浓度。RT-PCR测定女贞子提取物对软骨细胞中OA相关基因表达的调节作用,并进行统计分析。结果疼痛模型数据显示,模型组的压痛阈值与正常组相比显著下降(P<0.01);女贞子注射组与模型组比较有显著提高(P<0.01);女贞子灌胃组与模型组比较有提高(P>0.05)。组织病理学结果显示,模型组的Mankin′s评分高于空白组(P<0.01);女贞子注射组Mankin′s评分较模型组显著下降(P<0.01);女贞子灌胃组与模型组比较有下降(P>0.05)。免疫组化分析显示女贞子注射组和女贞子灌胃组软骨中Col2表达增加。女贞子提取物可促进大鼠原代软骨细胞的增殖,RT-PCR分析结果显示与TNF-α处理组相比,女贞子组显著下调Col10、MMP13的表达,上调Col2和Aggrecan的表达。结论女贞子提取物关节腔注射对软骨细胞的保护效果优于灌胃给药;女贞子提取物对大鼠KOA疼痛模型有干预作用,其机制与抑制软骨细胞肥大和分解代谢有关。     

Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis

OBJECTIVE: To evaluate the treatment effect of acupotomy(Apo) in a rabbit model of knee osteoarthritis(KOA), compare the results of Apo versus electroacupuncture(E-Apu) on ethology, morphology, and structure of the articular cartilage surface in a rabbit model of KOA, and analyze the differences in the treatment effects of Apo versus E-Apu.METHODS: Twenty-eight male New Zealand white rabbits were randomized into four groups: normal control, blank model, Apo, and E-Apu(n = 7 in each group). Except for the normal control group, the left hindlegs of all rabbits were fixed in an extended position for 5 weeks to establish the KOA model.The passive range of motion(PROM) and Lequesne index were measured before and after the establishment of the KOA model to assess the ethology in all groups. Safranin O-fast green staining and the Mankin score were used to assess the morphological cartilaginous changes to compare the effect of Apo versus E-Apu on the degeneration of articular cartilage, and to identify which therapy was superior in treating KOA.RESULTS: Compared with before the establishment of the KOA model, the Lequesne index of the KOA model rabbits was significantly increased(P 0.01), while the PROM was significantly decreased(P 0.01). The articular cartilaginous tissue in the three model groups exhibited pathological variations in the form of laminar derangement of cartilage cells, and so the Mankin score was significantly increased compared with the control group(P 0.01). At 1 week after the final treatment session,compared with the blank model group, both the Apo and E-Apu groups showed a significant decrease in the Lequesne index(P 0.01), and attenuation in the degree of morphologic pathological changes(P 0.05); The Apo improved the PROM significantly compared with the blank model group(P 0.05), while the E-Apu had no effect(P 0.05).Furthermore, compared with the E-Apu group, the Apo group had a significantly lower Lequesne index(P 0.05), and a significantly greater PROM(P 0.05).CONCLUSION: In a rabbit model of KOA, both Apo and E-Apu reduce disorders of ethology and morphology, and improve the condition of the articular cartilage. The results suggest that Apo is more effective than E-Apu in improving the PROM and alleviating symptoms resulting from cartilage damage in a rabbit model of KOA.     

独活寄生汤含药血清对膝骨性关节炎大鼠关节软骨细胞凋亡及GRP78，CHOP，HIRA及ASFla表达的影响

目的:观察独活寄生汤含药血清抗膝骨性关节炎(KOA)大鼠关节软骨细胞凋亡、内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及衰老蛋白组蛋白调节因子(HIRA),染色质组装和调节复合因子1a(ASF1a)的影响。方法:采用Hulth法建立KOA模型大鼠,模型成功后采用酶原消化法培养正常软骨细胞与KOA软骨细胞;另将40只大鼠分为独活寄生汤低、中、高剂量组(0.85,1.7,3.4 g·kg~(-1))及阳性药组(硫酸氨基葡萄糖胶囊3 g·kg~(-1)),灌胃14 d后处死取血清;将培养细胞分为空白组、模型组、独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组(对应剂量组大鼠血清培养)及阳性药组(阳性药组大鼠血清培养);采用活性检测试剂盒(CCK-8)法检测各组软骨细胞增值率;采用TUNEL法检测各组软骨细胞凋亡情况;蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组软骨细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白的表达。结果:与空白组软骨细胞比较,模型组细胞增殖抑制率明显升高,与模型组细胞比较,独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药组软骨细胞增殖抑制率降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞凋亡数量明显增加(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞凋亡数量明显降低(P0.05);与空白组软骨细胞比较,模型组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组软骨细胞比较,独活寄生汤低、中、高剂量组及阳性药组细胞中ASF1a,HIRA,GRP78及CHOP蛋白表达降低(P0.05)。结论:独活寄生汤含药血清可通过减少KOA软骨细胞内质网应激相关因子GRP78,CHOP及衰老相关因子ASF1a,HIRA的表达,从而起到抑制KOA软骨细胞衰老、凋亡,促进软骨细胞再生的作用,进而起到治疗KOA的目的。     

温针灸对膝骨性关节炎兔软骨及软骨下骨形态学的影响

目的:观察温针灸对膝骨性关节炎(KOA)兔软骨及软骨下骨形态学的影响,探讨温针灸能否减轻关节软骨及软骨下骨的退变从而减缓KOA的发展。方法:40只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组及阿仑膦酸钠组,每组10只。采用管型石膏伸直位固定法固定兔右后肢6周制备KOA模型。温针灸组给予"内膝眼""外膝眼"及"鹤顶"温针灸治疗,每次15 min,每日1次,连续4周;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液灌胃(150μg·kg^-1·d^-1),连续4周。治疗结束后对所有新西兰兔膝关节行X线、磁共振成像(MRI)检查。X线结果采用K-L分级法对关节间隙、软骨下骨增生程度进行分级;MRI结果采用Recht分级法对软骨退变程度进行分级,采用WORMS评分法对骨髓水肿程度进行评分;HE染色法观察膝关节软骨组织形态学改变,采用Mankin评分评价软骨退变程度;扫描电镜观察膝关节软骨表面的形态学改变;透射电镜观察膝关节软骨细胞的超微结构。结果:与空白组比较,模型组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显升高(P<0.05,P<0.01);扫描电镜显示模型组软骨缺损严重;透射电镜显示模型组软骨细胞变性肿胀,细胞器减少、形态紊乱,细胞外基质胶原纤维分布混乱。与模型组比较,温针灸组和阿仑膦酸钠组K-L分级、Recht分级、WORMS评分及Mankin评分明显降低(P<0.05,P<0.01)。扫描电镜显示,温针灸组软骨无明显缺损,软骨表面较平坦;阿仑膦酸钠组软骨有缺损,但再生软骨组织表面平坦。透射电镜显示,温针灸组软骨细胞形态基本正常,细胞器形态明显改善、数量明显增多,胞外基质胶原纤维较丰富,分布较为均匀;阿仑膦酸钠组细胞外形正常,细胞器数量较多,形态紊乱,胞外基质胶原纤维分布较混乱。与阿仑膦酸钠组比较,温针灸组Mankin评分降低(P<0.01)。结论:温针灸治疗可以有效减缓KOA兔软骨及软骨下骨退变,从而起到减缓KOA发展的作用。